幽门螺杆菌BIB原核表达工程菌的构建及微生物学特性分析 被引量：4

1

作者 潘兴 肖继红 +7 位作者 杨靖 王保宁 李健春 周法庭 祝捷 周永君 李婉宜 李明远 《西部医学》 2013年第10期1451-1454,共4页

目的构建融合了幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(Ure I)、尿素酶B亚单位(Ure B)的表位基因及霍乱毒素B亚单位(CTB)的原核表达质粒pET28a(+)/ct B/ure I-B(简称BIB)及其原核表达工程菌,并研究其生物学特性。方法参考基因库中ure I、ure B、ct ... 目的构建融合了幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(Ure I)、尿素酶B亚单位(Ure B)的表位基因及霍乱毒素B亚单位(CTB)的原核表达质粒pET28a(+)/ct B/ure I-B(简称BIB)及其原核表达工程菌,并研究其生物学特性。方法参考基因库中ure I、ure B、ct B的基因序列,合成不含信号肽的ct B基因及ure I、ure B优势表位基因,串联融合,形成多靶点重组ct B/ure I-B基因(简称BIB基因),并构建pET28a(+)/BIB原核表达质粒,经限制性内切酶Nco I、Xho I酶切以及DNA测序鉴定正确后,将重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)中,构建含BIB基因的原核表达工程菌。经乳糖诱导后,SDS-PAGE电泳检测重组蛋白(rBIB),Western blot及肌注BALB/c小鼠实验检测rBIB的免疫反应性和免疫原型。结果构建的原核表达质粒pET28a(+)/BIB,经双酶切和测序分析显示,构建的BIB基因与设计序列100%一致。乳糖诱导后,SDS-PAGE电泳显示在33kD左右出现一条明显蛋白条带,Western blot检测在33kD左右出现特异反应条带,肌注免疫BALB/c小鼠产生了较高的抗体水平。结论成功构建了pET28a(+)/BIB原核表达质粒及BIB原核表达工程菌,该工程菌可表达重组蛋白rBIB,且该重组蛋白具有良好的免疫反应性及免疫原性。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 原核表达工程菌 URE CTB 重组多表位

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肺炎克雷伯菌crp缺失株生物学特性初步研究

2

作者 欧琴 徐祥 +1 位作者 李健 李蓓 《湖北医药学院学报》 CAS 2014年第4期332-334,F0002,共4页

目的:研究cAMP受体蛋白(cAMP receptor protein,crp)对肺炎克雷伯菌生物学特性的影响。方法:通过细菌生长特性、荚膜染色、超黏性试验和离心试验观察肺炎克雷伯菌crp缺失株体外生物学特性的改变。结果:肺炎克雷伯菌crp缺失株生长菌落较... 目的:研究cAMP受体蛋白(cAMP receptor protein,crp)对肺炎克雷伯菌生物学特性的影响。方法:通过细菌生长特性、荚膜染色、超黏性试验和离心试验观察肺炎克雷伯菌crp缺失株体外生物学特性的改变。结果:肺炎克雷伯菌crp缺失株生长菌落较小,生长速度较慢,细菌形态由杆状变为圆形,离心不易沉淀于Ep管底部。结论:crp调控子可能会影响肺炎克雷伯菌的生长、细菌形态和荚膜含量等生物学特性。该研究为肺炎克雷伯菌crp基因功能进一步研究提供了依据。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 cAMP受体蛋白 毒力

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幽门螺杆菌双基因多表位重组原核表达工程菌的构建及其表达特性的研究 被引量：3

3

作者 杨靖 潘兴 +6 位作者 欧琴 周法庭 李建春 祝捷 周永君 李明远 王保宁 《成都医学院学报》 CAS 2013年第4期410-414,共5页

目的构建含幽门螺杆菌尿素酶保守基因序列ureI和ureB的双基因(简称IB)多表位原核表达质粒以及原核表达工程菌,并研究其微生物学特性。方法通过生物信息学方法从ureI和ureB基因中筛选T细胞和B细胞优势表位基因序列,人工合成所选择的表位... 目的构建含幽门螺杆菌尿素酶保守基因序列ureI和ureB的双基因(简称IB)多表位原核表达质粒以及原核表达工程菌,并研究其微生物学特性。方法通过生物信息学方法从ureI和ureB基因中筛选T细胞和B细胞优势表位基因序列,人工合成所选择的表位基因序列并构建原核重组表达质粒pET28a(+)/IB。经限制性内切酶(EcoR I,Xho I)鉴定及DNA测序鉴定后,将重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)。该工程菌经IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测重组蛋白(rIB)的表达情况,用Western blot检测rIB的免疫反应性。结果构建的双基因多表位基因序列与所设计的一致;工程菌经IPTG诱导后做SDS-PAGE电泳显示,在28kD左右有一条明显蛋白条带,Western blot结果显示在28kD左右出现特异反应条带。结论成功构建含ureI和ureB双基因序列的原核表达质粒pET28a(+)/IB及工程菌,该工程菌表达的重组蛋白rIB能被抗幽门螺杆菌悉尼株(H.pylori SS1)的特异抗体所识别,表明该新重组蛋白与幽门螺杆菌有高度相关性。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 双基因 多表位 原核表达

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西多福韦对HeLa细胞增殖抑制作用的研究 被引量：1

4

作者 吴五洲 徐祥 +4 位作者 欧琴 李蓓 丁娜娜 李明远 杨靖 《安徽医药》 CAS 2017年第8期1494-1497,共4页

目的研究抗病毒药西多福韦(CDV)对HeLa细胞的增殖抑制作用。方法采用MTT法分析CDV和阳性对照药顺铂(DDP)对HeLa细胞增殖活力的影响;利用细胞集落形成实验和Giemsa染色技术,观察CDV和DDP导致HeLa细胞凋亡情况;利用流式细胞仪观察CDV和DD... 目的研究抗病毒药西多福韦(CDV)对HeLa细胞的增殖抑制作用。方法采用MTT法分析CDV和阳性对照药顺铂(DDP)对HeLa细胞增殖活力的影响;利用细胞集落形成实验和Giemsa染色技术,观察CDV和DDP导致HeLa细胞凋亡情况;利用流式细胞仪观察CDV和DDP对细胞凋亡及细胞周期影响。结果 MTT法和细胞集落实验结果显示CDV能明显抑制HeLa细胞的增殖活性;流式细胞仪测定显示CDV和DDP使HeLa细胞阻滞于细胞周期的S期,并诱导HeLa细胞发生凋亡。结论 CDV对HeLa细胞具有明显的增殖抑制作用,并能诱导细胞凋亡,CDV有可能成为宫颈癌治疗的另一策略。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒 HELA细胞 西多福韦 顺钼 细胞凋亡

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Luteolin抑制血管生成的机制研究 被引量：1

5

作者 李文仿 欧琴 +1 位作者 王耕 赵宗彬 《现代肿瘤医学》 CAS 2015年第13期1810-1812,共3页

目的:探讨luteolin对血管的抑制机制。方法:采用不同浓度luteolin处理人微血管内皮细胞,观察luteolin对内皮细胞生长,乳腺癌细胞MDA-MB 231培养液介导的内皮细胞趋化抑制作用。并探讨luteolin对内皮细胞中IL-8信号激活的抑制作用,及lute... 目的:探讨luteolin对血管的抑制机制。方法:采用不同浓度luteolin处理人微血管内皮细胞,观察luteolin对内皮细胞生长,乳腺癌细胞MDA-MB 231培养液介导的内皮细胞趋化抑制作用。并探讨luteolin对内皮细胞中IL-8信号激活的抑制作用,及luteolin对血管生成抑制作用机制。结果:Luteolin对人微血管内皮细胞细胞增殖抑制作用明显(P<0.01)。Luteolin可抑制乳腺癌细胞MDA-MB 231培养液介导的内皮细胞趋化作用(P<0.01),并明显抑制IL-8对内皮细胞ERK及AKT的激活。结论:Luteolin可抑制人微血管内皮细胞增殖及乳腺癌细胞MDA-MB 231培养液介导的趋化作用,并可抑制IL-8对人微血管内皮细胞的信号激活作用,luteolin抗血管生成作用在预防恶性肿瘤复发及转移中可能有重要的作用。 展开更多

关键词 木犀草素 IL-8 人微血管内皮细胞

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DNA甲基化酶1在乙肝相关性肝癌中的表达及意义 被引量：1

6

作者 欧琴 张华 +1 位作者 赵宗彬 王耕 《现代肿瘤医学》 CAS 2015年第3期360-363,共4页

目的:探讨DNA甲基化酶1(DNMT1)在乙肝相关性肝癌中表达的临床意义。方法:免疫组化检测66例乙肝相关性肝癌组织术后DNMT1表达,并对患者临床病理资料进行分析。结果:DNMT1在乙肝相关性肝癌组织中阳性率为40.9%,DNMT1高表达组与低表达组在... 目的:探讨DNA甲基化酶1(DNMT1)在乙肝相关性肝癌中表达的临床意义。方法:免疫组化检测66例乙肝相关性肝癌组织术后DNMT1表达,并对患者临床病理资料进行分析。结果:DNMT1在乙肝相关性肝癌组织中阳性率为40.9%,DNMT1高表达组与低表达组在性别、年龄及肿瘤大小方面无明显差异(P=0.900,P=0.509,P=0.347),在肿瘤结节、包膜及微血管浸润方面亦无明显差异(P=0.385,P=0.690,P=0.149),DNMT1高表达组与低表达组在Edmondson分级、BCLC分期及复发方面有明显差异(P=0.014,P=0.032,P=0.014)。结论:在乙肝相关性肝癌组织中存在DNMT1蛋白高表达,DNMT1高表达与患者恶性病理特征及复发具有一定作用,与患者具有较差的预后有关。 展开更多

关键词 乙肝相关性肝癌 DNMT1 临床意义

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CHROM agar培养基鉴定念珠菌的临床评价

7

作者 邱红 胡筱梅 +1 位作者 雷香菊 金志雄 《湖北医药学院学报》 CAS 2013年第2期118-120,124+94,共5页

目的:评价CHROM agar念珠菌培养基应用于临床标本念珠菌分离和鉴定的效果。方法:取500份临床患者的标本,分别接种至血琼脂、Sabouraud和CHROM agar念珠菌培养基,常规孵育,并进行VITEK-YBC法鉴定和药敏判断。结果:利用血琼脂、Sabouraud... 目的:评价CHROM agar念珠菌培养基应用于临床标本念珠菌分离和鉴定的效果。方法:取500份临床患者的标本,分别接种至血琼脂、Sabouraud和CHROM agar念珠菌培养基,常规孵育,并进行VITEK-YBC法鉴定和药敏判断。结果:利用血琼脂、Sabouraud和CHROM agar念珠菌培养基各获得200、296和296株念珠菌,其特异性分别为67.6%、78.3%和100%。CHROM agar念珠菌培养基可对占94.26%的白色、热带、克柔和光滑念珠菌做出正确鉴定。结论:CHROM agar念珠菌培养基可用于临床标本念珠菌的初筛及快速做出病原学诊断,为抗念珠菌药物的选择提供依据。 展开更多

关键词 CHROM agar培养基 念珠菌 诊断

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两株抗幽门螺杆菌特异性卵黄抗体的制备及性能 被引量：2

8

作者 杨廷敏 杨靖 +6 位作者 王保宁 潘兴 李建春 祝捷 周永君 李明远 曹随忠 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期251-254,共4页

目的分别制备抗幽门螺杆菌(H.pylori)全菌(SS1株)和尿素酶I和尿素酶B的重组蛋白(r IB)的特异性卵黄抗体(Ig Y),纯化后研究其体外抑菌效果。方法分别以超声破碎SS1菌液和r IB为抗原免疫来杭鸡,用水稀释法和硫酸铵沉淀法纯化获得相应特异... 目的分别制备抗幽门螺杆菌(H.pylori)全菌(SS1株)和尿素酶I和尿素酶B的重组蛋白(r IB)的特异性卵黄抗体(Ig Y),纯化后研究其体外抑菌效果。方法分别以超声破碎SS1菌液和r IB为抗原免疫来杭鸡,用水稀释法和硫酸铵沉淀法纯化获得相应特异性Ig Y(SS1-Ig Y、IB-Ig Y)。将特异性Ig Y与SS1混合作用后共培养检测其抑菌效果,快速脲酶试验检测其抗尿素酶作用。结果成功制备2种特异性Ig Y:SS1-Ig Y和IB-Ig Y,效价超过1∶12 800,纯度超过80%。SS1-Ig Y和IB-Ig Y均有体外抗尿素酶活性和抑菌作用。结论 SS1-Ig Y和IB-Ig Y均具有在体外抑制H.pylori尿素酶活性和抑制H.pylori生长的作用。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 卵黄抗体 来杭鸡 尿素酶

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流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg的构建与细胞转染研究 被引量：1

9

作者 寇静远 潘兴 +10 位作者 李婉宜 邝玉 周琳琳 杨靖 石新丽 陆顺顺 黄筱钧 邓昭敏 秦臻 王保宁 李明远 《西部医学》 2015年第2期182-185,189,共5页

目的设计并构建含分子内佐剂的流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg,初步研究其在HEK293T细胞中的转染效率。方法通过生物信息学软件设计并合成了含分子内佐剂的流感病毒多表位基因CTB-Eg,将其插入真核载体pEGFP-C2中,获得了重组质粒pEGFP-C2/... 目的设计并构建含分子内佐剂的流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg,初步研究其在HEK293T细胞中的转染效率。方法通过生物信息学软件设计并合成了含分子内佐剂的流感病毒多表位基因CTB-Eg,将其插入真核载体pEGFP-C2中,获得了重组质粒pEGFP-C2/CTB-Eg;用脂质体法转染HEK293T细胞,通过荧光显微镜观察和PCR法检测其转染效率。结果成功构建了真核表达质粒pEGFP-C2/CTB-Eg,且该重组质粒能在HEK293T细胞中瞬时转染,转染效率在50%～70%之间。结论本研究成功设计、构建了CTB-Eg融合基因,其在HEK293T细胞中转染效率较高,为流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg在小鼠体内的抗病毒作用研究奠定了坚实基础。 展开更多

关键词 流感病毒 核酸疫苗 多表位基因 霍乱毒素B亚单位

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植物内生菌的次生代谢及应用 被引量：2

10

作者 金志雄 《湖北医药学院学报》 CAS 2012年第5期431-434,共4页

由于感染性疾病的药物抗性、化学合成药的毒副作用,迫使人们寻找新的药物或药物的来源。微生物在抗生素类药物的开发上已为人类做出了重要贡献,如:来源于放线菌的链霉素、金霉素、红霉素和创新霉素等;细菌产生的杆菌肽、短杆菌肽、多粘... 由于感染性疾病的药物抗性、化学合成药的毒副作用,迫使人们寻找新的药物或药物的来源。微生物在抗生素类药物的开发上已为人类做出了重要贡献,如:来源于放线菌的链霉素、金霉素、红霉素和创新霉素等;细菌产生的杆菌肽、短杆菌肽、多粘菌素等;真菌产生的青霉素、灰黄霉素等。土壤微生物的纷繁复杂加大了发现新药物资源菌株的难度,因此研究者已将目光转入微生物的另一个生存环境——植物。 展开更多

关键词 内生菌 代谢产物 生物活性

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环磷酸腺苷受体蛋白调控子对细菌毒力及生物膜形成的影响

11

作者 陈贝贝 杨钢 +1 位作者 杨勋 欧琴 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第14期1415-1417,共3页

目的探讨肺炎克雷伯菌环磷酸腺苷受体蛋白(CRP)调控子对细菌毒力及生物膜形成的影响。方法 2012年8月到2014年2月,选择120株肺炎克雷伯菌进行CRP调控子的PCR阳性表达检测,同时选择哌拉西林、哌拉西林+他唑巴坦、阿米卡星、头孢他啶、头... 目的探讨肺炎克雷伯菌环磷酸腺苷受体蛋白(CRP)调控子对细菌毒力及生物膜形成的影响。方法 2012年8月到2014年2月,选择120株肺炎克雷伯菌进行CRP调控子的PCR阳性表达检测,同时选择哌拉西林、哌拉西林+他唑巴坦、阿米卡星、头孢他啶、头孢曲松、头孢哌酮+舒巴坦、左氧氟沙星等进行耐药性与生物膜形成实验。结果 PCR检测CRP调控子阳性率为33.3%。而CRP调控子阳性株对于头孢曲松、左氧氟沙星、阿米卡星与头孢他啶有更高的耐药性,与CRP调控子阴性株对比差异有统计学意义(P<0.05)。2组生物被膜培养组CRP调控子表达量为0.28±0.04,普通液相培养组CRP调控子表达量为0.08±0.05,2组对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺炎克雷伯菌CRP调控子的阳性表达有利于降低细菌毒力与促进生物膜形成,从而提高相关抗菌药物的耐药性。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 环磷酸腺苷受体蛋白调控子 细菌毒力 生物膜形成

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幽门螺杆菌体外培养影响因素探讨 被引量：6

12

作者 邝玉 杨远 +2 位作者 李婉宜 李明远 杨靖 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第7期595-597,共3页

目的探索影响幽门螺杆菌体外培养的影响因素。方法观察不同培养时间幽门螺杆菌的菌落特点和细菌形态特点,确定幽门螺杆菌的最佳培养时间;通过SYTO9/PI核酸染料对暴露于空气中不同时间的幽门螺杆菌进行死活菌的染色,估计幽门螺杆菌在空... 目的探索影响幽门螺杆菌体外培养的影响因素。方法观察不同培养时间幽门螺杆菌的菌落特点和细菌形态特点,确定幽门螺杆菌的最佳培养时间;通过SYTO9/PI核酸染料对暴露于空气中不同时间的幽门螺杆菌进行死活菌的染色,估计幽门螺杆菌在空气中的存活时间。结果培养3d的幽门螺杆菌菌落为针尖大小、形态为典型弯曲杆菌,培养超过3d的幽门螺杆菌菌落直径可达1mm,菌体形态多为球型;荧光染色检查显示,暴露在空气中的幽门螺杆菌随着暴露时间的延长逐渐死亡,4h后几乎全部死亡。结论幽门螺杆菌体外培养最佳培养时间为3d,且菌体形态典型。幽门螺杆菌暴露于空气中的存活时间≤4h。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 培养 荧光染色

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幽门螺杆菌多表位重组原核表达工程菌的构建及表达特性研究 被引量：4

13

作者 丁娜娜 杨靖 +5 位作者 潘兴 周永君 李建春 祝捷 王保宁 李明远 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期367-370,共4页

目的构建含有幽门螺杆菌尿素酶(UreI、UreB)及粘附素(HpaA)的多表位原核表达质粒pET28a(+)/ureI-ureB-hpaA〔pET28a(+)/IBA〕及相应的原核表达工程菌,研究其表达特性。方法通过生物信息学方法从ureI、ureB和hpaA基因中筛选T细胞和B细胞... 目的构建含有幽门螺杆菌尿素酶(UreI、UreB)及粘附素(HpaA)的多表位原核表达质粒pET28a(+)/ureI-ureB-hpaA〔pET28a(+)/IBA〕及相应的原核表达工程菌,研究其表达特性。方法通过生物信息学方法从ureI、ureB和hpaA基因中筛选T细胞和B细胞优势表位基因序列,人工合成并构建原核重组表达质粒pET28a(+)/IBA。经限制性内切酶(NdeⅠ,XhoⅠ)酶切鉴定及DNA测序鉴定后导入大肠杆菌BL21(DE3)。该工程菌经IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测重组蛋白(rIBA)的表达情况,以抗幽门螺杆菌悉尼株(SS1株)特异卵黄抗体采用Western blot检测rIBA的抗原性。结果构建的多表位原核表达质粒pET28a(+)/IBA双酶切和测序鉴定与设计序列100%一致。工程菌经IPTG诱导后SDS-PAGE电泳显示在相对分子质量40×103左右有一条明显蛋白条带,Western blot显示有相应位置特异反应条带。结论成功构建幽门螺杆菌多表位重组原核表达质粒pET28a(+)/IBA及相应原核表达工程菌,该工程菌表达的rIBA具有抗原性,表明该重组蛋白与幽门螺杆菌有高度相关性。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 表位 尿素酶 粘附素 工程菌

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Bax对人卵巢癌细胞的凋亡诱导作用及其机制研究 被引量：4

14

作者 曾俊 杨靖 +1 位作者 陈登榜 曹康 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期697-701,共5页

目的观察Bax对人卵巢癌A2780细胞的凋亡诱导作用,并探讨其作用机制。方法构建重组质粒pcDNA-Bax,将重组质粒pcDNA-Bax转染A2780细胞,采用Hoechst 33258染色观察细胞凋亡、MTT法检测细胞活力,采用Western blot法检测Bax基因的过表达、线... 目的观察Bax对人卵巢癌A2780细胞的凋亡诱导作用,并探讨其作用机制。方法构建重组质粒pcDNA-Bax,将重组质粒pcDNA-Bax转染A2780细胞,采用Hoechst 33258染色观察细胞凋亡、MTT法检测细胞活力,采用Western blot法检测Bax基因的过表达、线粒体细胞色素C的释放及Caspase-9和Caspase-3的激活。结果经酶切和测序鉴定,重组质粒pcDNA-Bax构建成功。转染质粒pcDNA-Bax能明显诱导A2780细胞凋亡,Hoechst染色显示凋亡的细胞出现细胞核形态学改变;MTT结果显示转染质粒pcDNA3.1-Bax后,细胞活力明显下降;Western blot结果表明转染质粒pcDNA-Bax后的A2780细胞线粒体释放细胞色素C,激活了Caspase-9和Caspase-3。结论 Bax能促进卵巢癌细胞线粒体细胞色素C释放,从而诱导细胞凋亡。 展开更多

关键词 BAX 线粒体 真核表达 凋亡

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布鲁菌强毒株与疫苗株基因间的比较基因组研究 被引量：1

15

作者 赵琴 李儒贵 +4 位作者 刘翔 占国清 杨靖 李蓓 谭华炳 《中华实验和临床感染病杂志（电子版）》 CAS 2015年第4期109-111,共3页

目的比较我国布鲁菌强毒株与不同疫苗株基因组间的差异,寻找布鲁菌强毒株及不同种群布鲁菌所特有的基因。方法利用布鲁菌全基因组DNA芯片,进行牛、羊布鲁菌强毒株及我国常用布鲁菌疫苗株M5株(羊种)、S2株(猪种)、S19株(牛种)和104M株(牛... 目的比较我国布鲁菌强毒株与不同疫苗株基因组间的差异,寻找布鲁菌强毒株及不同种群布鲁菌所特有的基因。方法利用布鲁菌全基因组DNA芯片,进行牛、羊布鲁菌强毒株及我国常用布鲁菌疫苗株M5株(羊种)、S2株(猪种)、S19株(牛种)和104M株(牛种)间比较基因组学研究,寻找布鲁菌强毒株及不同种群布鲁菌特有的基因。结果在牛和羊布鲁菌强毒株中共发现263个在所有疫苗株中缺失的基因;发现BMEII0827-BMEII0849基因片段在牛布鲁菌疫苗株与强毒株中均缺失,而在羊及猪布鲁菌中能检测到;在猪布鲁菌疫苗株中比牛、羊布鲁菌缺失了一个BMEI1684-BMEI1702的基因片段。结论通过DNA芯片比较基因组学的研究,寻找到布鲁菌强毒株及不同种群布鲁菌所特有的基因,为布鲁菌致病机制的研究提供了靶标。 展开更多

关键词 布鲁菌 比较基因组 疫苗 毒力相关因子

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Ag85A-HA2原核表达载体的构建及其抗甲型流感病毒免疫效果的研究 被引量：1

16

作者 邵京京 杨靖 +5 位作者 戴军 孟俊杰 裴德翠 李虹 潘兴 李婉宜 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期547-551,共5页

目的构建结核杆菌分泌型抗原85A(Ag85A)与流感病毒血凝素(HA)中HA2(Ag85A-HA2)原核表达载体,并表达融合蛋白,研究其抗流感病毒的免疫保护效果。方法构建Ag85A-HA2原核表达载体pET-32a(+)/Ag85A-HA2;异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)... 目的构建结核杆菌分泌型抗原85A(Ag85A)与流感病毒血凝素(HA)中HA2(Ag85A-HA2)原核表达载体,并表达融合蛋白,研究其抗流感病毒的免疫保护效果。方法构建Ag85A-HA2原核表达载体pET-32a(+)/Ag85A-HA2;异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达Ag85A-HA2融合蛋白,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物,并使用吸附多聚组氨酸标签(His-Tag)的蛋白纯化柱分离纯化蛋白;甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)攻击重组蛋白免疫后的BALB/c小鼠(并设PBS对照组),通过观察小鼠肺病理切片、测定肺指数及肺指数抑制率、死亡保护率等指标分析其免疫保护效果。结果成功构建了原核表达载体pET-32a(+)/Ag85A-HA2;SDS-PAGE电泳分析显示成功表达相对分子质量为70×103的重组融合蛋白;动物实验表明,融合蛋白Ag85A-HA2对IAV攻击后的小鼠肺指数抑制率达到39.30%,死亡保护率达到80%,效果明显高于PBS对照组(P<0.05),肺部病理切片也证实融合蛋白Ag85A-HA2对小鼠肺部的保护效果显著。结论成功构建了Ag85A-HA2原核表达载体并表达出融合蛋白,该融合蛋白在动物体内能发挥良好的抗甲型流感病毒感染的免疫保护效果。 展开更多

关键词 甲型流感病毒 结核杆菌分泌型抗原85A 流感病毒血凝素 原核表达融合蛋白 免疫效果

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