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Osteopontin特异性siRNA慢病毒表达载体的构建及其在U251胶质瘤细胞中OPN的表达
被引量：
2
1
作者
晋雯
黄智勇
+1 位作者
高美钦
李赞
《第四军医大学学报》
CAS
北大核心
2009年第14期1296-1299,共4页
目的:观察慢病毒表达载体介导的RNA干扰(RNAinterference,RNAi)对人胶质瘤细胞U251骨桥蛋白(osteopon-tin,OPN)表达的影响,为后续的以OPN基因为靶点的神经胶质瘤基因治疗研究奠定基础.方法:应用基因工程技术,筛选出2条针对OPN基因的RNA...
目的:观察慢病毒表达载体介导的RNA干扰(RNAinterference,RNAi)对人胶质瘤细胞U251骨桥蛋白(osteopon-tin,OPN)表达的影响,为后续的以OPN基因为靶点的神经胶质瘤基因治疗研究奠定基础.方法:应用基因工程技术,筛选出2条针对OPN基因的RNAi靶序列,分别与pGCL-GFP载体连接,构建2个重组慢病毒表达载体LV-OPNshRNA1,LV-OPNshRNA2;将连接产物转化到DH5α感受态细胞,经PCR筛选阳性克隆、测序鉴定.将LV-OPNshRNA,pHelper 1.0,pHelper 2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度.将包装产生的2种重组慢病毒分别感染U251细胞,实时定量PCR和Western印迹检测U251细胞OPN mRNA和蛋白的表达,并与未转染及空转染细胞进行比较.结果:2个慢病毒载体PCR和测序结果与预期结果一致,经包装产生的病毒滴度为8×1010TU/L和5×1010TU/L.感染U251细胞后,OPN基因mRNA和蛋白的表达量与未感染慢病毒的细胞组及空载体感染组相比均明显下降.结论:成功构建针对OPN基因的2个慢病毒载体OPN shRNA,体外感染U251细胞后可有效抑制OPN基因和蛋白的表达.
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关键词
RNA干扰
骨桥蛋白
慢病毒属
神经胶质瘤
原文传递
腺苷酸环化酶相关蛋白2在肝细胞癌中的表达及意义
被引量：
3
2
作者
林洁
王斌
+1 位作者
黄爱民
刘景丰
《中华肝胆外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第4期287-290,共4页
目的探讨腺苷酸环化酶相关蛋白2（CAP-2）在肝细胞癌（HCC）中的表达及其在HCC发生发展中的作用。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western blot）和免疫组织化学染色方法检测CAP2在正常肝脏、肝硬化、早期HCC及...
目的探讨腺苷酸环化酶相关蛋白2（CAP-2）在肝细胞癌（HCC）中的表达及其在HCC发生发展中的作用。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western blot）和免疫组织化学染色方法检测CAP2在正常肝脏、肝硬化、早期HCC及进展期HCC组织中的表达情况。结果RT—PCR及Western blot显示，HCC组织中CAP2的表达明显升高，且进展期HCC较早期HCC升高的更为明显，而在正常肝及肝硬化组织中CAP2几乎不表达或仅有微弱表达。免疫组化染色检查结果与此相同，并且中低分化HCC的CAP2表达较高分化的HCC强。结论CAP2在HCC中是一个上调表达的基因，可能参与了HCC的多步骤发展过程，有望成为今后HCC诊断的一个有价值的分子标记物。
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关键词
肝细胞癌
肝硬化
腺苷酸环化酶相关蛋白2
原文传递
题名
Osteopontin特异性siRNA慢病毒表达载体的构建及其在U251胶质瘤细胞中OPN的表达
被引量：
2
1
作者
晋雯
黄智勇
高美钦
李赞
机构
福建医科大学
基础
医学院
病理学系
福建医科大学
基础
医学院
神经生物中心
福建医科大学基础医学院肿瘤研究室
出处
《第四军医大学学报》
CAS
北大核心
2009年第14期1296-1299,共4页
基金
福建医科大学神经生物学基金(0160003)
文摘
目的:观察慢病毒表达载体介导的RNA干扰(RNAinterference,RNAi)对人胶质瘤细胞U251骨桥蛋白(osteopon-tin,OPN)表达的影响,为后续的以OPN基因为靶点的神经胶质瘤基因治疗研究奠定基础.方法:应用基因工程技术,筛选出2条针对OPN基因的RNAi靶序列,分别与pGCL-GFP载体连接,构建2个重组慢病毒表达载体LV-OPNshRNA1,LV-OPNshRNA2;将连接产物转化到DH5α感受态细胞,经PCR筛选阳性克隆、测序鉴定.将LV-OPNshRNA,pHelper 1.0,pHelper 2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度.将包装产生的2种重组慢病毒分别感染U251细胞,实时定量PCR和Western印迹检测U251细胞OPN mRNA和蛋白的表达,并与未转染及空转染细胞进行比较.结果:2个慢病毒载体PCR和测序结果与预期结果一致,经包装产生的病毒滴度为8×1010TU/L和5×1010TU/L.感染U251细胞后,OPN基因mRNA和蛋白的表达量与未感染慢病毒的细胞组及空载体感染组相比均明显下降.结论:成功构建针对OPN基因的2个慢病毒载体OPN shRNA,体外感染U251细胞后可有效抑制OPN基因和蛋白的表达.
关键词
RNA干扰
骨桥蛋白
慢病毒属
神经胶质瘤
Keywords
RNA interference
osteopontin
lentivirus
glioma
分类号
R394.3 [医药卫生—医学遗传学]
原文传递
题名
腺苷酸环化酶相关蛋白2在肝细胞癌中的表达及意义
被引量：
3
2
作者
林洁
王斌
黄爱民
刘景丰
机构
福建
省立医院病理科、
福建医科大学
省立临床
医学院
福建医科大学基础医学院肿瘤研究室
福建医科大学
附属第一医院肝病中心肝外科
出处
《中华肝胆外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第4期287-290,共4页
基金
卫生部科学研究基金-福建省卫生教育联合攻关计划资助项目（WKJ2008-2-63）
文摘
目的探讨腺苷酸环化酶相关蛋白2（CAP-2）在肝细胞癌（HCC）中的表达及其在HCC发生发展中的作用。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western blot）和免疫组织化学染色方法检测CAP2在正常肝脏、肝硬化、早期HCC及进展期HCC组织中的表达情况。结果RT—PCR及Western blot显示，HCC组织中CAP2的表达明显升高，且进展期HCC较早期HCC升高的更为明显，而在正常肝及肝硬化组织中CAP2几乎不表达或仅有微弱表达。免疫组化染色检查结果与此相同，并且中低分化HCC的CAP2表达较高分化的HCC强。结论CAP2在HCC中是一个上调表达的基因，可能参与了HCC的多步骤发展过程，有望成为今后HCC诊断的一个有价值的分子标记物。
关键词
肝细胞癌
肝硬化
腺苷酸环化酶相关蛋白2
Keywords
Hepatocellular carcinoma
Liver cirrhosis
Cyelase-associated protein 2
分类号
R735 [医药卫生—肿瘤]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Osteopontin特异性siRNA慢病毒表达载体的构建及其在U251胶质瘤细胞中OPN的表达
晋雯
黄智勇
高美钦
李赞
《第四军医大学学报》
CAS
北大核心
2009
2
原文传递
2
腺苷酸环化酶相关蛋白2在肝细胞癌中的表达及意义
林洁
王斌
黄爱民
刘景丰
《中华肝胆外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013
3
原文传递
已选择
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引证文献
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