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可磷酸化短肽偶联壳聚糖介导兔关节软骨损伤修复的基因治疗 被引量：7
1
作者 赵荣兰 彭效祥 +2 位作者 楚海荣 宋伟 刘庆 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1346-1352,共7页
目的探讨可磷酸化短肽（phosphorylatable short peptide,pSP）偶联壳聚糖（chitosan,CS）（pSP-CS）,携载IGF-1和IL-1受体拮抗剂（IL-1 receptor antagonist,IL-1Ra）基因,局部转染促进关节软骨损伤修复的作用。方法构建pBudCE4.1-IL-... 目的探讨可磷酸化短肽（phosphorylatable short peptide,pSP）偶联壳聚糖（chitosan,CS）（pSP-CS）,携载IGF-1和IL-1受体拮抗剂（IL-1 receptor antagonist,IL-1Ra）基因,局部转染促进关节软骨损伤修复的作用。方法构建pBudCE4.1-IL-1Ra、pBudCE4.1-IGF-1及pBudCE4.1-IL-1Ra＋IGF-1质粒,以pSP偶联CS形成pSP-CS,将以上重组质粒分别与其复合形成pSP-CS/质粒DNA（pDNA）复合物。取3月龄健康雄性新西兰大耳白兔30只,体重2.0-2.5 kg,双侧后肢随机分为5组（n=12）。假手术组（A组）仅暴露股骨外侧髁关节面,pSP-CS/pBudCE4.1干预组（B组）、pSP-CS/pBudCE4.1-IL-1Ra干预组（C组）、pSP-CS/pBudCE4.1-IGF-1干预组（D组）、pSP-CS/pBudCE4.1-IL-1Ra＋IGF-1干预组（E组）制备膝关节外侧髁软骨缺损模型。术后1周,各干预组给予对应pSP-CS/pDNA复合物,共7周;A组注射等量生理盐水。术后观察动物一般情况,8周时处死实验动物,取关节腔灌洗液ELISA分析IL-1Ra及IGF-1含量;实时荧光定量PCR检测缺损区软骨组织聚集蛋白聚糖（Aggrecan）、基质金属蛋白酶3（matrix metalloproteinase 3,MMP-3）、MMP抑制剂1（MMP inhibitor 1,TIMP-1）mRNA表达;阿尔辛蓝-过碘酸雪夫（alcian blue-periodic acid/schiff,ABPAS）染色及Aggrecan免疫组织化学染色鉴定损伤区新生细胞的软骨细胞表型,分析Aggrecan染色吸光度（A）值。结果实验动物术后无感染及死亡。各干预组关节腔灌洗液中检测到大量外源蛋白IGF-1和IL-1Ra,其中D、E组IGF-1含量以及C、E组IL-1Ra含量显著高于A组（P〈0.05）。E组Aggrecan和TIMP-1 mRNA表达上调,MMP-3 mRNA表达下调,明显优于C、D组（P〈0.05）。C、D、E组缺损处出现不同程度软骨性修复,AB-PAS染色及Aggrecan免疫组织化学染色均为阳性,且E组作用明显优于C、D组（P〈0.05）;B组缺损处仅被大量纤维组织增生和炎性细胞浸润,未见明显软骨性修复。结论 pSP-CS是一种较理想的基因载体,可携载治疗基因有效进入兔关节软骨组织;IL-1Ra与IGF-1协同作用明显促进损伤软骨修复。 展开更多
关键词 可磷酸化短肽 壳聚糖 软骨损伤 基因治疗 IGF-1 IL-1受体拮抗剂 兔
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双功能短肽修饰壳聚糖介导miR-140基因修复兔关节软骨损伤的效果
2
作者 彭效祥 张洋洋 +4 位作者 宋伟 孙艳丽 王鲁娟 刘庆 赵荣兰 《中华创伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期246-252,共7页
目的观察核定位信号肽偶联核激酶底物短肽（NNS）修饰的壳聚糖（CS）（NNSCS）介导人miR-140基因，局部转染促进兔关节软骨损伤修复的效果。方法构建GV268-miR-140真核表达质粒，将NNSCS分别与阴性对照质粒GV268及重组质粒GV268-miR-14... 目的观察核定位信号肽偶联核激酶底物短肽（NNS）修饰的壳聚糖（CS）（NNSCS）介导人miR-140基因，局部转染促进兔关节软骨损伤修复的效果。方法构建GV268-miR-140真核表达质粒，将NNSCS分别与阴性对照质粒GV268及重组质粒GV268-miR-140复合形成NNSCS／GV268及NNSCS／GV268-miR-140复合物。选取健康雄性新西兰大耳白兔18只，单侧右后肢按随机数字表法分成转基因组（A组）、阴性对照组（B组）、假手术组（C组），每组6只。A组与B组均制备股骨滑车全层软骨损伤模型；C组仅暴露股骨滑车关节面。术后1周，A组给予NNSCS／GV268-miR-140复合物，B组给予NNSCS／GV268复合物，C组给予等量等渗盐水，每周2次，持续7周。术后8周末，处死动物并取材。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测缺损区软骨组织内miR-140、Sox9、Aggrecan和Hdac4表达；HE染色、番红O-固绿染色及Aggrecan免疫组化染色评估缺损区软骨修复情况。结果RT-qPCR检测结果显示，A组miR-140表达水平（3．16±0．37）较B组（1．00±0．24）和C组（1．24±0．18）明显升高（P〈0．05）；A组Sox9表达水平（4．38±0．66）较B组（1．04±0．04）和C组（1．19±0．30）明显上调（P〈0．05）；A组Aggrecan表达水平（3．63±0．58）较B组（1．21±0．14）和C组（1．34±0．13）明显上调（P〈0．05）。A组Hdac4表达水平（0．37±0．06）较B组（0．81±0．06）明显下调（P〈0．05）。HE染色、番红O-固绿染色及Aggrecan免疫组化染色显示，A组缺损处呈现明显的软骨性修复，B组缺损处出现大量纤维组织增生和炎性细胞浸润，未见软骨性修复。结论NNS可携带外源基因进入软骨细胞并在局部大量表达；高表达的miR-140可能通过上调Aggreean和Sox9表达及下调Hdae4表达，从而明显促进损伤软骨的修复，可为其今后用于治疗软骨损伤提供实验基础。 展开更多
关键词 微RNAS 软骨 关节 壳聚糖 信号肽
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