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CD80鼠-人嵌合抗体的CHO细胞表达及体外生物学功能的初步研究 被引量：10
1
作者 徐耀瑜 胡玲玲 +7 位作者 陈永井 程钢 罗先富 孙杰 刘玉华 王艳茹 陈明心 邱玉华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期114-117,共4页
目的:CHO细胞表达抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,并研究其在体外阻断CD80介导的共刺激信号转导的生物学功能。方法:构建含有嵌合重、轻链基因的表达载体pIRES/ch4E5;表达载体先转染293T细胞,FCM检测到ch4E5抗体的瞬时表达后,表达载体再转... 目的:CHO细胞表达抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,并研究其在体外阻断CD80介导的共刺激信号转导的生物学功能。方法:构建含有嵌合重、轻链基因的表达载体pIRES/ch4E5;表达载体先转染293T细胞,FCM检测到ch4E5抗体的瞬时表达后,表达载体再转染CHO细胞,构建稳定表达细胞株CHO-ch4E5;ProteinG亲和层析法从CHO-ch4E5细胞无血清培养上清中纯化ch4E5抗体,FCM检测ch4E5抗体对膜型CD80的识别;以丝裂霉素处理的正常人外周血单核细胞PBMCs为刺激细胞,以异体正常人外周血淋巴细胞PBLs为反应细胞,用MTT法分析ch4E5抗体的阻断作用。结果:ch4E5抗体在293T细胞的瞬时表达于48小时达到高峰,上清与L929-B7-1细胞结合率为96.0%;CHO-ch4E5细胞持续表达ch4E5抗体,其培养上清与L929-B7-1细胞结合率为95.7%;3天培养上清中,ch4E5抗体的产率约为5.56mg/L;ch4E5抗体和L929-B7-1、Daudi、Sub-T细胞结合率分别为94.1%、25.7%、23.5%;ch4E5抗体可以阻断CD80介导的共刺激信号转导,抑制异体PBLs的体外增殖。结论:在CHO细胞中成功表达了抗人CD80鼠-人嵌合抗体ch4E5,在体外该嵌合抗体具有亲本抗体阻断CD80介导的共刺激信号的生物学活性。 展开更多
关键词 CD80 嵌合抗体 瞬时表达 稳定表达 阻断作用
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两株抗人CD40配体单克隆抗体的制备及生物学特性的研究 被引量：8
2
作者 樊一笋 张学光 +2 位作者 邱玉华 朱华亭 於葛华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期388-391,共4页
目的 :研制功能性抗CD4 0L单克隆抗体 ,探讨其生物学特性及其运用价值。方法 :采用B淋巴细胞融合、免疫荧光、免疫印迹和竞争抑制等方法获得鼠抗人CD4 0LmAb ,通过Daudi细胞生长抑制试验、混合淋巴细胞反应观察抗CD4 0LmAb的生物学功能... 目的 :研制功能性抗CD4 0L单克隆抗体 ,探讨其生物学特性及其运用价值。方法 :采用B淋巴细胞融合、免疫荧光、免疫印迹和竞争抑制等方法获得鼠抗人CD4 0LmAb ,通过Daudi细胞生长抑制试验、混合淋巴细胞反应观察抗CD4 0LmAb的生物学功能。结果 :经表型分析、Westernblot和竞争抑制试验 ,证实mAbB1、mAb4F1是识别人CD4 0L分子的特异性单抗 ,且识别的位点不同 ;mAbB1、mAb4F1均能不同程度地拮抗CD4 0L TC介导的Daudi细胞生长抑制和抑制混合淋巴细胞反应。结论 :成功地获得两株能稳定分泌特异性抗人CD4 0L单克隆抗体的杂交瘤 (1B1、4F1) ,这两株单抗对CD4 0L的生物学功能具有明显的阻断作用 。 展开更多
关键词 生物学特性 CD40L 杂交瘤 单克隆抗体 DAUDI细胞 混合淋巴细胞反应
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肿瘤细胞冻融裂解物上清对凋亡细胞负载的树突状细胞生物学特性的作用研究 被引量：11
3
作者 古涛 朱一蓓 +6 位作者 李敏 黄勇 席泓 于葛华 戴俊 顾宗江 张学光 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期301-304,T003,共5页
目的 :探讨Balb/c小鼠骨髓瘤SP2 / 0细胞冻融裂解物上清对SP2 / 0凋亡细胞负载的骨髓来源的树突状细胞 (DC)的成熟、生物学特性及功能的影响。方法 :采用小鼠重组粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 (GM -CSF)和白介素 4(IL - 4)诱导骨髓来源... 目的 :探讨Balb/c小鼠骨髓瘤SP2 / 0细胞冻融裂解物上清对SP2 / 0凋亡细胞负载的骨髓来源的树突状细胞 (DC)的成熟、生物学特性及功能的影响。方法 :采用小鼠重组粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 (GM -CSF)和白介素 4(IL - 4)诱导骨髓来源的DC ,10 0Gyγ射线辐照诱导SP2 / 0细胞凋亡 ,与未成熟DC共育 16- 2 0h ;SP2 / 0细胞冻融裂解物上清和脂多糖 (LPS)分别作用于DC 48h。采用免疫荧光标记和流式细胞术分析DC表型 ;[3H] TdR掺入试验和 [51Cr]释放试验测定DC刺激T细胞增殖和细胞杀伤效应。采用腹股沟皮下DC主动免疫治疗SP2 / 0荷瘤小鼠 ,每间隔 14d治疗 1次 ,共 3个疗程 ,观察肿瘤生长情况及小鼠生存期。结果 :(1)经SP2 / 0冻融裂解物上清和脂多糖 (LPS)诱导凋亡肿瘤细胞负载的DC高表达共刺激分子CD40、CD80、CD86和MHC -Ⅱ分子 ,但抗原摄取能力均下降 ;(2 )SP2 / 0冻融裂解物上清组和LPS组DC体外刺激T细胞增殖和激活CTL能力均高于对照组 (P <0 0 5 ) ;(3 )经SP2 / 0冻融裂解物上清组主动免疫治疗小鼠存活期长于其它各组 (P <0 0 5 )。结论 :小鼠SP2 / 0细胞冻融裂解物上清可诱导凋亡细胞负载的树突状细胞成熟 ,能够刺激T细胞增殖和激发肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL) 。 展开更多
关键词 肿瘤细胞 冻融裂解物上清 凋亡细胞 树突状细胞 生物学特性
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鼠抗人B7-2单克隆抗体的研制及生物学特性研究 被引量：9
4
作者 陶然 石云杰 +7 位作者 孙中文 马泓冰 徐颖 程钢 孙玮丽 周立峰 邱玉华 张学光 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期203-207,共5页
以天然高表达膜型B7-2分子的人恶性B淋巴瘤经胞株Daudi和B7-2基因转染细胞株L929-B7-2为免疫原及检测细胞株,采用B细胞杂交瘤技术建立了1株稳定分泌抗人B7-2单抗的杂交瘤,命名为6A5。快速定性试纸法鉴定6A5属小鼠IgG1亚类。经体内诱生... 以天然高表达膜型B7-2分子的人恶性B淋巴瘤经胞株Daudi和B7-2基因转染细胞株L929-B7-2为免疫原及检测细胞株,采用B细胞杂交瘤技术建立了1株稳定分泌抗人B7-2单抗的杂交瘤,命名为6A5。快速定性试纸法鉴定6A5属小鼠IgG1亚类。经体内诱生腹水法制备单抗,小鼠腹水形成的阳性率为80%,腹水的收获量平均为5.9 ml/只小鼠。经免疫亲和层析法纯化,腹水中抗体蛋白的得率为1.1 mg/ml。采用间接免疫荧光法及流式细胞仪分析,单抗6A5与L929-B7-2、PBTC、Raji和Daudi的阳性结合率分别为99.9%、4.6%、90.6%和99.1%。将6A5(终浓度为5μg/ml)加入到Daudi细胞的培养体系中,经显微镜观察及MTT法分析,6A5对Daudi细胞的生长在24 h内具有抑制作用(P<0.05)。以丝裂霉素处理的L929-B7-2为刺激细胞,PBTC为反应细胞,加入6A5共同培养。经MTT法分析,6A5能阻断B7-2介导的协同刺激信号,抑制PBTC增殖(P<0.05)。提示6A5是一株功能性抗体,在B7-2分子相关的基础和应用研究中具有重要的价值。 展开更多
关键词 B7-2 基因转染细胞 协同刺激分子 单克隆抗体 腹水 抑制
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小鼠B7-H3-Fc融合蛋白的表达及其生物学活性的研究 被引量：6
5
作者 严茹红 张光波 +2 位作者 孙静 傅丰庆 张学光 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1067-1069,1074,共4页
目的:制备B7-H3-Fc融合蛋白,研究其对T细胞的共刺激作用。方法:首先采用PCR技术分别从pMD19-T/小鼠B7-H3和pMD19-T/hIgG1(Fc)重组载体中扩增出小鼠B7-H3胞外段基因和人IgG1重链Fc恒定区基因。通过重叠PCR技术将2段基因连接成B7-H3-Fc,经... 目的:制备B7-H3-Fc融合蛋白,研究其对T细胞的共刺激作用。方法:首先采用PCR技术分别从pMD19-T/小鼠B7-H3和pMD19-T/hIgG1(Fc)重组载体中扩增出小鼠B7-H3胞外段基因和人IgG1重链Fc恒定区基因。通过重叠PCR技术将2段基因连接成B7-H3-Fc,经EcoR I和BglII双酶切后插入真核表达载体pIRES2-EGFP构建成pIRES2-EG-FP/B7-H3-Fc重组载体。脂质体法转染CHO细胞,经G418加压筛选能稳定分泌表达小鼠B7-H3-Fc融合蛋白的基因转染细胞,并经Western blot鉴定。该转基因细胞无血清培养后,收集细胞上清、超滤浓缩后行经Protein G柱纯化,获得纯品B7-H3-Fc融合蛋白。通过CCK-8以及ELISA方法检测小鼠B7-H3-Fc融合蛋白对T细胞体外增殖及细胞因子分泌的影响。结果:成功地构建了能稳定表达B7-H3-Fc融合蛋白基因的CHO转基因细胞株,该融合蛋白能够剂量依赖性地促进T细胞体外增殖及IL-2和IFN-γ等细胞因子分泌。结论:本研究提示B7-H3作为重要的共刺激分子,在调节T细胞免疫应答中发挥了正性共刺激作用。 展开更多
关键词 B7-H3 融合蛋白 小鼠 T细胞 协同刺激分子
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可溶性CD40配体对肺癌细胞A549的生物学作用及其机制研究 被引量：9
6
作者 王天立 黄建安 +3 位作者 於葛华 毛一香 王光杰 张学光 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第11期1278-1282,共5页
背景与目的:尽管对CD40分子在B细胞中的功能已有深入的研究,但CD40在肺癌细胞中的功能目前知之甚少。本研究旨在探讨可溶性CD40配体(solubleCD40ligand,sCD40L)对肺癌细胞株A549(CD40表达阳性细胞株)的生物学作用及其相关机制。方法:采... 背景与目的:尽管对CD40分子在B细胞中的功能已有深入的研究,但CD40在肺癌细胞中的功能目前知之甚少。本研究旨在探讨可溶性CD40配体(solubleCD40ligand,sCD40L)对肺癌细胞株A549(CD40表达阳性细胞株)的生物学作用及其相关机制。方法:采用四氮唑盐(MTT)比色、3H标记胸腺脱氧嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法检测sCD40L对A549细胞增殖的影响,免疫荧光标记和流式细胞术测定细胞表型及细胞周期的改变,流式细胞术、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及Westernblot分析测定sCD40L对A549细胞凋亡的影响及Bcl-2、Bax基因表达的变化。结果:(1)sCD40L可抑制A549细胞的增殖(与对照组比较P<0.05)。(2)sCD40L作用72h后,A549细胞表面CD49e、CD54、TNFRⅠ及CD95L的表达犤分别为(61.2±4.8)%,(31.2±6.1)%,(42.7±5.9)%,(38.2±3.4)%犦较对照组犤分别为(34.7±2.1)%,(7.1±1.6)%,(15.2±4.1)%,(10.1±2.3)%犦明显升高,而TNFRⅡ的表达犤(8.7±0.8)%犦较对照组犤(58.1±3.6)%犦下降。(3)sCD40L作用72h后,A549细胞G1期细胞比例犤(76.0±9.1)%犦较对照组犤(56.7±6.9)%犦增加,S期细胞比例犤(10.3±5.7)%犦较对照组犤(32.7±5.5)%犦减少。(4)sCD40L在短期(72h)内并不引起A549细胞明显凋亡,但可上调Bax的表达。 展开更多
关键词 CD40-CD40配体 肺肿瘤 流式细胞术
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5株鼠抗人CD28单克隆抗体的研制及生物学特性的研究 被引量：11
7
作者 孙中文 陶然 +4 位作者 陆艳红 石云杰 於葛华 邱玉华 张学光 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期406-410,共5页
目的:制备鼠抗人CD28分子功能性单克隆抗体,研究其对T细胞活化、增殖及信号转导等方面的生物学效应。方法:以天然高表达CD28分子的人多发性骨髓瘤细胞株U266和小鼠淋巴瘤细胞转人CD28基因细胞株CD28-T分别作为免疫原和检测细胞株,采用B... 目的:制备鼠抗人CD28分子功能性单克隆抗体,研究其对T细胞活化、增殖及信号转导等方面的生物学效应。方法:以天然高表达CD28分子的人多发性骨髓瘤细胞株U266和小鼠淋巴瘤细胞转人CD28基因细胞株CD28-T分别作为免疫原和检测细胞株,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行单抗的研制;以快速定性试纸法鉴定单抗亚类;腹水诱生法和免疫亲和层析法进行单抗的制备和纯化;经间接免疫荧光法分析单抗对不同细胞膜表面CD28分子的识别;采用竞争抑制法分析单抗识别的抗原位点;利用3H-TdR掺入法分析单抗对PBTC的刺激效应和免疫荧光法分析PBTC活化前后的表型变化。结果:成功获得5株鼠抗人CD28功能性单克隆抗体,分别命名为2D5、2F5、3B6、3F8和8G8,其中2D5为IgG2a亚类,其余均为IgG1亚类;流式细胞仪分析结果显示,5株单抗均能良好识别CD28-T、U266、XG1和Jurkat细胞表面的CD28分子;竞争抑制试验表明,2D5和8G8能完全阻断标准抗人CD28单抗与U266膜CD28分子的结合,其余3株为部分阻断;3H-TdR掺入法实验结果表明,单抗8G8联合激发型CD3单抗能明显促进PBTC的增殖,刺激指数为7.4,活化细胞CD4、CD25、ICOS、41BB及OX40分子的表达上调。结论:5株单抗均为抗人CD28单克隆抗体,具有重要的基础研究及潜在的临床应用价值。 展开更多
关键词 CD28 杂交瘤 单克隆抗体 增殖效应 协同刺激分子
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肺癌患者外周血树突状细胞的生物学特性研究 被引量：4
8
作者 黄建安 朱一蓓 +4 位作者 古涛 席泓 王天立 戴俊 张学光 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2003年第3期175-179,共5页
目的 :探讨肺癌患者外周血来源的树突状细胞 (dendriticcells,DC)生物学特性。方法 :从肺癌患者外周血分离获得单个核细胞 ,用细胞因子GM CSF (10 0 μg/L) ,IL 4 (5 0 μg/L)体外培养诱导。凋亡肿瘤细胞负载 2 4h后加入TNF α(10μg/L)... 目的 :探讨肺癌患者外周血来源的树突状细胞 (dendriticcells,DC)生物学特性。方法 :从肺癌患者外周血分离获得单个核细胞 ,用细胞因子GM CSF (10 0 μg/L) ,IL 4 (5 0 μg/L)体外培养诱导。凋亡肿瘤细胞负载 2 4h后加入TNF α(10μg/L)或CD4 0激发型单抗于培养DC中 ,继续诱导 3～ 4d。分别测定DC的表型、DC摄取抗原能力 ;混合淋巴细胞反应(MLR)对T细胞增殖能力的测定 ;细胞计数和3 H TdR掺入观察DC对T细胞的激发和扩增效应 ,并与健康志愿者外周血来源的DC进行比较。结果 :患者外周血单个核细胞和正常人外周血单个核细胞来源的DC均高表达CD1α ,CD83,CD80 ,CD86和HLA DR等DC的相关抗原和共刺激分子 ;患者的未成熟DC能有效摄取FITC Dextran ,经TNF α或CD4 0激发型单抗激发诱导后 ,成为成熟和有功能的DC ,几乎完全失去对抗原的摄取能力 ,与健康人外周血来源DC组相比无明显差别 (P >0 .0 5 ) ;患者单个核细胞来源的DC在体外具有激发自体和同种异体外周血T细胞增殖的能力。结论 :肺癌患者的外周血来源单个核细胞可以诱导成为具有功能的成熟DC。 展开更多
关键词 肺癌 树突状细胞 外周血单个核细胞 CD40
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人B7-H3基因转染及其生物学功能的研究 被引量：9
9
作者 张光波 陈永井 +6 位作者 姜智 於葛华 杨明峰 施勤 王勤 李文香 张学光 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期455-459,共5页
B7 H3是新近发现的B7家族新成员。为探讨其体外生物学功能及单克隆抗体的研制构建了B7 H3基因转染细胞。利用PCR的方法扩增出B7 H3基因 ,继而插入逆转录病毒载体pGEZ Term ,重组逆转录病毒载体与两个辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞... B7 H3是新近发现的B7家族新成员。为探讨其体外生物学功能及单克隆抗体的研制构建了B7 H3基因转染细胞。利用PCR的方法扩增出B7 H3基因 ,继而插入逆转录病毒载体pGEZ Term ,重组逆转录病毒载体与两个辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞 2 93T ,经用含有完整病毒颗粒的 2 93T细胞的培养上清感染L92 9细胞 ,Zeocin筛选获得B7 H3的基因转染细胞。RT PCR、Westernblot和流式细胞仪表型分析等方法鉴定表明 ,B7 H3/L92 9基因转染细胞能稳定表达人B7 H3蛋白。继而基因转染细胞对T细胞体外培养试验显示该基因转染细胞与T细胞共培养可抑制其体外增殖。ELISA法分析表明该基因转染细胞抑制活化T细胞IFN γ及IL 10的分泌。CD2 8信号可以逆转B7 H3对活化T细胞的抑制效应。综上结果证实 ,B7 H3对体外活化的T细胞具有负性调控作用。 展开更多
关键词 B7-H3 基因转染 共刺激分子
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一株抗人BLys单克隆抗体的制备及其生物学功能研究 被引量：6
10
作者 徐海燕 马泓冰 +5 位作者 徐颖 刘琳 於葛华 胡玉敏 邱玉华 张学光 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期35-40,共6页
研究以稳定高表达BLys的基因转染细胞L-BLys为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,L-BLys细胞和天然表达BLys的HL60细胞为抗体筛选阳性细胞株,经免疫荧光标记分析反复筛选和以有限稀释法反复克隆化培养。... 研究以稳定高表达BLys的基因转染细胞L-BLys为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,L-BLys细胞和天然表达BLys的HL60细胞为抗体筛选阳性细胞株,经免疫荧光标记分析反复筛选和以有限稀释法反复克隆化培养。将获得的克隆4F7培养细胞注射入经致敏的小鼠体内,-抽取的腹水经Protein G亲和层析柱纯化。将纯化所得的抗体作用于经BLys分子刺激的扁桃体B细胞,3H-TdR检测细胞的增殖效率。结果获得1株持续、稳定分泌鼠抗人BLys单克隆抗体的杂交瘤细胞株。该细胞株所分泌的抗体能阻断膜型和可溶性BLys分子对扁桃体B细胞的促增殖作用。对这株单克隆抗体生物学功能的研究表明,这株单抗能特异性识别人BLys分子及阻断膜型和可溶性BLys发挥生物学活性。 展开更多
关键词 BLYS 杂交瘤 单克隆抗体 扁桃体B细胞
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人PD-L1Ig融合蛋白的表达及其生物学活性的研究 被引量：5
11
作者 陈永井 姜智 +5 位作者 张光波 毛一香 瞿秋霞 葛彦 杨明峰 张学光 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期449-454,共6页
为获取人PD L1Ig融合蛋白 ,研究其对T细胞的调节效应 ,采用PCR法从pMD18 T/PD L1中扩增出人PD L1基因的胞外段序列 ,从人脾脏细胞中扩增出人IgG1Fc恒定区基因 ,两者拼接后插入逆转录病毒载体pEGZ Term ,用脂质体法与两个辅助病毒载体共... 为获取人PD L1Ig融合蛋白 ,研究其对T细胞的调节效应 ,采用PCR法从pMD18 T/PD L1中扩增出人PD L1基因的胞外段序列 ,从人脾脏细胞中扩增出人IgG1Fc恒定区基因 ,两者拼接后插入逆转录病毒载体pEGZ Term ,用脂质体法与两个辅助病毒载体共转染 2 93T包装细胞 ,用含病毒颗粒的培养上清反复感染L92 9细胞 ,Zeocin筛选能稳定分泌人PD L1Ig蛋白的基因转染细胞并亚克隆之 ,经无血清培养 ,收集的上清用Dotblot检测、ELISA定量后 ,浓缩并经ProteinG柱纯化 ,再经Westernblot鉴定。以FACS分析纯化蛋白对活化T细胞表达的PD 1结合能力 ,以体外T细胞活化体系观察其对T细胞表型的调节作用。结果表明 ,成功地构建了表达人PD L1Ig蛋白的重组逆转录病毒载体 ;获得的L92 9/PD L1Ig细胞能稳定分泌人PD L1Ig蛋白 ;该蛋白与PD 1受体具有良好的结合能力 ,能抑制T细胞的进一步活化。 展开更多
关键词 PD-1 PD-L1 TP-PCR 稳定表达 抑制
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胎盘间充质干细胞样细胞的培养及生物学特性的实验研究 被引量：8
12
作者 薛群 张学光 +6 位作者 苗宗宁 华军 曲静 王明元 施勤 陈永井 方振羊 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2005年第2期188-192,244,共6页
目的　本研究拟从胎盘组织中分离培养获得间充质干细胞(placentaderivedmesenchymalstemcells,PMSCs) ,研究其生物学特性,探讨其在移植治疗方面的可行性。方法　将胎盘组织经胶原酶消化和贴壁培养获得的基质细胞,用免疫荧光标记和免疫... 目的　本研究拟从胎盘组织中分离培养获得间充质干细胞(placentaderivedmesenchymalstemcells,PMSCs) ,研究其生物学特性,探讨其在移植治疗方面的可行性。方法　将胎盘组织经胶原酶消化和贴壁培养获得的基质细胞,用免疫荧光标记和免疫细胞化学检测细胞表型,用活细胞记数和碘化丙啶(propidiumiodide,PI)检测其增殖能力,用叔丁对甲氧酚(butylatedhydroxyanisole ,BHA)、N2 培养基等对培养的细胞分别向神经和脂肪方向诱导分化,继而采用免疫细胞化学等方法对分化的细胞进行鉴定。结果　由胎盘组织中分离获得了一群具有与骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells ,BMSCs)相似的形态和细胞表面标志的细胞:该群细胞增殖能力强;表达CD2 9、CD4 4、CD10 5 (SH2 )、ASMA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原以及免疫应答负性调控分子PDL 1,但不表达CD11b、CD34、CD4 5、CD19、CD10 6 (VCAM 1)、CD117、HLA DR、vWF、MySM、HLA DR ,以及免疫应答正性调控分子CD4 0、CD4 0L、CD2 8、CD80和CD86 ;可诱导表达神经元标志神经微丝(neurofila ment,NF)和星型胶质细胞标志胶质纤维酸性蛋白(glialfibrilamentacidicprotein ,GFAP) ,并且这些细胞表达神经干细胞标志巢蛋白(nestin) ,向脂肪分化的细胞苏丹Ⅲ染色阳性。结论　本实验中获? 展开更多
关键词 胎盘 间充质干细胞
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转染人BTLA基因细胞株的建立及其生物学功能的初步研究 被引量：1
13
作者 王雪峰 陈永井 +4 位作者 王勤 杨科芳 代群 王凤鸣 张学光 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期201-204,共4页
目的:构建B、T淋巴细胞衰减子(BTLA)基因转染的细胞作为免疫原,并探讨该基因转染细胞在体外的生物学功能。方法:通过RT-PCR法从经PHA活化的人外周血T细胞中克隆出人BTLA编码区全长基因,经EcoR I和BamHI双酶切后插入逆转录病毒载体pEGZ-T... 目的:构建B、T淋巴细胞衰减子(BTLA)基因转染的细胞作为免疫原,并探讨该基因转染细胞在体外的生物学功能。方法:通过RT-PCR法从经PHA活化的人外周血T细胞中克隆出人BTLA编码区全长基因,经EcoR I和BamHI双酶切后插入逆转录病毒载体pEGZ-Term中构建成重组载体pEGZ-Term/BTLA。用脂质体法以重组逆转录病毒载体转染293T细胞,并用Zeocin抗生素进行长期筛选;流式细胞术分析BTLA在基因转染细胞膜上的表达;通过MTT法和流式细胞术探讨基因转染细胞在体外对T淋巴细胞增殖与活化的影响。结果:流式细胞术检测表明BTLA基因转染的293T细胞膜上能稳定地高表达人BTLA蛋白。BTLA基因转染的293T细胞和T细胞体外共培养显示,与未转染的293T细胞相比,该基因转染的细胞能部分地抑制抗人CD3单克隆抗体(mAb)刺激的T细胞增殖;流式细胞术和ELISA法分析揭示,该基因转染的细胞能够下调T细胞表面活化标志CD25的表达并降低IFN-γ和IL-10的分泌。结论:获得稳定高表达人BTLA基因转染的细胞株。该细胞株在体外对抗人CD3 mAb刺激的T细胞的增殖与活化具有部分地抑制作用。 展开更多
关键词 B、T淋巴细胞衰减子 基因转染 T细胞 增殖
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转染人CXCR4细胞株的构建及其生物学功能的研究 被引量：1
14
作者 周时勇 杨明峰 +3 位作者 王雪峰 于葛华 成中芹 张学光 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期427-429,432,共4页
目的:构建稳定表达人CXCR4基因的L929细胞株,分析CXCR4分子对转基因细胞迁移能力的影响。方法:TRIzol一步法抽提人外周血单个核细胞(PBMC)总RNA,RT-PCR扩增出CXCR4基因,双酶切装入逆转录病毒载体pEGZ-Term,与辅助病毒载体用脂质体法共... 目的:构建稳定表达人CXCR4基因的L929细胞株,分析CXCR4分子对转基因细胞迁移能力的影响。方法:TRIzol一步法抽提人外周血单个核细胞(PBMC)总RNA,RT-PCR扩增出CXCR4基因,双酶切装入逆转录病毒载体pEGZ-Term,与辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T,用其培养上清感染L929细胞72h后,经Zeocin筛选出稳定表达CXCR4分子的L929细胞株;利用微孔隔离小室检测转人CXCR4基因的L929细胞在SDF-1α作用下的迁移能力。结果:构建含CXCR4基因的重组逆转录病毒载体,经转染包装细胞293T后,筛选获得能稳定高表达人CXCR4蛋白的L929转基因细胞,转入人CXCR4基因的L929细胞在SDF-1α作用下介导迁移。结论:成功构建转染人CXCR4细胞株,为肿瘤迁移模型的研究和鼠抗人CXCR4mAb的制备打下基础。 展开更多
关键词 CXCR4 逆转录病毒 稳定表达 迁移
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人4-1BB转基因细胞的构建及体外生物学功能的研究 被引量：2
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作者 董秋明 张光波 +2 位作者 徐颖 陈永井 张学光 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第1期48-52,共5页
目的构建人共刺激分子4-1BB转基因细胞并探讨4-1BB的体外生物学功能。方法利用RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞总RNA中克隆出人4-1BB基因,经双酶切装入逆转录病毒载体pGEZ-Term中,重组逆转录病毒载体4-1BB/pGEZ-Term与两个辅助病毒载体用... 目的构建人共刺激分子4-1BB转基因细胞并探讨4-1BB的体外生物学功能。方法利用RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞总RNA中克隆出人4-1BB基因,经双酶切装入逆转录病毒载体pGEZ-Term中,重组逆转录病毒载体4-1BB/pGEZ-Term与两个辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T,用含有完整病毒颗粒的293T细胞的培养上清感染重新铺板的293T细胞,加入Zeocin选择性培养基进行筛选。经RT-PCR、Western blot、流式细胞仪表型检测等方法鉴定转基因细胞;3H-TdR掺入法分析转基因细胞对T细胞的作用;DCs培养过程中,加入转基因细胞与激发型CD40单抗5C11,流式细胞仪分析DCs表面分子CD80、CD83和CD86的表达。结果成功构建了能稳定表达人4-1BB蛋白的转基因细胞4-1BB/293T,该转基因细胞与T细胞共培养可抑制其体外增殖,可协同5C11促进DCs的体外成熟,上调DCs表面分子CD80、CD83和CD86的表达。结论稳定表达4-1BB蛋白的转基因细胞株的建立为该基因功能的后续研究和单克隆抗体的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 4-1BB 基因转染 共刺激分子 T细胞 DCS
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人4IgB7-H3-Fc融合蛋白的表达及其生物学活性的研究 被引量：1
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作者 马震宇 周迎会 +7 位作者 陈永井 费敏 马珍妮 王勤 王雪峰 马泓冰 谢芳 张学光 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期109-114,共6页
为获得人4IgB7-H3-Fc融合蛋白,研究其对T细胞的共刺激作用,采用PCR技术分别从pMD18-T/4IgB7-H3和pMD18-T/hIgG1(Fc)重组载体中扩增出人4IgB7-H3胞外段基因和人IgG1重链Fc恒定区基因,通过RT-PCR技术插入逆转录病毒载体pGEZ-Term,重组逆... 为获得人4IgB7-H3-Fc融合蛋白,研究其对T细胞的共刺激作用,采用PCR技术分别从pMD18-T/4IgB7-H3和pMD18-T/hIgG1(Fc)重组载体中扩增出人4IgB7-H3胞外段基因和人IgG1重链Fc恒定区基因,通过RT-PCR技术插入逆转录病毒载体pGEZ-Term,重组逆转录病毒载体与两个辅助病毒载体经脂质体法共转染包装细胞293T,收集含有完整病毒颗粒的293T细胞的培养上清反复感染L929细胞,利用Zeocin筛选获得能稳定分泌4IgB7-H3-Fc融合蛋白的基因转染细胞。基因转染细胞经无血清培养后,收集的上清用Dot blot检测,超滤浓缩并经Protein G柱纯化,再用SDS-PAGE、Western blot鉴定。以4IgB7-H3-Fc蛋白检测活化T细胞表面未知受体的表达,通过MTT方法分析4IgB7-H3-Fc融合蛋白对T细胞的共刺激作用。结果显示,成功地构建了pEGZ-Term/4IgB7-H3-Fc重组逆转录病毒载体,经转染包装细胞293T后,筛选获得能稳定分泌4IgB7-H3-Fc蛋白的L929基因转染细胞株;纯化后的4IgB7-H3-Fc蛋白能够与活化T细胞表面结合,并对T细胞有显著的促增殖作用。为探讨人4IgB7-H3-Fc融合蛋白对T细胞的共刺激作用和寻找其未知受体奠定良好的物质基础。 展开更多
关键词 4IgB7-H3 RT-PCR基因转染 融合蛋白 共刺激
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两株新的鼠抗人OX40L单克隆抗体的研制及其生物学功能的初步研究 被引量：1
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作者 吴鸿雅 王勤 +4 位作者 陈永井 谢芳 毛一香 刘高勤 张学光 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期757-760,共4页
目的:鼠抗人OX40L分子功能性单克隆抗体(mAb)的研制及其生物学特性的鉴定。方法:以高表达人OX40L分子的基因转染细胞L929/OX40L为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,经流式细胞术(FCM)分析和多次克隆化培... 目的:鼠抗人OX40L分子功能性单克隆抗体(mAb)的研制及其生物学特性的鉴定。方法:以高表达人OX40L分子的基因转染细胞L929/OX40L为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,经流式细胞术(FCM)分析和多次克隆化培养,筛选出特异分泌鼠抗人OX40L分子mAb的杂交瘤细胞株;采用Westernblot、Ig亚型快速定性试纸法、染色体核型分析、竞争结合抑制试验、间接免疫荧光法和MTT增殖试验等对单抗的生物学特性进行鉴定。结果:获得2株持续、稳定分泌鼠抗人OX40LmAb的杂交瘤细胞株,分别命名为4D6和5C2。对mAb生物学功能的研究结果表明,2株mAb均能识别成熟DC细胞以及Jurkat、SHI-1、U937等白血病细胞株表面的OX40L分子。对其中SHI-1白血病细胞株增殖影响的实验显示,这2株抗体对SHI-1的增殖都具有一定的抑制作用。结论:成功地获得了2株鼠抗人OX40L功能性mAb杂交瘤,其所分泌的抗体能特异地识别人OX40L分子,并影响表达OX40白血病细胞株的体外增殖,为进一步研究OX40/OX40L的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 OX40L 共刺激信号 杂交瘤 单克隆抗体 白血病
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人CD133基因转染细胞株的建立及其生物学功能的初步研究 被引量：2
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作者 汪家敏 陈永井 +3 位作者 张光波 李芳 胡玉敏 张学光 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期1-4,共4页
目的:构建人干细胞标记分子CD133-2转基因细胞并探讨CD133-2分子的生物学功能。方法:利用分段克隆和重叠PCR方法从人胎肝cDNA文库中克隆出人CD133-2全长基因,经双酶切后装入真核表达载体p IRES2-EGFP中,用脂质体法转染L929细胞,加入G41... 目的:构建人干细胞标记分子CD133-2转基因细胞并探讨CD133-2分子的生物学功能。方法:利用分段克隆和重叠PCR方法从人胎肝cDNA文库中克隆出人CD133-2全长基因,经双酶切后装入真核表达载体p IRES2-EGFP中,用脂质体法转染L929细胞,加入G418选择性培养基进行筛选。经RT-PCR、Western blot、流式细胞术(FCM)等方法鉴定转基因细胞;MTT法分析转基因细胞对T细胞的体外增殖作用;流式细胞仪分析T细胞表面活化分子标记CD4CD25、CD8CD25的表达。结果:成功克隆和构建了能稳定表达人CD133-2分子的转基因细胞CD133-2/L929,该转基因细胞与T细胞共培养可抑制其体外增殖,下调T细胞表面分子CD4CD25和CD8CD25的表达。结论:稳定表达CD133-2蛋白的转基因细胞株的建立为该基因功能的后续研究奠定了物质基础。 展开更多
关键词 CD133 基因转染 肿瘤干细胞 T细胞
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人4-1BBL转基因细胞株的构建及其生物学功能的研究 被引量：1
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作者 居颂文 居颂光 +5 位作者 仇红霞 胡玉敏 王凤鸣 王明元 王勤 张学光 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第4期539-542,共4页
目的为探讨人4-1BBL分子的生物学功能,构建人4-1BBL转基因细胞株。方法利用RT-PCR方法克隆人4-1BBL全长基因,继而重组入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term。重组逆转录病毒载体pEGZ-Term/4-1BBL与两个辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞29... 目的为探讨人4-1BBL分子的生物学功能,构建人4-1BBL转基因细胞株。方法利用RT-PCR方法克隆人4-1BBL全长基因,继而重组入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term。重组逆转录病毒载体pEGZ-Term/4-1BBL与两个辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T,用含有完整重组逆转录病毒颗粒的293T细胞培养上清感染L929细胞,筛选获得Zeocin抗性的转基因细胞。3H-TdR掺入实验分析4-1BBL转基因细胞对T细胞增殖的影响,ELISA法分析细胞因子的分泌。结果流式细胞仪表型分析结果表明,L929/4-1BBL转基因细胞稳定表达人4-1BBL分子。体外实验表明,L929/4-1BBL细胞能够促进T细胞活化、增殖及IL-2、IL-6和IFN-γ的分泌。结论该研究成功克隆了人4-1BBL基因,构建了能稳定表达4-1BBL分子的转基因细胞株L929/4-1BBL,该株转基因细胞能提供有效的4-1BBL共刺激信号,促进T细胞活化、增殖及细胞因子的分泌。 展开更多
关键词 4-1BBL 转基因细胞 T细胞
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人OX40L在BL-21大肠杆菌中的表达和生物学功能研究
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作者 施勤 陈永井 +4 位作者 孙建军 马泓冰 姜智 毛一香 张学光 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期163-167,171,共6页
目的克隆和表达人可溶性OX40L重组蛋白(sOX40L),探讨OX40L信号在T细胞对乳腺癌细胞反应中的协同刺激效应。方法运用基因工程技术在大肠杆菌中表达人重组融合蛋白GSTsOX40L,Westernblot分析表达蛋白的特异性;采用体外T细胞和乳腺癌细胞... 目的克隆和表达人可溶性OX40L重组蛋白(sOX40L),探讨OX40L信号在T细胞对乳腺癌细胞反应中的协同刺激效应。方法运用基因工程技术在大肠杆菌中表达人重组融合蛋白GSTsOX40L,Westernblot分析表达蛋白的特异性;采用体外T细胞和乳腺癌细胞混合培养体系,观察对T细胞生长和增殖的影响。结果构建了GSTsOX40L原核表达体系,从而进行重组蛋白的有效表达;纯化的重组蛋白通过免疫印迹分析能被特异性单抗识别,并在体外培养体系中显示出协同刺激T细胞对乳腺肿瘤细胞的反应性促进T细胞生长、增殖以及IL2的分泌。结论成功地研制了具有生物学活性的sOX40L,为体外激发肿瘤特异性T细胞提供良好的物质基础。 展开更多
关键词 OX40L BL-21大肠杆菌 表达 生物学功能
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