目的探讨表皮生长因子(EGF)上调顺时受体电位M7(TRPM7)以及TRPM7参与EGF诱导肿瘤细胞迁移的分子机制。方法 Western blot技术用于检测Akt和vimentin的蛋白表达,钙成像技术用于细胞内钙离子浓度的检测,全细胞膜片钳技术用于记录TRPM7电流...目的探讨表皮生长因子(EGF)上调顺时受体电位M7(TRPM7)以及TRPM7参与EGF诱导肿瘤细胞迁移的分子机制。方法 Western blot技术用于检测Akt和vimentin的蛋白表达,钙成像技术用于细胞内钙离子浓度的检测,全细胞膜片钳技术用于记录TRPM7电流,激光共聚焦技术检测细胞骨架蛋白F-actin的形态。结果 Western blot的结果显示EGF显著增加A549细胞Akt的磷酸化水平;PI3K阻断剂wortmanin可显著抑制EGF上调TRPM7电流的作用;EGF孵育A549细胞可上调vimentin的蛋白表达水平,并改变细胞骨架蛋白F-actin的荧光强度以及形态;稳定转染TRPM7-shRNA可抑制高钙引起的细胞内钙升高及EGF对细胞形态及F-actin表达的作用。结论 EGF可能通过PI3K-Akt信号通路上调TRPM7膜蛋白表达和通道功能,抑制钙离子内流,从而影响EMT的产生和F-actin的聚合,最终诱导细胞迁移。展开更多
文摘目的探讨表皮生长因子(EGF)上调顺时受体电位M7(TRPM7)以及TRPM7参与EGF诱导肿瘤细胞迁移的分子机制。方法 Western blot技术用于检测Akt和vimentin的蛋白表达,钙成像技术用于细胞内钙离子浓度的检测,全细胞膜片钳技术用于记录TRPM7电流,激光共聚焦技术检测细胞骨架蛋白F-actin的形态。结果 Western blot的结果显示EGF显著增加A549细胞Akt的磷酸化水平;PI3K阻断剂wortmanin可显著抑制EGF上调TRPM7电流的作用;EGF孵育A549细胞可上调vimentin的蛋白表达水平,并改变细胞骨架蛋白F-actin的荧光强度以及形态;稳定转染TRPM7-shRNA可抑制高钙引起的细胞内钙升高及EGF对细胞形态及F-actin表达的作用。结论 EGF可能通过PI3K-Akt信号通路上调TRPM7膜蛋白表达和通道功能,抑制钙离子内流,从而影响EMT的产生和F-actin的聚合,最终诱导细胞迁移。