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生物化学与分子生物学实验课程优化效果探讨 被引量：12
1
作者 王婷 王庆怡 +3 位作者 王磊 王明星 韩骅 贾林涛 《中华神经外科疾病研究杂志》 CAS 2016年第3期254-256,共3页
目的探讨生物化学与分子生物学实验课程优化后的教学效果。方法通过更新教学实验平台仪器设备器材,重组实验课程安排和改进实验课内容的方法提高生物化学与分子生物学实验课教学效果。结果解决生物化学与分子生物学实验课中出现的主要矛... 目的探讨生物化学与分子生物学实验课程优化后的教学效果。方法通过更新教学实验平台仪器设备器材,重组实验课程安排和改进实验课内容的方法提高生物化学与分子生物学实验课教学效果。结果解决生物化学与分子生物学实验课中出现的主要矛盾,均衡学员实验课授课时间,提高实验课授课质量。结论改善和优化生物化学与分子生物学实验课程实验条件及实验内容能够大大提高学员实验成功率,提升平均成绩,提高教学质量。 展开更多
关键词 生物化学 分子生物学 实验课程 教学方法 教学改革
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NT3基因工程细胞经脑脊液途径的耳蜗内生物学效应的初步证明 被引量：14
2
作者 高下 王锦玲 +3 位作者 杨安钢 金明 许彦鸣 王枫 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 2002年第4期255-257,279,共4页
目的　通过脑脊液途径移植神经营养因子 - 3(NT3)基因工程细胞 ,初步观察其耳蜗内听觉生物学效应。方法　将体外构建的NT3基因工程细胞扩大培养 ,收集浓缩培养上清中的蛋白 ,用印迹杂交鉴定其分泌蛋白的生物学效应 ,再将适当的细胞直接... 目的　通过脑脊液途径移植神经营养因子 - 3(NT3)基因工程细胞 ,初步观察其耳蜗内听觉生物学效应。方法　将体外构建的NT3基因工程细胞扩大培养 ,收集浓缩培养上清中的蛋白 ,用印迹杂交鉴定其分泌蛋白的生物学效应 ,再将适当的细胞直接移植到 2 0天龄近交BALB/C小鼠的脑脊液中 ,4 0天后比较移植前后的畸变产物耳声发射 (DPOAE)幅值。结果　体外构建NT3基因工程细胞是可行的 ,其具备分泌NT3的功能 ,经脑脊液途径注射后观察到BALB/C小鼠耳蜗功能的老化在高频范围内得到了延缓 ,DPOAE高频范围幅值下降减缓。结论　NT3基因工程细胞具有较好的体外体内生物学效应 ,可以用于进一步实验治疗感音性聋的研究 ; 展开更多
关键词 脑脊液 生物学效应 神经营养因子-3 基因治疗 基因转染 基因工程细胞 耳蜗 听觉老化 感音性聋
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人重组caspase-6融合蛋白对骨肉瘤SOSP-9607细胞靶向促凋亡作用 被引量：1
3
作者 周本根 许彦鸣 +7 位作者 裘秀春 杨彤涛 纪振钢 苟永胜 任民 周勇 杨安钢 范清宇 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第1期21-25,共5页
目的:探讨Her2靶向重组的caspase-6融合蛋白对骨肉瘤SOSP-9607细胞的促凋亡作用。方法:将抗Her2单链抗体基因e23sFv与绿脓杆菌外毒素PE的转膜结构域基因(PEⅡ)和活性caspase-6基因连接,构建成Immunocasp-6(e23sFv-PEⅡ-casp-6)基因,将... 目的:探讨Her2靶向重组的caspase-6融合蛋白对骨肉瘤SOSP-9607细胞的促凋亡作用。方法:将抗Her2单链抗体基因e23sFv与绿脓杆菌外毒素PE的转膜结构域基因(PEⅡ)和活性caspase-6基因连接,构建成Immunocasp-6(e23sFv-PEⅡ-casp-6)基因,将其克隆入真核表达载体pCMV中,转染SOSP-9607细胞,间接免疫荧光法检测目的基因表达和细胞形态学变化,通过AnnexinV染色、流式细胞术、MTT法检测来观察其促肿瘤细胞凋亡的作用。结果:转染SOSP-9607细胞后,间接免疫荧光染色检测出caspase-6的表达,SOSP-9607细胞出现明显的核浓缩、碎裂;电镜观察到细胞质浓缩,胞内空泡,核染色质浓集等典型的凋亡特征;MTT法检测发现细胞的增殖明显被抑制;AnnexinV染色流式细胞术检测可见明显的凋亡细胞,凋亡率为31.4%,较对照组细胞(凋亡率为6.0%)有非常显著的增加(P<0.01)。结论:重组Immunocasp-6基因可以在转染的SOSP-9607细胞中表达,并诱导细胞发生凋亡。 展开更多
关键词 CASPASE-6 HER 2 融合蛋白 骨肉瘤 细胞凋亡
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曲古抑菌素A通过上调KLF4表达诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡 被引量：1
4
作者 赵智凝 周强 +5 位作者 白久旭 闫博 秦炜炜 王涛 贾林涛 杨安钢 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期52-55,共4页
目的:观察组蛋白乙酰基转移酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的影响,并研究其与Krupell样因子4(Krupell-like factor 4,KLF4)的关系。方法:0、50、100、200、300、500ng... 目的:观察组蛋白乙酰基转移酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的影响,并研究其与Krupell样因子4(Krupell-like factor 4,KLF4)的关系。方法:0、50、100、200、300、500ng/ml TSA作用于Ishikawa细胞24 h,或100 ng/ml TSA作用于Ishikawa细胞0、4、8、12、24、48 h,流式细胞术检测Ishikawa细胞凋亡情况,qRT-PCR检测Ishikawa细胞中KLF4 mRNA的表达情况;将KLF4真核表达载体pcDNA3-KLF4转染Ishikawa细胞,流式细胞术检测Ishikawa细胞凋亡情况。结果:100 ng/ml TSA作用于Ishikawa细胞24 h后,Ishikawa细胞的凋亡率显著高于对照组[(30.6±4.5)%vs(7.53±0.93)%,P<0.05];不同质量浓度TSA处理Ishikawa细胞24 h后或100 ng/ml TSA作用Ishikawa细胞不同时间后,KLF4 mRNA表达水平以剂量依赖和时间依赖方式明显增高(P<0.05);pcDNA3-KLF4转染后Ishikawa细胞凋亡率显著增加[(27.3±2.7)%vs(4.53±1.75)%,P<0.05]。结论:TSA能通过诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞中KLF4的表达,促进Ishikawa细胞发生凋亡。 展开更多
关键词 曲古抑菌素A 子宫内膜癌 ISHIKAWA细胞 Krupell样因子4 凋亡
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HER2基因沉默抑制人胃癌细胞SGC-7901的生长和侵袭 被引量：1
5
作者 鲍炜 付海京 +6 位作者 贾林涛 张勇 刘家云 任新玲 温伟红 孟艳玲 杨安钢 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第4期328-332,共5页
目的:探讨针对HER2基因的RNA干涉对人胃癌细胞生长和侵袭的影响。方法:构建了针对癌基因HER2的siRNA表达载体,分别命名为pcDNA3-sihe1和pcDNA3-sihe2,将构建的干涉载体与对照载体转染胃癌SGC-7901细胞,通过间接免疫荧光实验确定干涉效果... 目的:探讨针对HER2基因的RNA干涉对人胃癌细胞生长和侵袭的影响。方法:构建了针对癌基因HER2的siRNA表达载体,分别命名为pcDNA3-sihe1和pcDNA3-sihe2,将构建的干涉载体与对照载体转染胃癌SGC-7901细胞,通过间接免疫荧光实验确定干涉效果;以软琼脂集落形成实验检测干涉后细胞的集落形成能力,以流式细胞术检测细胞在悬浮培养条件下的凋亡情况;并以Boyden chamber法检测转染后细胞的侵袭能力。结果:成功构建针对癌基因HER2的siRNA表达载体,siRNA表达载体转染SGC-7901细胞后HER2表达水平明显降低,证实siRNA成功抑制HER2蛋白的表达。HER2低表达的细胞株集落形成能力降低,流式细胞术检测发现HER2下调可引起胃癌细胞的凋亡,Boydenchamber实验表明针对HER2的RNA干涉可抑制胃癌细胞SGC-7901的侵袭能力。结论:RNA干涉有效地抑制了HER2分子的表达,进而影响SGC-7901细胞的生长和侵袭,本实验为进一步研究HER2分子与肿瘤细胞生长和转移的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 HER2基因 RNA干涉 胃肿瘤 侵袭
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hOP-1全长基因克隆及真核表达载体的构建
6
作者 岳玲 史俊南 +3 位作者 柴玉波 孙叶方 荫俊 文玲英 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期118-121,共4页
目的　证实人牙乳头细胞中OP 1的表达 ,获得hOP 1全长基因及其高效真核表达载体。方法　提取人牙乳头细胞总RNA ,反转录合成cDNA ,以特异性引物扩增hOP 1全长基因并克隆入T载体 ,筛选阳性克隆进行序列测定后。构建高效真核表达载体pCI O... 目的　证实人牙乳头细胞中OP 1的表达 ,获得hOP 1全长基因及其高效真核表达载体。方法　提取人牙乳头细胞总RNA ,反转录合成cDNA ,以特异性引物扩增hOP 1全长基因并克隆入T载体 ,筛选阳性克隆进行序列测定后。构建高效真核表达载体pCI OP 1并筛选鉴定。结果　PCR扩增得到一特异性的约 13 0 0bp的片段 ,序列测定结果表明与国外已发表的序列完全一致。构建的pCI OP 1质粒 ,用于基因转染纯度较好。结论　人牙乳头细胞中首次克隆到hOP 1全长基因 。 展开更多
关键词 hOP-1 全长基因 克隆 人牙乳头细胞 真核表达载体
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BDNF基因重组逆转录病毒载体pLCNX-BDNF的构建与鉴定
7
作者 高下 贾林涛 +3 位作者 许彦鸣 王枫 王锦玲 杨安钢 《安徽医科大学学报》 CAS 2001年第4期267-270,共4页
目的　构建含脑源性神经营养因子 (BDNF)基因的逆转录病毒载体 (pLCNX)质粒。 方法　利用多克隆酶切位点正向黏端连接 ,转化大肠杆菌感受态细菌DH5α获得质粒 ,双酶切电泳和PCR方法初步鉴定 ,并提交DNA测序工作站进行测序分析。结果　... 目的　构建含脑源性神经营养因子 (BDNF)基因的逆转录病毒载体 (pLCNX)质粒。 方法　利用多克隆酶切位点正向黏端连接 ,转化大肠杆菌感受态细菌DH5α获得质粒 ,双酶切电泳和PCR方法初步鉴定 ,并提交DNA测序工作站进行测序分析。结果　重组构建的质粒pLCNX BDNF完全正确 ,含有全长小鼠BDNF基因片段。结论　获得正确的含全长BDNF基因的 pLCNX BDNF质粒 。 展开更多
关键词 脑源性神经营养因子 逆转录病毒科 基因重组 小鼠 耳聋 BDNF
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新生儿枫糖尿症1例分析
8
作者 孙茂 黄萍 +2 位作者 江宁 王伟红 吴元明 《生物技术世界》 2015年第12期54-55,共2页
枫糖尿症是一种罕见的支链氨基酸代谢异常疾病,为常染色体隐性遗传,临床表现以意识障碍、肌张力障碍、惊厥、中枢性呼吸困难最为常见,临床易漏诊、误诊,早期诊断、早期干预是改善预后的关键。本文探讨枫糖尿症(MSUD)的诊断、治疗、预后... 枫糖尿症是一种罕见的支链氨基酸代谢异常疾病,为常染色体隐性遗传,临床表现以意识障碍、肌张力障碍、惊厥、中枢性呼吸困难最为常见,临床易漏诊、误诊,早期诊断、早期干预是改善预后的关键。本文探讨枫糖尿症(MSUD)的诊断、治疗、预后及误诊原因。 展开更多
关键词 枫糖尿症 新生儿 代谢病
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临床医学本科专业公共选修课《法医学》教学探讨
9
作者 吴元明 孙茂 王国霞 《中华医学教育探索杂志》 2015年第3期290-292,共3页
本教研室在临床医学本科专业公共选修课《法医学》教学过程中，从教学整体设置、案例和讨论式教学的有效实施、多媒体和网上课堂教学手段的充分运用、参观实践和师生座谈会的组织开展等方面进行了有益尝试，通过上述努力，提升了公共选... 本教研室在临床医学本科专业公共选修课《法医学》教学过程中，从教学整体设置、案例和讨论式教学的有效实施、多媒体和网上课堂教学手段的充分运用、参观实践和师生座谈会的组织开展等方面进行了有益尝试，通过上述努力，提升了公共选修课《法医学》教学质量。 展开更多
关键词 法医学 课程设置 教学方法
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小鼠髓母细胞瘤干细胞分离培养及干细胞标记物的分析 被引量：1
10
作者 李天骄 张一萌 +2 位作者 王庆怡 贾林涛 王婷 《医学分子生物学杂志》 CAS 2017年第3期125-129,共5页
目的旨在建立自发髓母细胞瘤模型小鼠肿瘤干细胞分离培养方法，观察其在体外形成克隆的能力，对可能的肿瘤干细胞标志分子CD44、CDl33和CDl5进行流式细胞术分析鉴定。方法将小鼠髓母细胞瘤组织通过温和消化液消化分离成单细胞悬液，于... 目的旨在建立自发髓母细胞瘤模型小鼠肿瘤干细胞分离培养方法，观察其在体外形成克隆的能力，对可能的肿瘤干细胞标志分子CD44、CDl33和CDl5进行流式细胞术分析鉴定。方法将小鼠髓母细胞瘤组织通过温和消化液消化分离成单细胞悬液，于干细胞培养基中培养。计算其细胞球形成率。于含血清培养基中培养观察分化能力。利用流式细胞术对其表面可能的干细胞表面标记分子进行分析鉴定。结果从模型小鼠髓母细胞瘤组织中成功分离培养髓母细胞瘤原代细胞．原代细胞可形成具有高度的自我更新和增殖能力的细胞球；细胞球可在含血清培养基中贴壁分化成为神经元样细胞：干细胞表面标记分子流式细胞术分析表明髓母细胞瘤干细胞中CD44表达较高，CDl33及CDl5的表达无差异或者降低。结论髓母细胞瘤肿瘤细胞中存在一定量的具有自我更新增殖能力、高表达CD44的肿瘤干细胞。并能在体外将其分离培养、连续传代及诱导发生分化。 展开更多
关键词 髓母细胞瘤 肿瘤干细胞 细胞球 干细胞表面标记 CD44
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