微生物来源α-L-鼠李糖苷酶的分子和结构生物学研究进展 被引量：7

1

作者 张霞 李利君 +2 位作者 倪辉 蔡慧农 苏文金 《生命科学研究》 CAS CSCD 2015年第1期68-74,共7页

α-L-鼠李糖苷酶(α-L-rhamnosidase(EC 3.2.1.40))是一种水解酶,分布在GH13、GH28、GH78和GH106家族,其中3种GH78家族的α-L-鼠李糖苷酶具有典型的(α/α)6桶状结构,它能够特异性地水解许多糖苷类物质末端的α-L-鼠李糖基,在食品饮料... α-L-鼠李糖苷酶(α-L-rhamnosidase(EC 3.2.1.40))是一种水解酶,分布在GH13、GH28、GH78和GH106家族,其中3种GH78家族的α-L-鼠李糖苷酶具有典型的(α/α)6桶状结构,它能够特异性地水解许多糖苷类物质末端的α-L-鼠李糖基,在食品饮料加工工业和医药业中具有重要的应用价值。介绍了微生物来源的α-L-鼠李糖苷酶的性质及应用,主要阐述了α-L-鼠李糖苷酶基因的克隆、表达及该酶晶体结构方面的研究进展。 展开更多

关键词 α-L-鼠李糖苷酶 基因克隆 基因表达 晶体结构

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单宁酶处理提高茶梗儿茶素含量及茶梗提取液生物活性 被引量：12

2

作者 黄玉凤 肖安风 +1 位作者 倪辉 蔡慧农 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第13期277-285,共9页

为综合利用茶叶加工副产物茶叶梗,试验设计利用固态发酵得到的单宁酶处理茶梗,比较不同处理条件下的茶梗提取液中儿茶素组成的差异及还原力、DPPH和OH自由基清除率、胰α-淀粉酶和胰脂肪酶抑制活性变化,探讨单宁酶处理提高茶梗提取物中... 为综合利用茶叶加工副产物茶叶梗,试验设计利用固态发酵得到的单宁酶处理茶梗,比较不同处理条件下的茶梗提取液中儿茶素组成的差异及还原力、DPPH和OH自由基清除率、胰α-淀粉酶和胰脂肪酶抑制活性变化,探讨单宁酶处理提高茶梗提取物中儿茶素含量和生物活性可行性。研究发现:在50℃条件下,利用2U/mL单宁酶溶液作用于茶梗粉末60min,茶梗提取液中酯型儿茶素(EGCG、ECG、GCG)基本被水解生成非酯型儿茶素(EGC、EC、GC)和没食子酸(GA),从而减少单宁-蛋白质聚合物和茶乳的形成量;此外,经单宁酶处理的茶梗提取液抗氧化活性与对照比较明显增强,表现为OH和DPPH自由基清除率IC50分别降低了74%和26%;酶解茶梗提取液质量浓度为5000mg/L时,胰α-淀粉酶和胰脂肪酶抑制率分别提高了89%和107%。研究结果表明单宁酶可高效水解茶梗提取液中酯型儿茶素,提高茶梗提取液的抗氧化活性以及体外抑制胰α-淀粉酶和胰脂肪酶活性。 展开更多

关键词 酶 提取 生物活性 茶梗 儿茶素 转化

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茶梗固态生料发酵产单宁酶研究 被引量：6

3

作者 吴昌正 蔡慧农 +3 位作者 倪辉 朱艳冰 杨远帆 肖安风 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期79-86,共8页

为促进茶梗的高效利用,对黑曲霉利用茶梗固态生料发酵生产单宁酶进行初步研究。结果表明:生料发酵产酶量是熟料发酵方式的3.2倍;茶梗中外加单宁酸对产酶没有明显影响,同时添加无机盐和碳氮源对产酶具有协同效应;蔗糖为产酶最佳碳源,但... 为促进茶梗的高效利用,对黑曲霉利用茶梗固态生料发酵生产单宁酶进行初步研究。结果表明:生料发酵产酶量是熟料发酵方式的3.2倍;茶梗中外加单宁酸对产酶没有明显影响,同时添加无机盐和碳氮源对产酶具有协同效应;蔗糖为产酶最佳碳源,但在产酶初期会对单宁酶的合成产生一定的抑制作用;氯化铵为产酶最佳氮源,在培养基中添加氯化铵既可提前单宁酶合成的时间,又可显著提高酶产量。添加质量分数为7%的蔗糖和氯化铵获得最高酶产量23.6 U·g-1。试验结果为茶梗固态生料发酵产单宁酶奠定了一定的理论基础,并有助于促进对茶梗的规模化开发和利用。 展开更多

关键词 农业废弃物 茶梗 单宁酶 生料固态发酵 黑曲霉

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响应面优化酶法澄清琯溪蜜柚汁工艺研究 被引量：4

4

作者 许键 蔡慧农 +2 位作者 倪辉 杜希萍 黄高凌 《集美大学学报（自然科学版）》 CAS 2014年第2期100-106,共7页

以琯溪蜜柚为主要原料,利用响应面法对酶法澄清琯溪蜜柚汁工艺进行优化.在单因素基础上选取试验因素与水平,根据Box-Benhnken试验设计原理,采用三因素三水平的响应面分析法,对各个因素的显著性和交互作用进行分析,以透光率为响应值作响... 以琯溪蜜柚为主要原料,利用响应面法对酶法澄清琯溪蜜柚汁工艺进行优化.在单因素基础上选取试验因素与水平,根据Box-Benhnken试验设计原理,采用三因素三水平的响应面分析法,对各个因素的显著性和交互作用进行分析,以透光率为响应值作响应面曲线图和等高线图,并建立了工艺数学模型.结果表明:酶法澄清蜜柚汁工艺的最佳参数为果胶酶浓度200 U/mL、酶解温度49℃、酶解时间40 min;并对结果进行验证,在此条件下,蜜柚汁透光率为97.2%,与预测值97.5%接近.说明,根据Box-Behnken模型并采用响应面分析法得到的酶法澄清蜜柚汁优化工艺准确、可靠. 展开更多

关键词 琯溪蜜柚汁 酶法澄清 优化 响应面

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酶法提取铁皮石斛多糖工艺优化及对挥发性成分的影响研究 被引量：12

5

作者 杨岩 李利君 +3 位作者 吴妙灵 张珍珍 冷晓冬 倪辉 《激光生物学报》 CAS 2017年第3期274-280,216,共8页

铁皮石斛具有重要的药用价值,但其资源有限,因此对其充分开发和利用具有重要的意义。本文利用α-L-鼠李糖苷酶辅助提取铁皮石斛多糖,通过对酶解温度、酶解时间及加酶量三个因素进行优化,提高铁皮石斛多糖提取率;结果显示,在酶解温度为4... 铁皮石斛具有重要的药用价值,但其资源有限,因此对其充分开发和利用具有重要的意义。本文利用α-L-鼠李糖苷酶辅助提取铁皮石斛多糖,通过对酶解温度、酶解时间及加酶量三个因素进行优化,提高铁皮石斛多糖提取率;结果显示,在酶解温度为40℃、酶解时间为1 h、加酶量为2.5%时,多糖提取率为38.4%,而不加酶处理多糖提取率仅为21.7%,酶法处理大大增加了铁皮石斛的多糖提取率。同时,运用顶空固相微萃取技术结合气相色谱质谱联用仪(HS-SPME-GC-MS)分析比较α-L-鼠李糖苷酶对铁皮石斛挥发性成分的影响;GC-MS分析表明,铁皮石斛加酶处理前后共发现31种挥发性成分,主要成分均为己醛、1-辛烯-3-醇、异薄荷醇和3-辛烯-2-酮,并且醛类化合物在加酶处理前后的样品中相对含量均最高,且加酶处理后产生6种新的挥发性成分。该研究结果表明α-L-鼠李糖苷酶的使用可显著增加对铁皮石斛多糖提取率,并为铁皮石斛挥发性成分的研究和开发利用提供一定的参考依据。 展开更多

关键词 铁皮石斛 α-L-鼠李糖苷酶 多糖 气质联用 挥发性成分

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1株枯草芽胞杆菌的鉴定及其弹性蛋白酶结构研究 被引量：6

6

作者 王超 陈启和 +3 位作者 倪辉 李利君 蔡慧农 苏文金 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第3期13-20,共8页

鉴定弹性蛋白酶产生菌株EL32,确定该酶的基本结构。采用分子生物学、形态学及生理生化性质对菌株EL32进行鉴定;用硫酸铵沉淀、离子交换层析和分子筛层析纯化酶蛋白;借助肽指纹图谱及酶基因克隆技术研究该酶的一级结构;利用同源建模的方... 鉴定弹性蛋白酶产生菌株EL32,确定该酶的基本结构。采用分子生物学、形态学及生理生化性质对菌株EL32进行鉴定;用硫酸铵沉淀、离子交换层析和分子筛层析纯化酶蛋白;借助肽指纹图谱及酶基因克隆技术研究该酶的一级结构;利用同源建模的方法研究该酶的空间结构。菌株EL32的16S rDNA与枯草芽胞杆菌16S rDNA的同源性达到99%,其菌落呈乳白色,其细胞革兰染色阳性,具有芽胞;发酵葡萄糖试验产酸不产气,明胶水解试验呈阳性,能够水解淀粉,V-P反应呈阳性,鉴定为枯草芽胞杆菌。从菌株BL32发酵液中纯化得到了弹性蛋白酶,SDS-PAGE分析显示其分子量为31 ku。用LTQ-MS测定肽指纹图谱表明该弹性蛋白酶是枯草芽胞杆菌蛋白酶subtilisin,该酶的基因和蛋白质序列与枯草芽胞杆菌蛋白酶subtilisin的同源性都高达99%。菌株EL32弹性蛋白酶的三维结构含有6个α-螺旋,7个扭曲的平行β-折叠以及2个反平行的β-折叠,His、Asp和Ser是其活性中心的关键基团。鉴定了1株产弹性蛋白酶的枯草芽胞杆菌,确定了其弹性蛋白酶是蛋白酶subtilisin,为该枯草芽胞杆菌蛋白酶的应用提供了基础。 展开更多

关键词 菌株鉴定 枯草芽胞杆菌 弹性蛋白酶 纯化 结构

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现代食品工业设计理念 被引量：4

7

作者 杜玲玲 苏国成 +1 位作者 周常义 李健 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2016年第11期201-204,共4页

在经济高速发展的今天,人们对食品品质要求越来越高,不同于以往满足基本营养要求,现如今,消费者选购食品时对外观和口感的要求也越来越高,产品的个性化和趣味性极大的影响消费者的购买决定。在此基础上我们提出现代食品工业设计理念,主... 在经济高速发展的今天,人们对食品品质要求越来越高,不同于以往满足基本营养要求,现如今,消费者选购食品时对外观和口感的要求也越来越高,产品的个性化和趣味性极大的影响消费者的购买决定。在此基础上我们提出现代食品工业设计理念,主要是在了解消费者喜好和购买心理的基础上,对产品的色香味形及外在包装形象进行整体的设计,符合市场需求,进而促进产品的销售,并达到宣扬企业文化等的目的。 展开更多

关键词 食品 形象 市场 包装

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柚子精油提取、成分、贮藏及应用研究进展 被引量：10

8

作者 陈峰 孙浩 +4 位作者 倪辉 洪鹏 李丽君 杨远帆 姜泽东 《食品科学技术学报》 CAS 北大核心 2018年第1期1-10,共10页

柚子是柑橘属植物的重要成员之一,其果皮的油包层含有丰富的芳香类成分,可通过冷磨法、水蒸馏法、同时蒸馏萃取(SDE)法、溶剂辅助萃取法(SAFE)以及超临界二氧化碳萃取法(SFECO2)等制备得到精油产品,其中冷磨法制备的精油香味最接近原柚... 柚子是柑橘属植物的重要成员之一,其果皮的油包层含有丰富的芳香类成分,可通过冷磨法、水蒸馏法、同时蒸馏萃取(SDE)法、溶剂辅助萃取法(SAFE)以及超临界二氧化碳萃取法(SFECO2)等制备得到精油产品,其中冷磨法制备的精油香味最接近原柚皮香味。相关研究已经采用感官评价、气相色谱(GC)、气相色谱质谱联用(GC-MS)、气相色谱嗅闻仪联用(GC-O)、电子鼻(ENose)等方法分析了柚皮精油的成分,而高分辨率的质谱(HRMS)、气相色谱-飞行时间质谱(GCTOF-MS)等方法在柚皮精油分析中较少。柚皮精油以萜烯类化合物为主,同时也存在着醇类、醛类、酯类等其他成分,其中月桂烯在柚皮精油中的含量显著高于其他柑橘类水果。不同品种柚子精油的香味特征及香气成分具有一定的差异,琯溪蜜柚精油以清香、柠檬和果香为主,梁平柚精油以花香为主,沙田柚精油以薄荷味为主。贮藏温度、光照及氧气会引起精油中挥发性成分的变化,其中紫外线对精油风味影响最大,是精油香味和成分不可逆变质的重要原因。柚皮精油在医药、食品添加剂以及化妆品行业应用非常广泛,对柚皮精油的进一步研究具有重要意义。 展开更多

关键词 柚子 精油 提取 成分 贮藏 香味 应用

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单宁酶处理对乌龙茶水浸出液抗氧化活性及澄清度的影响研究 被引量：2

9

作者 许雨石 蔡明瑛 +2 位作者 倪辉 肖安风 黄高凌 《福建茶叶》 北大核心 2015年第1期7-10,共4页

通过DPPH^＊、ABTS^＊和OH^＊自由基清除率试验测定了单宁酶处理乌龙茶水浸出液的抗氧化活性，并以透光率为指标评价浸出液的澄清度，研究了单宁酶处理对乌龙茶水浸出液抗氧化活性和澄清度的影响。结果表明，乌龙茶的水浸出液经单宁酶... 通过DPPH^＊、ABTS^＊和OH^＊自由基清除率试验测定了单宁酶处理乌龙茶水浸出液的抗氧化活性，并以透光率为指标评价浸出液的澄清度，研究了单宁酶处理对乌龙茶水浸出液抗氧化活性和澄清度的影响。结果表明，乌龙茶的水浸出液经单宁酶作用后，对DPPH、ABTS和oH自由基的清除能力均有增强，其中IC50分别降低了14．5％、15．4％和44．5％；保存4周后，经单宁酶解的水浸出液透光率基本不变（T640为81．10），而未经酶解的水浸出液透光率明显下降（T640由82．67降至33．37），说明茶水浸出液经单宁酶酶解处理后，其贮存稳定性显著提高。因此，单宁酶可有效提高乌龙茶水浸出液的抗氧化活性以及荼汤的稳定性。 展开更多

关键词 单宁酶 乌龙茶水浸出物 抗氧化活性 透过率

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壳聚糖澄清芦柑果汁工艺条件的优化 被引量：24

10

作者 许键 蔡慧农 +2 位作者 倪辉 杜希萍 黄高凌 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第23期268-275,共8页

为了制备稳定的澄清芦柑果汁,该文基于Box-Behnken试验设计,探讨了壳聚糖浓度、澄清温度、澄清时间对果汁澄清度的影响;建立了二次多项式回归模型,分析模型的有效性与因子间的交互作用,并对壳聚糖澄清芦柑果汁的工艺参数进行了优化。结... 为了制备稳定的澄清芦柑果汁,该文基于Box-Behnken试验设计,探讨了壳聚糖浓度、澄清温度、澄清时间对果汁澄清度的影响;建立了二次多项式回归模型,分析模型的有效性与因子间的交互作用,并对壳聚糖澄清芦柑果汁的工艺参数进行了优化。结果表明:壳聚糖澄清芦柑果汁的最佳工艺参数为:壳聚糖浓度0.80 g/L、温度59℃和时间71 min。在此最佳工艺条件下果汁透光率达到97.8%,且试验结果与模型预测值(98.3%)相吻合,所得回归模型拟合情况良好(R2=0.9886),达到设计要求。进一步对经壳聚糖澄清后的芦柑果汁的相关指标进行测定,发现果汁中可溶性固形物、维生素C及总酸含量依次从11.30±0.15%、31.33±3.25 mg/100mL、0.71±0.00 g/100mL略降为9.50±0.25%、21.8±5.28 mg/100mL、0.51±0 g/100mL,而总酚、果胶、蛋白质质量浓度依次从990.3±8.02 mg/L、366±4.70μg/mL、595.53±20.62μg/mL减少为557.87±4.67 mg/L、186.24±44.32μg/mL、26.42±0.30μg/mL有较明显下降,但澄清后的果汁非生物稳定性很好。该试验用响应面法优选出的澄清工艺合理可行,为芦柑果汁深加工及果汁产品开发提供了理论依据。 展开更多

关键词 优化 加工 品质调控 壳聚糖 澄清 芦柑汁 响应面

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3种清香型铁观音挥发性成分及香味特征 被引量：28

11

作者 张珍珍 杨远帆 +7 位作者 孙浩 洪鹏 黄高凌 姜泽东 陈峰 杜希萍 胡阳 倪辉 《集美大学学报（自然科学版）》 CAS 2016年第3期175-183,共9页

运用顶空固相微萃取技术结合气相色谱质谱联用仪（HS-SPME-GC-MS）和感官评价分析清香型铁观音的挥发性成分和主要风味特征。通过GC-MS检测分析,在3种清香型铁观音中共发现34种挥发性成分,主要成分均为反式-橙花叔醇、吲哚、正己醛、α... 运用顶空固相微萃取技术结合气相色谱质谱联用仪（HS-SPME-GC-MS）和感官评价分析清香型铁观音的挥发性成分和主要风味特征。通过GC-MS检测分析,在3种清香型铁观音中共发现34种挥发性成分,主要成分均为反式-橙花叔醇、吲哚、正己醛、α-法呢烯,质量含量分别为24751～41899、19958～33929、1875～3467、1033～3361μg/kg;感官评价结果显示,3种铁观音均具有典型的清香味和花香味;香气值（OAVs）分析表明,3种铁观音中主要风味成分相同,均为癸醛（128.92～299.37）、反式-橙花叔醇（110.01～186.21）、苯乙醛（31.27～37.89）、正己醛（17.86～33.02）和吲哚（9.50～16.16）;聚类分析结合感官评价表明,清香味主要来源于正己醛、苯乙醛和癸醛,花香味主要来源于反式-橙花叔醇。该研究结果说明,3种清香型铁观音的主要挥发性成分和香味特征相似,但和其他乌龙茶具有一定的差异。 展开更多

关键词 铁观音 感官评价 气质联用 香气值 统计学分析

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红树植物内生真菌的分离鉴定及抗菌活性菌株的筛选 被引量：4

12

作者 陈昭华 伍菱 +3 位作者 杨秋明 王骥妍 朱敏佳 杜希萍 《激光生物学报》 CAS CSCD 2013年第3期263-266,共4页

本文对厦门集美红树植物无瓣海桑(Sonneratia apetala),海马齿(Sesuvium portulacastrum)和秋茄(Kan-delia candel)的多个部位进行内生真菌的分离和形态鉴定,并采用菌饼法对分离到的内生真菌进行抗菌活性筛选。结果显示,从3种红树植物... 本文对厦门集美红树植物无瓣海桑(Sonneratia apetala),海马齿(Sesuvium portulacastrum)和秋茄(Kan-delia candel)的多个部位进行内生真菌的分离和形态鉴定,并采用菌饼法对分离到的内生真菌进行抗菌活性筛选。结果显示,从3种红树植物的根、茎、叶中分离得到25株内生真菌,分别隶属8个类群,以链格孢属和曲霉属为主,分别占菌株总数的28.0%和24.0%;有19株菌株对至少一种指示菌有抑制作用,占菌株总数的76.0%。研究结果表明,红树植物来源的内生真菌数量多,种属丰富,同时具有良好的抗菌活性,是研究抗菌活性化合物的重要资源。 展开更多

关键词 红树植物 内生真菌 分离鉴定 抗菌活性

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琯溪蜜柚果汁树脂吸附脱苦前后酚类物质含量的测定 被引量：5

13

作者 钟晓婷 嵇海峰 +1 位作者 许键 黄高凌 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期136-139,共4页

利用高效液相色谱法测定了琯溪蜜柚果汁酚类成分的含量,并研究了吸附脱苦对琯溪蜜柚果汁中酚类物质含量的影响。结果表明,琯溪蜜柚果汁中含有绿原酸、咖啡酸、香豆酸、阿魏酸、芸香苷和柚皮苷等六种酚类物质;用高效液相色谱法分析琯溪... 利用高效液相色谱法测定了琯溪蜜柚果汁酚类成分的含量,并研究了吸附脱苦对琯溪蜜柚果汁中酚类物质含量的影响。结果表明,琯溪蜜柚果汁中含有绿原酸、咖啡酸、香豆酸、阿魏酸、芸香苷和柚皮苷等六种酚类物质;用高效液相色谱法分析琯溪蜜柚果汁中酚类物质,它们的加标回收率均在85.0%~103.6%之间,相对标准偏差（RSD）均在0.48%~2.9%之间。经XAD-16树脂吸附脱苦后,柚汁中的香豆酸、阿魏酸、芸香苷等三种酚类成分已检测不到,而绿原酸、柚皮苷和咖啡酸的损失率分别为97.2%、93.5%、87.9%,说明树脂吸附脱苦导致琯溪蜜柚汁中绿原酸、咖啡酸、香豆酸、阿魏酸、芸香苷和柚皮苷等六种酚类物质含量严重降低。 展开更多

关键词 琯溪蜜柚果汁 吸附脱苦 酚类物质 高效液相色谱法

原文传递

一株甲基对硫磷降解菌-布朗克假丝酵母JMUPMD-1的分离与鉴定 被引量：3

14

作者 张霞 张书泰 +2 位作者 谢顺昌 杜希萍 李利君 《激光生物学报》 CAS CSCD 2014年第2期183-188,共6页

对一株新分离的、能以甲基对硫磷为唯一磷源生长的菌株JMUPMD-1,利用形态特征观察和生理生化特性,及结合rDNA ITS分子序列分析对JMUPMD-1进行鉴定;采用气相色谱法检测培养过程中甲基对硫磷浓度的变化,确定甲基对硫磷降解速率。该菌株的r... 对一株新分离的、能以甲基对硫磷为唯一磷源生长的菌株JMUPMD-1,利用形态特征观察和生理生化特性,及结合rDNA ITS分子序列分析对JMUPMD-1进行鉴定;采用气相色谱法检测培养过程中甲基对硫磷浓度的变化,确定甲基对硫磷降解速率。该菌株的rDNA ITS序列与布朗克假丝酵母(Candida blankii)的同源性为99%,形态特征和生理生化特性与布朗克假丝酵母相符合,因此鉴定为布朗克假丝酵母。以350μg/L甲基对硫磷为唯一磷源和350μg/L甲基对硫磷及1 g/L K2HPO4组成的混合磷源培养该菌株,测得该菌株的降解率为48.6%。该菌株的胞内提取液具有明显的甲基对硫磷降解酶活性。 展开更多

关键词 甲基对硫磷 生物降解 ITS序列 布朗克假丝酵母 菌种鉴定

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促进剂对枯草芽胞杆菌CICC20958产肌苷的影响

15

作者 游洪燕 杨哲 +3 位作者 肖安风 倪辉 蔡慧农 杨秋明 《集美大学学报（自然科学版）》 CAS 2014年第2期107-112,共6页

根据肌苷的代谢调控机理,选择柠檬酸钠、NaF、CaCl2、次黄嘌呤、MnSO45种肌苷促进剂,考察它们的不同添加量对枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis,简称Bs)CICC20958菌株产肌苷的影响,采用均匀设计法得到最佳组合添加方案.结果表明,在促进剂... 根据肌苷的代谢调控机理,选择柠檬酸钠、NaF、CaCl2、次黄嘌呤、MnSO45种肌苷促进剂,考察它们的不同添加量对枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis,简称Bs)CICC20958菌株产肌苷的影响,采用均匀设计法得到最佳组合添加方案.结果表明,在促进剂柠檬酸钠、NaF、CaCl2、次黄嘌呤、MnSO4质量浓度分别为7.9、0.001、0.032、2.1、0.2 g/L的条件下发酵,菌株Bs CICC20958的肌苷产量达到7.81 g/L,比不添加促进剂实验组(对照组)的肌苷产量提高了5.38倍. 展开更多

关键词 枯草芽胞杆菌 CICC20958 肌苷 促进剂 均匀设计试验

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法夫酵母整合型表达载体的构建

16

作者 陈丽娜 朱艳冰 +1 位作者 倪辉 李利君 《集美大学学报（自然科学版）》 CAS 2014年第3期185-191,共7页

为了建立法夫酵母虾青素代谢途径研究和分子育种的技术体系,构建了法夫酵母的整合型表达载体.通过测定法夫酵母对G418的抗性来确定抗性筛选物的质量浓度,以来源于法夫酵母本身的rRNA基因为基因同源重组片段,利用法夫酵母肌动蛋白启动子... 为了建立法夫酵母虾青素代谢途径研究和分子育种的技术体系,构建了法夫酵母的整合型表达载体.通过测定法夫酵母对G418的抗性来确定抗性筛选物的质量浓度,以来源于法夫酵母本身的rRNA基因为基因同源重组片段,利用法夫酵母肌动蛋白启动子和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gpd)启动子,构建了携带G418抗性基因的整合型载体pMD-18spakta和pMD-18spgktg.结果表明:法夫酵母对20μg/mL质量浓度的G418敏感,将构建的载体转化法夫酵母菌株后,筛选得到了能够在含有G418的培养基上生长的转化子;利用PCR的方法检测到转化子中存在的抗性基因.将筛选得到的阳性菌株连续传代培养10次后,发现该菌株的G418抗性仍然存在;以总DNA为模板,用PCR的方法仍可检测到G418抗性基因.说明已经构建得到了遗传稳定性良好的法夫酵母整合型表达载体,构建的质粒pMD-18spakta和pMD-18spgktg可作为法夫酵母整合载体应用于法夫酵母的DNA重组实验. 展开更多

关键词 法夫酵母 整合载体 构建 G418抗性

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柚皮苷及其酶解产物的生物活性研究 被引量：5

17

作者 于广仁 蒋超 +3 位作者 肖安风 蔡慧农 倪辉 杨秋明 《食品科技》 CAS 北大核心 2014年第3期155-159,共5页

以柚皮苷及其酶解产物柚皮素为考察目标,采用抑菌圈法测定其抑菌活性,通过测定它们对Fe3+的还原能力、对1,1-二苯-2-苦基苯肼自由基(DPPH·)、羟基自由基(·OH)的清除能力,来评价它们的体外抗氧化性能。抑菌试验结果表明,柚皮... 以柚皮苷及其酶解产物柚皮素为考察目标,采用抑菌圈法测定其抑菌活性,通过测定它们对Fe3+的还原能力、对1,1-二苯-2-苦基苯肼自由基(DPPH·)、羟基自由基(·OH)的清除能力,来评价它们的体外抗氧化性能。抑菌试验结果表明,柚皮苷及柚皮素在相同的试验浓度下,两者的抑菌能力存在着较大差别,柚皮素的抑菌能力要明显强于柚皮苷,且柚皮素对革兰阳性菌的抑制作用要强于革兰阴性菌,但两者对黑曲霉菌未表现出抑制效果。而体外抗氧化试验结果表明,两者在相同浓度下的抗氧化能力也有所不同,柚皮苷、柚皮素及对照物BHT对DPPH自由基的IC50分别为7.044、1.277、0.035 mg/mL,对羟自由基的IC50分别为1.499、1.288、1.081 mg/mL。 展开更多

关键词 棘孢曲霉 柚苷酶 柚皮苷 酶法转化 柚皮素 生物活性

原文传递

实时定量PCR构建法夫酵母内参基因β-actin、gpd、18S rRNA标准品质粒和标准曲线 被引量：2

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作者 李天丽 郑晨华 +2 位作者 李利君 倪辉 蔡慧农 《激光生物学报》 CAS CSCD 2013年第4期379-384,共6页

为建立检测法夫酵母JMU-MVP14中虾青素合成相关基因在不同生长时期表达水平的实时定量PCR方法,构建法夫酵母JMU-MVP14的管家基因β-actin、gpd、18S rRNA的标准质粒,进行实时定量PCR,制作标准曲线及回归方程。β-actin基因标准曲线相关... 为建立检测法夫酵母JMU-MVP14中虾青素合成相关基因在不同生长时期表达水平的实时定量PCR方法,构建法夫酵母JMU-MVP14的管家基因β-actin、gpd、18S rRNA的标准质粒,进行实时定量PCR,制作标准曲线及回归方程。β-actin基因标准曲线相关系数(R2)=0.9956,扩增效率(E)=96.93%;gpd基因标准曲线相关系数(R2)=0.9901,扩增效率(E)=93.78%;18S rRNA基因标准曲线相关系数(R2)=0.9981,扩增效率(E)=98.76%。3个基因片段的熔解曲线均呈单峰;扩增曲线呈典型的S型动力学曲线,指数期和平台期明显,为理想的熔解曲线和扩增曲线。用geNorm软件对三个管家基因的稳定性进行分析,三个基因的稳定性排序为β-actin>18S rRNA>gpd,故β-actin和18S rRNA较适合作为研究法夫酵母JMU-MVP14定量实验的内参基因。 展开更多

关键词 实时定量PCR 法夫酵母 标准质粒 标准曲线

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一种新的海洋微藻病毒丝氨酸蛋白酶基因的克隆表达及其活性分析 被引量：1

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作者 李丽华 邱健健 +2 位作者 蔡艺钦 于鹏 刘静雯 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期101-110,共10页

从海洋球石藻 Emiliania huxleyi 病毒 EhV99B1的基因组中克隆了丝氨酸蛋白酶（Sp）基因（GenBank 登录号：KC161207），对该基因的开放阅读框（ORF）进行系统的生物信息学分析，并在大肠杆菌中融合表达，通过亲和层析法获得了纯化的重... 从海洋球石藻 Emiliania huxleyi 病毒 EhV99B1的基因组中克隆了丝氨酸蛋白酶（Sp）基因（GenBank 登录号：KC161207），对该基因的开放阅读框（ORF）进行系统的生物信息学分析，并在大肠杆菌中融合表达，通过亲和层析法获得了纯化的重组 Sp。结果表明：EhV99B1-Sp 基因的 ORF 为1110 bp，编码368个氨基酸，蛋白相对分子质量为39．5 kDa；该基因片段与 GenBank 中 EhV86-Sp 的同源性很高，核苷酸及其对应的氨基酸序列同源性分别为95％和97％，而与其他物种 Sp 序列的同源性仅为28％～32％，说明其可能是丝氨酸蛋白酶家族中的一个新成员；预测的二级结构特征显示EhV99B1-Sp 的蛋白结构域中具有典型的 LTAGHC （组氨酸活性位点区域）和 AICNGDSGGPLF（丝氨酸活性位点区域）两个丝氨酸蛋白酶催化活性位点的氨基酸基序，是一个两次跨膜蛋白；将该基因在大肠杆菌中进行低温诱导表达，得到分子量为60 kDa 的重组蛋白，经鲤鱼肌肉丝氨酸蛋白酶（MB-SP）抗体检测证实为 Sp，且重组蛋白在大肠杆菌细胞中具有明显的生物学活性。本研究结果为进一步探讨 EhV99B1-Sp 在病毒与宿主相互作用过程中的调节作用及其功能与应用奠定基础。 展开更多

关键词 海洋球石藻病毒 丝氨酸蛋白酶 基因克隆 重组表达 活性分析

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塔宾曲霉固态发酵产物中α-L-鼠李糖苷酶的分离纯化及酶学性质分析 被引量：1

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作者 高庭 李利君 +3 位作者 王耸 吴喆瑜 张文静 倪辉 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第15期165-170,共6页

α-L-鼠李糖苷酶是一种在食品、药品中有重要用途的糖苷酶,但其结构与功能关系尚不明确,限制了优良酶制剂的设计。本文通过硫酸铵分级沉淀、疏水层析和亲和层析从塔宾曲霉固态发酵柚皮产物中分离纯化得到了一种α-L-鼠李糖苷酶,纯化倍... α-L-鼠李糖苷酶是一种在食品、药品中有重要用途的糖苷酶,但其结构与功能关系尚不明确,限制了优良酶制剂的设计。本文通过硫酸铵分级沉淀、疏水层析和亲和层析从塔宾曲霉固态发酵柚皮产物中分离纯化得到了一种α-L-鼠李糖苷酶,纯化倍数和比活力分别为34和21105 IU/mg,SDS-PAGE测得该酶的分子质量为120 ku;纯化得到的α-L-鼠李糖苷酶最适反应p H为4.0,最适反应温度为50℃,p H稳定性和热稳定性好;Fe^(2+)对酶活有促进作用,Mn^(2+)、Ca^(2+)、Cd^(2+)对酶有抑制作用;该酶可水解柚皮苷,但对芸香苷和对硝基苯酚鼠李糖的转化率较低,不水解杨梅苷和柴胡皂苷C。以上结果表明纯化得到的α-L-鼠李糖苷酶在金属离子影响特性、底物特异性方面具有新颖性,丰富了α-L-鼠李糖苷酶的结构与功能关系研究素材。 展开更多

关键词 塔宾曲霉 固态发酵 α-L-鼠李糖苷酶 分离纯化 酶学性质

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