目的本文拟采用体外实验,探讨脑细胞色素P450 2E1(cytochrome P450 2E1,CYP 2E1)在尼古丁致神经细胞氧化损伤中的可能作用。方法实验选用IMR-32人神经母细胞瘤细胞系,设置对照组,尼古丁小剂量组(0.1 n M)、中剂量组(1 n M)和大剂量组(10...目的本文拟采用体外实验,探讨脑细胞色素P450 2E1(cytochrome P450 2E1,CYP 2E1)在尼古丁致神经细胞氧化损伤中的可能作用。方法实验选用IMR-32人神经母细胞瘤细胞系,设置对照组,尼古丁小剂量组(0.1 n M)、中剂量组(1 n M)和大剂量组(10 n M),并选用中剂量尼古丁加入不同剂量CYP2E1特异性抑制剂二丙烯基硫醚(diallyl sulfide,DAS)(0.025、0.05、0.075 n M)。尼古丁或尼古丁与二丙烯基硫醚处理细胞48 h。取处理后细胞,分别检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、CYP2E1mRNA和蛋白水平的变化,并对CYP2E1蛋白表达水平与LDH活力、SOD活力、ROS含量进行相关性分析。结果与对照组相比,经低、中、高剂量尼古丁处理后,IMR-32细胞增殖受抑制,抑制率分别为39%、47%、52%(均P<0.05);细胞受到损伤,培养基LDH活力分别升高14%、50%、70%(均P<0.05);SOD活力下降至对照组的76%、58%、44%(均P<0.05);细胞CYP2E1蛋白表达水平显著升高至2.19、2.65及2.76倍(均P<0.05),未见CYP2E1 mRNA水平改变;ROS生成量升高48%、65%、136%(均P<0.05)。与尼古丁(1 nm)组相比,加入低、中、高剂量抑制剂后,SOD活力升高24%、47%、52%(均P<0.05);ROS含量下降至77.8%、57.8%、44.3%(均P<0.05)。相关性分析显示,CYP2E1含量与LDH活力呈正相关,与SOD活力呈负相关,相关系数分别为0.740和-0.584,与ROS含量呈正相关,相关系数为0.695(均P<0.01)。结论尼古丁处理可抑制IMR-32细胞增殖,诱导脑CYP2E1表达,明显诱导ROS生成,致神经细胞损伤。展开更多
