目的:寻找一种适合乳腺癌细胞MCF-7蛋白提取的裂解液配方用于免疫印迹分析。方法:配制两种不同的细胞裂解液A与B,分别对培养的密度相当的人乳腺癌细胞MCF-7进行总蛋白的提取,Bradford法测蛋白含量,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对蛋白...目的:寻找一种适合乳腺癌细胞MCF-7蛋白提取的裂解液配方用于免疫印迹分析。方法:配制两种不同的细胞裂解液A与B,分别对培养的密度相当的人乳腺癌细胞MCF-7进行总蛋白的提取,Bradford法测蛋白含量,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对蛋白进行分离,免疫印迹法检测β-actin和Twist的表达,比较2种裂解液裂解效果。结果:2种细胞裂解液均可满足免疫印迹分析的要求,B液提取的蛋白含量虽比A液高,但A液用于免疫印迹检测β-actin和Twist的效果更佳。结论:免疫印迹分析结果显示:A细胞裂解液(50 mM pH 7.4 Tris-HCl,150 mM NaCl,0.1%SDS,1%NP-40,1 mM EDTA,临用前加入PMSF使终浓度为1mM)可作为提取乳腺癌细胞MCF-7中蛋白的一种理想配方。展开更多
文摘目的:寻找一种适合乳腺癌细胞MCF-7蛋白提取的裂解液配方用于免疫印迹分析。方法:配制两种不同的细胞裂解液A与B,分别对培养的密度相当的人乳腺癌细胞MCF-7进行总蛋白的提取,Bradford法测蛋白含量,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对蛋白进行分离,免疫印迹法检测β-actin和Twist的表达,比较2种裂解液裂解效果。结果:2种细胞裂解液均可满足免疫印迹分析的要求,B液提取的蛋白含量虽比A液高,但A液用于免疫印迹检测β-actin和Twist的效果更佳。结论:免疫印迹分析结果显示:A细胞裂解液(50 mM pH 7.4 Tris-HCl,150 mM NaCl,0.1%SDS,1%NP-40,1 mM EDTA,临用前加入PMSF使终浓度为1mM)可作为提取乳腺癌细胞MCF-7中蛋白的一种理想配方。
