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水稻苯丙氨酸氨解酶基因在大肠杆菌BL21 DE3中的表达 被引量:10
1
作者 蔡朱男 余应年 +2 位作者 罗建红 钱羽力 陈星若 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期12-16,共5页
目的 :探索水稻苯丙氨酸氨解酶基因在大肠杆菌中的表达及其规律 ,为治疗苯丙酮尿症奠定基础。方法 :应用基因工程技术 ,将水稻苯丙氨酸氨解酶的cDNA(rPAL - 1-cDNA)重组入大肠杆菌高效表达质粒pET - 2 8c ,通过异丙基硫代 - β -D -半... 目的 :探索水稻苯丙氨酸氨解酶基因在大肠杆菌中的表达及其规律 ,为治疗苯丙酮尿症奠定基础。方法 :应用基因工程技术 ,将水稻苯丙氨酸氨解酶的cDNA(rPAL - 1-cDNA)重组入大肠杆菌高效表达质粒pET - 2 8c ,通过异丙基硫代 - β -D -半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,在大肠杆菌中获得表达。 结果 :SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳表明 ,诱导 1,3,5 ,7h后 ,表达蛋白量占菌体总蛋白分别为 2 1.40 % ,30 .6 0 % ,35 .40 % ,35 .43% ,融合蛋白His6 -rPAL分子量为 78.6kDa ,主要以包涵体形式存在。结论 展开更多
关键词 质粒 大肠杆菌 苯丙酮尿症 苯丙氨酸氨解酶
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低浓度MNNG激活转录因子 被引量:4
2
作者 王谷亮 王政 +1 位作者 杨军 余应年 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2003年第5期390-392,共3页
目的 :为了进一步研究 N-甲基 - N’-硝基 - N-亚硝基胍 (MNNG)引起的非定标性突变的发生机制 ,观察了低浓度 MNNG对转录因子 NF- κB、CREB、AP- 1和 c- Myc的影响。方法 :采用分泌型碱性磷酸酶报告基因和瞬时转染实验检测转录因子活... 目的 :为了进一步研究 N-甲基 - N’-硝基 - N-亚硝基胍 (MNNG)引起的非定标性突变的发生机制 ,观察了低浓度 MNNG对转录因子 NF- κB、CREB、AP- 1和 c- Myc的影响。方法 :采用分泌型碱性磷酸酶报告基因和瞬时转染实验检测转录因子活性。结果 :经 0 .2 μmol/L MNNG处理后 ,转录因子 CREB活性是溶剂对照组的 1.4倍 (P<0 .0 5 ) ,AP- 1和 NF- κB活性均为溶剂对照组的 1.3倍 (P<0 .0 5 ) ;而 c- Myc的活性在对照组和 MNNG处理组都较低。结论 :低浓度 MNNG可以激活转录因子 AP- 1、CREB和 NF- κB,对 c- Myc则无明显激活作用 ,提示一些转录因子的激活可能参与了 MNNG引起的非定标性突变发生过程。 展开更多
关键词 N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍 转录因子 信号传递
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真核泛素缀合途径研究进展 被引量:12
3
作者 陈建明 余应年 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期175-178,共4页
A Review] A large quantity of intracellular structural and regulatory proteins can be covalently attached to ubiquitin posttranscriptionally and thus modified. The ubiquitination of proteins serves as targeting signal... A Review] A large quantity of intracellular structural and regulatory proteins can be covalently attached to ubiquitin posttranscriptionally and thus modified. The ubiquitination of proteins serves as targeting signals, making ubiquitinated proteins distributed to different parts of the cells, changing the activities, the interaction between macromolecules and the half-life of proteins. Therefore, ubiquitin conjugation is implicated in numerous metabolic processes in eukaryotes. Ubiquitin conjugates its protein substrates via a cascade reaction. This paper is a review of recent advances in this area. 展开更多
关键词 遍在蛋白质 生物学意义 泛素 缀合 真核细胞
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hREV3基因表达被反义阻断的人胚肾细胞系的建立及其某些生物学特性观察 被引量:4
4
作者 徐方 余应年 宋韬 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期293-297,共5页
目的:建立 hREV3基因表达反义阻断的细胞系并观察其生长特性与对烷化剂 N-甲基-N’-硝基-N-亚硝胍(N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)敏感性的改变。方法:利用改... 目的:建立 hREV3基因表达反义阻断的细胞系并观察其生长特性与对烷化剂 N-甲基-N’-硝基-N-亚硝胍(N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)敏感性的改变。方法:利用改良磷酸钙-DNA共沉淀法分别将本室构建的持续和诱导表达反义hREV3 RNA的真核细胞重组表达质粒pBK-RSV-hREV3和pMAMneo-amp--hREV3转染人胚胎肾细胞(HEK-293细胞),经G418筛选,建立相应的细胞系293-B-hREV3-和293-M-hREV3。通过细胞计数方法观察这些细胞系的生长速率和不同浓度MNNG对细胞的细胞毒作用。结果:持续或诱导阻断hREV3基因的表达对细胞生长速率均无影响;反义阻断细胞系对MNNG的细胞毒作用比母本293细胞较为敏感。结论:hREV3基因的编码产物并非细胞生长所必需而可能在细胞的DNA损伤修复中起作用。 展开更多
关键词 DNA损伤 hREV3基因 反义阻断 RNA
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细胞信号转导、基因表达、DNA复制保真度与哺乳细胞非定标性突变——致癌物诱发基因突变分子机制研究 被引量:2
5
作者 余应年 孙雪敏 +3 位作者 冯朝晖 胡文蔚 宋韬 谢海洋 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第10期1028-1029,共2页
关键词 细胞信号转导 基因表达 DNA复制 基因突变 肿瘤
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酪醇诱导肝癌细胞NQO_1酶基因表达增加及细胞增殖的抑制 被引量:6
6
作者 薛丽君 金中初 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期884-888,共5页
目的 :研究酪醇诱导肝癌细胞Ⅱ相脱毒酶NAD(P)H :醌氧化还原酶 - 1 (NQO1 )基因表达情况和对细胞增殖的影响以及两者之间的关系。方法 :肝癌细胞SMMC - 772 1接种后 2 4h经 β -酪醇处理 2 4h ,分别测定NQO1酶活性 ,mRNA表达和细胞增殖... 目的 :研究酪醇诱导肝癌细胞Ⅱ相脱毒酶NAD(P)H :醌氧化还原酶 - 1 (NQO1 )基因表达情况和对细胞增殖的影响以及两者之间的关系。方法 :肝癌细胞SMMC - 772 1接种后 2 4h经 β -酪醇处理 2 4h ,分别测定NQO1酶活性 ,mRNA表达和细胞增殖情况。NQO1 酶活性采用微孔板直接测定法 ,诱导结果用NQO1 酶比活性 =NQO1 酶活性 /细胞数 ;mRNA水平的变化采用定量RT -PCR ;细胞增殖采用结晶紫显色法。结果 :NQO1 酶活性诱导上 ,酪醇大于60mg/L时有明显的剂量效应关系 ,且每一浓度点 (60mg/L ,70mg/L ,80mg/L ,90mg/L)与空白组比较均有显著差异 (P <0 0 5) ,80mg/L的酪醇与 80 μmol/L的 β -NF(阳性对照 )诱导的酶比活性相当 ;mRNA表达量存在剂量依赖性增加 (r=0 82 4 ,P <0 0 5) ,且与酶比活性存在明显的相关性 (r=0 .951 ,P <0 0 1 ) ;酪醇在 70mg/L - 1 0 0mg/L范围内 ,其抑制细胞增殖的能力随着浓度的增加而增加。另外 ,细胞增殖与酶比活性呈负相关 (r =- 0 41 0 ,P <0 0 1 )。结论 :酪醇在培养肝癌细胞SMMC - 772 1上能使NQO1 酶活性与mRNA表达量诱导性增加 ,同时酪醇能抑制细胞的增殖 。 展开更多
关键词 肝癌 NQO1酶基因 酪醇 肝肿瘤 细胞增殖 基因表达 醌氧化还原酶-1
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生物信息学在基因转录调控研究中的应用 被引量:10
7
作者 刘天婵 余应年 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期668-672,共5页
Gene transcriptional regulation research is one of the major challenges in the post-genome era. Bioinformatics has become more important with the rapid accumulation of complete genome sequences and the advances of com... Gene transcriptional regulation research is one of the major challenges in the post-genome era. Bioinformatics has become more important with the rapid accumulation of complete genome sequences and the advances of computational methods and related databases. The current computational approaches in promoter prediction, transcription factor binding site identification, composite elements prediction, co-regulation of gene expression analysis and phylogenetic footprinting in the regulatory region analysis are discussed in this review. 展开更多
关键词 生物信息学 转录因子结合部位 基因 调节
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化学诱变剂诱发基因非定标性突变的分子机理研究 被引量:3
8
作者 余应年 杨军 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2003年第5期369-374,共6页
应用将突变靶基因与哺乳细胞基因组 DNA相分离的实验体系 ,证明化学诱变剂 N-甲基 - N’-硝基 - N-亚硝基胍 (MNNG)诱发的基因突变可发生在损伤碱基以外的正常序列中 (非定标性突变 ) ,并有突变谱特征和突变好发的序列特异性。它的发生... 应用将突变靶基因与哺乳细胞基因组 DNA相分离的实验体系 ,证明化学诱变剂 N-甲基 - N’-硝基 - N-亚硝基胍 (MNNG)诱发的基因突变可发生在损伤碱基以外的正常序列中 (非定标性突变 ) ,并有突变谱特征和突变好发的序列特异性。它的发生在于化学诱变剂诱发的基因表达改变。应用 m RNA差异显示和反义核酸技术分离到2个基因表达序列标识 ,阻断其相关基因表达 ,可分别促进和抑制化学诱变剂诱发的非定标性突变。应用蛋白质组学技术发现有 6 0多个蛋白质斑点在 MNNG处理后发生了显著变化 ,根据肽质指纹图对其中大部分蛋白作了鉴定 ,发现了很多新的参与应答的蛋白质。用体外 DNA复制技术证明 ,其发生基础是化学诱变剂引发细胞 DNA复制保真度的下降 ,而细胞错配修复功能未发现异常 ,但 DNA聚合酶酶谱发生改变。用反义核酸技术 ,证明 POLζ、POLκ和 POLη可能参与非定标性突变形成。其发生可因细胞应激信号通路激活剂所促进 ,在化学诱变剂作用后有蛋白磷酸化谱和蛋白酪氨酸残基磷酸化谱的改变以及应激激活蛋白激酶的激活 ,提示细胞信号转导通路的激活参与了非定标性突变的发生。研究还证明调节 POLβ表达的 c AMP- PKA- CREB通路在 MNNG处理后激活 ;MN-NG还可诱发细胞表面受体的聚簇 ,但其发生并不依赖于 展开更多
关键词 N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍 非定标性突变 DNA突变分析
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POLΗ基因反义阻断细胞系的建立及POLΗ在MNNG引起的非定标性突变中的作用 被引量:1
9
作者 罗月球 杨军 余应年 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2003年第5期398-402,共5页
目的 :通过建立 POLΗ反义阻断细胞系 FL - POLΗ-,研究 POLΗ的功能。方法 :将 POLΗ基因的 14 73~ 2 131片段反向克隆到哺乳动物细胞表达载体 p MAMneo- amp-中 ,将重组表达质粒转染 FL细胞 ,G4 18筛选 ,获得 POLΗ基因被表达阻断的... 目的 :通过建立 POLΗ反义阻断细胞系 FL - POLΗ-,研究 POLΗ的功能。方法 :将 POLΗ基因的 14 73~ 2 131片段反向克隆到哺乳动物细胞表达载体 p MAMneo- amp-中 ,将重组表达质粒转染 FL细胞 ,G4 18筛选 ,获得 POLΗ基因被表达阻断的哺乳动物细胞系 FL - POLΗ-。采用穿梭质粒 p Z189介导的突变实验 ,观察在 POLΗ基因表达被阻断细胞系中进行复制时的自发突变频率和 MNNG引起的诱发突变频率。结果 :成功建立细胞系 FL -POLΗ-。穿梭质粒 p Z189在 FL- POLΗ-细胞中复制后 ,其 Sup F t RNA基因的自发突变频率为 13.5× 10 -4,而对照细胞 FL和 FL- M分别为 4 .9× 10 -4和 3.7× 10 -4。同时 ,质粒在接触过 MNNG的 FL- POLΗ-细胞中复制 ,其 Sup Ft RNA基因的非定标性突变频率不发生。结论 :POLΗ在维持哺乳类细胞的遗传稳定性中起重要作用 ,且参与哺乳动物细胞中 MNNG引起的非定标性突变。 展开更多
关键词 POLH基因 N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍 非定标性突变 DNA突变分析
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反义阻断CROC-1基因表达导致细胞生长变慢 被引量:1
10
作者 陈建明 余应年 陈星若 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第7期577-580,共4页
目的 :建立CROC - 1基因表达被阻断的FL -CROC - 1-细胞系 ,研究CROC - 1基因在细胞生长中的作用。方法 :运用反义技术将新近发现的人泛素缀合酶样蛋白基因CROC - 1的适当长度cDNA片断克隆到本室改建的真核细胞表达载体pMAMneo -amp-中 ... 目的 :建立CROC - 1基因表达被阻断的FL -CROC - 1-细胞系 ,研究CROC - 1基因在细胞生长中的作用。方法 :运用反义技术将新近发现的人泛素缀合酶样蛋白基因CROC - 1的适当长度cDNA片断克隆到本室改建的真核细胞表达载体pMAMneo -amp-中 ,经限制性内切酶图谱分析筛选出反向插入的表达CROC - 1反义RNA的重组质粒。将此反义表达重组质粒 (pMAM -antiCROC - 1)用改良的磷酸钙法转染人羊膜FL细胞并用含G418的培养基筛选 ,测定G418抗性的FL -CROC - 1-细胞系的生长速度。结果 :建立的FL-CROC - 1-细胞系在地塞米松诱导下CROC - 1基因表达被反义抑制后 ,其生长速度较对照FL细胞及转染了载体pMAMneo -amp-的FL细胞 (FL -MAMneo)的明显要慢 (P <0 0 5 )。结论 :本研究成功地建立了CROC -1基因表达被阻断的FL -CROC - 1-细胞系 ,并提示CROC - 1基因编码的泛素缀合酶样蛋白在细胞生长中起正调控作用。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 反义阻断CROC-1基因 DNA损伤
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DNA链断裂与DNA损伤和细胞凋亡 被引量:3
11
作者 余应年 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 1999年第6期280-280,共1页
关键词 DNA链断裂 DNA损伤 细胞凋亡
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化学诱变剂诱发基因突变分子机理研究 被引量:3
12
作者 余应年 《卫生毒理学杂志》 CSCD 2000年第1期10-12,共3页
应用一将突变靶基因与哺乳细胞基因组DNA相分离的实验体系 ,证明化学诱变剂诱发的基因突变可发生在损伤碱基以外的正常序列中 (非定标性突变 ) ,并有突变谱特征和突变好发的序列特异性。它的发生依存于化学诱变剂诱发的基因表达改变 ,应... 应用一将突变靶基因与哺乳细胞基因组DNA相分离的实验体系 ,证明化学诱变剂诱发的基因突变可发生在损伤碱基以外的正常序列中 (非定标性突变 ) ,并有突变谱特征和突变好发的序列特异性。它的发生依存于化学诱变剂诱发的基因表达改变 ,应用mRNA差异显示和反义技术分离到两个基因表达序列标识 ,其相关基因表达被阻断后可分别促进和抑制化学诱变剂诱发的非定标性突变。用体外DNA复制技术证明其发生基础是由于化学诱变剂引发细胞DNA复制保真度的下降 ,而细胞错配修复功能未发现异常 ,但DNA聚合酶酶谱发生改变。还证明它的发生可因细胞应激信号通路激活剂所促进 ,在化学诱变剂作用后有蛋白磷酸化谱和蛋白酪氨酸残基磷酸化谱的改变以及应激激活蛋白激酶的激活和cAMP浓度升高。细胞信号转导通路的激活参与了非定标性突变的发生。 展开更多
关键词 化学诱变剂 诱发 基因突变 分子机理
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低浓度MNNG诱发FL细胞应答反应的蛋白质组学研究
13
作者 金静华 高志华 +1 位作者 杨军 余应年 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2003年第5期375-379,共5页
目的 :研究低浓度甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)对人羊膜 FL细胞蛋白质表达谱的影响 ,以助于阐明环境致癌物引起细胞早期应答反应的分子机制。方法 :FL细胞分别用 MNNG和 DMSO(溶剂对照 )处理后 ,提取细胞总蛋白 ,用双向凝胶电泳分离蛋白质... 目的 :研究低浓度甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)对人羊膜 FL细胞蛋白质表达谱的影响 ,以助于阐明环境致癌物引起细胞早期应答反应的分子机制。方法 :FL细胞分别用 MNNG和 DMSO(溶剂对照 )处理后 ,提取细胞总蛋白 ,用双向凝胶电泳分离蛋白质组成分 ,银染染色后用相应的分析软件分析数字化的凝胶图像 ,找出在 MN-NG处理后表达有差异的蛋白斑点 ,用基质辅助的激光解吸 -飞行时间质谱 (MAL DI- TOF)鉴定。结果 :在 MNNG处理后有 6 0多个蛋白斑点出现质和量的变化 ,其中 18个蛋白斑点只能在 MNNG处理的细胞中检测到 ,13个蛋白斑点则在 MNNG处理后消失 ;同时检测到 30个蛋白斑点在表达量上有显著变化 ,其中 16个点表达升高 ,14个点则表达降低。通过数据库的检索 ,初步的鉴定了一批结构和功能各异的蛋白。结论 :在低浓度烷化剂攻击后 ,FL细胞中的蛋白表达谱发生了显著的变化。 展开更多
关键词 FL细胞/遗传学 N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍 蛋白质组学 凝胶 电泳 双向
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稳定表达人细胞色素P4501A2的HepG2细胞的建立及其代谢效应
14
作者 诸葛坚 叶森 余应年 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2003年第5期403-406,共4页
目的 :建立稳定表达人细胞的色素 P4 5 0 1A2 (CYP1A2 )的 Hep G2细胞。方法 :将所克隆的野生型CYP1A2 c DNA从重组质粒 p GEM- CYP1A2中用 Kpn / Bam H 双酶切 ,并亚克隆到哺乳动物细胞表达载体p REP9中。再将重组质粒转化感受态大... 目的 :建立稳定表达人细胞的色素 P4 5 0 1A2 (CYP1A2 )的 Hep G2细胞。方法 :将所克隆的野生型CYP1A2 c DNA从重组质粒 p GEM- CYP1A2中用 Kpn / Bam H 双酶切 ,并亚克隆到哺乳动物细胞表达载体p REP9中。再将重组质粒转化感受态大肠杆菌 Top10 ,用氨苄青霉素抗性筛选和限制酶谱鉴定。改良的磷酸钙介导的细胞转染法将重组质粒 p REP9- CYP1A2转染肝癌细胞 Hep G2 ,用 RT- PCR技术对转基因细胞的 CYP1A2m RNA表达作了分析 ,并用 MTT法比较转基因细胞对黄曲霉素 B1(AFB1)细胞毒敏感试验。结果 :与 Hep G2细胞相比 ,Hep G2 - CYP1A2转基因细胞表达 CYP1A2 m RNA,能增强 AFB1的细胞毒作用。结论 :建立了稳定表达CYP1A2的转基因细胞系 ,可用于由 CYP1A2参与的毒理学与药物代谢研究。 展开更多
关键词 细胞色素P-450 肝细胞 HEPG2 黄曲霉素B1
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蛋白质组学研究技术及其在烷化剂引起的细胞应答反应研究中的应用
15
作者 金静华 余应年 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2002年第3期195-200,共6页
蛋白质组学是后基因组时代的一个新兴领域 ,其理论和技术的发展为化学致癌物致突变的分子机制的研究提供了新的思维方式。本文回顾了蛋白质组学的研究技术 ,包括双向凝胶电泳、质谱和生物信息学近年的主要进展 ,并介绍了本实验室利用蛋... 蛋白质组学是后基因组时代的一个新兴领域 ,其理论和技术的发展为化学致癌物致突变的分子机制的研究提供了新的思维方式。本文回顾了蛋白质组学的研究技术 ,包括双向凝胶电泳、质谱和生物信息学近年的主要进展 ,并介绍了本实验室利用蛋白质组学的技术 ,研究低浓度烷化剂引起的细胞应答反应所取得的初步结果。 展开更多
关键词 蛋白质组学 烷化剂 应答反应 化学致癌 双向电泳 质谱技术 生物信息学
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低浓度MNNG诱发非DNA损伤依赖的细胞信号通路 被引量:3
16
作者 王政 王谷亮 +2 位作者 杨军 高志华 余应年 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2003年第5期385-389,共5页
目的 :研究基因组 DNA损伤与细胞信号通路激活的关系以及低浓度 N-甲基 - N’-硝基 - N-亚硝基胍(MNNG)对细胞膜表面受体的影响。方法 :采用 ELISA法来检测蛋白激酶 A(PKA)的活性 ,不连续梯度密度离心法完成细胞脱核 ,以及免疫荧光法和... 目的 :研究基因组 DNA损伤与细胞信号通路激活的关系以及低浓度 N-甲基 - N’-硝基 - N-亚硝基胍(MNNG)对细胞膜表面受体的影响。方法 :采用 ELISA法来检测蛋白激酶 A(PKA)的活性 ,不连续梯度密度离心法完成细胞脱核 ,以及免疫荧光法和激光共聚焦显微镜观察细胞表面受体聚集情况。结果 :0 .2 μmol/ L MNNG能在脱核细胞中引起 PKA活性升高 2 .3倍 ,并可在 5 min内引起 vero细胞表面生长因子受体和肿瘤坏死因子 α受体的聚集 ;在脱核细胞中 ,表面受体聚集现象与在完整细胞中一样。结论 :低浓度 MNNG对 PKA的激活和诱导细胞表面受体聚集均不依赖于基因组 DNA的损伤 ,表明细胞信号转导通路的起源可能位于细胞膜或者细胞质中。 展开更多
关键词 N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍 Vero细胞 DNA损伤 信号传递 蛋白激酶A 生长调节素受体 肿瘤坏死因子受体
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结构特异性核酸酶FEN-1的功能和结构 被引量:2
17
作者 石斌山 余应年 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第2期143-146,共4页
FEN 1(flapendo/exonuclease)是一种结构特异性核酸酶 ,它能识别特定的DNA分叉结构 ,并切除含有游离 5′端的单链核酸 .在DNA复制过程中 ,FEN 1通过其外切酶、内切酶活力去除了冈崎片段前端RNA引物的最后一个核糖核苷 .在DNA修复中 ,FE... FEN 1(flapendo/exonuclease)是一种结构特异性核酸酶 ,它能识别特定的DNA分叉结构 ,并切除含有游离 5′端的单链核酸 .在DNA复制过程中 ,FEN 1通过其外切酶、内切酶活力去除了冈崎片段前端RNA引物的最后一个核糖核苷 .在DNA修复中 ,FEN 1以其内切酶活力参与了损伤碱基的修复过程 .FEN 1基因含有两个保守区和一个PCNA结合区 . 展开更多
关键词 结构特异性核酸酶 DNA复制 DNA修复 遗传稳定性
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苯并[a]芘诱导的FL细胞锌指蛋白等表达的改变
18
作者 高志华 金静华 +1 位作者 杨军 余应年 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2003年第5期380-384,共5页
目的 :观察苯并 [a]芘诱发的细胞应答反应 ,探讨苯并 [a]芘引发的基因突变和致癌机制。方法 :应用双向凝胶电泳与相应软件分析苯并 [a]芘处理后细胞内蛋白质的表达谱 ,MAL DI- TOF(matrix assisted laser desorp-tion/ ionization- time... 目的 :观察苯并 [a]芘诱发的细胞应答反应 ,探讨苯并 [a]芘引发的基因突变和致癌机制。方法 :应用双向凝胶电泳与相应软件分析苯并 [a]芘处理后细胞内蛋白质的表达谱 ,MAL DI- TOF(matrix assisted laser desorp-tion/ ionization- time of flight)质谱结合数据库检索鉴定差异表达的蛋白斑点。结果 :细胞经苯并 [a]芘处理后 ,可引起广泛的蛋白质表达的改变 ,其中以锌指蛋白和一些参与转录调控的蛋白多见。结论 :这些表达改变的锌指蛋白和转录调控因子参与了苯并 [a]芘诱发细胞的应答反应 ,提示可能参与苯并 [a]芘引发的基因突变和肿瘤形成。 展开更多
关键词 苯并[A]芘 锌指蛋白 细胞应答反应 凝胶 电泳 双向 MALDI-TOF质谱
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人REV3基因启动子区的克隆和生物信息学分析及其对MNNG的反应
19
作者 朱峰 杨军 +1 位作者 徐方 余应年 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2003年第5期393-397,共5页
目的 :了解人 REV3基因对化学致癌物 N-甲基 - N’-硝基 - N-亚硝基胍 (MNNG)诱发转录上调的机制。方法 :根据 BL AST序列比对、启动子和转录因子结合部位预测软件 ,对人 REV3基因促进子区进行生物信息学分析 ;用巢式PCR技术克隆了人 R... 目的 :了解人 REV3基因对化学致癌物 N-甲基 - N’-硝基 - N-亚硝基胍 (MNNG)诱发转录上调的机制。方法 :根据 BL AST序列比对、启动子和转录因子结合部位预测软件 ,对人 REV3基因促进子区进行生物信息学分析 ;用巢式PCR技术克隆了人 REV3基因启动子区 ;用瞬时转染二重荧光素酶报道基因系统检测人 REV3启动子对化学致癌物MNNG的反应。结果 :生物信息学分析显示 ,人 REV3基因启动子区位于 6号染色体 PAC克隆 RP3- 415 N12 ,假设的启动子区有启动子序列、富含 Cp G岛和包括 AP- 1/ c- Jun/ c- Fos、AP- 2、STAT、CREBP和 NF- κB等的转录因子识别部位。将启动子区 2 5 82 bp的片段插入荧光素酶报道基因载体 p GL3- Basic中 ,构建了重组体质粒 p GL3- 2 5 82。瞬时转染检测显示 ,该假设的启动子区确有启动子功能 ,对 MNNG发生反应。结论 :成功地克隆了人 REV3基因启动子区 ,并证明其对 MNNG发生反应。提示当细胞处于基因毒应激状态下可在转录水平调节 REV3基因。 展开更多
关键词 REV3/遗传学基因 N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍
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FL-FEN-1-细胞的建立
20
作者 石斌山 余应年 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 1999年第6期288-289,共2页
关键词 FEN-1 特异性核酸酶 病理生理学
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