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EvaGreen多重荧光RT-PCR结合熔解曲线分析同时检测3种呼吸道病毒
被引量:
3
1
作者
王琪
黄翩翩
+5 位作者
贾晓芸
徐金花
方海荣
周小坚
苏影
莫秋华
《中国国境卫生检疫杂志》
CAS
2018年第4期229-232,共4页
目的建立能同时检测甲型流感病毒(Flu-A)、乙型流感病毒(Flu-B)和鼻病毒(HRV)的Eva Green多重荧光RT-RCR熔解曲线分析方法。方法针对Flu-A的M基因、Flu-B的NS1基因、HRV的5’NCR设计检测引物,并使3个基因扩增产物的解链温度(T_m值)相差...
目的建立能同时检测甲型流感病毒(Flu-A)、乙型流感病毒(Flu-B)和鼻病毒(HRV)的Eva Green多重荧光RT-RCR熔解曲线分析方法。方法针对Flu-A的M基因、Flu-B的NS1基因、HRV的5’NCR设计检测引物,并使3个基因扩增产物的解链温度(T_m值)相差≥1.5℃。采用Eva Green新型荧光染料,通过优化反应条件建立一步法多重RT-PCR反应体系。通过与商品化的荧光RT-PCR试剂盒的对照试验,对新建方法进行性能验证。结果 3种病毒的PCR产物均获得特异性的熔解曲线峰,T_m值范围分别为:Flu-A,85.0~85.5℃;Flu-B,82.5~83.0℃;HRV,88.5~89.5℃,可以通过T_m值差异明显区分3种病毒。100份临床样本的性能验证显示,新方法对3种病毒的检测均有较高的灵敏度、特异性和检验效能。结论针对3种常见呼吸道病毒建立了基于Eva Green结合熔解曲线分析的多重荧光RT-PCR方法。该方法简便实用、成本低廉,为喘息性疾病的临床诊断和病原谱研究奠定了方法学基础。
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关键词
EvaGreen染料
多重荧光RT-PCR
熔解曲线
呼吸道病毒
原文传递
题名
EvaGreen多重荧光RT-PCR结合熔解曲线分析同时检测3种呼吸道病毒
被引量:
3
1
作者
王琪
黄翩翩
贾晓芸
徐金花
方海荣
周小坚
苏影
莫秋华
机构
珠海生码医学检验有限公司
珠海
市妇幼保健院
珠海
国际旅行卫
生
保健中心
出处
《中国国境卫生检疫杂志》
CAS
2018年第4期229-232,共4页
基金
广东省医学科学技术研究基金项目(A2017443)
文摘
目的建立能同时检测甲型流感病毒(Flu-A)、乙型流感病毒(Flu-B)和鼻病毒(HRV)的Eva Green多重荧光RT-RCR熔解曲线分析方法。方法针对Flu-A的M基因、Flu-B的NS1基因、HRV的5’NCR设计检测引物,并使3个基因扩增产物的解链温度(T_m值)相差≥1.5℃。采用Eva Green新型荧光染料,通过优化反应条件建立一步法多重RT-PCR反应体系。通过与商品化的荧光RT-PCR试剂盒的对照试验,对新建方法进行性能验证。结果 3种病毒的PCR产物均获得特异性的熔解曲线峰,T_m值范围分别为:Flu-A,85.0~85.5℃;Flu-B,82.5~83.0℃;HRV,88.5~89.5℃,可以通过T_m值差异明显区分3种病毒。100份临床样本的性能验证显示,新方法对3种病毒的检测均有较高的灵敏度、特异性和检验效能。结论针对3种常见呼吸道病毒建立了基于Eva Green结合熔解曲线分析的多重荧光RT-PCR方法。该方法简便实用、成本低廉,为喘息性疾病的临床诊断和病原谱研究奠定了方法学基础。
关键词
EvaGreen染料
多重荧光RT-PCR
熔解曲线
呼吸道病毒
Keywords
EvaGreen dye
Muhiplex fluorescence RT-PCR
Melting curve
Respiratory viruses
分类号
R373.1 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
EvaGreen多重荧光RT-PCR结合熔解曲线分析同时检测3种呼吸道病毒
王琪
黄翩翩
贾晓芸
徐金花
方海荣
周小坚
苏影
莫秋华
《中国国境卫生检疫杂志》
CAS
2018
3
原文传递
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