鸡载脂蛋白A-Ⅰ的多克隆抗体制备及亚细胞定位分析

1

作者 王圣文 张丹 +2 位作者 邬雨倩 周继勇 郑肖娟 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期137-146,共10页

载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,Apo A-Ⅰ)在动脉粥样硬化、病毒感染、脂质代谢等方面发挥重要的调控作用。目前关于鸡载脂蛋白A-Ⅰ(chicken Apo A-Ⅰ,chApo A-Ⅰ)的研究较少,对其生物学功能尚不清楚。本研究在对chApo A-Ⅰ进行生物... 载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,Apo A-Ⅰ)在动脉粥样硬化、病毒感染、脂质代谢等方面发挥重要的调控作用。目前关于鸡载脂蛋白A-Ⅰ(chicken Apo A-Ⅰ,chApo A-Ⅰ)的研究较少,对其生物学功能尚不清楚。本研究在对chApo A-Ⅰ进行生物信息学分析的基础上,通过p ET-28a原核表达系统对chApo A-Ⅰ的重组蛋白进行表达和纯化。利用纯化后的重组蛋白免疫小鼠,制备鼠多克隆抗血清(多抗血清),通过酶联免疫吸附测定(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测其效价,并通过蛋白质印迹法(Western blot,WB)、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定其反应性,随后利用多抗血清对chApo A-Ⅰ进行亚细胞定位分析。生物信息学分析显示,chApo A-Ⅰ蛋白在第1—18位氨基酸处含有信号肽,由N端的连续α螺旋构成。氨基酸序列同源性分析显示,chApo A-Ⅰ蛋白与火鸡的同源性最高,与鱼类的同源性最低。利用成功表达和纯化的重组蛋白His-chApo A-Ⅰ制备多抗血清,其ELISA效价达1×10^(5)以上,与真核表达的chApo A-Ⅰ蛋白有WB和IFA反应性,能识别鸡血清中的Apo A-Ⅰ蛋白,而与鼠、兔、牛、猪血清中的Apo A-Ⅰ蛋白无交叉反应性。利用该多克隆抗体对全长片段chApo A-Ⅰ-FL和不含信号肽的片段chApo A-Ⅰ-NS进行亚细胞定位分析,经共聚焦显微镜观察发现,chApo A-Ⅰ-FL蛋白大多分布在细胞膜附近,而chApo A-Ⅰ-NS蛋白则定位于细胞胞浆中,且多数呈弥散分布。chApo A-Ⅰ蛋白的特异性多克隆抗体和亚细胞定位结果为进一步开展Apo A-Ⅰ的生物学功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 鸡载脂蛋白A-Ⅰ 原核表达 多克隆抗体 亚细胞定位

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2例犬口腔肉瘤的病理学分析

2

作者 苏真 惠天朝 +7 位作者 韦方华 徐亚嵩 张舒六 许世军 吴旧生 师福山 林琳 王华南 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第1期9-14,共6页

口腔肉瘤是犬常见的口腔肿瘤,尤其在老年犬多发。本试验通过苏木精-伊红(H.E.)染色和免疫组织化学检测对2例犬口腔肿物进行组织病理学分析。H.E.染色结果显示,2例患犬肿物组织可见大量增生的梭形细胞和局部黑色素颗粒,伴随继发性出血和... 口腔肉瘤是犬常见的口腔肿瘤,尤其在老年犬多发。本试验通过苏木精-伊红(H.E.)染色和免疫组织化学检测对2例犬口腔肿物进行组织病理学分析。H.E.染色结果显示,2例患犬肿物组织可见大量增生的梭形细胞和局部黑色素颗粒,伴随继发性出血和坏死性囊变,高倍镜下细胞具多形性和异型性,核仁明显,核分裂象易见,初步诊断为恶性黑色素瘤或软组织肉瘤。免疫组织化学检测结果显示,2例患犬口腔肿物中广谱细胞角蛋白(CKp)表达均呈阴性,波形蛋白(Vimentin)表达均呈阳性,1号犬上皮细胞膜抗原(EMA)和2号犬人角蛋白抗原决定簇(Cam5.2)表达均呈阴性,可知肿瘤是间质来源;黑色素-A(Melan-A)、钙结合蛋白(S-100)和人类黑色素瘤标志物-45(HMB45)等特异性抗体表达均呈阴性,故黑色素瘤和神经鞘肉瘤的可能性不高。1号犬中α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、中间丝状体蛋白(Desmin)在部分区域呈阳性,肌细胞生成素(Myogenin)呈阴性,考虑部分肌源性分化;2号犬无肌源性标志物表达。综合分析,2例患犬口腔肿物均为高级软组织肉瘤。 展开更多

关键词 犬 口腔肿瘤 组织病理 免疫组织化学 肉瘤

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基于微生物组和宿主转录组整合分析香砂六君子汤对ETEC诱导断奶腹泻仔猪回肠损伤的调控机制

3

作者 肖乐 刘峻源 +8 位作者 曾雯玉 汪芹 韩雯珏 刘彦泠 范誉 徐雨婷 杨贝妮 肖雄 王自力 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期797-808,共12页

本研究旨在探讨香砂六君子汤对产肠毒素大肠杆菌(entexotoxigenic Escherichia coli,ETEC)诱导的断奶仔猪腹泻的干预作用及其机制。将24头21日龄断奶仔猪随机分为空白组(CON)、模型组(MOD)和香砂六君子汤组(XS),连续14 d给XS组灌服香砂... 本研究旨在探讨香砂六君子汤对产肠毒素大肠杆菌(entexotoxigenic Escherichia coli,ETEC)诱导的断奶仔猪腹泻的干预作用及其机制。将24头21日龄断奶仔猪随机分为空白组(CON)、模型组(MOD)和香砂六君子汤组(XS),连续14 d给XS组灌服香砂六君子汤(1 mL·kg^(-1),1 g·mL^(-1)),其余组灌服等量无菌水,第15天给MOD组、XS组仔猪按1 mL·kg^(-1)连续3 d灌服1011 CFU·mL^(-1) ETEC菌液,XS组继续灌服香砂六君子汤。分别记录各组仔猪腹泻评分,HE法检测回肠组织病理学变化,实时荧光定量PCR检测回肠组织IL-1β、IL-6、IL-8 mRNA水平,转录组学分析回肠组织RNA差异表达情况,微生物宏基因组学分析回肠菌群变化情况,Western blot检测回肠组织p-p38/p38、p-ERK/ERK、p-JNK/JNK蛋白水平。结果表明,灌服ETEC后,MOD组腹泻评分极显著高于CON组(P<0.01),回肠组织结构破坏,V/C值极显著下降(P<0.01),且IL-1β、IL-6和IL-8 mRNA表达量极显著升高(P<0.01),肠道菌群门水平上变形菌门极显著上调(P<0.01),厚壁菌门极显著下调(P<0.01),属水平上乳酸菌属下调,志贺菌属上调,回肠组织p-p38/p38和p-JNK/JNK比值显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01)。与MOD组相比,XS组腹泻评分极显著下降(P<0.01),回肠组织结构完整,V/C值极显著升高(P<0.01),回肠组织IL-1β、IL-6和IL-8 mRNA表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),肠道菌群门水平上变形菌门极显著下调(P<0.01),厚壁菌门极显著上调(P<0.01),属水平上乳酸菌属上调,志贺菌属下调,回肠组织p-p38/p38和p-ERK/ERK比值极显著降低(P<0.01)。肠道组织基因转录组学筛选出与炎症免疫相关的差异显著的10个基因,分别为TNFAIP8L2、TRIM67、CXCL2、EGF、NOX1、CCL28、FABP2、FABP6、IL1RAP和CEBPB。微生物组学筛选出各组可能的标志物种分别为CON组的Lactobacillaceae,MOD组的Shigella,XS组的Deinococcus和Eubacterium。综上所述,香砂六君子汤可有效缓解ETEC诱导的断奶仔猪腹泻,提高肠道菌群中有益菌的丰度,逆转ETEC诱发的菌群结构的改变,并可通过抑制MAPK信号通路的激活,从而缓解ETEC诱导的肠道炎性损伤。 展开更多

关键词 香砂六君子汤 产肠毒素大肠杆菌 断奶仔猪 腹泻 肠道菌群 转录组学 MAPK信号通路

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猫冠状病毒核衣壳蛋白的可溶性表达与多克隆抗体反应性鉴定

4

作者 张丹 卢舒婷 +8 位作者 卢辰赫 王子仪 徐丽华 陈伊玄 王圣文 金子安 倪成章 周继勇 郑肖娟 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期424-434,共11页

为制备猫冠状病毒(feline coronavirus, FCoV)核衣壳(nucleocapsid, N)蛋白的特异性抗体,本研究将Ⅰ型FCoV(ZJU1709)的N蛋白基因全长c DNA亚克隆到pCold TF原核表达载体上,通过低温诱导表达、镍柱亲和纯化获得可溶性重组N蛋白;进一步以... 为制备猫冠状病毒(feline coronavirus, FCoV)核衣壳(nucleocapsid, N)蛋白的特异性抗体,本研究将Ⅰ型FCoV(ZJU1709)的N蛋白基因全长c DNA亚克隆到pCold TF原核表达载体上,通过低温诱导表达、镍柱亲和纯化获得可溶性重组N蛋白;进一步以纯化的重组N蛋白为免疫原制备兔多克隆抗血清(多抗血清),再通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、蛋白质印迹法(Western blotting, WB)、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay, IFA)等多种方法对兔多抗血清进行反应性鉴定。结果显示:经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside, IPTG)和低温诱导,成功表达出分子量约为100 kDa的可溶性重组N蛋白,在非变性条件下亲和纯化获得的重组N蛋白质量浓度达到1.4 mg/mL;N蛋白兔多抗血清的ELISA效价可达1×10^(6),与真核表达的重组蛋白Flag-N以及FCoV感染细胞中的N蛋白均具有良好的WB和IFA反应性。交叉反应性结果显示:该多克隆抗体能与α属冠状病毒中不同亚型的FCoV以及犬冠状病毒(canine coronavirus,CCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的N蛋白发生反应,但不与β属冠状病毒中的严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome-related coronavirus 2, SARS-CoV-2)和γ属冠状病毒中的传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)的N蛋白发生反应。综上所述,以pCold TF原核系统表达的可溶性重组N蛋白具有良好的免疫原性,以该蛋白制备的FCoV N蛋白兔多抗血清能识别多种来自不同物种的α属冠状病毒N蛋白,但与β、γ属冠状病毒N蛋白没有交叉反应性,这为进一步研究FCoV复制机制以及开发高效的抗原和抗体检测技术奠定了基础。 展开更多

关键词 猫冠状病毒 核衣壳蛋白 可溶性表达 多克隆抗体 交叉反应性

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不同原核表达载体对非洲猪瘟病毒CD2v蛋白可溶性表达及免疫反应性比较

5

作者 冯梦珂 王星博 +3 位作者 林璐璐 崔明仙 颜焰 周继勇 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期873-880,共8页

本研究旨在系统性地探究不同原核表达载体对非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的可溶性表达差别,并利用临床非洲猪瘟病毒抗体阳性血清比较包涵体和可溶性CD2v蛋白的免疫反应性。利用5种原核表达载体pCold-TF、pET28a、pMAL-C6T、pGEX-4T-1、pET32a... 本研究旨在系统性地探究不同原核表达载体对非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的可溶性表达差别,并利用临床非洲猪瘟病毒抗体阳性血清比较包涵体和可溶性CD2v蛋白的免疫反应性。利用5种原核表达载体pCold-TF、pET28a、pMAL-C6T、pGEX-4T-1、pET32a分别表达去除信号肽和跨膜区的非洲猪瘟病毒CD2v蛋白,利用镍-氨三乙酸(nickel-nitrilotriacetic acid,Ni-NTA)亲和层析法分别纯化源自pET28a和pCold-TF表达载体的包涵体和可溶性CD2v蛋白,并用间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法比较纯化蛋白的免疫反应性。结果显示,pCold-TF载体以表达可溶性蛋白为主,pMAL-C6T载体同时表达包涵体和可溶性蛋白,而其他载体主要表达包涵体蛋白。临床非洲猪瘟病毒抗体阳性血清检测数据显示,可溶性蛋白的免疫反应性显著优于包涵体蛋白(P<0.05)。pCold-TF载体的触发因子(trigger factor,TF)标签可促进CD2v蛋白的可溶性表达,其表达蛋白的免疫反应性优于包涵体蛋白。本研究结果为CD2v蛋白的免疫原性研究奠定了基础,亦为其他重要抗原的可溶性表达提供了思路。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 CD2v蛋白 原核表达 可溶性表达 免疫反应性

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禽传染性支气管炎病毒S2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

6

作者 李忠斐 周建卫 +4 位作者 张焕东 彭莉 颜焰 周继勇 廖敏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期942-950,共9页

为制备禽传染性支气管炎病毒(IBV) S2蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达系统表达并纯化重组S2蛋白,将其免疫BALB/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到4株能够稳定分泌S2蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1A7、4F12、4A7、4D1。亚类... 为制备禽传染性支气管炎病毒(IBV) S2蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达系统表达并纯化重组S2蛋白,将其免疫BALB/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到4株能够稳定分泌S2蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1A7、4F12、4A7、4D1。亚类鉴定结果显示4株MAb的重链均为Ig G1,轻链均为κ。采用间接ELISA法检测上清及腹水效价,结果显示MAb细胞上清效价均不低于1∶12 800,腹水效价均不低于1∶51 200。采用western blot检测制备的S2蛋白MAb与IBV感染鸡胚尿囊液后天然表达的S2蛋白的反应原性;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测IBV感染非洲绿猴肾细胞(Vero)后天然表达的S2蛋白的反应原性。Western blot结果显示,感染IBV的鸡胚尿囊液中出现了90 ku左右的特异性条带;IFA结果显示,感染IBV的Vero细胞中出现绿色荧光。以上结果表明,制备的S2蛋白MAb能够与天然表达的S2蛋白反应,反应原性较强。利用间接ELISA检测MAb与S2蛋白的亲和力,结果显示4株MAb对S2蛋白均有良好的亲和力。利用一系列表达部分重叠的重组S2片段并经western blot鉴定4株MAb识别的抗原表位,结果显示,1A7、4F12、4A7 MAb识别的抗原表位是^(69)VQINCLQYVCGSSLECRKLFQQ^(90),4D1MAb识别的抗原表位是^(175)YKKCTAGPLGTLKDLI^(190)。采用IFA检测MAb的中和活性,结果显示,4株MAb均不具有中和活性。通过western blot检测MAb的反应谱,结果显示,MAb均能够与所选不同基因型(GI-1、GI-7、GI-13、GI-19、GI-22、GI-23) IBV发生特异性反应,表明制备的MAb反应谱较广。本研究为进一步探究IBV S2蛋白的功能及病毒致病机制奠定了基础。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎病毒 S2蛋白 单克隆抗体 抗原表位

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猫冠状病毒非结构蛋白3的多克隆抗体制备及亚细胞定位

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作者 王子仪 金子安 +5 位作者 卢辰赫 乔治 王圣文 颜焰 周继勇 郑肖娟 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期744-754,共11页

冠状病毒的非结构蛋白3(non-structural protein 3,Nsp3)是复制/转录复合体的组成部分,也是重要的潜在抗病毒靶标之一。本研究在对Nsp3进行跨膜区、信号肽和抗原表位预测的基础上,通过聚合酶链反应扩增Ⅱ型猫冠状病毒(feline coronaviru... 冠状病毒的非结构蛋白3(non-structural protein 3,Nsp3)是复制/转录复合体的组成部分,也是重要的潜在抗病毒靶标之一。本研究在对Nsp3进行跨膜区、信号肽和抗原表位预测的基础上,通过聚合酶链反应扩增Ⅱ型猫冠状病毒(feline coronavirus,FCoV)代表毒株(WSU 79-1683)Nsp3蛋白中抗原性较好的区段(第50—550位氨基酸),随后将其亚克隆到pCOLD-TF原核表达载体上。在低温条件下,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导,成功表达分子量约为130 kDa的His-Nsp3重组融合蛋白。在非变性条件下,采用镍柱亲和层析获得了纯度较高的目的重组蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,制备Nsp3多克隆抗血清(多抗血清),蛋白质印迹法(Western blotting,WB)和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)结果显示,Nsp3多抗血清能特异性识别FCoV感染细胞中的Nsp3蛋白。采用免疫荧光双标法结合激光共聚焦显微镜对FCoV感染细胞中Nsp3蛋白的亚细胞定位进行分析,结果发现,FCoV感染细胞中Nsp3发生聚集现象,并与内质网存在共定位现象。Nsp3蛋白的特异性抗体制备以及亚细胞定位研究为进一步开展Nsp3蛋白的生物学功能分析奠定了基础。 展开更多

关键词 猫冠状病毒 非结构蛋白3 原核表达 多克隆抗体 亚细胞定位

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致病性猪圆环病毒基因分型三重荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：3

8

作者 金玉兰 李寒影 +2 位作者 董伟仁 颜焰 周继勇 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1360-1366,共7页

为建立一种同时鉴别致病性猪圆环病毒(PCV)不同型的检测方法,本研究对PCV2、PCV3、PCV4各自Rep基因进行特异性保守序列分析,建立了致病性PCV的TaqMan单重和三重荧光定量PCR检测方法。该方法能特异性区分PCV2、PCV3和PCV4,与PCV1及PRV等... 为建立一种同时鉴别致病性猪圆环病毒(PCV)不同型的检测方法,本研究对PCV2、PCV3、PCV4各自Rep基因进行特异性保守序列分析,建立了致病性PCV的TaqMan单重和三重荧光定量PCR检测方法。该方法能特异性区分PCV2、PCV3和PCV4,与PCV1及PRV等临床上常见的猪传染性病原均无交叉反应。建立的单重及三重PCR方法的最低检测限度均为101copies∕μL,组内及组间的变异系数均小于1%,表明重复性良好。对354份猪临床组织病料进行三重荧光定量PCR检测,结果显示,PCV2、PCV3和PCV4的阳性率分别为66.7%、26.8%和0;PCV2和PCV3共感染率为15.8%。结果表明,本研究建立的三重荧光定量PCR方法能准确鉴别致病性PCV,灵敏性优于普通PCR法,检测过程更高效、便捷,为致病性PCV的临床诊断及流行病学调查提供了检测工具。 展开更多

关键词 猪圆环病毒 分型 三重荧光定量PCR

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猪伪狂犬病毒基因分型PCR检测方法的建立 被引量：4

9

作者 胡铭哲 董伟仁 +2 位作者 颜焰 顾金燕 周继勇 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2021年第8期983-992,共10页

为建立一种基因Ⅰ型和Ⅱ型猪伪狂犬病毒(PRV)鉴定方法,对PRV全基因组序列进行生物信息学分析,在Ⅱ型PRV gC基因上鉴定到一段不同于Ⅰ型PRV的47 bp长的多位点稳定差异基序。该方法能特异性区分基因Ⅰ型和Ⅱ型PRV,检测猪瘟病毒、猪德尔塔... 为建立一种基因Ⅰ型和Ⅱ型猪伪狂犬病毒(PRV)鉴定方法,对PRV全基因组序列进行生物信息学分析,在Ⅱ型PRV gC基因上鉴定到一段不同于Ⅰ型PRV的47 bp长的多位点稳定差异基序。该方法能特异性区分基因Ⅰ型和Ⅱ型PRV,检测猪瘟病毒、猪德尔塔冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、猪蓝耳病病毒、猪圆环病毒2型及3型时呈阴性。两种分型方法针对Ⅰ、Ⅱ型PRV的最低检测限均为1×10^(4)copies/L。44份猪组织病料的单重及双重PCR检测均显示,5份样品为Ⅰ型PRV,1份样品为Ⅱ型PRV。结果表明,本研究建立的单重和双重PRV分型检测方法均能准确鉴定PRV基因型,双重PCR分型方法更便捷,本研究为PRV流行病学调查及持续性感染猪的清群净化提供有效技术手段。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病毒 基因分型 双重PCR

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骆驼蓬子活性成分的筛选及小鼠乳腺炎治疗效果评价 被引量：1

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作者 张震平 阿得力江·吾斯曼 +6 位作者 希尔艾力·阿不力克木 扎依尔江·吐尔洪 努尔艾力·麦提尼亚孜 徐伟 买占海 刘丹丹 赛福丁·阿不拉 《新疆农业大学学报》 CAS 2022年第3期196-204,共9页

为探明骆驼蓬(Peganum harmala L.)种子的抑菌作用及小鼠乳腺炎的治疗效果。本研究采用溶剂提取和超声辅助提取等方式对骆驼蓬子中的多糖、多酚、生物碱、黄酮类活性成分进行提取;通过琼脂平板扩散法(打孔法)和微量肉汤法对各提取物的... 为探明骆驼蓬(Peganum harmala L.)种子的抑菌作用及小鼠乳腺炎的治疗效果。本研究采用溶剂提取和超声辅助提取等方式对骆驼蓬子中的多糖、多酚、生物碱、黄酮类活性成分进行提取;通过琼脂平板扩散法(打孔法)和微量肉汤法对各提取物的抑菌效果进行检测;通过急性毒性预试验和最大耐受量试验对抑菌效果显著的提取物进行安全性检测;最后用于小鼠乳腺炎模型,对其治疗效果进行评价。结果表明,骆驼蓬子中含有多糖、多酚、生物碱、黄酮类活性物质,相应提取物的含量分别为36.90%±0.27%、23.18%±0.36%、22.24%±0.08%、20.46%±0.14%。抑菌试验结果显示,骆驼蓬子多酚和黄酮的抑菌效果较为显著,对大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、无乳链球菌(S.agalactiae)的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)分别在0.7813~1.5625 mg/mL和0.7813~12.5000 mg/mL。安全性试验结果显示,骆驼蓬子多酚和黄酮对小鼠的半数致死量(LD_(50))值均大于1200 mg/kg,其最大耐受量是4.5 g/kg。小鼠乳腺炎治疗结果显示,骆驼蓬子多酚和黄酮能够显著降低乳腺组织中的TNF-α、IL-6含量及菌落数量(P<0.05),减少血管扩张和炎性细胞浸润程度,加快腺泡结构和功能的恢复。其中,骆驼蓬子多酚的作用效果更为显著(P<0.05)。骆驼蓬子多酚不但对引发奶牛乳腺炎的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌具有较强的抑制效果,而且能够降低金黄色葡萄球所致的乳腺炎小鼠乳腺组织中的菌落数量、IL-6和TNF-α含量,增强乳腺组织修复能力。 展开更多

关键词 骆驼蓬子 活性成分 抑菌 乳腺炎

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3株H3N2亚型禽流感病毒的基因组特征与演化分析

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作者 崔明仙 王星博 +5 位作者 黄彦铭 卞希一 冯梦珂 颜焰 董伟仁 周继勇 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期4116-4122,共7页

旨在了解浙江地区家禽H3N2亚型禽流感病毒(AIV)的流行变异情况,采用RT-PCR技术对2021年浙江923份样品进行检测,对AIV分离株进行分子特征及遗传演化分析。结果表明,AIV样品阳性率为7.69%(71/923);共分离到2株鸡源和1株鸭源H3N2亚型AIVs,... 旨在了解浙江地区家禽H3N2亚型禽流感病毒(AIV)的流行变异情况,采用RT-PCR技术对2021年浙江923份样品进行检测,对AIV分离株进行分子特征及遗传演化分析。结果表明,AIV样品阳性率为7.69%(71/923);共分离到2株鸡源和1株鸭源H3N2亚型AIVs,其HA和NA基因相似性分别为93.4%~100%和94.0%~99.9%,分离株内部基因片段来源复杂,与H1N2、H1N4、H10N7等亚型亲缘关系密切;遗传进化分析显示,H3N2亚型AIV主要流行于华东地区,鸭是其主要宿主,3株H3N2亚型分离株HA和NA基因均属于禽源进化分支;分离株HA蛋白裂解位点均为PEKQTR↓GLF,符合低致病性禽流感病毒特征,HA蛋白与受体结合相关位点为226Q和228G,PB2蛋白与哺乳动物适应性相关的氨基酸位点为627E,均不同于人流感病毒对应蛋白的相关位点(226L、228S和627K),推测其跨种传播至人的潜力较低;分离株PB1蛋白的66位氨基酸突变为S,提示其对哺乳动物的致病性可能增强。综上所述,本研究分离的H3N2亚型AIV符合低致病性禽流感病毒特征,基因片段来源复杂,跨种传播至人的潜力较低,但是否影响对宿主的致病性仍需进一步探究。 展开更多

关键词 H3N2亚型禽流感病毒 浙江地区 遗传进化 氨基酸变异

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非洲猪瘟病毒A151R蛋白核定位信号的鉴定

12

作者 王裴 倪温碧 +2 位作者 钟桂芳 胡伯里 周继勇 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1552-1557,共6页

为研究非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白A151R发挥功能的亚细胞定位,通过荧光显微镜观察发现,A151R蛋白能够聚集在细胞核内。使用在线软件预测A151R中存在的核定位信号(NLS),并构建缺失NLS的A151R质粒。荧光共聚焦显微镜观察结果表明,缺失... 为研究非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白A151R发挥功能的亚细胞定位,通过荧光显微镜观察发现,A151R蛋白能够聚集在细胞核内。使用在线软件预测A151R中存在的核定位信号(NLS),并构建缺失NLS的A151R质粒。荧光共聚焦显微镜观察结果表明,缺失NLS的重组A151R蛋白A151RΔNLS无法进入细胞核。细胞核质分离结果显示,NLS序列能够协助EGFP进入细胞核,证明了NLS的核输入能力。以上证据均表明A151R依赖于NLS进入细胞核,为进一步研究其在ASFV复制中的功能提供了重要的信息。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 A151R 核定位信号 亚细胞定位

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肠道菌群调控宿主天然免疫的机制研究 被引量：4

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作者 杨晓炼 李涵 朱书 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2021年第4期16-30,共15页

哺乳动物肠道栖息着数以亿计的共生细菌,在与宿主共进化的过程中,逐渐形成了相互依存的微生态系统,称之为“全功能体”。越来越多研究证实:肠道细菌作为一个整体,对宿主免疫系统的发育、诱导、学习及调节至关重要;而菌群失调将导致多种... 哺乳动物肠道栖息着数以亿计的共生细菌,在与宿主共进化的过程中,逐渐形成了相互依存的微生态系统,称之为“全功能体”。越来越多研究证实:肠道细菌作为一个整体,对宿主免疫系统的发育、诱导、学习及调节至关重要;而菌群失调将导致多种免疫失衡相关的炎性疾病和自身免疫病。细菌代谢产物,包括食源性代谢产物、经菌群修饰后的宿主细胞代谢产物以及菌群从头合成的代谢产物,均在宿主的免疫应答中起重要的调控作用。本综述围绕天然免疫细胞调控机理、细菌主要代谢产物调控机制以及宿主抗病毒天然免疫调控机制展开论述。 展开更多

关键词 肠道菌群 代谢产物 免疫稳态 天然免疫 免疫调控

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双歧杆菌在人类重大疾病中的作用与机制研究 被引量：1

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作者 李涵 朱书 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2022年第5期206-214,共9页

肠道菌群结构与宿主健康息息相关,菌群失调将导致多种炎性疾病和自身免疫病。双歧杆菌等益生菌被广泛应用于食品和保健领域。近年来,双歧杆菌在医疗领域的应用越来越广泛,其临床功效也逐渐为人所知。本综述围绕双歧杆菌在酒精性肝病、... 肠道菌群结构与宿主健康息息相关,菌群失调将导致多种炎性疾病和自身免疫病。双歧杆菌等益生菌被广泛应用于食品和保健领域。近年来,双歧杆菌在医疗领域的应用越来越广泛,其临床功效也逐渐为人所知。本综述围绕双歧杆菌在酒精性肝病、炎性肠病、肾病、肥胖、幽门螺旋杆菌感染等肠道相关疾病中的调控机制展开论述,并讨论了以其为代表的益生菌在保健功能上需要深入探索的研究领域,以便进一步解析其在肠道相关疾病预防和治疗中的分子机制。 展开更多

关键词 肠道菌群 双歧杆菌 免疫稳态 免疫调控

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碘海醇对不同体型犬脊髓造影的最佳剂量

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作者 张雅楠 温贵林 +1 位作者 高劲松 张子威 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第12期97-101,共5页

为了有效避免脊髓造影时因造影剂使用剂量不当造成犬神经损伤或造影效果不佳的情况发生,本试验采用经小脑延髓池穿刺方法,对中型、小型、超小型共15只犬进行蛛网膜下腔造影,通过比较X线数字影像效果,研究碘海醇对不同体型犬脊髓造影的... 为了有效避免脊髓造影时因造影剂使用剂量不当造成犬神经损伤或造影效果不佳的情况发生,本试验采用经小脑延髓池穿刺方法,对中型、小型、超小型共15只犬进行蛛网膜下腔造影,通过比较X线数字影像效果,研究碘海醇对不同体型犬脊髓造影的最佳剂量及最佳拍摄时间。结果显示:碘海醇对中型犬、小型犬、超小型犬的造影最佳剂量分别为0.25、0.35 mL/(kg·bw)和0.35 mL/(kg·bw),最佳拍摄时间分别为造影后5~10、3~10 min和3~8 min。本试验结果为优化犬脊髓造影、改进临床诊断方法提供科学依据。 展开更多

关键词 犬 脊髓造影 碘海醇 最佳剂量 体型 DR

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一例犬糖尿病继发白内障的诊治 被引量：2

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作者 薛观宏 朱新颖 +1 位作者 乐萱 吴海冲 《上海畜牧兽医通讯》 2022年第4期63-66,共4页

犬糖尿病多发于中老龄阶段,具有多饮、多食、多尿、体重减轻等典型症状。本文对1例表现为多饮、多尿、体重减轻且两眼晶状体轻度浑浊的患病犬进行临床检查和实验室检查,确诊为糖尿病继发白内障。通过采用胰岛素疗法,结合绝育手术及处方... 犬糖尿病多发于中老龄阶段,具有多饮、多食、多尿、体重减轻等典型症状。本文对1例表现为多饮、多尿、体重减轻且两眼晶状体轻度浑浊的患病犬进行临床检查和实验室检查,确诊为糖尿病继发白内障。通过采用胰岛素疗法,结合绝育手术及处方粮饲喂方式,患病犬血糖得到控制。本文就犬糖尿病发病机理、临床表现、诊断及治疗方面进行介绍,以期为犬糖尿病的临床诊疗提供参考。 展开更多

关键词 犬 糖尿病 白内障 诊治

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益生菌牙膏缓解犬牙菌斑和牙结石的研究

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作者 郑智杰 彭曦冉 +5 位作者 焦玉珠 唐海丽 陈欣雨 张晓露 王自力 吴海冲 《畜牧与饲料科学》 2022年第5期117-122,共6页

[目的]评价某公司生产的一款宠物用益生菌牙膏对犬牙菌斑和牙结石形成的缓解功效。[方法]选取口腔健康、体况良好的成年比格犬10只,配对设计随机分为阴性对照组(n=5)和益生菌牙膏组(n=5);阴性对照组仅饲喂犬粮,益生菌牙膏组每次餐后给予... [目的]评价某公司生产的一款宠物用益生菌牙膏对犬牙菌斑和牙结石形成的缓解功效。[方法]选取口腔健康、体况良好的成年比格犬10只,配对设计随机分为阴性对照组(n=5)和益生菌牙膏组(n=5);阴性对照组仅饲喂犬粮,益生菌牙膏组每次餐后给予约4 g/只益生菌牙膏,每天2次,连续使用28 d;试验第0天对所有试验犬牙齿进行洁牙抛光处理,试验第14天和第29天分别对比格犬牙菌斑进行评分,第29天对牙结石进行评分并检测口腔气体挥发性化合物(H2S+CH3SH)浓度;当牙菌斑和牙结石评分均值以及口腔气体挥发性化合物浓度均值减少幅度≥15%时,定义为益生菌牙膏效果显著。[结果]与阴性对照组相比,益生菌牙膏组在给予益生菌牙膏第14天时,牙菌斑评分均值减少幅度为-0.36%(P>0.05),第29天牙菌斑评分均值减少幅度为21.47%(P<0.05);第29天益生菌牙膏组牙结石评分均值减少幅度为6.54%(P>0.05);第29天益生菌牙膏组犬口腔气体挥发性化合物浓度均值减少幅度为-44.59%(P>0.05)。[结论]在试验期内,该款益生菌牙膏能够有效抑制犬牙菌斑的形成,但不具有减少牙结石形成和降低口腔气体挥发性化合物浓度的功效。 展开更多

关键词 益生菌牙膏 犬 牙菌斑 牙结石

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猪圆环病毒2型Cap蛋白互作宿主核蛋白的筛选与鉴定

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作者 余涛 胡婧宇 +4 位作者 司维 颜焰 董伟仁 顾金燕 周继勇 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期20-28,共9页

为探究在猪圆环病毒2型(PCV2)入核复制过程中发挥生物学功能的宿主核相关蛋白,本研究借助免疫沉淀技术联合蛋白质谱鉴定技术,从宿主细胞核膜提取物中筛选到了可与PCV2 Cap蛋白发生潜在互作的2个蛋白质:高迁移率族蛋白1(HMGB1)和精氨酸酶... 为探究在猪圆环病毒2型(PCV2)入核复制过程中发挥生物学功能的宿主核相关蛋白,本研究借助免疫沉淀技术联合蛋白质谱鉴定技术,从宿主细胞核膜提取物中筛选到了可与PCV2 Cap蛋白发生潜在互作的2个蛋白质:高迁移率族蛋白1(HMGB1)和精氨酸酶1(ARG1)。通过进一步的免疫共沉淀试验及激光共聚焦试验,证明了HMGB1、ARG1与PCV2 Cap蛋白的相互作用,且互作与Cap蛋白的核定位信号(NLS)无关。该研究为进一步探索PCV2入核复制的机制解析提供了重要信息。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 入核 CAP蛋白 互作 高迁移率族蛋白1 精氨酸酶1

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猪丁型冠状病毒ns7、ns7a蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

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作者 杨宛书 李娟 +3 位作者 杜柳阳 陈文镜 周继勇 顾金燕 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期29-38,共10页

为获得免疫原性好的猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)辅助蛋白ns7和ns7a,并制备特异性的多克隆抗体,以用于ns7和ns7a蛋白功能的初步研究,本试验构建原核表达载体pGEX-PDCoV-ns7和pGEX-PDCoV-ns7a,测序正确后转入E.coli B... 为获得免疫原性好的猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)辅助蛋白ns7和ns7a,并制备特异性的多克隆抗体,以用于ns7和ns7a蛋白功能的初步研究,本试验构建原核表达载体pGEX-PDCoV-ns7和pGEX-PDCoV-ns7a,测序正确后转入E.coli BL21(DE3)中诱导表达。利用GST-Resin进行蛋白纯化,将获得的重组蛋白以皮下注射方式免疫BALB/c小鼠,成功制备4份PDCoV ns7和2份ns7a小鼠多克隆抗体,并用ELISA、Western blot和IFA对抗体效价、反应性及特异性进行鉴定。结果显示,本试验成功应用大肠杆菌表达了可溶性ns7和ns7a蛋白,制备的PDCoV ns7和ns7a多克隆抗体效价分别为1∶409600和1∶12800,并在Western blot和IFA试验中具有良好的反应性及特异性。结果表明,制备的PDCoV辅助蛋白ns7和ns7a多克隆抗体为深入研究ns7及ns7a蛋白的生物学功能提供了重要工具。 展开更多

关键词 猪丁型冠状病毒 辅助蛋白ns7和ns7a 原核表达 多克隆抗体

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猪流行性腹泻病毒非结构蛋白nsp9互作宿主蛋白对病毒复制的影响 被引量：1

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作者 施朱桂 吴佳瑜 +2 位作者 朱雅 周继勇 胡伯里 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期4824-4836,共13页

猪流行性腹泻病毒(porcineepidemicdiarrheavirus,PEDV)导致仔猪和育肥猪发生急性肠道传染病,是危害养猪业最重要的病原体之一。目前发现PEDV能够编码至少16个非结构蛋白,其中nsp9能够结合至单链RNA中,但是其功能机制还不清楚。本研究... 猪流行性腹泻病毒(porcineepidemicdiarrheavirus,PEDV)导致仔猪和育肥猪发生急性肠道传染病,是危害养猪业最重要的病原体之一。目前发现PEDV能够编码至少16个非结构蛋白,其中nsp9能够结合至单链RNA中,但是其功能机制还不清楚。本研究通过免疫沉淀联合蛋白质谱分析,筛选出潜在的与PEDV nsp9宿主互作蛋白。通过进一步免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)和激光共聚焦技术确认了nsp9与热休克蛋白HSPA8、Toll相互作用蛋白Tollip、热休克蛋白HSPA9、线粒体外膜蛋白TOMM70互作。其中,过表达HSPA8使nsp9的表达量先上调而后下调,并促进PEDV的增殖;过表达Tollip使nsp9的表达量显著上调,并抑制PEDV的增殖;过表达TOMM70使nsp9的表达量显著下调,但对PEDV的增殖无明显影响;过表达HSPA9对nsp9的表达以及PEDV的增殖均无明显影响。该研究为探索nsp9互作蛋白在PEDV感染过程中的功能提供了重要信息。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 非结构蛋白9 免疫沉淀技术 质谱技术 互作蛋白

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