医学细胞生物学实验教学改革探索 被引量：5

1

作者 李洁 李理 周进 《科教文汇》 2010年第24期130-131,共2页

实验教学在我国医学教育中占有极其重要的地位,对于培养合格的医学人才起着决定性的作用。为提高实验教学质量和学生的综合素质,医学细胞生物学与遗传学教研室进行了医学细胞生物学实验教学改革。通过改革,调动了学生学习积极性,更好地... 实验教学在我国医学教育中占有极其重要的地位,对于培养合格的医学人才起着决定性的作用。为提高实验教学质量和学生的综合素质,医学细胞生物学与遗传学教研室进行了医学细胞生物学实验教学改革。通过改革,调动了学生学习积极性,更好地培养了学生的创新精神和实践能力,取得了明显的实验教学成效。 展开更多

关键词 医学细胞生物学 实验教学

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加强高等医学院校实验教学质量监控的思考 被引量：1

2

作者 饶晓红 田强 《教育教学论坛》 2013年第51期228-230,共3页

实验教学是高等教育的重要组成部分,对高等医学教育尤为重要。加强实验教学质量监控体系的构建是高等医学院校实验教学管理的重要环节之一,能够推进实验教学管理的规范化、信息化和科学化,对提高实验教学质量将起到非常重要的作用。本... 实验教学是高等教育的重要组成部分,对高等医学教育尤为重要。加强实验教学质量监控体系的构建是高等医学院校实验教学管理的重要环节之一,能够推进实验教学管理的规范化、信息化和科学化,对提高实验教学质量将起到非常重要的作用。本文结合高等医学院校实际,对实验教学质量监控体系的构建进行了分析,并围绕如何加强高等医学院校实验教学质量监控体系提出了相应的措施。 展开更多

关键词 高等医学院校 实验教学 质量监控

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医学遗传学实验教学中对医学生综合实践能力的培养初探

3

作者 曾永秋 税青林 +1 位作者 刘岚 赵矫 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第13期1345-1346,共2页

＂以实验为中心安排教学＂是近年来美国高校正在开展的一项极有影响力的实验教学改革计划（enhanced biology education programe,EBE）,其教学重点为能力的培养[1-2]。医学遗传学是应用遗传学的理论和方法研究人类遗传性疾病和人类疾... ＂以实验为中心安排教学＂是近年来美国高校正在开展的一项极有影响力的实验教学改革计划（enhanced biology education programe,EBE）,其教学重点为能力的培养[1-2]。医学遗传学是应用遗传学的理论和方法研究人类遗传性疾病和人类疾病发生的遗传学问题的一门综合性学科[3],是横跨基础医学与临床医学的桥梁课程。 展开更多

关键词 实验教学改革 医学遗传学 实践能力 培养 人类遗传性疾病 医学生 教学重点 疾病发生

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不良妊娠夫妇的细胞遗传学分析 被引量：2

4

作者 赵小平 陈绍坤 +1 位作者 黄燕 税青林 《泸州医学院学报》 2010年第1期31-33,共3页

目的:探讨不良妊娠夫妇与染色体异常的关系。方法:对570例(285对)有习惯性流产、不孕不育、死产、死胎及曾生育畸形儿或智力低下儿史的遗传咨询者进行外周血淋巴细胞培养,G显带染色体核型分析。结果:570例遗传咨询者中染色体核型异常38... 目的:探讨不良妊娠夫妇与染色体异常的关系。方法:对570例(285对)有习惯性流产、不孕不育、死产、死胎及曾生育畸形儿或智力低下儿史的遗传咨询者进行外周血淋巴细胞培养,G显带染色体核型分析。结果:570例遗传咨询者中染色体核型异常38例,异常率达6.67%,显著高于普通人群。结论:染色体异常是导致不良孕产的重要影响因素,对不良妊娠夫妇进行细胞遗传学检查,不仅有助于病因的分析与诊断,而且对提高出生人口素质,降低出生缺陷有十分重要的指导意义。 展开更多

关键词 不良妊娠 遗传咨询 染色体

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沉默SEPT9基因对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响 被引量：2

5

作者 曾永秋 曹洋 +2 位作者 梅志强 刘岚 税青林 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期236-239,共4页

目的探讨SEPT9基因与肝癌的关系,进一步揭示SEPT9基因在肝癌发生发展过程中的作用。方法将构建的针对SEPT9基因的shRNA表达载体通过脂质体LipofectamineTM2000转染人肝癌HepG2细胞,荧光显微镜下观察细胞的转染效率,RT-PCR、Western blo... 目的探讨SEPT9基因与肝癌的关系,进一步揭示SEPT9基因在肝癌发生发展过程中的作用。方法将构建的针对SEPT9基因的shRNA表达载体通过脂质体LipofectamineTM2000转染人肝癌HepG2细胞,荧光显微镜下观察细胞的转染效率,RT-PCR、Western blot法分别检测SEPT9 mRNA和蛋白质的表达抑制情况,CCK-8检测细胞的生长抑制情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果荧光显微镜观察细胞的转染效率达到70%以上;SEPT9 mRNA及蛋白表达抑制率均受到明显抑制。CCK-8法检测结果显示,实验组HepG2细胞的生长受到明显抑制;流式细胞术检测结果显示实验组HepG2细胞凋亡明显(P<0.05)。结论抑制SEPT9基因的表达可有效抑制HepG2细胞的增殖,并对细胞凋亡有明显的促进作用。 展开更多

关键词 SEPT9基因 RNAI HEPG2细胞 细胞增殖 细胞凋亡

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大鼠脑微血管内皮细胞的原代培养 被引量：4

6

作者 李华 马明义 马红艳 《昆明医科大学学报》 CAS 2012年第12期26-29,共4页

目的探索一种简便可行的脑微血管内皮细胞(brainmicrovascularendothelialcells,BMECs)的培养方法,为研究BMECs在脑血管疾病中的重要作用提供技术支持.方法分离出生后1～4 d内的Wistar大鼠乳鼠大脑皮质,用植块法培养BMECs;用倒置显微镜... 目的探索一种简便可行的脑微血管内皮细胞(brainmicrovascularendothelialcells,BMECs)的培养方法,为研究BMECs在脑血管疾病中的重要作用提供技术支持.方法分离出生后1～4 d内的Wistar大鼠乳鼠大脑皮质,用植块法培养BMECs;用倒置显微镜观察BMECs的形态以及从皮质块细胞迁出的过程;通过形态学观察及第Ⅷ因子相关抗原免疫荧光细胞化学法对培养细胞进行鉴定.结果大脑皮质块植块法培养的大鼠BMECs呈单层贴壁生长,细胞形态以长梭形、多角形、三角形、四边形为主,呈典型的"铺路石"样征象,第3代细胞经免疫荧光染色,第Ⅷ因子相关抗原呈阳性,阳性率达95%以上.结论植块法具有经济、简便、要求条件不高,可成功培养高纯度的脑微血管内皮细胞的优点. 展开更多

关键词 大鼠 脑微血管内皮细胞 原代培养

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STAT5A基因有效siRNA序列的筛选及其对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

7

作者 杨华秀 曾永秋 +3 位作者 曹洋 林春燕 黄燕 李洁 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1031-1035,共5页

目的筛选针对STAT5A基因有效的siRNA,研究抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖、周期及凋亡的影响,探讨STAT5A基因在肝癌发生发展中的作用。方法设计并化学合成针对STAT5A基因三个靶点的siRNA,采用脂质体法转染人肝癌细胞HepG2,... 目的筛选针对STAT5A基因有效的siRNA,研究抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖、周期及凋亡的影响,探讨STAT5A基因在肝癌发生发展中的作用。方法设计并化学合成针对STAT5A基因三个靶点的siRNA,采用脂质体法转染人肝癌细胞HepG2,分别用半定量RT-PCR、Western blot技术检测转染后HepG2细胞STAT5A mRNA和蛋白表达的变化,从中筛选出一段干扰效率最显著的siRNA;用该siRNA转染HepG2细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果三段STAT5A基因的siRNA均对HepG2细胞中STAT5A mRNA和蛋白表达产生了不同程度的抑制作用,其中以siRNA-3697的干扰效率最高,STAT5A mRNA和蛋白的表达抑制率分别为72.03%和66.27%(P<0.05);转染后1～4 d细胞生长速度减慢、增殖显著抑制(P<0.05);转染后48 h细胞凋亡率为37.33%(P<0.05)。结论成功筛选出针对STAT5A基因有效的siRNA;该siRNA可特异地阻断HepG2细胞STAT5A基因的表达,抑制细胞生长,诱导细胞凋亡。 展开更多

关键词 STAT5A基因 SIRNA HEPG2细胞 细胞增殖 细胞凋亡

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抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖的影响及其机制研究

8

作者 杨华秀 曾永秋 +2 位作者 曹洋 黄燕 李洁 《泸州医学院学报》 2012年第6期559-563,共5页

目的:研究抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖的影响,并对其影响肝癌细胞增殖的机制进行探讨,为STAT5A基因在肝细胞癌中的功能研究提供实验依据。方法:构建针对STAT5A基因的shRNA真核表达载体,脂质体法转染人肝癌细胞HepG2,采... 目的:研究抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖的影响,并对其影响肝癌细胞增殖的机制进行探讨,为STAT5A基因在肝细胞癌中的功能研究提供实验依据。方法:构建针对STAT5A基因的shRNA真核表达载体,脂质体法转染人肝癌细胞HepG2,采用半定量RT-PCR的方法检测细胞中STAT5A mRNA的变化;蛋白质印迹技术检测转染前后细胞中STAT5A蛋白、细胞周期蛋白Cyclin D1蛋白表达的变化;采用MTT法检测细胞增殖的情况。结果:酶切及测序结果显示shRNA表达载体均构建成功,转染HepG2细胞48h后,与对照组相比,RT-PCR结果显示实验组细胞中STAT5A mRNA的抑制率为72.03%(P<0.05),蛋白质印迹法显示STAT5A蛋白的抑制率为66.27%(P<0.05),细胞周期蛋白Cyclin D1蛋白表达下降47.16%(P<0.05),同时MTT法显示细胞生长速度减慢、增殖抑制明显。结论:抑制STAT5A基因的表达可有效抑制HepG2细胞的增殖,其机制可能是通过下调Cyclin D1的表达实现的。 展开更多

关键词 STAT5A基因 RNA干扰 HEPG2细胞 细胞增殖 CYCLIN D1

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动物细胞培养中支原体污染的检测方法比较研究 被引量：6

9

作者 刘谋渊 刘岚 +1 位作者 赵娇 余红 《现代医药卫生》 2011年第5期682-683,共2页

目的:探索细胞培养中支原体污染检测快速有效的方法。方法:用4种方案对待测细胞株进行支原体污染检测,并比较其优缺点。结果:4种方法对13种待测细胞株分别检测后,相差显微境检测阳性率为23.08%;其余3种方法检测阳性率均为30.77%,污染细... 目的:探索细胞培养中支原体污染检测快速有效的方法。方法:用4种方案对待测细胞株进行支原体污染检测,并比较其优缺点。结果:4种方法对13种待测细胞株分别检测后,相差显微境检测阳性率为23.08%;其余3种方法检测阳性率均为30.77%,污染细胞株直接培养法和PCR法一致,但DNA荧光染色法与前二者之间有差异。结论:细胞培养支原体检测方法各有优缺点,应根据具体情况选取不同方法。 展开更多

关键词 细胞培养 支原体 检测

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过表达核糖核酸酶抑制因子通过调节ILK/PI3K/AKT信号途径抑制小鼠黑色素瘤B16-F10细胞体内外生长

10

作者 黄梦鸽 潘湘阳 +1 位作者 陈俊霞 田强 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期373-382,共10页

核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)是胞浆内的一种酸性蛋白质.已有研究证明,RI与核糖核酸酶A(RNase A)和血管生成素(angiogenin,ANG)结合可抑制其活性.本室前期实验证实,RI可有效抑制某些肿瘤的生长和转移.然而,RI抑制肿... 核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)是胞浆内的一种酸性蛋白质.已有研究证明,RI与核糖核酸酶A(RNase A)和血管生成素(angiogenin,ANG)结合可抑制其活性.本室前期实验证实,RI可有效抑制某些肿瘤的生长和转移.然而,RI抑制肿瘤的分子机制尚不清楚.本研究探讨RI对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞生长和凋亡的影响及其机制.MTT法结合流式细胞术分析结果证明,RI基因稳定转染导致B16-F10黑色素瘤细胞S期阻滞,抑制B16-F10黑色素瘤细胞增殖.Annexin V/PI结合流式细胞术结果显示,RI过表达引起细胞凋亡.与此相一致,蛋白质印迹分析显示,过表达RI引起抗凋亡分子Bcl-2表达下调,而Bax上调,同时伴有Pro-casepase 3激活.C57BL/6小鼠移植成瘤实验显示,与对照相比,转染RI的B16-F10细胞形成的肿瘤重量显著减少,同时伴有肿瘤组织微血管密度降低.提示RI过表达能抑制微血管生成.此外,体内外组织/细胞免疫化学和蛋白质印迹结果揭示,过表达RI可显著抑制整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)下游靶分子Akt和GSK-3β的磷酸化,并降低β-联蛋白的表达.研究结果证明,过表达RI可通过抑制ILK/PI3K/AKT信号通路,促进细胞凋亡,引起S期阻滞,并抑制血管生成,从而显著抑制小鼠黑色素瘤B16-F10细胞在体内、外的生长.上述结果提示,RI可能是治疗黑色素瘤的有效分子靶点. 展开更多

关键词 核糖核酸酶抑制因子 B16-F10细胞 细胞凋亡 ILK/PI3K/AKT信号通路

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泸州髙坝地区480例遗传咨询者细胞遗传学分析

11

作者 刘谋渊 刘岚 +1 位作者 余红 赵娇 《中国优生与遗传杂志》 2011年第9期62-63,共2页

目的对遗传咨询者进行细胞遗传学分析,探讨细胞遗传学分析在遗传咨询与优生优育工作中的重要作用。方法常规取外周血淋巴细胞培养,制备染色体G显带标本,镜下核型分析。结果检出染色体异常核型63例,异常率13.13%。结论染色体异常是影响... 目的对遗传咨询者进行细胞遗传学分析,探讨细胞遗传学分析在遗传咨询与优生优育工作中的重要作用。方法常规取外周血淋巴细胞培养,制备染色体G显带标本,镜下核型分析。结果检出染色体异常核型63例,异常率13.13%。结论染色体异常是影响智力和正常生育的重要因素之一。开展染色体检查有利于优生优育,在遗传咨询工作中具有重要意义。 展开更多

关键词 遗传咨询 核型分析 优生优育

原文传递

雄激素受体基因c.528C>A变异与雄激素不敏感综合征无关 被引量：1

12

作者 李华 马明义 +3 位作者 杜亭 雷娟 覃维 张宇翔 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期598-600,共3页

雄激素对男性个体发生、生长发育和生殖功能等都起着十分重要的作用。雄激素必须通过靶器官上特异的雄激素受体（androgen receptor，AR）而起作用。雄激素不敏感综合征（androgen insensitivity syndrome, AIS）是由于AR基因缺失、突... 雄激素对男性个体发生、生长发育和生殖功能等都起着十分重要的作用。雄激素必须通过靶器官上特异的雄激素受体（androgen receptor，AR）而起作用。雄激素不敏感综合征（androgen insensitivity syndrome, AIS）是由于AR基因缺失、突变导致AR功能障碍或缺失引起雄激素的作用减弱或消失。 展开更多

关键词 雄激素不敏感综合征 雄激素受体基因 RECEPTOR 变异 个体发生 生殖功能 生长发育 基因缺失

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一散发型软骨发育不全家系的基因突变分析及产前基因诊断 被引量：1

13

作者 李华 马明义 +3 位作者 杜亭 覃维 雷娟 张宇翔 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第26期50-53,共4页

目的通过对一散发型软骨发育不全(achondroplasia,ACH)家系成员成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor 3,FGFR 3)基因突变的靶向检测与产前基因诊断,以达到寻找致病突变位点和避免患儿出生的目的。方法利用PCR产物... 目的通过对一散发型软骨发育不全(achondroplasia,ACH)家系成员成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor 3,FGFR 3)基因突变的靶向检测与产前基因诊断,以达到寻找致病突变位点和避免患儿出生的目的。方法利用PCR产物直接测序的方法,对ACH家系中2个表型正常个体、2个ACH患者与胎儿的FGFR3基因第10外显子中G1138A G1138C与A1180T突变进行检测,并用限制性核酸内切酶Bfm I对已发现的突变进行酶切验证。结果 ACH家系中患者为G1138A突变杂合子,而父母、胎儿及父亲精液DNA均为野生型纯合子。胎儿娩出后脐血基因分析结果与产前检查一致。结论在某些散发型软骨发育不全家系中,患者的致病基因可能源至双亲之一生殖系部分细胞存在的突变,其表型正常是因为外周血基因组DNA不携带该突变,但患者的同胞发病风险远远大于群体发病率,要想生育正常的小孩,应该进行产前基因诊断。 展开更多

关键词 软骨发育不全 成纤维细胞生长因子受体基因 基因突变 基因诊断

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大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血核心区NCCa-ATP通道的表达变化 被引量：1

14

作者 李华 马明义 《昆明医科大学学报》 CAS 2013年第9期46-50,共5页

日的了解局灶性脑缺血再灌注后磺酰脲类受体1（SURl）调控的非选择性阳离子通道（nonselectivecationchannel，NCCa—ATP通道）表达的变化与脑缺血损伤的关系，探索脑缺血的治疗时间窗．方法以颈内动脉线栓法建立大鼠大脑左侧中动脉梗... 日的了解局灶性脑缺血再灌注后磺酰脲类受体1（SURl）调控的非选择性阳离子通道（nonselectivecationchannel，NCCa—ATP通道）表达的变化与脑缺血损伤的关系，探索脑缺血的治疗时间窗．方法以颈内动脉线栓法建立大鼠大脑左侧中动脉梗塞模型，缺血2h后恢复再灌注．取实验性脑缺血再灌注损伤后3h、6h、8h、12h、24h等不同时间缺血核心区的脑组织，采用RT—PCR及Western—blot技术，测定SURl的mRNA及蛋白表达水平．采用免疫荧光双标法技术，观察SURl在缺血后脑微血管内皮细胞的表达情况．结果缺血再灌注核心区组织在缺血再灌注后3h、6h、8h、12h及24h各时间点SURlmRNA和SURl蛋白的表达量均上调，再灌注后8h达高峰（P〈0．05），缺血再灌注后12h，SURl在脑微血管内皮细胞的表达非常明显．结论局灶性脑缺血再灌注过程中SURl调节的NCCa～ATP通道参与了脑缺血损伤，在脑缺血再灌注后其mRNA和蛋白的表达量均上调．推测应用SURl受体的特异性抑制剂最佳时机在缺血再灌注后8～12h． 展开更多

关键词 局灶性脑缺血再灌注 缺血核心区 NCCa—ATP通道 大鼠

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四川宜宾产桃花水母的线粒体COⅠ序列片段分析 被引量：2

15

作者 蔡延森 刘芹 +2 位作者 王译伟 马明义 税青林 《泸州医学院学报》 2014年第1期79-82,共4页

目的:针对桃花水母形态分类中存在的一些混乱和矛盾,引入分子生物学方法阐明其分类难题。方法:采用PCR.和DNA测序技术,对四川宜宾产桃花水母标本的线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因(mitochondrial cytochrome coxidase subunitⅠ,COⅠ)... 目的:针对桃花水母形态分类中存在的一些混乱和矛盾,引入分子生物学方法阐明其分类难题。方法:采用PCR.和DNA测序技术,对四川宜宾产桃花水母标本的线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因(mitochondrial cytochrome coxidase subunitⅠ,COⅠ)片段进行了扩增与测序,并与GenBank中已有的淡水水母目COⅠ基因序列进行比对分析,利用MEGA 5计算它们的遗传距离,构建NJ树。结果:该桃花水母标本与索氏桃花水母Craspedacusta sowerbii的COⅠ基因相似度极高,同源性在99%以上,遗传距离为0.003,在进化树中与索氏桃花水母聚为同一支。结论:该标本属于索氏桃花水母。 展开更多

关键词 DNA条形码 COⅠ 索氏桃花水母 DNA分类学

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pET 22b-TP17表达载体的构建与鉴定

16

作者 李佳凌 李尹凤 +1 位作者 汤军 蔡延森 《泸州医学院学报》 2014年第3期243-246,共4页

目的:采用原核基因工程技术构建表达梅毒螺旋体外膜脂蛋白TP17的载体,并进行酶切鉴定,为获得重组抗原TP17及其用于梅毒血清学诊断试剂的研究奠定基础。方法:将化学合成的寡核苷酸(oligo)通过PCR的方法拼接成TP17目的基因的序列,并将合... 目的:采用原核基因工程技术构建表达梅毒螺旋体外膜脂蛋白TP17的载体,并进行酶切鉴定,为获得重组抗原TP17及其用于梅毒血清学诊断试剂的研究奠定基础。方法:将化学合成的寡核苷酸(oligo)通过PCR的方法拼接成TP17目的基因的序列,并将合成好的序列克隆入pMD18-T Simple载体。以pMD18-T Simple-TP17为模板,PCR扩增TP17基因片段。PCR产物通过1.5%琼脂糖凝胶电泳回收TP17条带,随后用EcoRⅠ和XhoⅠ对TP17回收所得片段及目的载体pET 22b进行双酶切并连接。连接产物电转化至感受态细胞DH10B中后,挑取克隆,提取质粒并鉴定。最后将质粒转化至BL21菌株中。挑取克隆,提质粒,进行鉴定。结果:PCR扩增片段、双酶切均出现445 bp大小的目的基因条带,与预期结果相符。结论:本研究成功构建了重组质粒pET 22b-TP17,为下一步用IPTG诱导BL21菌株表达重组目的蛋白的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 梅毒螺旋体 原核表达载体 质粒pET 22b 重组蛋白的表达

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SEPT9基因与人类疾病

17

作者 李洁 曾永秋 税青林 《医学信息（医学与计算机应用）》 2014年第18期647-647,共1页

SEPT9是Septin基因家族一员,其编码的Septin 9蛋白参与细胞分裂、极化等多项细胞活动,并与肿瘤等疾病的发生直接相关,对其深入研究有助于认识结构特征、表达改变以及致疾机制。

关键词 疾病 SEPT9

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SEPT9与恶性肿瘤的研究进展 被引量：8

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作者 林春燕 税青林 《泸州医学院学报》 2013年第2期186-188,共3页

Septin是一类广泛分布于除植物外所有真核生物中具有GTPase活性的保守骨架蛋白基因家族，与细胞分裂有关Ⅲ。在人类，其由14个家族成员组成，分别命名为SEPT1-14，其中SEPT9定位于17q25．3，含有17个外显子，编码Septin9蛋白。

关键词 恶性肿瘤 GTPase活性 骨架蛋白 基因家族 真核生物 细胞分裂 家族成员 外显子

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STAT5A基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡影响的观察 被引量：1

19

作者 曾永秋 杨华秀 +2 位作者 曹洋 刘岚 税青林 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2013年第1期31-35,共5页

目的:研究抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响,为其作为肝癌基因治疗的新分子靶点提供实验依据,并对RNAi实验方法的优化进行探讨。方法:构建2个针对STAT5A基因不同位点的RNA干扰(RNAi)真核表达载体,为减少脱靶效应... 目的:研究抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响,为其作为肝癌基因治疗的新分子靶点提供实验依据,并对RNAi实验方法的优化进行探讨。方法:构建2个针对STAT5A基因不同位点的RNA干扰(RNAi)真核表达载体,为减少脱靶效应和细胞毒性,采用两载体共转染的方法转染人肝癌细胞HepG2,分别采用半定量RT-PCR、蛋白质印迹法检测转染前后细胞中STAT5A mRNA和蛋白表达的变化;采用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:酶切及测序结果显示,STAT5A基因两位点的shRNA表达载体均构建成功;两载体共转染HepG2细胞48h后,与对照组相比,RT-PCR结果显示实验组细胞中STAT5A mRNA的抑制率约为66%,P<0.05;蛋白质印迹法检测结果显示,STAT5A蛋白的抑制率约为58%,P<0.05;同时MTT法显示实验组较对照组在转染后24～96h内细胞生长速度减慢、增殖抑制明显(P<0.05),流式细胞仪检测实验组细胞凋亡率为(34.68±0.78)%,明显高于阴性对照组(5.12±1.09)%和空白组(4.75±1.65)%,P<0.05。结论:成功构建了针对STAT5A基因的RNA干扰真核表达载体,两载体共转染可有效抑制STAT5A基因的表达,并能抑制细胞生长、诱导细胞凋亡。 展开更多

关键词 肝肿瘤 STAT5A基因 RNA干扰 HEPG2细胞 细胞增殖 细胞凋亡

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一个低血磷性佝偻病家系的PHEX基因突变研究 被引量：3

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作者 马明义 李华 蔡延森 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期582-584,共3页

目的筛查低血磷性佝偻病患者的致病基因突变，从基因水平确诊患者并探讨其发病机制。方法提取1个低血磷性佝偻病家系先证者及其父母外周血基因组DNA，针对PHEX基因编码区设计引物，PCR扩增后测序。结果在先证者的PHEX基因第6内含子区筛... 目的筛查低血磷性佝偻病患者的致病基因突变，从基因水平确诊患者并探讨其发病机制。方法提取1个低血磷性佝偻病家系先证者及其父母外周血基因组DNA，针对PHEX基因编码区设计引物，PCR扩增后测序。结果在先证者的PHEX基因第6内含子区筛查到c．732＋1G〉T突变，其母亲也存在相同的突变。结论c．732＋1G〉T突变导致PHEX基因的hnRNA错误剪接是该家系中患者临床表型的致病原因。 展开更多

关键词 PHEX基因 突变 低血磷性佝偻病

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