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二元调控系统中的TcfSR在布鲁菌胞内存活过程中的作用及其调控基因的转录分析
1
作者 李爽 李志强 +9 位作者 张辉 付强 史慧君 李天森 王震 王勇 郭飞 王远志 张俊波 陈创夫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期35-39,共5页
为分析二元调控系统TcfSR在布鲁菌胞内存活中的调控作用,本研究采用同源重组和抗性替换的方法,利用卡那基因替换TcfSR启动子,构建布鲁菌16M株的突变株16MΔTcfSR,并利用亲本株和突变株侵染小鼠巨噬细胞,比较两者在宿主细胞内的生存能力... 为分析二元调控系统TcfSR在布鲁菌胞内存活中的调控作用,本研究采用同源重组和抗性替换的方法,利用卡那基因替换TcfSR启动子,构建布鲁菌16M株的突变株16MΔTcfSR,并利用亲本株和突变株侵染小鼠巨噬细胞,比较两者在宿主细胞内的生存能力及其胞内存活相关毒力基因的转录情况。同时在各种逆环境下刺激亲本株和突变株,比较两者在逆环境中的存活能力。结果显示16MΔTcf SR在小鼠巨噬细胞和逆环境中的存活能力均比亲本株下降,并且突变株的胞内存活相关毒力基因的转录水平较亲本株具有差异。表明TcfSR在布鲁菌胞内存活过程中具有重要的调控作用。本研究初步阐明了TCRS Tcf SR的调控机制,为进一步研究TCRS在布鲁菌致病过程中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 布鲁菌 二元调控系统 TcfSR 转录调控
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绵羊肺炎支原体降落PCR-侧向层析快速检测方法的建立 被引量：6
2
作者 杜鲜 乔军 +3 位作者 陈诚 张洁 石峰 陈创夫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期466-470,共5页
为建立一种简易、快速、特异性强的绵羊肺炎支原体(Mo)检测方法,本研究结合降落PCR(TD PCR)和侧向层析(LFA)技术,采用40nm的胶体金标记抗地高辛抗体,检测线和质控线分别包被链霉亲和素和羊抗鼠IgG,组装成LFA方法通用胶体金层析试纸条。... 为建立一种简易、快速、特异性强的绵羊肺炎支原体(Mo)检测方法,本研究结合降落PCR(TD PCR)和侧向层析(LFA)技术,采用40nm的胶体金标记抗地高辛抗体,检测线和质控线分别包被链霉亲和素和羊抗鼠IgG,组装成LFA方法通用胶体金层析试纸条。两条特异性引物5'端分别标记地高辛和生物素,以Mo的全基因组为模板进行降落PCR,产物滴加于试纸条上样垫,检测结果可在15min内读取。通过对各环节的调整优化,建立了检测Mo病原的TD PCR-LFA快速检测方法。结果显示:该方法仅对MO检测呈阳性,对其它病原菌检测均为阴性,表明该方法特异性良好。其检测下限为3×102ccu/mL,敏感性较强。不同批次的PCR产物、不同批次的试纸条读取结果均一致,表明重复性和稳定性较好。本研究建立的Mo检测方法整合了TD PCR的特异性、敏感性和金标条快速、简单的特性,在2h内可完成检测,为建立适用于基层的临床检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 降落PCR 金标侧向层析技术 快速检测
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奶牛妊娠相关糖蛋白2的表达及结构功能预测分析 被引量：5
3
作者 杨亚军 何金科 +4 位作者 白天鸽 宋胜男 杨宁宁 陈创夫 王震 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第10期3039-3048,共10页
为了获得高效表达纯化并且抗原性较好的牛妊娠相关糖蛋白2(bovine pregnancy-associated glycoprotein 2,BoPAG2),对该蛋白的结构与功能进行生物信息学预测分析。通过PCR扩增荷斯坦奶牛BoPAG2基因,并将该基因连接至表达载体pET-28a,转... 为了获得高效表达纯化并且抗原性较好的牛妊娠相关糖蛋白2(bovine pregnancy-associated glycoprotein 2,BoPAG2),对该蛋白的结构与功能进行生物信息学预测分析。通过PCR扩增荷斯坦奶牛BoPAG2基因,并将该基因连接至表达载体pET-28a,转化至大肠杆菌(BL21)中诱导表达并纯化,通过SDS-PAGE和Western blotting验证与检测该蛋白的大小和免疫学特性,通过生物信息学对BoPAG2蛋白的糖基化修饰、B细胞抗原表位、亲水性、信号肽,蛋白二级结构和3D模型、保守结构域以及蛋白互作进行预测分析。结果表明,本研究成功克隆出BoPAG2基因,通过诱导表达并纯化相应蛋白,通过SDS-PAGE和Western blotting验证BoPAG2蛋白的大小与预期结果相符,通过生物信息学预测分析结果显示,BoPAG2蛋白有5个位点发生糖基化修饰,分别为Asp51、Asp71、Asp114、Asp252和Asp343,该蛋白含有15个B细胞抗原表位,在N端含有15个氨基酸组成的信号肽序列,二级结构主要以无规则卷曲和延伸链为主,并且成功建立了BoPAG2蛋白的3D模型,该蛋白含有4个超家族结构域,蛋白互作分析结果显示,与BoPAG2互作的蛋白有7个,该蛋白可能参与了消化和吸收,以及母体在妊娠期的调节功能等过程。综上所述,本试验成功表达并纯化获得了BoPAG2蛋白。通过对BoPAG2蛋白的结构及功能进行生物信息学预测分析,为BoPAG2蛋白抗体的制备以及功能的研究提供了理论基础。 展开更多
关键词 妊娠相关糖蛋白 原核表达 抗原表位 信号肽
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奶牛妊娠相关糖蛋白BoPAG7和BoPAG8的表达及其结构与功能预测 被引量：9
4
作者 杨亚军 何金科 +3 位作者 宋胜男 杨宁宁 陈创夫 王震 《畜牧与兽医》 北大核心 2020年第8期56-63,共8页
试验旨在获得高效表达并且抗原性较好的奶牛妊娠相关糖蛋白BoPAG7和BoPAG8,并对BoPAG7和BoPAG8结构和功能进行生物信息学预测分析。通过PCR扩增荷斯坦奶牛BoPAG7和BoPAG8基因,并将其分别连接在表达载体上,转化至大肠杆菌(BL21)中表达,通... 试验旨在获得高效表达并且抗原性较好的奶牛妊娠相关糖蛋白BoPAG7和BoPAG8,并对BoPAG7和BoPAG8结构和功能进行生物信息学预测分析。通过PCR扩增荷斯坦奶牛BoPAG7和BoPAG8基因,并将其分别连接在表达载体上,转化至大肠杆菌(BL21)中表达,通过SDS-PAGE和Western blot检测其免疫学特性,采用生物信息学方法对BoPAG7和BoPAG8蛋白修饰、蛋白结构、B细胞抗原表位、蛋白互作进行预测分析。结果显示,成功克隆出BoPAG7和BoPAG8基因,大小与预期结果相符,成功表达并纯化获得了BoPAG7和BoPAG8蛋白。BoPAG7有5个位点发生糖基化修饰,BoPAG8有1个糖基化修饰,2个蛋白均有15个氨基酸组成的信号肽,以及含有多个B细胞抗原表位和多个互作蛋白。本研究为BoPAG7和BoPAG8蛋白抗体的制备和功能的研究提供了基础。 展开更多
关键词 妊娠相关糖蛋白 抗原表位 蛋白互作 糖基化
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