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题名荧光PCR检测乙型肝炎病毒cccDNA方法的建立
被引量：8
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作者
罗进
郭晏海
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机构
第四军医大学药学系药物基因组学教研室全军基因诊断技术研究所国家肿瘤生物重点实验室
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出处
《中国卫生检验杂志》
CAS
2008年第7期1384-1386,共3页
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文摘
目的:建立特异、灵敏的荧光PCR检测乙型肝炎病毒cccDNA的方法。方法:首先用煮沸法提取血清中的HBVDNA,然后用绿豆核酸酶(Mung Bean Nuclease)消化松弛环状HBVDNA(rcDNA),保留共价闭合环状DNA(cccDNA)。设计一条嵌合引物,该引物分为两部分序列,近5′部分为人为设定的序列,近3′部分是与正链缺口下游互补序列。先用该嵌合引物以正链为模板,自HBV cccDNA1590nt开始向上游延伸,然后以嵌合引物中人为设定的序列为下游引物、与负链互补的上游引物以及一条在两引物之间与正链互补的Taqman探针,扩增检测嵌合引物延伸的产物。由于带有缺口的HBV rcDNA无法被嵌合引物延伸,因此最终只能扩增检测到cccDNA。结果:用含有相应HBV DNA片端的PUC19质粒模拟HBV cccDNA,该检测方法的检测灵敏度为1×103拷贝/ml;以模拟松弛环状DNA(rcDNA)与模拟HBV cccDNA按不同比例混合,在rcDNA与cccDNA的比为1×109拷贝/ml:1×103拷贝/ml时,该方法仍可检测到模拟cccDNA;单独检测模拟rcDNA浓度为1×109拷贝/ml时,该方法检测未出现假阳性。结论:该检测乙型肝炎病毒cccDNA的方法操作简单、灵敏、特异,适用于检测血清中HBV cccDNA。
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关键词
聚合酶链反应
乙型肝炎病毒
共价闭合环状DNA
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Keywords
Polymerase chain reaction
Fluorescence - Polarization
Liquid - hybridization
Hepatitis B virus
DNA
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分类号
R51
[医药卫生—内科学]
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题名蛋白质芯片定量检测乙肝表面抗原系统的建立
被引量：1
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作者
吴昊
罗进
郭晏海
王小明
闫小君
李丁
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机构
第四军医大学药学系药物基因组学教研室全军基因诊断技术研究所国家肿瘤生物重点实验室
陕西省生物诊断与治疗工程技术研究中心
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出处
《中国卫生检验杂志》
CAS
2008年第5期857-859,共3页
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文摘
目的：建立以蛋白质芯片检测乙肝表面抗原的方法,以期对乙肝患者血清中HBsAg进行定量检测,帮助动态分析病情和评估疗效。方法：用点样仪将一种抗-HBsAg单抗点到硝酸纤维素膜（NC膜）上制成芯片,HRP标记另一种抗-HBsAg单抗,以双抗夹心法捕获血清中HBsAg,建立HBsAg浓度与检测点灰度间关系的标准曲线并通过芯片阅读仪进行定量分析。结果：建立的蛋白质芯片检测系统能快速准确地对血清中HBsAg进行定性和定量检测,系统的定量检测范围是1-10000 ng/ml。结论：蛋白质芯片检测系统具有微型化和自动化的优点,与PCR HBV-DNA相比其操作更简便,所需时间更短,可以代替传统的ELISA方法,是更为科学的疗效评估方法。
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关键词
蛋白质芯片
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)
定量检测
硝酸纤维素膜
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Keywords
Protein microarrays
Hepatitis B virus surface antigen
Quantitative detection
Nitrocellulose membrane
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分类号
R446.62
[医药卫生—诊断学]
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