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Math1基因重组慢病毒的构建及其在293T细胞中的表达 被引量：2
1
作者 潘松 付勇 +2 位作者 刘强 刘立思 刘杰 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期412-417,共6页
目的构建携带Math1基因的重组慢病毒载体,检测其滴度,检测其在293T细胞中的表达。方法 PCR扩增Math1基因,将其连入慢病毒载体pLenti-GFP中;在感受态细胞DH5α中培养扩增,并行Math1基因的测序鉴定;将重组的慢病毒四质粒共转染293T细胞,... 目的构建携带Math1基因的重组慢病毒载体,检测其滴度,检测其在293T细胞中的表达。方法 PCR扩增Math1基因,将其连入慢病毒载体pLenti-GFP中;在感受态细胞DH5α中培养扩增,并行Math1基因的测序鉴定;将重组的慢病毒四质粒共转染293T细胞,收获并浓缩病毒;感染293T细胞和提取细胞DNA后用实时定量PCR法检测病毒滴度。用逆转录PCR和Western blot法检测Math1基因在感染病毒的293T细胞中的表达。结果构建的慢病毒载体pLenti-Math1-GFP经测序分析证实基因序列正确。四质粒共转染293T细胞后,荧光显微镜下可见大量绿色荧光。包装后慢病毒测定滴度约为3×1011Tu/L。逆转录PCR和Western blot法均能检测Math1基因在感染病毒的293T细胞中的表达。结论成功构建携带Math1基因的重组慢病毒,并能在293T细胞中表达。 展开更多
关键词 MATH1 慢病毒 293T细胞
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胚胎大鼠海马源性神经干细胞的分离、培养、分化和鉴定 被引量：2
2
作者 潘松 付勇 +2 位作者 刘强 刘杰 刘立思 《陕西医学杂志》 CAS 2011年第1期3-6,共4页
目的:探讨胚胎大鼠海马源性神经干细胞(N SC)的分离、培养、分化和鉴定的方法。方法:机械分离出胚胎大鼠海马区细胞,以无血清培养基培养,再以血清培养基诱导其分化;在显微镜下观察其形态学特征,逆转录PCR(RT-PCR)和免疫荧光化学法检测... 目的:探讨胚胎大鼠海马源性神经干细胞(N SC)的分离、培养、分化和鉴定的方法。方法:机械分离出胚胎大鼠海马区细胞,以无血清培养基培养,再以血清培养基诱导其分化;在显微镜下观察其形态学特征,逆转录PCR(RT-PCR)和免疫荧光化学法检测神经干细胞和其诱导后细胞的表面标志物。结果:无血清培养基条件下培养的细胞在光镜下可见呈悬浮生长,易聚集成神经球,RT-PCR和免疫荧光化学法可检测到N SC表面标志物N estin的表达;经血清培养基诱导分化后,光镜下可见细胞呈贴壁生长,可见胞体呈树突状突起或呈梭形,RT-PCR和免疫荧光化学法可检测到星形胶质细胞的表面标志物GFAP和神经元细胞的表面标志物N SE的表达。结论:胚胎大鼠海马区分离的细胞具有N SC的特性,并能在含特定生长因子的无血清培养基保持其分化潜能,为进一步针对N SC的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 细胞分离 细胞培养 干细胞 海马 胚胎 大鼠
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腹腔镜肾囊肿去顶引流术20例疗效观察
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作者 刘强 《咸宁学院学报（医学版）》 2006年第6期510-511,共2页
关键词 肾囊肿去顶术 腹腔镜 去顶引流术 疗效观察
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胚胎大鼠神经干细胞的冷冻及复苏 被引量：2
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作者 付勇 潘松 +1 位作者 刘强 龚树生 《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期311-314,共4页
目的:研究胚胎大鼠神经干细胞(NSCs)冻存复苏后的存活率及再培养生长情况,观察低温冻存对NSCs生物特性的影响。方法:含有10%BSA及7.5%DMSO的NSCs无血清培养液(不含神经生长因子)作为冻存液,将利用无血清培养液体外培养的原代、第3代、第... 目的:研究胚胎大鼠神经干细胞(NSCs)冻存复苏后的存活率及再培养生长情况,观察低温冻存对NSCs生物特性的影响。方法:含有10%BSA及7.5%DMSO的NSCs无血清培养液(不含神经生长因子)作为冻存液,将利用无血清培养液体外培养的原代、第3代、第6代胚胎大鼠NSCs进行冻存,于1周、4周、8周、12周、16周分别复苏,计数活细胞比例并进行再培养、分化鉴定。结果:不同的细胞代数,不同的冻存时间对复苏后的细胞存活率都无明显影响。复苏后NSCs的存活率均达到60%～70%,并能分化为神经元和星型胶质细胞。结论:本实验成功地对胚胎大鼠NSCs进行了冻存复苏及再培养,为择期应用NSCs耳蜗内移植治疗感音神经性聋的实验研究奠定了基础。 展开更多
关键词 听觉丧失 感音神经性 神经干细胞 胚胎 冻存 复苏
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