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2014—2016年河南省猪伪狂犬野毒感染和免疫情况血清学调查 被引量：22
1
作者 解伟涛 梁跃 +2 位作者 乔松林 郝慧芳 郭成留 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2016年第12期153-156,160,共5页
调查河南省猪群伪狂犬野毒感染流行情况,为制订合理的防控与净化策略提供参考依据。于2014年1月—2016年5月,采集河南省不同地域780个猪场16 200份血清样本,使用g EELISA鉴别诊断方法进行血清学调查,对10个阳性稳定猪场和10个阳性发病... 调查河南省猪群伪狂犬野毒感染流行情况,为制订合理的防控与净化策略提供参考依据。于2014年1月—2016年5月,采集河南省不同地域780个猪场16 200份血清样本,使用g EELISA鉴别诊断方法进行血清学调查,对10个阳性稳定猪场和10个阳性发病猪场进行血清学分析,对2个后备母猪培育场(1个为阴性场,另1个为阳性场)进行生产成绩分析,同时对猪场伪狂犬g E基因缺失疫苗使用情况进行调查,并跟踪了40个猪场的疫苗免疫情况。结果显示,河南省猪场伪狂犬g E抗体阳性率90.0%,血清样本阳性率46.2%,成年种猪阳性率53.1%,后备种猪阳性率27.6%。猪群在阳性发病场的阳性率高于在阳性稳定场的阳性率,育肥猪感染带毒严重影响其生产成绩,猪场伪狂犬疫苗免疫强度呈现增加趋势。综上可知,目前河南省猪群伪狂犬野毒感染情况比较严重。 展开更多
关键词 猪 伪狂犬 野毒 gE-ELISA 免疫
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减蛋综合征病毒抗体胶体金免疫层析试纸条的研制及初步应用
2
作者 宋亚鹏 孙亚宁 +4 位作者 刘琳 杨继飞 李新生 魏蔷 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2024年第1期125-132,共8页
为建立快速检测减蛋综合征病毒(EDSV)抗体的方法,基于EDSV的Fiber蛋白,制备快速检测EDSV抗体的免疫层析试纸条,为养禽业提供针对病原微生物的感染预警及免疫评估。利用胶体金标记EDSV Fiber蛋白抗原为探针,将羊抗鸡IgG和抗Fiber蛋白的... 为建立快速检测减蛋综合征病毒(EDSV)抗体的方法,基于EDSV的Fiber蛋白,制备快速检测EDSV抗体的免疫层析试纸条,为养禽业提供针对病原微生物的感染预警及免疫评估。利用胶体金标记EDSV Fiber蛋白抗原为探针,将羊抗鸡IgG和抗Fiber蛋白的抗体包被到硝酸纤维膜上,分别作为质控线和检测线,对家禽EDSV抗体水平进行监测。结果表明,制备的EDSV免疫层析试纸条具有高度特异性,与其他家禽病毒抗体无交叉反应,仅与EDSV抗体反应,在试纸条上产生可见的检测线;并且制备的试纸条具有高度稳定性,在室温条件下可至少保存6个月。应用制备的检测EDSV抗体的免疫层析试纸条对从河南、安徽、山东等地养鸡场采集的576份鸡血清样本检测,与血凝抑制试验(HI)结果进行平行比较,二者的Kappa值为0.878,具有良好一致性。综上,制备的检测ESDV抗体的免疫层析试纸条具有高度的特异性、敏感性、稳定性和易操作性,对EDSV抗体的临床检测具有实际应用价值。 展开更多
关键词 减蛋综合征病毒 Fiber蛋白 免疫层析试纸 血凝抑制试验
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抗球虫药的人工抗原合成及免疫分析方法研究进展
3
作者 吴佳蓓 田恒旗 +5 位作者 胡骁飞 孙亚宁 邢云瑞 王琳 王成宾 王耀 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期347-355,共9页
抗球虫药在畜禽业应用广泛,但不合理使用会导致其在动物性食品中残留超标,对人类健康造成威胁。近年来,食品安全监督抽检中抗球虫药残留超标时有发生,因此,实现动物性食品中抗球虫药残留的高效快速检测,有利于兽药残留的有效监管。在众... 抗球虫药在畜禽业应用广泛,但不合理使用会导致其在动物性食品中残留超标,对人类健康造成威胁。近年来,食品安全监督抽检中抗球虫药残留超标时有发生,因此,实现动物性食品中抗球虫药残留的高效快速检测,有利于兽药残留的有效监管。在众多残留检测方法中,免疫分析方法具有灵敏度高、特异性强,操作简单等优点,适用于大批量样品的现场快速检测。该文综述了抗球虫药人工抗原的合成方法,并对其免疫分析方法进行归纳总结,以期为开发更高效的抗球虫药残留分析方法提供参考。 展开更多
关键词 抗球虫药 人工抗原 免疫分析 研究进展
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免疫层析技术在食物过敏原快速检测中的应用进展
4
作者 郭开通 胡骁飞 +7 位作者 孙亚宁 邢云瑞 王成宾 吴佳蓓 王琳 宋乾召 杨海涛 王耀 《食品与发酵工业》 CSCD 北大核心 2024年第1期311-317,共7页
食物过敏是重要的公共卫生问题之一,严重威胁着过敏人群的健康,为保障过敏人群食品安全,针对食物过敏原开展检测方法研究尤为必要。近年来,针对食物过敏原的快速检测技术发展迅速,其中,免疫层析技术因其具有检测效率高、成本低、特异性... 食物过敏是重要的公共卫生问题之一,严重威胁着过敏人群的健康,为保障过敏人群食品安全,针对食物过敏原开展检测方法研究尤为必要。近年来,针对食物过敏原的快速检测技术发展迅速,其中,免疫层析技术因其具有检测效率高、成本低、特异性强等优点,在快速检测中得到广泛应用。该文简述了主要食物过敏原及免疫层析技术的检测原理,对食物中植物源性食物过敏原(花生、大豆、小麦和树生坚果过敏原)和动物源性食物过敏原(牛奶、鸡蛋、甲壳类和鱼类过敏原)的免疫层析检测方法进行系统总结,并对其发展方向进行展望。 展开更多
关键词 食物过敏 过敏原 免疫层析 快速检测 纳米颗粒
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3种佐剂对猪瘟病毒E2蛋白免疫效果的影响
5
作者 陈玉梅 刘运超 +3 位作者 祁艳华 梁超 周景明 王爱萍 《动物医学进展》 北大核心 2024年第3期22-27,共6页
为筛选猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)亚单位疫苗高效佐剂,将杆状病毒表达系统制备的重组CSFV E2蛋白分别与铝佐剂(胶状)、50V佐剂(W/O)和201佐剂(W/O/W)3种不同佐剂配伍后免疫Balb/c小鼠,经间接ELISA和阻断ELISA测定抗体... 为筛选猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)亚单位疫苗高效佐剂,将杆状病毒表达系统制备的重组CSFV E2蛋白分别与铝佐剂(胶状)、50V佐剂(W/O)和201佐剂(W/O/W)3种不同佐剂配伍后免疫Balb/c小鼠,经间接ELISA和阻断ELISA测定抗体效价及血清IL2、IL4、IL10和IFN-γ细胞因子水平。结果显示,经Ni-NAT亲和层析纯化获得的重组E2蛋白纯度约95%;免疫后28 d,无佐剂的E2蛋白免疫Balb/c小鼠后抗体效价达到1∶3200,但血清抗体阻断率小于30%;加入佐剂后,抗体效价明显提升,血清抗体阻断率也随之升高,3种不同的佐剂免疫血清抗体阻断率大于40%。其中50V佐剂组抗体效价最高可达1∶204800,其抗体阻断率大于80%,且50V佐剂组免疫血清中IL-4表达量最高为892.23 pg/mL,说明50V佐剂可以有效激发以Th2型免疫应答为主的细胞免疫反应。综合B细胞和T细胞免疫应答结果,50V佐剂对E2蛋白的免疫效果提升明显优于其他佐剂,试验结果为进一步研究高效猪用CSFV亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 佐剂 免疫效果
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伏马菌素B_1单克隆抗体的制备及免疫学检测方法初步应用 被引量：7
6
作者 姚静静 胡骁飞 +4 位作者 韩俊岭 李青梅 王方雨 邓瑞广 张改平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期1009-1017,共9页
拟制备灵敏高、特异性强的抗伏马菌素B_1(FB_1)单克隆抗体,并初步应用于FB_1的检测,以期为FB_1的免疫学快速检测提供技术支持。采用碳二亚胺法(EDC)制备人工抗原FB_1-BSA和FB_1-OVA。以免疫原FB_1-BSA免疫BALB/c小鼠,每四周免疫一次。... 拟制备灵敏高、特异性强的抗伏马菌素B_1(FB_1)单克隆抗体,并初步应用于FB_1的检测,以期为FB_1的免疫学快速检测提供技术支持。采用碳二亚胺法(EDC)制备人工抗原FB_1-BSA和FB_1-OVA。以免疫原FB_1-BSA免疫BALB/c小鼠,每四周免疫一次。四免后,小鼠脾B细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合后,采用ELISA筛选,建立分泌抗FB_1抗体的单克隆杂交瘤细胞株;采用动物体内诱生腹水方法制备出抗FB_1单抗,并鉴定单抗的各种性能;初步建立FB_1免疫学检测方法。结果得到1株稳定分泌抗FB_1单抗的杂交瘤细胞株2E11-H3,该细胞株分泌的mAbs的效价高达1∶1.02×10~6,亲和力常数平均值为7.98×10^(10) L·mol^(-1),亚型为IgG_3。FB_1mAbs的工作浓度为1∶6.0×10~4,与FB_1发生特异性反应,间接竞争ELISA测得IC_(50)=43.65ng·mL^(-1);与FB_1结构类似物FB_2和FB_3的交叉反应率分别为385%和72.4%,与其他霉菌毒素及载体蛋白BSA和OVA均无交叉反应。样品回收率在85.85%~114.07%,平均值为98.81%;变异系数为10.11%。本研究制备出了灵敏度高、特异性强、亲和力高的FB_1单抗,并初步建立FB_1免疫学检测方法。 展开更多
关键词 伏马菌素B1 单克隆抗体 杂交瘤 ELISA
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黄曲霉毒素M1免疫学检测方法研究进展 被引量：8
7
作者 陈曦 侯玉泽 +2 位作者 蔡齐超 胡骁飞 邓瑞广 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期413-416,共4页
黄曲霉毒素M1（Aflatoxin M1,AFM1）是黄曲霉毒素的一种,是在动物摄入含有黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）的饲料后,AFB1在体内经羟基化所形成的代谢物。AFM1主要存在于动物的乳汁中,在肝肾、肉、蛋以及尿液也有存在。随着人们生活... 黄曲霉毒素M1（Aflatoxin M1,AFM1）是黄曲霉毒素的一种,是在动物摄入含有黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）的饲料后,AFB1在体内经羟基化所形成的代谢物。AFM1主要存在于动物的乳汁中,在肝肾、肉、蛋以及尿液也有存在。随着人们生活水平的提高,乳及乳制品以其较高的营养价值深受消费者的喜爱。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素M1 免疫学检测方法 乳及乳制品 AFB1 AFM1 营养价值 代谢物 羟基化
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量子点标记技术在免疫学检测中的应用 被引量：4
8
作者 李文君 侯玉泽 +4 位作者 胡骁飞 王坤 裴亚峰 张改平 邓瑞广 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期953-956,共4页
1959年,Yalow等[1]将放射性同位素示踪与免疫反应相结合建立了放射免疫测定法,实现了痕量分析化学方面的重大突破,从而开创了标记免疫分析这一崭新领域。此后,一系列标记免疫分析方法纷纷涌现并不断发展,如酶联免疫吸附法、荧光免疫测... 1959年,Yalow等[1]将放射性同位素示踪与免疫反应相结合建立了放射免疫测定法,实现了痕量分析化学方面的重大突破,从而开创了标记免疫分析这一崭新领域。此后,一系列标记免疫分析方法纷纷涌现并不断发展,如酶联免疫吸附法、荧光免疫测定法、免疫层析测定法、免疫传感器测定法等等。 展开更多
关键词 免疫学检测 标记技术 量子点 放射免疫测定 放射性同位素示踪 酶联免疫吸附法 应用 标记免疫分析
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免疫学技术在食品过敏原检测中的应用 被引量：10
9
作者 胡骁飞 王耀 +1 位作者 邓瑞广 张改平 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1-5,共5页
食品过敏原可引起机体产生过敏反应,严重危害人类健康及生命安全。目前食品包装上过敏原信息标注规范尚不完善,因此食品过敏原检测技术对于预防含有过敏原食品进入流通领域,减少过敏事件发生至关重要。本文综述了免疫学检测技术在食品... 食品过敏原可引起机体产生过敏反应,严重危害人类健康及生命安全。目前食品包装上过敏原信息标注规范尚不完善,因此食品过敏原检测技术对于预防含有过敏原食品进入流通领域,减少过敏事件发生至关重要。本文综述了免疫学检测技术在食品过敏原检测中应用,并展望了其未来的发展趋势。 展开更多
关键词 食品过敏原 免疫学技术 检测
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磺胺二甲氧嘧啶单克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定 被引量：5
10
作者 刘宣兵 鲁晓翠 +6 位作者 张改平 杨小保 侯玉泽 邓瑞广 刘庆堂 职爱民 宋春美 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期739-744,共6页
用重氮化法将SDM(磺胺二甲氧嘧啶)偶联于载体蛋白BSA和OVA,合成免疫原BSA-SDM和包被原OVA-SDM,并用紫外扫描(UV)、SDS-PAGE进行鉴定;用BSA-SDM免疫BALB/C小鼠,间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术建立分泌SDM mAb细... 用重氮化法将SDM(磺胺二甲氧嘧啶)偶联于载体蛋白BSA和OVA,合成免疫原BSA-SDM和包被原OVA-SDM,并用紫外扫描(UV)、SDS-PAGE进行鉴定;用BSA-SDM免疫BALB/C小鼠,间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术建立分泌SDM mAb细胞株,用体内诱生腹水法制备SDM mAb;对SDM mAb的效价、亲和性、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。结果表明,BSA-SDM人工抗原制备成功,分子结合比约为1∶12.1;筛选出1B43、D9、4E1共3株敏感特异的杂交瘤细胞,间接ELISA效价细胞培养上清分别为1∶3.2×102、1∶5.12×102、1∶8.1×102,腹水分别为1∶2.56×105、1∶2.56×1051、∶5.12×105,4E1亲和常数(Ka)为1.25×1010L/mol;4E1株对SDM的IC50为16.64ng/ml,与磺胺-6-甲氧嘧啶交叉反应率为5%,与其他磺胺类药物无交叉反应性。本试验获得了抗SDM高价、敏感、特异的mAb,可用于SDM残留检测的免疫学试验。 展开更多
关键词 磺胺二甲氧嘧啶 单克隆抗体 免疫学特性
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1-芘丁酸单克隆抗体的制备及免疫学性能鉴定 被引量：2
11
作者 胡骁飞 孔蒙蒙 +3 位作者 邢广旭 邢云瑞 孙亚宁 张改平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1114-1118,共5页
目的:拟制备灵敏、特异的1-芘丁酸(PBA)单克隆抗体并对其免疫学性能进行鉴定。方法:碳二亚胺法(EDC)制备人工抗原PBA-BSA和PBA-OVA。PBA-BSA免疫BALB/c小鼠,选择血清效价高、灵敏度良好的小鼠进行细胞融合并筛选出分泌抗PBA单克隆抗体... 目的:拟制备灵敏、特异的1-芘丁酸(PBA)单克隆抗体并对其免疫学性能进行鉴定。方法:碳二亚胺法(EDC)制备人工抗原PBA-BSA和PBA-OVA。PBA-BSA免疫BALB/c小鼠,选择血清效价高、灵敏度良好的小鼠进行细胞融合并筛选出分泌抗PBA单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法批量制备抗体并对其免疫学性能进行鉴定。结果:筛选出能稳定分泌PBA单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株10C2A6,单克隆抗体效价为1∶2.56×10^5,IC50为0.86 ng/ml,亚型为IgG2b型,亲和常数为1.96×10^9 L/mol,与芘、1-芘甲醛和1-芘甲醇的交叉反应率分别为1.74%、1.42%和0.63%,与其他物质交叉反应率均小于0.05%。结论:本实验成功制备出了灵敏、特异的PBA单克隆抗体,并为其免疫学检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 1-芘丁酸 人工抗原 细胞融合 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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磺胺嘧啶单克隆抗体的制备及其免疫学特性研究 被引量：2
12
作者 刘庆堂 滕曼 +5 位作者 职爱民 刘宣兵 杨艳艳 柴书军 邓瑞广 张改平 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2009年第6期19-24,共6页
【目的】制备磺胺嘧啶(Sulfadiazine,SD)单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并对其免疫学特性进行检测。【方法】用重氮化法将SD偶联于载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上,合成免疫原BSA-SD和包被原OVA-SD,并用紫外扫描(UV)... 【目的】制备磺胺嘧啶(Sulfadiazine,SD)单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并对其免疫学特性进行检测。【方法】用重氮化法将SD偶联于载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上,合成免疫原BSA-SD和包被原OVA-SD,并用紫外扫描(UV)、SDS-PAGE法进行鉴定。用BSA-SD免疫Balb/c小鼠,间接ELISA和阻断ELISA法筛选细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术建立SD mAb细胞株,用体内诱生腹水法制备SD mAb,对SDmAb的效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。【结果】BSA-SD人工抗原制备成功,SD与BSA的分子结合比约为10.3∶1;筛选出6B5-E4、6B5-E9、3A5-B4和2H8-G5 4株敏感特异的杂交瘤细胞,其细胞培养上清液效价分别为1∶810、1∶256、1∶512、1∶512,腹水效价分别为1∶(8.6×106)、1∶(2.5×106)、1∶(5×106)和1∶(5×106)。6B5-E4株对SD的半数抑制浓度(IC50)为0.54μg/L。SD mAb与磺胺一甲基嘧啶交叉反应率为2.7%,与其他磺胺类药物无交叉反应性。【结论】获得了抗SD效价高、敏感、特异的mAb,可用于SD残留的快速检测。 展开更多
关键词 磺胺嘧啶 单克隆抗体 免疫学特性
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鹅星状病毒感染在河南地区的分子流行病学调查 被引量：4
13
作者 金前跃 郭永刚 +7 位作者 李俊朋 秦保亮 王寅彪 郭振华 杜永坤 万博 邢广旭 张改平 《畜牧与兽医》 北大核心 2021年第7期100-106,共7页
鹅星状病毒(goose astrovirus, GAstV)是引起当前雏鹅痛风疾病的主要病原体,其流行严重影响养鹅产业的健康发展。为研究鹅星状病毒在河南地区的流行情况,本研究于2018年从河南12个地市的养鹅场采集了36份雏鹅痛风样品,采用RT-PCR方法进... 鹅星状病毒(goose astrovirus, GAstV)是引起当前雏鹅痛风疾病的主要病原体,其流行严重影响养鹅产业的健康发展。为研究鹅星状病毒在河南地区的流行情况,本研究于2018年从河南12个地市的养鹅场采集了36份雏鹅痛风样品,采用RT-PCR方法进行检测,并对12个地市代表毒株的ORF1b基因进行了序列测定、同源性分析和系统进化分析。研究结果表明,36份样品均为阳性,阳性率为100%;12个地市代表毒株的ORF1b序列长度均为1 551 bp,各自间的核苷酸同源性为98.7%~99.9%,与河南地区的XX、AstV/HN01/Goose/0103/18、AstV/HB01/Goose/0123/19、AstV/AH01/Goose/0512/18等代表毒株核苷酸同源性为97.9%~99.5%,与国内其他地区的GD、AstV/SDPY/Goose/1116/17、AAstV/Goose/CHN/2017/SD01等代表毒株核苷酸同源性为98.4%~99.7%;系统进化分析显示,12个地市代表毒株与河南及国内其他地区代表毒株,在进化关系上处于同一分支,属于禽星状病毒1群。本研究明确了河南地区鹅星状病毒的分子流行情况,并为鹅痛风病的防治提供了线索和思路。 展开更多
关键词 鹅星状病毒 雏鹅痛风 河南地区 分子流行病学 同源性 系统进化分析
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应用免疫学技术测定植酸酶活性的设想与展望 被引量：1
14
作者 胡骁飞 魏凤仙 +2 位作者 杨继飞 邓瑞广 张改平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1697-1705,共9页
植酸广泛存在于粮食、饲料中,与磷及其他养分结合形成不溶性的络合物,降低磷和其他养分利用率。植酸酶能够分解植酸及其盐类,释放出磷元素及其他养分,因而可以在饲料中添加植酸酶来减少磷酸氢钙用量。但如果饲料中降低了磷酸氢钙添加量... 植酸广泛存在于粮食、饲料中,与磷及其他养分结合形成不溶性的络合物,降低磷和其他养分利用率。植酸酶能够分解植酸及其盐类,释放出磷元素及其他养分,因而可以在饲料中添加植酸酶来减少磷酸氢钙用量。但如果饲料中降低了磷酸氢钙添加量,而忘记添加植酸酶会造成动物缺磷,导致饲料产品质量降低,动物生产性能及产品品质下降,因而,监控检测饲料中植酸酶活性对保证饲料产品质量至关重要。目前,植酸酶常用的检测方法不适合饲料生产及畜禽养殖企业现场实时检测。本文提出了用免疫学检测技术检测植酸酶活性的设想,并展望了免疫学技术在植酸酶活性检测中应用前景。 展开更多
关键词 植酸 植酸酶 饲料品质 免疫学检测
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高亲和力大豆凝集素单抗制备及免疫学特性鉴定 被引量：1
15
作者 胡骁飞 李燕虹 +5 位作者 邢云瑞 胡思宇 孙亚宁 邢广旭 邓瑞广 张改平 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期2477-2483,共7页
为制备高亲和力的大豆凝集素(SBA)单克隆抗体,本试验以50μg SBA蛋白/200μL乳化液/只的剂量免疫BALB/c小鼠,间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定多抗血清效价和灵敏性。选择血清效价和灵敏性较好的小鼠进行细胞融合。通过有限稀释亚克隆筛选... 为制备高亲和力的大豆凝集素(SBA)单克隆抗体,本试验以50μg SBA蛋白/200μL乳化液/只的剂量免疫BALB/c小鼠,间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定多抗血清效价和灵敏性。选择血清效价和灵敏性较好的小鼠进行细胞融合。通过有限稀释亚克隆筛选出能稳定分泌SBA单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法批量制备SBA单克隆抗体并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明,SBA免疫的4只小鼠中,1号小鼠效价最高且灵敏性最好,半数抑制浓度(IC50)为571.4μg·L^-1。选取该小鼠进行细胞融合,并最终得到1株杂交瘤细胞,命名为5B4E10。制备的SBA单克隆抗体的效价达到1∶409600以上,IC50为82.04μg·L^-1,亚型为IgG1型,亲和力常数(Ka)为1.83×10^9 L·mol^-1。且该抗体与大豆球蛋白、β-伴大豆球蛋白和其他抗营养因子无交叉反应。本研究结果为建立大豆及其制品中SBA的免疫学检测方法奠定了良好的抗体基础。 展开更多
关键词 大豆凝集素(SBA) 动物免疫 细胞融合 杂交瘤筛选 单克隆抗体
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基于量子点技术的猪伪狂犬病病毒gB抗体免疫层析试纸研究
16
作者 杨苏珍 刘运超 +3 位作者 邢云瑞 孙亚宁 尚延丽 张改平 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期4160-4167,共8页
【目的】建立一种基于量子点(quantum dots,QDs)技术的猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)gB抗体免疫层析试纸,为PRV疫苗免疫效果评估提供一种快速、简便的检测技术。【方法】选用昆虫细胞表达系统表达的gB蛋白,采用羧基修饰的水溶... 【目的】建立一种基于量子点(quantum dots,QDs)技术的猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)gB抗体免疫层析试纸,为PRV疫苗免疫效果评估提供一种快速、简便的检测技术。【方法】选用昆虫细胞表达系统表达的gB蛋白,采用羧基修饰的水溶性QDs,在偶联剂1-乙基-3[3-二甲基氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐(EDC)的作用下制备gB-QDs荧光标记物。将金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococcus aureus protein A,SPA)和抗gB蛋白的单克隆抗体分别固定在硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,将样品垫、标记垫、吸水垫、支撑底板按生产工艺组装成基于QDs的荧光免疫层析试纸。检测该试纸的特异性、敏感性及与商品化ELISA试剂盒的符合率。【结果】敏感性试验结果显示,该试纸的敏感性为1∶6400。特异性试验结果显示,该试纸与猪瘟病毒(CSFV)、口蹄疫病毒(FMDV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性血清均无交叉反应,特异性为100%。通过检测田间猪血清样品,对比商品化ELISA检测试剂盒,结果显示,113份田间猪血清样品中,两种方法检测结果不一致的血清有11份,结果一致的血清有102份,该试纸与商品化ELISA试剂盒的符合率为90.3%。【结论】本研究制备的试纸检测线紫外灯下显色清晰可见,辨识度高,具有较高的特异性和敏感性,可用于PRV gB抗体的检测。 展开更多
关键词 猪 伪狂犬病病毒(PRV) 量子点 抗体 试纸
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T-2毒素完全抗原制备及免疫学检测方法的建立 被引量：3
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作者 郉云瑞 孙亚宁 +5 位作者 姚静静 王英华 郝慧芳 柴书军 李俊鹏 胡骁飞 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第4期124-129,共6页
为建立小分子霉菌毒素中T-2毒素残留的检测方法,合成并鉴定T-2毒素完全抗原,通过制备敏感性强的抗T-2毒素多抗血清,建立T-2毒素免疫学检测方法。采用N,N'-羰基二咪唑(CDI)法合成完全抗原T-2-BSA和包被原T-2-OVA,采用聚丙烯酰胺凝胶... 为建立小分子霉菌毒素中T-2毒素残留的检测方法,合成并鉴定T-2毒素完全抗原,通过制备敏感性强的抗T-2毒素多抗血清,建立T-2毒素免疫学检测方法。采用N,N'-羰基二咪唑(CDI)法合成完全抗原T-2-BSA和包被原T-2-OVA,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和动物免疫试验对合成的完全抗原进行鉴定,优化ELISA反应条件,建立T-2毒素间接竞争ELISA检测方法。SDS-PAGE结果显示,完全抗原T-2-BSA合成成功;动物试验结果显示,制备的完全抗原能够刺激小鼠产生针对T-2毒素的特异性抗体;基于该抗体所建立的T-2毒素间接竞争ELISA检测方法的灵敏度(IC50)为8.34 ng/m L,检测限(LOD)为0.048 ng/m L。综上,成功合成了完全抗原T-2-BSA,获得了效价高、敏感性强的抗T-2毒素的鼠源多克隆抗体,并初步建立了T-2毒素免疫学检测方法。 展开更多
关键词 T-2毒素 完全抗原 多克隆抗血清 ELISA
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《猪业科学》——了解养猪业的一扇窗——2016年第4期读后感
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作者 郭振华 《猪业科学》 2016年第5期13-13,共1页
作为从事猪场疫病检测和防控的研究人员，在研究工作之余，《猪业科学》是我长期阅读的杂志之一，其丰富的内容设置基本覆盖了养猪业的各个环节，每一位从业者从中总能发现亮点，有所收获，是了解养猪行业很好的一扇窗。在期盼中，本期... 作为从事猪场疫病检测和防控的研究人员，在研究工作之余，《猪业科学》是我长期阅读的杂志之一，其丰富的内容设置基本覆盖了养猪业的各个环节，每一位从业者从中总能发现亮点，有所收获，是了解养猪行业很好的一扇窗。在期盼中，本期杂志如约而至，品味之余，将一些感受与大家共享。 展开更多
关键词 养猪业 科学 窗 研究人员 疫病检测 内容设置 杂志 防控
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黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备及基于该抗体的黄曲霉毒素B_1免疫学检测方法的建立 被引量：8
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作者 姚静静 胡骁飞 +6 位作者 韩俊岭 徐帆 滕蔓 邢云瑞 孙亚宁 邓瑞广 张改平 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期1405-1414,共10页
为了快速准确检测粮食与饲料中黄曲霉毒素B_1(AFB_1)含量,本试验制备了具有高灵敏度的AFB_1单克隆抗体,并将其应用于AFB_1间接竞争酶联免疫吸附测定(ELISA)方法的建立。采用碳二亚胺(EDC)法制备AFB_1完全抗原[AFB_1-牛血清白蛋白(BSA)和... 为了快速准确检测粮食与饲料中黄曲霉毒素B_1(AFB_1)含量,本试验制备了具有高灵敏度的AFB_1单克隆抗体,并将其应用于AFB_1间接竞争酶联免疫吸附测定(ELISA)方法的建立。采用碳二亚胺(EDC)法制备AFB_1完全抗原[AFB_1-牛血清白蛋白(BSA)和AFB_1-鸡卵白蛋白(OVA)],并免疫B_ALB/c小鼠。经细胞融合,筛选出能够分泌高灵敏度AFB_1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法,大量制备AFB_1单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。基于制备的AFB_1单克隆抗体,建立AFB_1间接竞争ELISA检测方法。结果显示:通过筛选,获得稳定产生抗体的杂交瘤细胞株9H1F5,经间接ELISA方法测定,获得的AFB_1单克隆抗体的效价高达5.12×105,亲和力常数(Ka)=6.72×107L/mol,抗体亚型为免疫球蛋白G_2(IgG_2)。采用间接竞争ELISA方法测得AFB_1的半数抑制浓度(IC_(50))为0. 232 ng/mL,检测范围为0.014～1.920 ng/mL,最低检测限为0.014 ng/mL。同时,该AFB_1单克隆抗体与黄曲霉毒素B_2(AFB_2)、黄曲霉毒素G_1(AFG_1)、黄曲霉毒素G_2(AFG_2)、黄曲霉毒素M1(AFM1)的交叉反应率分别为40.21%、33.19%、31.96%、4.40%,与其他霉菌毒素无交叉反应。由上述结果可知,本试验成功制备了灵敏度高、特异性强的AFB_1单克隆抗体,并基于该抗体建立了检测AFB_1的间接竞争ELISA方法,为粮食与饲料中AFB_1快速免疫学检测奠定了基础。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1 细胞融合 单克隆抗体 ELISA
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猪伪狂犬病实验室检测与控制净化常见问题 被引量：1
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作者 解伟涛 梁跃 +1 位作者 乔松林 郭成留 《今日养猪业》 2015年第9期80-81,共2页
目前猪群伪狂犬野毒感染率仍呈不断上升趋势,临床发病症状有所缓和,亚临床感染较多,伪狂犬防控形势依然严峻。
关键词 猪伪狂犬病 亚临床感染 野毒感染 猪无名高热病 流行性腹泻 临床发病 实验室检测 抗体检测 蓝耳病 临床诊断
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