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白藜芦醇对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用:基于抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路 被引量：2
1
作者 桂建军 孙晓东 +3 位作者 温舒 刘欣 覃冰清 桑明 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期270-279,共10页
目的探讨白藜芦醇(RES)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病模型小鼠肠道屏障的保护作用及其调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的分子机制。方法将52只小鼠随机分为对照组(n=12),MPTP组(n=14),RES低剂量(MPTP+RES30)组(n... 目的探讨白藜芦醇(RES)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病模型小鼠肠道屏障的保护作用及其调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的分子机制。方法将52只小鼠随机分为对照组(n=12),MPTP组(n=14),RES低剂量(MPTP+RES30)组(n=13)及高剂量(MPTP+RES90)组(n=13)。利用30 mg/kg MPTP腹腔注射7 d诱导帕金森病小鼠模型,对照组腹腔注射等剂量PBS,治疗组分别利用30 mg/kg和90 mg/kg RES干预3周。小鼠行为学测试分析RES对帕金森模型小鼠运动功能的影响。Western blotting检测RES在TLR4/MyD88/Nf-κB信号通路中发挥的作用。免疫组织化学、免疫荧光、酶联免疫吸附试验和透射电镜检测验证RES抑制炎症和保护肠屏障的作用。结果与对照组相比,MPTP组小鼠在运动功能、多巴胺能神经元数量、神经炎症、LPS和LBP水平以及肠屏障紧密连接蛋白表达水平等方面的差异具有统计学意义(P<0.05);RES治疗组与MPTP组相比,运动功能改善(P<0.01),神经元数量恢复,TH蛋白表达上调(P<0.05),GFAP、Iba-1和TLR4的表达下调,粪便、血浆中LPS、LBP水平下降(P<0.05),ZO-1、Claudin-1的表达恢复(P<0.01),结肠组织TLR4、MyD88、NF-κB表达下调(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。电镜检测结果显示,与MPTP组比较,MPTP+RES30组紧密连接复合体形态正常,肠绒毛排列整齐且紧密。结论RES通过抑制肠屏障TLR4/MyD88/NF-κB信号通路介导的炎症反应修复肠屏障,从而改善MPTP诱导的帕金森病小鼠模型的运动功能障碍和神经病变,对多巴胺能神经元发挥保护作用。 展开更多
关键词 白藜芦醇 帕金森病 肠-脑轴 多巴胺能神经元 TLR4
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褪黑素调控自噬及铁死亡增强胰腺癌细胞PANC-1对吉西他滨的化疗敏感性 被引量：2
2
作者 曹健 董钦鹏 +5 位作者 曾炼 李恒平 刘君瑞 孙晓东 王青松 胡鹏超 《医药导报》 CAS 北大核心 2024年第4期502-510,共9页
目的探讨褪黑素联合吉西他滨对人胰腺癌细胞株PANC-1化疗敏感性的作用及其潜在的作用机制。方法单独使用吉西他滨和联合褪黑素处理人胰腺癌细胞株PANC-1,生物因子活性检测(CCK-8)检测细胞活力;克隆形成实验观察褪黑素和吉西他滨单独或... 目的探讨褪黑素联合吉西他滨对人胰腺癌细胞株PANC-1化疗敏感性的作用及其潜在的作用机制。方法单独使用吉西他滨和联合褪黑素处理人胰腺癌细胞株PANC-1,生物因子活性检测(CCK-8)检测细胞活力;克隆形成实验观察褪黑素和吉西他滨单独或联合处理对PANC-1细胞克隆形成能力的影响;采用划痕实验和transwell实验检测细胞迁移能力;细胞活性氧和线粒体膜电位JC-1检测试剂盒测定活性氧的合成和膜电位水平;亚铁离子(Fe^(2+))荧光探针检测细胞内Fe^(2+)水平;通过免疫荧光和Western blotting检测不同处理组中LC3、P62、GPX4和SLC7A11的蛋白表达水平。结果CCK-8结果显示,吉西他滨单独处理48 h及72 h后PANC-1细胞活力受到抑制,呈时间剂量依赖性,吉西他滨联合褪黑素组的细胞活力显著低于吉西他滨组,且细胞活力随着褪黑素的浓度升高而下降;细胞划痕、transwell及平板克隆实验结果显示,吉西他滨联合褪黑素组较吉西他滨组比较,细胞的增殖及迁移能力明显受到抑制;通过荧光显微镜观察并分析得出吉西他滨联合褪黑素组的PANC-1细胞内活性氧、Fe^(2+)水平较吉西他滨组上升,线粒体膜电位显著下降(P<0.01);Western blotting及免疫荧光结果显示,吉西他滨联合褪黑素组较吉西他滨组的自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I比值降低、P62表达上调,抗铁死亡相关蛋白GPX4及SLC7A11的表达受到显著抑制(P<0.05),提示褪黑素联合吉西他滨可抑制PANC-1细胞自噬以及促进铁死亡。结论褪黑素增加胰腺癌细胞PANC-1对吉西他滨的化疗敏感性,其作用机制可能是通过抑制细胞自噬及促进肿瘤细胞铁死亡。 展开更多
关键词 褪黑素 胰腺癌 吉西他滨 铁死亡 细胞自噬
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miR-155敲除小鼠乳腺癌肺转移模型的外周免疫细胞分型分析
3
作者 孙晓东 谢丽霞 +2 位作者 杜凯丽 许倩倩 桑明 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期484-490,共7页
目的:以miR-155基因敲除(miR155^(-/-))小鼠为对象,比较其与C57BL/6J野生型(WT)小鼠乳腺癌肺转移模型的外周血免疫细胞分型。方法:生物信息学分析miR-155在乳腺癌组织和外周血清中的表达水平及与预后的关系;采用尾静脉注射方式建立小鼠... 目的:以miR-155基因敲除(miR155^(-/-))小鼠为对象,比较其与C57BL/6J野生型(WT)小鼠乳腺癌肺转移模型的外周血免疫细胞分型。方法:生物信息学分析miR-155在乳腺癌组织和外周血清中的表达水平及与预后的关系;采用尾静脉注射方式建立小鼠乳腺癌肺转移模型,流式细胞术对外周血免疫细胞进行分型分析;通过病理检查观察肺组织肿瘤转移情况。结果:miR-155^(-/-)小鼠T细胞和单核细胞百分比较WT小鼠显著降低(P<0.05),髓源性抑制细胞(MDSCs)百分比显著升高(P<0.01),其中单核细胞亚群(M-MDSC)显著减少(P<0.05),粒细胞亚群(G-MDSC)显著增多(P<0.05);在乳腺癌肺转移模型中,miR155^(-/-)小鼠的T淋巴细胞较WT小鼠明显增多(P<0.05),NK细胞明显减少(P<0.05),中性粒细胞明显减少(P<0.001),T细胞中Th细胞明显减少(P<0.05),M-MDSCs显著减少(P<0.01),而G-MDSCs显著增多(P<0.01)。结论:miR-155基因缺失导致外周免疫细胞分型的显著差异,使小鼠更易发生乳腺癌肺转移。 展开更多
关键词 MIR-155 基因敲除小鼠 乳腺癌 肺转移 外周血免疫分型
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茶多酚通过介导细胞自噬提高人胃癌细胞对奥沙利铂的敏感性
4
作者 董钦鹏 孙晓东 +3 位作者 刘君瑞 王鑫澳 刘家铭 李恒平 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1182-1189,共8页
目的:体外实验探讨茶多酚(TP)联合奥沙利铂(L-OHP)对人胃癌细胞化疗敏感性的作用及其机制。方法:选取人胃癌HGC-27和N87细胞及人胃黏膜GES-1细胞,采用CCK-8实验测定TP和L-OHP分别处理的HGC-27和N87细胞活力,并计算L-OHP的IC_(50),测定L-... 目的:体外实验探讨茶多酚(TP)联合奥沙利铂(L-OHP)对人胃癌细胞化疗敏感性的作用及其机制。方法:选取人胃癌HGC-27和N87细胞及人胃黏膜GES-1细胞,采用CCK-8实验测定TP和L-OHP分别处理的HGC-27和N87细胞活力,并计算L-OHP的IC_(50),测定L-OHP联合TP处理的GES-1细胞活力。将HGC-27和N87细胞随机分为对照组、TP(5μmol/L)组、L-OHP(HGC-27细胞5.2μmol/L,N87细胞7.7μmol/L)组和TP(5μmol/L)+LOHP(HGC-27细胞5.2μmol/L,N87细胞7.7μmol/L)组,每组3个复孔。CCK-8实验测定不同处理组的细胞活力;集落形成实验检测细胞增殖能力;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡;腺病毒感染检测细胞自噬;活性氧(ROS)检测试剂盒检测ROS水平;Western blot检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)和超氧化物歧化酶1(SOD1)蛋白水平。结果:与L-OHP单独处理相比,TP联合L-OHP处理后HGC-27和N87细胞的活力下降显著,细胞增殖和迁移能力受到显著抑制,自噬小体和ROS水平显著升高,LC3-II/LC3-I比值显著升高,Nrf2、HO-1和SOD1表达水平显著降低(P<0.05)。结论:TP通过抑制Nrf2通路、再生细胞内ROS促进细胞自噬,从而提高胃癌细胞对L-OHP的敏感性。 展开更多
关键词 胃癌 茶多酚 奥沙利铂 自噬 活性氧
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人浆液性卵巢癌细胞体外培养体系的建立及其在化疗药物敏感性检测中的应用 被引量：4
5
作者 葛京京 徐红霞 +3 位作者 谢丽霞 杜凯丽 桑明 孙晓东 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期999-1007,共9页
目的:建立人浆液性卵巢癌细胞体外培养体系,为浆液性卵巢癌患者的临床用药提供实验模型和理论依据。方法:采用Ⅱ型胶原酶消化和差速离心法分离培养人浆液性卵巢癌细胞,培养至第3代的浆液性卵巢癌细胞用于实验。倒置相差显微镜下观察卵... 目的:建立人浆液性卵巢癌细胞体外培养体系,为浆液性卵巢癌患者的临床用药提供实验模型和理论依据。方法:采用Ⅱ型胶原酶消化和差速离心法分离培养人浆液性卵巢癌细胞,培养至第3代的浆液性卵巢癌细胞用于实验。倒置相差显微镜下观察卵巢癌细胞形态表现,绘制并分析细胞生长曲线。免疫荧光法检测细胞中人癌抗原125(CA125)、配对盒基因8(PAX8)和人附睾蛋白4(HE4)表达情况,对所培养原代细胞进行鉴定,同时检测胚胎干细胞同源转录因子Nanog和八聚体结合转录因子4(Oct-4)的表达情况。药物敏感性检测分为不同浓度5-氟尿嘧啶(5-FU)(0、0.625、1.250、2.500、5.000 mg·L^(-1))组、紫杉醇(PTX)(0、0.0625、0.1250、0.2500、0.5000 mg·L^(-1))组、替莫唑胺(TMZ)(0、0.125、0.250、0.500、1.000 mg·L^(-1))组、卡铂(CBP)(0、0.625、1.250、2.500、5.000 mg·L^(-1))组、阿霉素(DOX)(0、0.125、0.250、0.500、1.000 mg·L^(-1))组和褪黑素(MLT)(0、0.625、1.250、2.500、5.000 mg·L^(-1))组,其中0 mg·L^(-1)组为对照组,CCK-8法检测各组细胞存活率。结果:原代浆液性卵巢癌细胞接种4 h后开始贴壁,培养8~10 d生长融合成片;连续传代后细胞形态均一,生长迅速,细胞接种后2~7 d为线性增长期。免疫荧光法检测细胞中CA125、PAX8、HE4、Nanog和Oct-4均呈高表达。药物敏感性检测,卵巢癌细胞对5-FU、TMZ、CBP和MLT均有较高的敏感性,与相对应对照组比较,不同浓度5-FU组、TMZ组、CBP组、MLT组及0.0625和0.1250 mg·L^(-1) PTX组细胞存活率明显降低(P<0.05或P<0.01),且细胞存活率随药物浓度升高逐渐降低。结论:成功建立了人浆液性卵巢癌细胞体外培养体系,该细胞对5-FU、TMZ、CBP和MLT具有较高的敏感性,该结果对浆液性卵巢癌患者术后化疗药物的选择有指导意义。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 原代细胞培养 化疗药物敏感性 肿瘤标志物 肿瘤干细胞
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白藜芦醇改善α-突触核蛋白A53T转基因小鼠运动功能障碍和调节外周免疫的作用研究 被引量：3
6
作者 冯胜蓝 孙晓东 +6 位作者 谢丽霞 叶俊杰 覃冰清 许倩倩 杜凯丽 王敏 桑明 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期646-654,共9页
目的研究白藜芦醇(resveratrol,RES)对α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)A53T转基因小鼠运动功能障碍及外周免疫的影响。方法选取8月龄的A53T转基因小鼠,随机分成4组:对照组(WT)、对照治疗组(WT+RES)、模型组(PD)、模型治疗组(PD+RES... 目的研究白藜芦醇(resveratrol,RES)对α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)A53T转基因小鼠运动功能障碍及外周免疫的影响。方法选取8月龄的A53T转基因小鼠,随机分成4组:对照组(WT)、对照治疗组(WT+RES)、模型组(PD)、模型治疗组(PD+RES)。治疗组每3 d灌胃RES,用药3个月;对照组和模型组给予等量生理盐水。通过爬杆实验、转棒实验、前脚抓力实验、四肢抱紧实验检测各组小鼠运动水平。流式细胞仪检测小鼠T淋巴细胞亚群,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-18(IL-18)以及转化生长因子-β(TGF-β)的水平。结果与对照组相比,模型组运动功能评分均较低;与模型组相比,模型治疗组运动功能评价显著改善。流式结果显示,与对照组比,模型组小鼠外周T细胞占比、CD4^(+)T细胞占比、CD4^(+)/CD8^(+)比值均降低,CD8^(+)T细胞占比无统计学意义。与模型组相比,模型治疗组T淋巴细胞占比和CD4^(+)T细胞占比均显著升高,有统计学意义,CD4^(+)/CD8^(+)比值也升高,但差异无统计学意义。外周血血清ELISA结果显示,与对照组相比,模型组小鼠IL-6、IL-18均升高,TGF-β降低,TNF-α浓度无统计学差异。与模型组相比,模型治疗组IL-6、IL-18浓度显著下降,TGF-β有所上升,结果无统计学意义。结论RES通过调节小鼠外周免疫,减少神经炎症反应,从而显著改善A53T转基因小鼠的运动功能障碍。 展开更多
关键词 白藜芦醇 α-突触核蛋白A53T转基因小鼠 帕金森病 运动功能障碍 外周T淋巴细胞
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人脐带血血浆外泌体调控帕金森病小鼠免疫反应发挥神经保护作用的研究 被引量：2
7
作者 叶俊杰 孙晓东 +5 位作者 蒋琦 董金菊 王丛慧 庹芹 谢丽霞 桑明 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1422-1430,共9页
目的:观察人脐带血血浆外泌体(UCB-Exos)对帕金森病小鼠模型运动功能的影响,探究其免疫干预作用和神经保护机制。方法:改良超速离心法分离UCB-Exos,透射电镜、动态光散射技术和Western blot法进行鉴定。将C57BL/6小鼠随机分为对照组、... 目的:观察人脐带血血浆外泌体(UCB-Exos)对帕金森病小鼠模型运动功能的影响,探究其免疫干预作用和神经保护机制。方法:改良超速离心法分离UCB-Exos,透射电镜、动态光散射技术和Western blot法进行鉴定。将C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组[腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)造模]、治疗组(造模后尾静脉注射UCB-Exos)和预保护组(造模前尾静脉注射UCB-Exos)。检测小鼠运动功能变化;免疫组化检测小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(TH)、离子钙结合衔接分子1(IBA-1)和胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达;流式细胞术分析小鼠外周血淋巴细胞和巨噬细胞的变化;RT-qPCR和ELISA检测小鼠脑组织炎症因子的表达水平。结果:与模型组相比,治疗组和预保护组小鼠运动功能显著改善,黑质区TH表达水平升高,IBA-1和GFAP表达水平降低,脑组织白细胞介素6(IL-6)、IL-1β和IL-18表达水平显著降低,IL-10表达水平升高。流式细胞术结果显示,经UCB-Exos处理后,小鼠外周血T淋巴细胞亚群比例发生改变。结论:UCB-Exos调节免疫反应,减轻神经炎症,从而缓解帕金森病小鼠的运动功能障碍。 展开更多
关键词 脐带血 外泌体 帕金森病 免疫 神经炎症
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血清拉曼光谱技术在抑郁症诊断试验中的初步应用研究
8
作者 任自敬 柴森茂 +4 位作者 葛京京 孙晓东 桑明 周佩洋 郝世胜 《湖北医药学院学报》 CAS 2022年第4期364-369,共6页
目的:使用拉曼光谱技术对比抑郁症患者及健康人血清,寻找差异标志物,判断该技术在抑郁症诊断中应用的可能性。方法:空腹采集21例抑郁症患者与11例年龄匹配的健康人血清,用拉曼光谱仪进行点测量,获得的原始数据扣除荧光背景后,采用origin... 目的:使用拉曼光谱技术对比抑郁症患者及健康人血清,寻找差异标志物,判断该技术在抑郁症诊断中应用的可能性。方法:空腹采集21例抑郁症患者与11例年龄匹配的健康人血清,用拉曼光谱仪进行点测量,获得的原始数据扣除荧光背景后,采用origin 2018软件寻找差异光谱数据。考虑到饮食对结果的影响,另采集非空腹6例抑郁症患者与7例年龄匹配的健康人血清,进行相同检测。结果:空腹情况下,抑郁症患者血清的拉曼光谱与健康人血清存在差异,于1150、1155、1157、1518及1524 cm位移处的峰强显著低于健康人血清(P<0.001),表明这些峰归属的物质(类胡萝卜素)在抑郁症患者中含量较少。非空腹情况下,仅1150、1157 cm处存在显著差异(P<0.05)。结论:通过血清拉曼光谱分析方法可以找到健康人和抑郁症患者的差异物,但受饮食影响较大。拉曼光谱技术在抑郁症的鉴别诊断上具有一定的临床应用价值。 展开更多
关键词 血清 拉曼光谱分析 抑郁症 诊断
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人脐血血浆外泌体提取方法的比较 被引量：2
9
作者 叶俊杰 孙晓东 +5 位作者 袁乐永 冯胜蓝 覃冰清 许倩倩 谢丽霞 桑明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期2342-2351,共10页
为探寻高效且稳定的提取人脐血血浆外泌体的方法,利用超高速离心法、蔗糖垫密度梯度离心法、改良超速离心法和聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)沉淀法提取人脐血血浆外泌体,并比较4种方法的优劣。利用透射电镜、动态光散射技术观察... 为探寻高效且稳定的提取人脐血血浆外泌体的方法,利用超高速离心法、蔗糖垫密度梯度离心法、改良超速离心法和聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)沉淀法提取人脐血血浆外泌体,并比较4种方法的优劣。利用透射电镜、动态光散射技术观察外泌体的形态、结构及大小;聚氰基丙烯酸正丁酯(bicinchoninic acid, BCA)法测定外泌体蛋白总量;Western blotting检测外泌体表面标志蛋白CD63、HSP70以及外泌体阴性蛋白GM130 (高尔基标志蛋白)的表达。结果表明,与提取外泌体的“金标准”,即超高速离心法相比,蔗糖垫密度梯度离心法稳定性好,获取的外泌体粒径较均一,但操作较复杂,耗时长;改良超速离心法操作较简单,纯度较高;PEG沉淀法提取的外泌体蛋白量最高,操作时间最短,但杂质较多。结果表明,4种方法均能从人脐血血浆中获取外泌体,但在操作时间、纯度、提取量等方面存在一定差异。因此,应根据实验目的和具体要求选择合适的提取人脐血血浆外泌体的方法。 展开更多
关键词 外泌体 超高速离心法 蔗糖垫密度梯度离心法 改良超速离心法 聚乙二醇沉淀法 脐血血浆
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