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rhIL-13在毕氏酵母中的表达及生物学活性研究 被引量：2
1
作者 江阳 黄伟达 +3 位作者 时宏珍 张维延 周璇 张学光 《苏州医学院学报》 2001年第2期117-120,共4页
目的　在甲醇营养型毕氏酵母蛋白质表达系统中高效表达重组人白介素 - 13(rhIL - 13) ,便于进一步研究开发。方法　根据酵母对密码子的偏爱性设计并人工合成了人IL - 13编码基因片段 ,经T4DNA连接酶、PCR技术连接形成IL - 13cDNA全长序... 目的　在甲醇营养型毕氏酵母蛋白质表达系统中高效表达重组人白介素 - 13(rhIL - 13) ,便于进一步研究开发。方法　根据酵母对密码子的偏爱性设计并人工合成了人IL - 13编码基因片段 ,经T4DNA连接酶、PCR技术连接形成IL - 13cDNA全长序列 ;将其插入 pPICZαA质粒中 ,构建成 pPICZαA -IL - 13表达载体 ;该载体经SacI线形化后以电转化法导入GS115酵母菌株中 ,经YPD平板Zeocine抗性筛选获得IL - 13表达阳性菌株 ;用WesternBlotting和ELISA检测发酵上清中IL - 13的抗原性和表达量 ,B9-11细胞株分析其生物学活性。结果　15 %SDS -PAGE显示重组人IL - 13分子量约 13kd ,Western -blotting证实为人IL - 13,ELISA测定在摇瓶培养上清表达量达 15 μg/ml,其生物学活性同标准品一样具有剂量依赖性的刺激B9-11细胞株增殖的作用。结论　成功获得IL - 13人工基因和稳定分泌蛋白的基因工程菌株 ,该重组蛋白的生物学活性达到标准品的要求。 展开更多
关键词 rhIL-13 毕氏酵母 生物学活性 基因表达
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CD40分子在肺癌中的表达及其临床意义 被引量：5
2
作者 黄建安 顾冬梅 +2 位作者 庄羽美 康苏娅 张学光 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期645-647,共3页
目的　探讨CD4 0分子在肺癌中的表达及临床应用价值。方法　外科手术切除标本5 1例 ,采用免疫组织化学法检测肺恶性肿瘤组织中CD4 0分子的表达 ,并分析CD4 0表达水平高低与临床分期和病理分级的相关性。同时采用直接免疫荧光标记和流式... 目的　探讨CD4 0分子在肺癌中的表达及临床应用价值。方法　外科手术切除标本5 1例 ,采用免疫组织化学法检测肺恶性肿瘤组织中CD4 0分子的表达 ,并分析CD4 0表达水平高低与临床分期和病理分级的相关性。同时采用直接免疫荧光标记和流式细胞仪测定 10例新鲜肺癌和 4株肺癌细胞株膜表面CD4 0分子的表达率。结果　 (1)免疫组化结果显示CD4 0在肺癌组织中的阳性表达率为 76 5 % ,强阳性表达率 5 4 9% ,明显高于正常肺组织 (P <0 0 1)。 (2 )直接免疫荧光标记和流式细胞仪测定CD4 0分子在新鲜肺癌细胞和肺癌细胞株中的表达率分别为 1 6 %～ 71 0 %和2 1%～ 88 2 %。 (3)CD4 0阳性表达与肿瘤临床分期和淋巴结转移显著相关 (P <0 0 5 ) ,但与肺癌的病理组织学分级及病理类型等无明显相关 (P >0 0 5 )。结论　CD4 0在肺癌发病过程中可能起重要的作用 。 展开更多
关键词 CD40分子 肺癌 表达 免疫组化 流式细胞仪
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CD40配基化对肺癌细胞肿瘤坏死因子受体及其相关因子表达的影响 被引量：2
3
作者 黄建安 王天立 +2 位作者 王光杰 施勤 张学光 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期641-643,共3页
目的 探讨CD40配基化(CD40 ligation)对肺癌细胞株NCI-H460、A549、SPC-A-1的增殖以及对细胞肿瘤坏死因子受体(TNFR)和肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)表达谱的影响。方法 采用四氮唑盐(MTT)比色法检测CD40配体(CD40 ligand,CD40L)对肺... 目的 探讨CD40配基化(CD40 ligation)对肺癌细胞株NCI-H460、A549、SPC-A-1的增殖以及对细胞肿瘤坏死因子受体(TNFR)和肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)表达谱的影响。方法 采用四氮唑盐(MTT)比色法检测CD40配体(CD40 ligand,CD40L)对肺癌细胞增殖的影响,免疫荧光标记和流式细胞术测定细胞表面CD40的表达以及CD40配基化后细胞TNFR和TRAF表达的改变。结果(1)肺癌细胞株NCI-H460、A549和SPC-A-1表面CD40表达分别为(89.2±3.2)％、(42.2±4.5)％、(2.3±0.3)％。(2)CD40配基化后能显著抑制NCI-H460、A549细胞的增殖(P<0.05),而不抑制SPC-A-1的增殖(P>0.05)。(3)CD40配基化可上调NCI-H460、A549细胞TNFRⅠ的表达,下调TNFRⅡ的表达(P<0.05),而不影响SPC-A-1细胞TNFR的表达。(4)CD40配基化可下调NCI-H460、A549细胞中TRAF2、3、5、6的表达(P<0.05),而不影响SPC-A-1中TRAFs的表达。结论 CD40配基化可抑制CD40表达阳性细胞株NCI-H460、A549细胞的增殖,并可引起细胞TNFR、TRAF表达谱的改变,提示CD40信号对CD40表达阳性的肺癌细胞生物学行为具有重要调节作用。 展开更多
关键词 CD40 表达谱 NCI TNFR 配基 肺癌细胞 A549细胞 TRAF 增殖 肿瘤坏死因子受体
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耐药性卵巢癌中CX43和P-gp的检测 被引量：1
4
作者 孙志华 吴强 +3 位作者 冯继良 左连富 刘江惠 张学光 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期169-171,共3页
目的:探讨细胞间隙连接蛋白43(connexin43,CX43)和P糖蛋白(P鄄Glycoprotein,P鄄gp)与上皮性卵巢癌化疗疗效(耐药或敏感)及临床病理的关系。方法:在1999年1月至2003年6月间,从临床资料及随访资料完整的卵巢癌病例中,筛选出60例原发上皮... 目的:探讨细胞间隙连接蛋白43(connexin43,CX43)和P糖蛋白(P鄄Glycoprotein,P鄄gp)与上皮性卵巢癌化疗疗效(耐药或敏感)及临床病理的关系。方法:在1999年1月至2003年6月间,从临床资料及随访资料完整的卵巢癌病例中,筛选出60例原发上皮性卵巢癌(primaryepitheliaovariancarcinoma,PEOC)和6例正常卵巢的存档蜡块,作为研究对象。根据临床诊断将它们分为三组:化疗耐药组30例,化疗敏感组30例,正常卵巢组6例。这些病例术前均未接受过放疗,入院后均行全子宫和双附件切除+盆腔淋巴结清扫+阑尾切除+大网膜切除术,全部66例患者均有随访结果。用流式细胞术定量分析66例标本组织中CX43和P鄄gp蛋白的表达量。结果:①CX43蛋白的表达:化疗耐药组<化疗敏感组<正常卵巢组织,两两比较结果差异有统计学意义。②P鄄gp的表达:化疗耐药组>化疗敏感组>正常卵巢组织,差异均有统计学意义。结论:CX鄄43蛋白表达下降及P鄄gp蛋白的表达上升与上皮性卵巢癌的化疗耐药显著相关。 展开更多
关键词 卵巢癌 CX43 P-GP 流式细胞术 化学治疗
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一株抗重组人促红细胞生成素单克隆抗体杂交瘤的研制 被引量：1
5
作者 居颂光 朱华亭 +3 位作者 邱玉华 胡云龙 居颂文 张学光 《苏州医学院学报》 2000年第12期1098-1100,共3页
目的　研制特异性识别人促红细胞生成素的单克隆抗体 ,并对其生物学特性作出初步鉴定。方法　采用重组人促红细胞生成素 (rhEPO)为抗原 ,常规免疫BALB/c小鼠 ,经细胞融合、ELISA筛选、有限稀释亚克隆获得抗人EPO杂交瘤 ,以免疫印迹和快... 目的　研制特异性识别人促红细胞生成素的单克隆抗体 ,并对其生物学特性作出初步鉴定。方法　采用重组人促红细胞生成素 (rhEPO)为抗原 ,常规免疫BALB/c小鼠 ,经细胞融合、ELISA筛选、有限稀释亚克隆获得抗人EPO杂交瘤 ,以免疫印迹和快速Ig亚型分类对所获单抗作出初步鉴定。结果　经筛选获得 1株稳定分泌的抗rhEPO单抗的杂交瘤细胞株 (1D1)。亚型鉴定为IgG2b ,轻链为κ链 ,用Westernblot分析证实该单抗对rhEPO特异性识别。结论　成功获得 展开更多
关键词 重组人促红细胞生成素 单克隆抗体 抗贫血药
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IL-8在肝缺血再灌注损伤中的作用
6
作者 李德春 朱兴国 +1 位作者 刘继明 张学光 《苏州医学院学报》 2000年第12期1109-1111,共3页
目的　探讨IL - 8在中性粒细胞浸润引起的肝脏缺血再灌注损伤中的作用。方法　建立兔肝缺血再灌注的动物模型 ,于缺血再灌注过程中不同时间点采外周血 ,ELISA法测定IL - 8的浓度 ,同时于相应时间点取肝脏组织作普通病理切片 ,观察中性... 目的　探讨IL - 8在中性粒细胞浸润引起的肝脏缺血再灌注损伤中的作用。方法　建立兔肝缺血再灌注的动物模型 ,于缺血再灌注过程中不同时间点采外周血 ,ELISA法测定IL - 8的浓度 ,同时于相应时间点取肝脏组织作普通病理切片 ,观察中性粒细胞浸润情况 ,并对肝脏病理切片组织作IL - 8免疫组化分析。结果　在肝缺血再灌注肝脏组织中有中性粒细胞浸润和聚集 ,同时随着肝脏组织的破坏 ,引起肝功能损害 ,且在中性粒细胞浸润早期IL - 8免疫组化染色呈阳性反应。结论　在肝脏缺血再灌注过程中 ,由于肝脏组织中IL - 8对中性粒细胞的趋化作用 ,致中性粒细胞在肝脏实质内浸润 ,引起肝细胞破坏 ,释放出各种血清酶 ,从而导致肝脏功能的障碍。 展开更多
关键词 中性粒细胞 缺血再灌注 肝脏 IL-8
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2株重组弓形虫P30抗原单克隆抗体的制备和鉴定 被引量：2
7
作者 王际平 杨秋林 +3 位作者 蔡亮 张如胜 张愉快 邱玉华 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第5期344-346,共3页
目的制备重组P30抗原单克隆抗体,研究其生物活性。方法重组质粒pET28b-P30经BL21(DE3)表达,纯化、复性后免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备单克隆抗体。ELISA筛选阳性克隆,经亚克隆建株。体内诱生腹水法制备抗体,测定其亚类、效价,West... 目的制备重组P30抗原单克隆抗体,研究其生物活性。方法重组质粒pET28b-P30经BL21(DE3)表达,纯化、复性后免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备单克隆抗体。ELISA筛选阳性克隆,经亚克隆建株。体内诱生腹水法制备抗体,测定其亚类、效价,Western blot分析其特异性,双单抗夹心-ELISA测定其敏感度。双单抗夹心-ELISA法检测弓形虫感染鼠血清中的CAg。结果筛选出2株抗重组P30的单克隆抗体9D7、2H9,抗体重链分别为IgG2a、IgG1,轻链均为κ链,Western blot显示2株单抗均能识别弓形虫速殖体天然P30抗原。双单抗夹心-ELISA检测抗原量为0.5μg/ml;同法检测鼠血清中的CAg,感染第4、6、8 d的阳性率分别为20%、60%、60%。结论制备的P30抗原单克隆抗体具有较高的敏感性和特异性,为其应用研究打下了基础。 展开更多
关键词 重组P30抗原 杂交瘤技术 单克隆抗体 双单抗夹心-ELISA 循环抗原
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p53基因功能与肿瘤细胞辐射敏感性及其凋亡效应的研究
8
作者 施勤 张学光 +3 位作者 许志祥 徐颖 王静 强亦忠 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期428-430,共3页
目的　探讨6 0 Coγ射线对不同p5 3基因功能状态的人淋巴性恶性肿瘤细胞株 82 2 6和Raji凋亡相关基因Bcl xL、Bax的作用及其分子机理。方法　分别运用流式细胞仪技术 (FACS)、DNA片段释放法、RT PCR和MTT法 ,分析了 82 2 6、Raji中Bcl x... 目的　探讨6 0 Coγ射线对不同p5 3基因功能状态的人淋巴性恶性肿瘤细胞株 82 2 6和Raji凋亡相关基因Bcl xL、Bax的作用及其分子机理。方法　分别运用流式细胞仪技术 (FACS)、DNA片段释放法、RT PCR和MTT法 ,分析了 82 2 6、Raji中Bcl xL、Bax转录相对表达与辐照诱导的细胞凋亡率及抑制细胞增殖的关系。结果　 82 2 6和Raji在照射后Bcl xL、Bax转录表达均迅速上升 ,于 4～8h达到高峰 ,而后开始下降 ,于 2 4～ 48h恢复至辐照前水平 ;82 2 6中Bcl xL转录较Raji持续时间为长 ;且Bcl xL Bax的比率影响靶细胞辐照后的细胞凋亡和抑制细胞增殖。结论　肿瘤细胞株p5 3基因状态与辐射敏感性相关 ,两个等位基因突变的细胞株 82 2 6比一个等位基因突变的细胞株Raji更具辐射抗性 ,这种辐射抗性的不同与肿瘤细胞Bcl xL、Bax的表达及二者比率有关。 展开更多
关键词 P53基因 BCL-XL BAX 辐射敏感性 凋亡 肿瘤细胞
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人多发性骨髓瘤细胞syndecan-1的表达、分泌及调节 被引量：4
9
作者 李新燕 陆肇阳 +1 位作者 张学光 BKlein 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第11期572-576,共5页
目的　研究蛋白聚糖家族成员syndecan 1分子在人多发性骨髓瘤 (MM)细胞表面的表达和可溶型syndecan 1分子的分泌及其调节 ,以期探讨syndecan 1与人MM发生、发展的相关性。方法　用免疫荧光标记流式细胞仪分析人MM肿瘤细胞表面syndecan ... 目的　研究蛋白聚糖家族成员syndecan 1分子在人多发性骨髓瘤 (MM)细胞表面的表达和可溶型syndecan 1分子的分泌及其调节 ,以期探讨syndecan 1与人MM发生、发展的相关性。方法　用免疫荧光标记流式细胞仪分析人MM肿瘤细胞表面syndecan 1的表达 ;采用ELISA法检测人MM细胞培养上清可溶型syndecan 1的分泌水平。结果　①人MM细胞表面表达高水平的syndecan 1分子 ,随着肿瘤细胞的凋亡 ,细胞表面syndecan 1分子表达丢失 ;②大多数骨髓瘤细胞分泌可溶型syndecan 1分子 ,其分泌水平与细胞状态有关 ,而与膜表面syndecan 1分子的密度无关 ,而且可溶型syndecan 1的产生不依赖于血清的存在 ;③蛋白合成抑制剂放线菌酮抑制可溶型syndecan 1分子的产生 ,丝氨酸蛋白酶抑制剂antipain对syndecan 1分子的分泌无影响。结论　syndecan 1分子作为多种生长因子、细胞因子以及肝素样结合生长因子的受体 ,在MM的病理过程中 ,对于骨髓瘤细胞的生长。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 syndecan-1分子 膜型 可溶型
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