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不同胎龄小鼠脑组织中神经干细胞所占比例的研究 被引量：3
1
作者 张凤兰 杨璐军 +4 位作者 朱红梅 张南炀 沙学芳 朱柯颖 肖志成 《中国比较医学杂志》 北大核心 2017年第7期48-52,共5页
目的详细了解并比较不同胎龄小鼠全脑和大脑皮层组织中神经干细胞(neural stem cells,NSCs)所占比例,为后期优化分离培养NSCs提供直接量化数据。方法分离不同胎龄小鼠全脑(胎龄12.5、14、16和18d)和大脑皮层(胎龄14、16和18 d)组织,消... 目的详细了解并比较不同胎龄小鼠全脑和大脑皮层组织中神经干细胞(neural stem cells,NSCs)所占比例,为后期优化分离培养NSCs提供直接量化数据。方法分离不同胎龄小鼠全脑(胎龄12.5、14、16和18d)和大脑皮层(胎龄14、16和18 d)组织,消化成单细胞悬液,贴壁培养3~4 h,细胞免疫荧光标记NSCs特异性标记物Nestin,统计分析各组中NSCs所占比例。另外,通过实时荧光定量PCR技术检测Nestin mRNA在不同胎龄(12.5、14、16和18 d)小鼠大脑皮层中的表达水平。结果细胞免疫荧光结果显示,分离培养的不同胎龄小鼠全脑和大脑皮层组织中均有Nestin阳性细胞。在分离培养的小鼠全脑组织中胎龄12.5 d组NSCs所占比例最高,为53.42%±1.57%;胎龄18 d组NSCs所占比例最低,为25.96%±1.31%,而胎龄14 d组和16 d组位于二者之间。在分离培养的不同胎龄小鼠大脑皮层组织中,胎龄14 d组NSCs所占比例最高,为33.65%±0.29%;胎龄18d组比例最低,为25.29%±0.28%,胎龄16 d组位于二者之间(26.82%±0.30%)。实时荧光定量PCR结果显示,当把胎龄12.5 d组的小鼠大脑皮层组织中Nestin mRNA表达水平设定为1,胎龄14 d组的小鼠大脑皮层组织中Nestin mRNA的相对表达量为0.83±0.04,胎龄16 d组为0.77±0.05,胎龄18 d组为0.44±0.05。因此,随着小鼠胎龄增加,小鼠大脑皮层中的Nestin mRNA的表达水平逐渐下降。结论在小鼠大脑发育过程中,随着胎龄增加,分离培养的小鼠全脑和大脑皮层组织中神经干细胞比例逐渐降低。 展开更多
关键词 小鼠 不同胎龄 神经干细胞 全脑 大脑皮层
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胎鼠不同脑组织中神经干细胞和神经元所占比例及差异 被引量：1
2
作者 张凤兰 杨璐军 肖志成 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2017年第21期3364-3369,共6页
背景:目前,小鼠神经干细胞的体外培养技术已被众多科研平台熟练掌握,但是各科研平台在培养脑源性神经干细胞时所使用的脑组织有很大差异。胎龄14 d(E14)小鼠脑组织被广泛用于培养胎鼠神经干细胞,而对于此时胎鼠不同脑组织中所含神经干... 背景:目前,小鼠神经干细胞的体外培养技术已被众多科研平台熟练掌握,但是各科研平台在培养脑源性神经干细胞时所使用的脑组织有很大差异。胎龄14 d(E14)小鼠脑组织被广泛用于培养胎鼠神经干细胞,而对于此时胎鼠不同脑组织中所含神经干细胞的详细比例及其间有无差异,目前研究较少。目的:比较E14小鼠全脑、大脑皮质和前脑组织中神经干细胞和神经元所占比例及差异,为后期优化分离高纯度神经干细胞提供直接量化数据和前期研究基础。方法:分离E14小鼠全脑、大脑皮质和前脑组织,加入胰酶消化成单细胞,贴壁培养3.0-4.0 h,然后通过细胞免疫荧光实验,用DAPI标记总细胞,神经干细胞特异性抗原Nestin标记神经干细胞,神经元特异性抗原Tuj1标记神经元,统计分析Nestin^+/DAPI和Tuj1^+/DAPI所占比例。另外,通过实时荧光定量PCR技术检测E14小鼠全脑、大脑皮质和前脑组织中Nestin和Tuj1 mR NA的表达水平。结果与结论:(1)细胞免疫荧光结果显示,E14小鼠全脑、大脑皮质和前脑组织中均有大量Nestin^+和Tuj1^+细胞存在;小鼠前脑组织中Nestin^+细胞所占比例最高,明显高于全脑(P<0.01)和大脑皮质(P<0.05);而前脑组织中Tuj1^+细胞比例明显低于全脑(P<0.05)和大脑皮质(P<0.001)。该结果表明,与全脑和大脑皮质相比,前脑组织中神经干细胞所占比例最高,神经元所占比例最低;(2)Real time PCR结果显示,E14小鼠前脑组织中Nestin mR NA表达水平最高,明显高于全脑组织(P<0.05),略高于大脑皮质(P>0.05),说明前脑组织中有较多神经干细胞存在;而Tuj1 mR NA的表达水平明显低于全脑组织(P<0.05)和大脑皮质组织(P<0.05),说明前脑组织中有较少神经元存在;(3)综合以上结果,与全脑和大脑皮质相比,分离、消化E14小鼠前脑组织所获得的神经干细胞比例最高,是后期培养优质神经干细胞的重要前提。 展开更多
关键词 神经干细胞 脑 大脑皮质 前脑 组织工程 干细胞 培养 胎鼠 全脑 前脑组织 神经元 比例 差异
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人参皂苷Rg3对体外培养小鼠神经干细胞分化的影响 被引量：6
3
作者 张凤兰 杨璐军 +3 位作者 胡炜彦 周姣月 马生霞 肖志成 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2018年第13期2098-2103,共6页
背景:神经干细胞来源非常有限,而且在自然分化过程中绝大多数分化为神经胶质细胞,分化为神经元的比例相对较少,因此采取有效措施诱导其向合适的子细胞方向分化是非常重要的科研课题。以往研究证明人参皂苷类成分,如Rb1和Rg1,对神经干细... 背景:神经干细胞来源非常有限,而且在自然分化过程中绝大多数分化为神经胶质细胞,分化为神经元的比例相对较少,因此采取有效措施诱导其向合适的子细胞方向分化是非常重要的科研课题。以往研究证明人参皂苷类成分,如Rb1和Rg1,对神经干细胞的定向分化有一定影响,但Rg3是否对神经干细胞的分化起作用鲜有报道。目的:研究人参皂苷Rg3对小鼠神经干细胞分化为神经元和星形胶质细胞的影响。方法:分离孕14 d的C57BL/6小鼠的胎鼠大脑皮质神经干细胞并传代培养,用神经干细胞特异性免疫抗体Nestin和Sox2检测神经干细胞纯度。用分化培养基联合人参皂苷Rg3(空白对照、50 nmol/L和250 nmol/L)诱导神经干细胞分化3 d,然后用神经元特异性免疫抗体Tuj1和星形胶质细胞特异性免疫抗体GFAP检测神经干细胞分化为神经元和星形胶质细胞的情况,计算Tuj1^+/DAPI和GFAP^+/DAPI的比例;通过实时荧光定量PCR技术检测各组细胞Tuj1和GFAP mRNA的表达水平。结果与结论:(1)经细胞免疫荧光实验检测传代培养的小鼠胎鼠细胞几乎全为Nestin和Sox2双阳性细胞,表明成功分离培养出纯度较高的神经干细胞,可以用于后期实验;(2)诱导分化3 d后,与空白对照组和250 nmol/L人参皂苷Rg3组相比,50 nmol/L人参皂苷Rg3组对神经干细胞分化为神经元具有明显促进作用(P<0.01),而空白对照组和250 nmol/L人参皂苷Rg3组之间差异无显著性意义(P>0.05);(3)诱导分化3 d后,与空白对照组相比,50 nmol/L人参皂苷Rg3组和250 nmol/L人参皂苷Rg3组对神经干细胞分化为星形胶质细胞具有促进作用(P<0.05),而50 nmol/L人参皂苷Rg3组和250 nmol/L人参皂苷Rg3组之间差异不明显(P>0.05);(4)real time PCR结果总体与细胞免疫荧光结果相似;(5)结果表明,人参皂苷Rg3在50 nmol/L浓度时能明显促进神经干细胞向神经元和星形胶质细胞方向分化;但在250 nmol/L浓度时主要促进其向星形胶质细胞方向分化,对神经元分化没有显著影响。 展开更多
关键词 人参皂苷RG3 神经干细胞 分化 神经元 星形胶质细胞 干细胞
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不同分化时间对体外培养大脑皮层神经干细胞分化的影响 被引量：1
4
作者 张凤兰 杨璐军 +1 位作者 法志强 肖志成 《中华神经医学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第9期898-905,共8页
目的研究不同分化时间对体外单层贴壁培养的大脑皮层神经干细胞（NSCs）分化成星形胶质细胞和神经元的影响。方法（1）体外分离、培养胎鼠大脑皮层原代NSCs，采用细胞免疫荧光染色检测P2代神经球和吹散成单细胞的NSCs中巢蛋白、Sox2的... 目的研究不同分化时间对体外单层贴壁培养的大脑皮层神经干细胞（NSCs）分化成星形胶质细胞和神经元的影响。方法（1）体外分离、培养胎鼠大脑皮层原代NSCs，采用细胞免疫荧光染色检测P2代神经球和吹散成单细胞的NSCs中巢蛋白、Sox2的表达；（21取P2代神经球吹散成单细胞，接种于圆玻片上培养过夜，次日更换诱导分化培养基，分别继续培养ld、3d、5d，采用细胞免疫荧光染色检测细胞神经胶质纤维酸性蛋白（GFAPl、Tuj1的表达，分析神经元突起的平均数量、平均最长长度和平均分枝水平；（31取接种于12孔细胞培养板上的NSCs分化样品，采用实时荧光定量PCR检测NSCs不同分化时间点巢蛋白、GFAP、TujlmRNA的表达。结果（11细胞免疫荧光染色检测显示神经球、单层贴壁培养细胞几乎均为巢蛋白和Sox2双阳性细胞，说明培养的细胞几乎全部是NSCs。（21分化3d组、分化5d组NSCs中GFAP’细胞比例高于分化ld组，分化5d组NSCs中Tuil’细胞比例高于分化1d组、分化3d组，差异均有统计学意义（P〈0．05）；分化3d组、分化5d组所分化神经元突起的平均数量、平均分枝水平均高于分化1d组，差异有统计学意义（氏0．051；分化1d组、分化3d组、分化5d组所分化神经元突起的平均最长长度依次增加，差异有统计学意义（P〈0．05）；（3）与分化1d组、分化3d组比较，分化5d组NSCs中巢蛋白mRNA的表达降低，GFAP、TujlmRNA的表达增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论随着分化时间的增加，体外单层贴壁培养的NSCs分化出的星形胶质细胞和神经元的数量增多，细胞形态变复杂，神经元突起也越来越成熟，巢蛋白mRNA的表达降低，GFAP和Tuj1 mRNA的表达上升。 展开更多
关键词 神经干细胞 细胞分化 星形胶质细胞 神经元 细胞突起
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