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基于重组酶聚合酶扩增技术的日本血吸虫感染性钉螺检测体系的建立与应用
1
作者 冯惊涛 聂东宋 +2 位作者 周松辉 柳勇波 李广平 《湖南理工学院学报（自然科学版）》 CAS 2023年第4期44-48,共5页
确定日本血吸虫感染性钉螺是进行日本血吸虫病疫情预警的重要依据.现有日本血吸虫感染性钉螺的检测方法存在费时费力、设备昂贵、操作复杂等局限,因此研发一种易于推广和使用的日本血吸虫感染性钉螺检测方法十分必要.设计和开发一套基... 确定日本血吸虫感染性钉螺是进行日本血吸虫病疫情预警的重要依据.现有日本血吸虫感染性钉螺的检测方法存在费时费力、设备昂贵、操作复杂等局限,因此研发一种易于推广和使用的日本血吸虫感染性钉螺检测方法十分必要.设计和开发一套基于重组酶聚合酶扩增(RPA)技术的日本血吸虫感染性钉螺检测体系.该检测体系可以在恒温(39℃)条件下、快速(20 min内)检测出浓度仅为10^(3)copies/μL的目标基因;结合简单的钉螺基因组DNA提取方法,该体系可以方便、快捷地检测出1/20的日本血吸虫感染性钉螺(即20只阴性钉螺中混有1只日本血吸虫感染性钉螺). 展开更多
关键词 日本血吸虫 钉螺 重组酶聚合酶扩增
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重组葡激酶对小型猪冠脉血栓的溶栓作用研究
2
作者 李光 方晓兰 +6 位作者 任仲 李克强 周松辉 胡道奇 吴刚强 王太林 李卫平 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期369-375,共7页
目的:评价重组葡激酶的溶栓效力,并与相同作用方式的重组链激酶进行比较。方法:30只中国实验小型猪分成5组,分别为溶剂对照组、阳性药对照组和三个重组葡激酶组,每组6只,采用麻醉动物、手术开胸、直流电刺激形成冠脉血栓;在冠脉血栓形成... 目的:评价重组葡激酶的溶栓效力,并与相同作用方式的重组链激酶进行比较。方法:30只中国实验小型猪分成5组,分别为溶剂对照组、阳性药对照组和三个重组葡激酶组,每组6只,采用麻醉动物、手术开胸、直流电刺激形成冠脉血栓;在冠脉血栓形成30 min后开始静脉给药,采用先推注、再蠕动泵恒速输注的方式给药;溶剂对照组静脉推注对照液,阳性药对照组静脉给予重组链激酶4 mg·kg^-1,三个重组葡激酶组分别静脉给予4 mg·kg^-1、2 mg·kg^-1、1 mg·kg^-1重组葡激酶,静脉推注体积为5 ml,1 min内注毕,输注速度为0.5 ml·min-1,60 min内输毕,120 min后放血处死动物。于给药前及给药后30、60、120 min取静脉血,实验结束后取血栓形成部位的冠脉血管段,分别检测优球蛋白溶解时间(ELT)、血纤维蛋白原含量(Fbg)、纤维蛋白(原)降解产物(FDP)和伤口出血量,检测冠脉血栓溶解率、心肌缺血程度及缺血范围。结果:与溶剂对照组相比,试验组ELT明显缩短(P<0.05或P<0.01),FDP明显升高(P<0.05或P<0.01),较少量实验动物Fbg降解超过20%,对小型猪血压及心率无明显影响。与对照组相比,试验组高、中2个剂量组,最大血栓面积分别减少34.3%、15.4%(P<0.05)。与等剂量的重组链激酶相比,重组葡激酶对电刺激引起的冠脉血栓具有更强的溶栓作用(P<0.05或P<0.01),引起的出血副反应少。结论:重组葡激酶对小型猪冠脉血栓有较好的溶栓作用,相比重组链激酶,溶栓速度快、具有更高的纤维蛋白专一性,出血副反应较少。综合比较,2 mg·kg^-1重组葡激酶具有较好的临床疗效和安全性保障。 展开更多
关键词 重组葡激酶 重组链激酶 溶栓 小型猪
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严重急性呼吸综合征冠状病毒2核衣壳蛋白的制备及其初步应用
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作者 李光 任仲 +7 位作者 胡道奇 刘汨 李克强 张玉玲 周松辉 方晓兰 李卫平 滕淑静 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期184-188,共5页
目的在大肠埃希菌中表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N蛋白),并进行纯化,用于制备SARS-CoV-2检测试剂。方法将含N蛋白基因的重组质粒pET... 目的在大肠埃希菌中表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N蛋白),并进行纯化,用于制备SARS-CoV-2检测试剂。方法将含N蛋白基因的重组质粒pET28a转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),诱导表达N蛋白,考察Ni柱亲和层析与SP强阳离子交换层析和CM弱阳离子交换层析对重组N蛋白的纯化效率,制备胶体金免疫检测试剂并检测灭活血清。结果表达的重组N蛋白相对分子质量约49000,表达量约占包涵体总蛋白的30%。Ni^(2+)亲和层析对重组N蛋白的选择性较低,通过强阳离子交换与弱阳离子交换两步层析,实现了重组N蛋白在色谱柱上的复性和纯化,纯度大于90%。以此制备的免疫胶体金检测试剂可初步用于血清中相应抗体的检测。结论复性后的重组N蛋白,具有较好的生物活性,可用于诊断试剂开发,复性工艺对其他重组蛋白质的纯化具有借鉴意义。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2 核衣壳蛋白 包涵体 复性 纯化 免疫胶体金检测试剂
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