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miR-933调控KLF6基因影响非小细胞肺癌的作用研究 被引量：3
1
作者 李海洲 张艳炜 +3 位作者 许英杰 杨门 张磊 韩京军 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期581-588,共8页
背景与目的:miRNA被认为参与肿瘤的发生、发展过程,但miRNA与肺癌的关系仍不完全清楚,探讨miR-933调控Kruppel样锌指转录因子6(Kruppel-like zinc finger transcription factor 6,KLF6)对肺癌细胞系增殖、迁移侵袭和诱导凋亡的影响。方... 背景与目的:miRNA被认为参与肿瘤的发生、发展过程,但miRNA与肺癌的关系仍不完全清楚,探讨miR-933调控Kruppel样锌指转录因子6(Kruppel-like zinc finger transcription factor 6,KLF6)对肺癌细胞系增殖、迁移侵袭和诱导凋亡的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQPCR)检测正常支气管上皮细胞BEAS-2B细胞、肺癌细胞系A549、H460细胞中miR-933的表达。采用RTFQ-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测KLF6 mRNA表达和蛋白水平。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)和EdU法检测细胞增殖,采用transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭,采用AnnexinⅤ-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)/碘化丙啶(propidiumiodide,PI)染色法检测细胞凋亡。结果:肺癌细胞系转染miR-933mimic组KLF6mRNA表达水平明显上调(P<0.05)。与阴性对照组相比,高表达miR-933能增加A549、H460细胞KLF6蛋白的相对表达水平(P<0.05)。过表达miR-933可抑制A549、H460细胞的增殖、迁移和侵袭能力,差异均有统计意义(P<0.05)。转染miR-933mimc后,A549和H460细胞的凋亡率均显著高于各阴性对照组(P<0.001)。结论:miR-933通过调控KLF6基因的表达,诱导肺癌细胞的凋亡,抑制肺癌细胞的增殖,降低肺癌细胞的迁移和侵袭能力,影响肺癌的发生、发展。 展开更多
关键词 MIRNA 非小细胞肺癌 细胞增殖 细胞凋亡 Kruppel样锌指转录因子6
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依布哂啉的稳定性及杂质和急性毒性试验 被引量：2
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作者 林凯 赵美英 +1 位作者 张宏宇 张静 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期831-832,共2页
目的了解合成的依布哂啉(Ebs)的稳定性和杂质及急性毒性。方法采用高效液相色谱法测定2～8℃及室温下和0～4年中的Ebs的含量;亚硝酸盐氮和苯胺分别用比色法测定,成年小鼠3次/24h灌胃的死亡率。结果Ebs在2～8℃中可保存3年,亚硝酸盐氮和... 目的了解合成的依布哂啉(Ebs)的稳定性和杂质及急性毒性。方法采用高效液相色谱法测定2～8℃及室温下和0～4年中的Ebs的含量;亚硝酸盐氮和苯胺分别用比色法测定,成年小鼠3次/24h灌胃的死亡率。结果Ebs在2～8℃中可保存3年,亚硝酸盐氮和苯胺的含量为4.83μg/kg和1.78mg/kg,小鼠3次经口的LD50为2355.05mg/kg。结论Ebs质量可靠,性能稳定,安全性高,可供开发研究。 展开更多
关键词 依布哂啉 亚硝盐氮 苯胺 LD50
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伤寒、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌多重荧光PCR方法的评估及临床应用 被引量：3
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作者 马淑贞 石晓路 +3 位作者 林一曼 邱亚群 李迎慧 扈庆华 《中国医药指南》 2013年第22期1-2,共2页
目的建立和评估多重荧光PCR方法快速鉴定伤寒、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌的方法,并应用于临床血培养样品的检测。方法收集留取医院的可疑伤寒患者的血培养标本,用多重实时荧光PCR法和传统分离培养法同时进行分离鉴定,分析比较双盲实验结... 目的建立和评估多重荧光PCR方法快速鉴定伤寒、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌的方法,并应用于临床血培养样品的检测。方法收集留取医院的可疑伤寒患者的血培养标本,用多重实时荧光PCR法和传统分离培养法同时进行分离鉴定,分析比较双盲实验结果,评价多重实时荧光PCR方法的灵敏度、特异度等检测性能指标。结果共检测临床样本538例,多重荧光PCR法检出阳性218例,比传统培养法多检出6例;阴性320例,与传统培养法一致。以传统检测方法为金标准,多重荧光PCR方法的灵敏度为100%,特异度为98.2%。结论建立的多重荧光PCR检测方法操作简便,可快速、特异、灵敏地检测出伤寒、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌,可以应用于临床标本的早期快速分型诊断,提升重大传染病的应急处置能力和监测能力。 展开更多
关键词 多重荧光PCR 伤寒沙门菌 甲型副伤寒沙门菌 乙型副伤寒沙门菌 丙型副伤寒沙门菌
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miR-671-5p对非小细胞肺癌细胞增殖和迁移及侵袭影响及其作用机制 被引量：1
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作者 许英杰 张艳炜 +3 位作者 李海洲 张磊 杨门 韩京军 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2021年第20期1541-1548,共8页
目的探讨miR-671-5p调控非小细胞肺癌细胞系增殖、迁移和侵袭的作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测人正常肺上皮细胞系(BEAS-2B)和非小细胞肺癌细胞系(A549和H460)中miR-671-5p及其靶基因Kruppel样锌指转录因子6(KLF6)m... 目的探讨miR-671-5p调控非小细胞肺癌细胞系增殖、迁移和侵袭的作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测人正常肺上皮细胞系(BEAS-2B)和非小细胞肺癌细胞系(A549和H460)中miR-671-5p及其靶基因Kruppel样锌指转录因子6(KLF6)mRNA表达量。miR-671-5p mimic转染A549和H460细胞,设置阴性对照序列,蛋白质印迹法检测KLF6蛋白表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法、EdU法和Transwell小室法分别检测非小细胞肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果与BEAS-2B细胞比较,miR-671-5p在A549和H460细胞中高表达,表达量分别为1.646±0.026和1.638±0.027,差异有统计学意义,F=153.900,P<0.001;KLF6在A549和H460中的mRNA表达量降低,分别为0.233±0.005和0.382±0.003,差异有统计学意义,F=2 077.000,P<0.001;转染miR-671-5p mimic后,A549和H460细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强(均P<0.05),KLF6的mRNA和蛋白表达水平受到抑制,其中A549和H460细胞KLF6蛋白水平分别下调至0.252±0.011(t=23.970,P<0.001)和0.290±0.017(t=16.140,P<0.001)。结论 miR-671-5p可能通过调控KLF6基因促进非小细胞肺癌细胞系的增殖、迁移及侵袭,进而影响非小细胞肺癌的发生和发展。 展开更多
关键词 miR-671-5p 非小细胞肺癌 增殖 迁移侵袭 KLF6基因
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改良分子信标-实时荧光PCR同时检测猪霍乱沙门菌和丙型副伤寒沙门菌 被引量：3
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作者 林一曼 石晓路 +4 位作者 朱玉梅 邱亚群 李迎慧 吕东月 扈庆华 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期514-516,共3页
目的建立猪霍乱沙门菌和丙型副伤寒沙门菌的实时荧光PCR快速检测方法,应用于食品和食物中毒病人标本的猪霍乱沙门菌检测以及沙门菌属C群的鉴别诊断。方法根据GenBank公布的猪霍乱沙门菌和丙型副伤寒沙门菌的保守序列(CP000857.1),设计... 目的建立猪霍乱沙门菌和丙型副伤寒沙门菌的实时荧光PCR快速检测方法,应用于食品和食物中毒病人标本的猪霍乱沙门菌检测以及沙门菌属C群的鉴别诊断。方法根据GenBank公布的猪霍乱沙门菌和丙型副伤寒沙门菌的保守序列(CP000857.1),设计引物和改良分子信标探针,优化PCR程序和PCR成分,以11种细菌为对照,建立实时荧光PCR检测方法,并用71株常见血清型的沙门菌评价该方法的灵敏度和特异性,所建立的方法应用于70份食品样品的检测。结果该改良分子信标—荧光PCR方法的DNA最低检出限为10fg/反应体系,菌液最低检出限为20 CFU/反应体系;无交叉荧光信号产生。针对目标菌均出现特异荧光信号。对71株沙门菌属的检测,该方法的灵敏度和特异度为100%。70份食品样品用荧光PCR和传统方法检测猪霍乱沙门菌和丙型副伤寒沙门菌,结果均为阴性。该方法从菌株的核酸提取到检测仅需1.5小时,从样品处理到检测仅需1天时间。结论建立的实时PCR检测方法快速、灵敏度高、特异性强,可用于食品及食物中毒标本的猪霍乱沙门菌检测以及沙门菌属C群的鉴别诊断,保障食品安全。 展开更多
关键词 改良分子信标 实时荧光PCR 猪霍乱沙门菌 丙型副伤寒沙门菌
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