自噬在胃癌干细胞中的作用及研究进展

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作者 田恒金 汪非凡 +3 位作者 高培垚 陈阿敏 王娜 张强 《中国现代医生》 2024年第6期120-123,共4页

胃癌干细胞(gastric cancer stem cell,GCSC)是一组异质细胞,具有自我更新能力,并具有多重分化、迁移、转移和耐药性的潜力。GCSC的来源可能与胃干细胞的来源密切相关,它在胃癌的发生、发展中起着重要作用。细胞自噬是由自噬相关基因严... 胃癌干细胞(gastric cancer stem cell,GCSC)是一组异质细胞,具有自我更新能力,并具有多重分化、迁移、转移和耐药性的潜力。GCSC的来源可能与胃干细胞的来源密切相关,它在胃癌的发生、发展中起着重要作用。细胞自噬是由自噬相关基因严格调控的细胞内稳态过程,是细胞应对饥饿、缺氧和放/化疗等各种细胞应激的生物大分子分解过程。它涉及细胞内蛋白质、复合物或自噬体中的细胞器。越来越多的研究发现自噬与维持肿瘤干细胞的干性及与肿瘤的发生密切相关。 展开更多

关键词 细胞自噬 胃癌干细胞 胃癌 蛋氨酸

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Cbl-b基因和血小板参数在免疫性血小板减少症病人中的表达及临床意义

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作者 张丹 吴冬会 +3 位作者 傅磊 陆尧 王科 李玉云 《蚌埠医学院学报》 CAS 2023年第10期1412-1416,共5页

目的:检测Cbl-b基因和血小板参数在原发免疫性血小板减少症(ITP)病人外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达情况,并研究其临床意义。方法:选取68例初诊的ITP病人(ITP组)和同期40名健康的体检者(对照组)为研究对象,检测并比较2组间Cbl-b mRNA... 目的:检测Cbl-b基因和血小板参数在原发免疫性血小板减少症(ITP)病人外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达情况,并研究其临床意义。方法:选取68例初诊的ITP病人(ITP组)和同期40名健康的体检者(对照组)为研究对象,检测并比较2组间Cbl-b mRNA的相对表达量和血小板参数血小板计数(PLT)、平均血小板体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)和大血小板比率(P-LCR)的差异,分析ITP组病人不同亚组分组间Cbl-b mRNA表达的差异以及其与部分临床指标的相关性,分别采用logistic回归和ROC曲线分析发生ITP的影响因素以及其对ITP的诊断价值。结果:ITP组Cbl-b mRNA的表达和PLT低于对照组,MPV、PDW和P-LCR高于对照组(P<0.01)。Cbl-b mRNA的表达随着血小板分级增高而增高,出血评分<2分组的Cbl-b mRNA的表达量高于出血评分≥2分组(P<0.05~P<0.01)。Cbl-b mRNA的表达与PLT呈正相关关系(P<0.01),与出血评分、MPV和P-LCR均呈负相关关系(P<0.05~P<0.01)。logistic回归分析表明Cbl-b mRNA低表达(OR=17.525,95%CI:2.589~118.637)、MPV升高(OR=2.515,95%CI:1.506~4.200)和P-LCR升高(OR=1.211,95%CI:1.067~1.376)可能是ITP发生的独立危险因素(P<0.01)。ROC曲线分析显示Cbl-b mRNA、MPV、P-LCR及三者联合预测发生ITP的AUC分别是0.920、0.899、0.883和0.972,联合检测的预测AUC均高于单项检测。结论:ITP病人PBMCs中Cbl-b基因表达降低,MPV和P-LCR升高,Cbl-b与出血评分、PLT、MPV和P-LCR有一定的相关性,三者的异常表达是发生ITP的危险因素,联合检测三者对于是否发生ITP具有较高预测价值。 展开更多

关键词 免疫性血小板减少症 CBL-B 血小板参数 危险因素

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SATB1通过PI3K/Akt信号通路在哌立福新对胃癌失巢凋亡抵抗细胞作用机制中的研究 被引量：5

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作者 秦玉萍 高迎新 +3 位作者 马熙萌 杜瑶 王新 禹莉(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期273-281,共9页

目的:探讨人胃癌细胞失巢凋亡抵抗的机制,研究哌立福新对胃癌细胞凋亡抵抗的可能治疗作用以及SATB1通过PI3K/Akt信号通路在哌立福新对胃癌失巢凋亡抵抗细胞中的作用机制。方法:在超低黏附条件下培养胃癌AGS亲本细胞,建立AGS细胞失巢凋... 目的:探讨人胃癌细胞失巢凋亡抵抗的机制,研究哌立福新对胃癌细胞凋亡抵抗的可能治疗作用以及SATB1通过PI3K/Akt信号通路在哌立福新对胃癌失巢凋亡抵抗细胞中的作用机制。方法:在超低黏附条件下培养胃癌AGS亲本细胞,建立AGS细胞失巢凋亡抵抗模型,检测细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力、PI3K/Akt信号通路相关蛋白以及MMP-2、SATB1的表达与亲本细胞的差异;通过MTT、流式细胞术、划痕试验、Transwell试验和Western blot等检测哌立福新对凋亡抵抗AGS细胞生物学行为的影响,抑制信号传导通路及干扰SATB1基因的表达对胃癌失巢凋亡抵抗AGS细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。结果:成功构建了胃癌AGS细胞失巢凋亡抵抗模型。与亲代细胞相比,胃癌AGS细胞失巢凋亡模型的生长速度更快,凋亡率更低,迁移和侵袭能力更强,PIK3CA、Akt mRNA表达增加,PTEN mRNA表达减少,p-Akt、SATB1、MMP-2的蛋白表达增加,PTEN蛋白表达减少。不同浓度的哌立福新作用于凋亡抵抗AGS细胞后,抑制细胞生长,诱导细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,p-Akt、MMP-2蛋白表达随哌立福新浓度增加而下降,PTEN蛋白表达逐渐增加。此外,发现哌立福新降低了SATB1蛋白在凋亡抵抗AGS细胞中的表达,SATB1的下调增强了哌立福新介导的抗肿瘤能力。结论:哌立福新可通过PI3K/Akt途径对凋亡抵抗AGS细胞发挥抗癌作用,并且下调SATB1的表达可增强抗癌作用。本次研究可能为胃癌转移提供一种新的潜在的抗肿瘤治疗策略。 展开更多

关键词 哌立福新 AGS PI3K/AKT信号通路 SATB1 失巢凋亡抵抗

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长链非编码RNA与胃癌关系的研究进展 被引量：1

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作者 杜瑶(综述) 禹莉(审校) 《现代医药卫生》 2021年第9期1507-1511,共5页

长链非编码RNA(LncRNA)是一类长度在200 bp以上的核酸序列的转录本,不能编码蛋白质。最近几年来的研究显示,位于细胞核或细胞质内的LncRNA可作为基因表达调控元件,不仅在外遗传、细胞周期等中发挥重要的调节、控制作用,而且在诱导细胞... 长链非编码RNA(LncRNA)是一类长度在200 bp以上的核酸序列的转录本,不能编码蛋白质。最近几年来的研究显示,位于细胞核或细胞质内的LncRNA可作为基因表达调控元件,不仅在外遗传、细胞周期等中发挥重要的调节、控制作用,而且在诱导细胞凋亡、细胞增殖、血管生成和促进迁移等方面也具有关键作用。发生于胃黏膜上皮细胞恶性病变的胃癌,居于我国各种恶性肿瘤发病率的前列,且有年轻化趋势。在胃癌的病程中LncRNA起着重要的作用。很多特异表达的LncRNA在胃癌中被发现,它们影响着胃癌的发生、发展。LncRNA可能成为新型标志物,用于胃癌的诊断及预后的推断。该文将对LncRNA与胃癌关系的相关研究进展进行综述,以期为胃癌的临床诊治研究提供新方向。 展开更多

关键词 胃肿瘤 长链非编码RNA 综述

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AQP5对胃癌干细胞增殖、迁移、侵袭和干性的影响 被引量：1

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作者 高培垚 汪非凡 +3 位作者 田恒金 陈阿敏 王娜 张强 《山西医科大学学报》 CAS 2023年第7期894-902,共9页

目的探讨水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)对胃癌干细胞(gastric cancer stem cell,GCSC)生物学行为的影响及机制。方法将胃癌细胞AGS通过无血清悬浮成球培养技术富集胃癌干细胞(AGS-GCSC)。通过流式细胞术检测AGS和无血清培养富集的AGS-G... 目的探讨水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)对胃癌干细胞(gastric cancer stem cell,GCSC)生物学行为的影响及机制。方法将胃癌细胞AGS通过无血清悬浮成球培养技术富集胃癌干细胞(AGS-GCSC)。通过流式细胞术检测AGS和无血清培养富集的AGS-GCSC中胃癌干性标志物CD133的阳性率来鉴定所富集的AGS-GCSC是否符合后续实验要求。Western blot和qRT-PCR检测AGS和富集的AGS-GCSC中AQP5及胃癌干性标志物八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,OCT4)和CD133的表达。运用慢病毒技术将富集的AGS-GCSC分为两组:sh-NC组(阴性对照组)和sh-AQP5组(AQP5低表达组)。通过CCK-8、平板克隆、Transwell、干细胞成球实验检测sh-NC组和sh-AQP5组增殖、迁移、侵袭和成球能力。通过Western blot技术检测sh-NC组和sh-AQP5组中胃癌干性标志物OCT4、CD133的表达。Western blot检测sh-NC组和sh-AQP5组CAMKK2/AMPK通路相关蛋白(磷酸化CAMKK2、磷酸化AMPK)以及自噬相关蛋白(ATG7、P62、LC3Ⅱ)的表达情况。结果流式细胞术结果显示,与胃癌细胞AGS相比,AGS-GCSC中CD133的阳性率明显增加(P<0.05),符合后续实验需求。Western blot和qRT-PCR结果显示,与胃癌细胞AGS相比,无血清培养富集的AGS-GCSC中高表达AQP5和胃癌干性标志物OCT4、CD133(P<0.05)。CCK-8、平板克隆、Transwell及成球实验表明,与sh-NC组相比,sh-AQP5组AGS-GCSC增殖、迁移、侵袭和成球能力下降(P<0.05)。另外,Western blot实验结果显示,与sh-NC组相比,sh-AQP5组AGS-GCSC中干性标志物OCT4、CD133表达下调(P<0.05)。Western blot结果显示,与sh-NC组相比,sh-AQP5组磷酸化CAMKK2、磷酸化AMPK的蛋白水平下调,自噬相关蛋白ATG7、LC3Ⅱ表达降低,P62表达增加(P<0.05)。结论AQP5可能通过调控CAMKK2/AMPK通路抑制自噬影响GCSC的生物学功能。 展开更多

关键词 胃癌干细胞 AQP5 增殖 迁移 侵袭 干性

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姐妹染色体过早分离基因5黏附相关因子B(PDS5B)下调Wnt5a表达抑制A549人肺癌细胞增殖

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作者 马丽 马童童 +3 位作者 周文静 李娟 李玉云 徐慧 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期15-20,共6页

目的探讨姐妹染色体过早分离基因5黏附相关因子B(PDS5B)对A549肺癌细胞株生物学功能的影响及可能的分子机制。方法沉默或过表达A549人肺癌细胞的PDS5B后,噻唑蓝(MTT)法及集落形成实验检测肺癌细胞的增殖情况;划痕实验及TranswellTM检测... 目的探讨姐妹染色体过早分离基因5黏附相关因子B(PDS5B)对A549肺癌细胞株生物学功能的影响及可能的分子机制。方法沉默或过表达A549人肺癌细胞的PDS5B后,噻唑蓝(MTT)法及集落形成实验检测肺癌细胞的增殖情况;划痕实验及TranswellTM检测细胞迁移的情况;Western blot法检测A549细胞PDS5B及无翅基因5a(Wnt5a)的蛋白表达;共同转染PDS5B小干涉RNA(siRNA)及Wnt5a siRNA,TranswellTM检测细胞迁移的情况。结果与转染阴性对照组相比,转染PDS5B siRNA后,PDS5B蛋白表达明显下降且A549细胞增殖能力、细胞集落形成率、迁移能力均明显提高,Wnt5a的表达升高;过表达PDS5B后,则结果相反;共转实验显示Wnt5a可以抵抗PDS5B对A549细胞的抑制作用。结论PDS5B通过下调Wnt5a表达抑制肺癌细胞增殖。 展开更多

关键词 姐妹染色体过早分离基因5黏附相关因子B(PDS5B) A549肺癌细胞 无翅基因5a(Wnt5a) 癌细胞生物学

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miR-497阻断Wnt/β-catenin信号通路抑制SGC-7901人胃癌失巢凋亡抵抗细胞的生长和转移

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作者 禹莉 许颖 +5 位作者 杨靖瑞 高榴 李海翔 王姿涵 张兆君 凌云志 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期617-625,共9页

目的 探讨微小RNA 497(miR-497)在胃癌转移中的作用及机制。方法 SGC-7901胃癌亲本细胞培养在超低黏附环境中,重新贴壁后建立SGC-7901细胞失巢凋亡抵抗模型,集落形成实验、流式细胞术、 TranswellTM实验和划痕愈合实验检测其细胞生物学... 目的 探讨微小RNA 497(miR-497)在胃癌转移中的作用及机制。方法 SGC-7901胃癌亲本细胞培养在超低黏附环境中,重新贴壁后建立SGC-7901细胞失巢凋亡抵抗模型,集落形成实验、流式细胞术、 TranswellTM实验和划痕愈合实验检测其细胞生物学行为与亲本细胞的差异、荧光定量PCR检测miR-497表达、 Western blot法检测无翅基因/β联蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路关键蛋白以及上皮间质转化(EMT)相关蛋白如波形蛋白(vimentin)和上皮钙黏蛋白(E-cadherin)等表达的变化;亲本细胞和凋亡抵抗SGC-7901细胞转染miR-497抑制物(miR-497 inhibitor)或miR-497模拟物(miR-497 mimic), CCK-8法检测其增殖活性、 TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力、 TranswellTM迁移实验和划痕愈合实验检测细胞迁移能力、 Western blot法检测Wnt1、 β-catenin、 E-cadherin、 vimentin蛋白表达的变化。通过在失巢凋亡抵抗SGC-7901细胞中转染miR-497 mimic,在裸鼠皮下接种,测量并记录肿瘤组织的体积及质量的变化,Western blot法检测Wnt1、 β-catenin、 E-cadherin、 vimentin蛋白表达的变化。结果 与亲本细胞相比,SGC-7901胃癌失巢凋亡抵抗细胞增殖速度更快、集落形成更强,凋亡率更低,侵袭和迁移能力更强,miR-497表达明显下降。下调miR-497后细胞增殖能力显著增强,侵袭、迁移能力明显增强,Wnt1、 β-catenin蛋白表达量显著增加,vimentin表达显著增加,E-cadherin表达下降,而上调miR-497表达结果相反。miR-497过表达组的肿瘤组织生长速度、肿瘤的体积与质量明显低于对照组;Wnt1、 β-catenin、 vimentin蛋白表达量显著下降,而E-cadherin表达明显上调。结论miR-497在SGC-7901失巢凋亡抵抗细胞中低表达,miR-497通过阻断Wnt/β-catenin信号通路的活化和EMT,抑制胃癌细胞的生长和转移。 展开更多

关键词 miR-497 SGC-7901细胞 WNT β联蛋白(β-catenin) 失巢凋亡抵抗

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敲低lncRNA CACNA1C-AS2促进上皮间质转化增强人食管癌细胞的增殖、侵袭和迁移

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作者 秦玉萍 曹通 +3 位作者 许颖 蒋旭 马佳 禹莉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期249-257,共9页

目的 探讨钙电压门控通道亚基α1C反义RNA2(CACNA1C-AS2)通过调节上皮间质转化(EMT)对食管癌细胞恶性生物学行为的影响。方法 通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析CACNA1C-AS2在癌旁组织和食管癌组织的表达;实时定量PCR检测食管癌细胞中... 目的 探讨钙电压门控通道亚基α1C反义RNA2(CACNA1C-AS2)通过调节上皮间质转化(EMT)对食管癌细胞恶性生物学行为的影响。方法 通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析CACNA1C-AS2在癌旁组织和食管癌组织的表达;实时定量PCR检测食管癌细胞中CACNA1C-AS2 mRNA表达水平;在食管癌细胞中敲低和高表达CACNA1C-AS2后,采用噻唑蓝(MTT)法和细胞集落形成实验检测细胞的活力,TranswellTM小室法检测细胞的侵袭能力和纵向迁移能力,划痕愈合实验检测细胞的横向迁移能力,流式细胞术检测细胞的凋亡率;Western blot法检测神经钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和锌指转录因子snail 2(slug)蛋白表达。结果 CACNA1C-AS2在食管癌组织和细胞系中均低表达;敲低EC-9706细胞和Eca-109细胞中CACNA1C-AS2后,食管癌细胞的侵袭、迁移能力和细胞活力显著增强,细胞凋亡减少;N-cadherin、vimentin和slug表达上调。过表达CACNA1C-AS2则结果相反。结论 CACNA1C-AS2通过促进EMT增强食管癌细胞的增殖、侵袭和迁移。 展开更多

关键词 食管癌 长链非编码RNA(lncRNA) 钙电压门控通道亚基α1C反义RNA2(CACNA1C-AS2) 上皮间质转化(EMT)

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川藏香茶菜丙素抑制NLRP3炎症小体活化并缓解小鼠脓毒性休克

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作者 曹海若 张玮 +2 位作者 李明远 杨燕青 李玉云 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1476-1484,共9页

目的探究中草药提取物川藏香茶菜丙素(Iso C)对NLRP3炎症小体活化的影响以及对脂多糖(LPS)诱导的小鼠脓毒性休克是否具有缓解作用。方法体外实验:利用LPS预刺激小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)以及人急性单核细胞白血病(THP-1)细胞系。通过... 目的探究中草药提取物川藏香茶菜丙素(Iso C)对NLRP3炎症小体活化的影响以及对脂多糖(LPS)诱导的小鼠脓毒性休克是否具有缓解作用。方法体外实验:利用LPS预刺激小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)以及人急性单核细胞白血病(THP-1)细胞系。通过加入多种NLRP3炎症小体激动剂活化经典NLRP3炎症小体。利用胞内转染LPS活化非经典NLRP3炎症小体。利用转染聚脱氧腺苷酸(poly A:T)活化AIM2炎症小体。通过蛋白质印迹法(Western blot)检测NLRP3炎症小体活化产物caspase-1的剪切,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测上清中NLRP3依赖与非依赖的多种促炎细胞因子分泌情况。利用电感耦合等离子体发射光谱仪检测细胞内钾离子含量。体内实验:挑选SPF级C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组(Control组),脓毒性休克组(LPS组),Iso C治疗组(LPS+Iso C组)。ELISA分析小鼠血清和腹腔灌洗液中促炎细胞因子白细胞介素1β(1L-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的分泌情况,并观察注射LPS后小鼠48 h内生存时间,绘制小鼠生存曲线。结果体外实验表明,在BMDM细胞中Iso C以剂量依赖的方式抑制多种激动剂引起的经典NLRP3炎症小体活化以及胞内转染LPS诱导非经典NLRP3炎症小体的活化(P<0.05),Iso C对NLRP3炎症小体非依赖的促炎细胞因子TNF-α和IL-6的分泌无显著影响(P>0.05)。Iso C对AIM2炎症小体的活化无显著影响(P>0.05)。Iso C不影响NLRP3炎症小体活化上游信号钾离子外流(P>0.05)。在人THP-1细胞中Iso C抑制NLRP3炎症小体活化(P<0.05)。体内实验结果表明,与脓毒性休克组相比,Iso C治疗组小鼠血清和腹腔灌洗液中IL-1β的水平显著下降(P<0.05)且生存时间更长(P<0.05)。结论中草药来源的Iso C可以特异性抑制NLRP3炎症小体的活化从而缓解小鼠脓毒性休克,是潜在的治疗炎症性疾病的小分子化合物。 展开更多

关键词 川藏香茶菜丙素 NLRP3炎症小体 脓毒性休克 川藏香茶菜

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miR-30e-5p过表达促进结直肠癌细胞的增殖和迁移:基于下调PTEN激活CXCL12轴

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作者 魏可 石纪雯 +3 位作者 肖雨寒 王文锐 杨清玲 陈昌杰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1081-1092,共12页

目的探讨miR-30e-5p通过PTEN/CXCL12轴对结直肠癌生物学活性的影响及机制。方法实验设置空白对照、阴性对照、miR-30e-5p mimics组、miR-30e-5p inhibitor组及共转染miR-30e-5p mimics+LV-PTEN(PTEN过表达)组或miR-30e-5p inhibitor+si-... 目的探讨miR-30e-5p通过PTEN/CXCL12轴对结直肠癌生物学活性的影响及机制。方法实验设置空白对照、阴性对照、miR-30e-5p mimics组、miR-30e-5p inhibitor组及共转染miR-30e-5p mimics+LV-PTEN(PTEN过表达)组或miR-30e-5p inhibitor+si-PTEN(PTEN干扰)组。生物信息学分析miR-30e-5p在结直肠癌组织和正常组织中的表达差异;qRT-PCR检测miR-30e-5p在肠上皮细胞和结直肠癌细胞中的差异表达;生物信息学和双荧光素酶实验预测并验证miR-30e-5p与PTEN的靶向关系;平板克隆、CCK-8增殖、细胞周期、细胞凋亡、划痕愈合和Transwell实验检测癌细胞的生物学活性;Western blotting检测癌细胞PTEN、CXCL12表达情况;小鼠体内实验检测miR-30e-5p(miR-NC、miR-30e-5p inhibitor组)对结直肠癌发生发展的影响。结果生信分析结直肠癌组织miR-30e-5p较癌旁组织表达升高(P<0.01);在癌细胞中miR-30e-5p较肠上皮细胞表达升高(P<0.01);双荧光素酶实验证实miR-30e-5p与PTEN存在靶向关系(P<0.05);相对于Control组,miR-30e-5p mimics能增强癌细胞增殖、转移能力并抑制凋亡(P<0.05),共转染miR-30e-5p mimics+LV-PTEN能够逆转miR-30e-5p mimics的作用(P<0.05);miR-30e-5p mimics能抑制PTEN表达,增强CXCL12表达(P<0.01);然而miR-30e-5p inhibitor与mimics效果相反,将细胞阻滞在G0/G1期,共转染miR-30e-5p inhibitor+si-PTEN能逆转miR-30e-5p inhibitor的作用(P<0.05);体内实验发现相对于miR-NC组,miR-30e-5p inhibitor可抑制肿瘤发生发展。结论miR-30e-5p过表达通过下调PTEN激活CXCL12轴,从而促进结直肠癌细胞的增殖和迁移。 展开更多

关键词 结直肠癌 miR-30e-5p PTEN CXCL12

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小鼠骨髓来源树突状细胞模型的建立及功能鉴定

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作者 纪俊莉 梁笑星 +4 位作者 李小萌 杨姿萱 周宇泽 凌一绮 郝艳梅 《山西医科大学学报》 CAS 2023年第9期1247-1253,共7页

目的通过快速高效获取小鼠骨髓有核细胞,建立小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow dendritic cell,BMDC)模型,并对BMDC进行表面特异性标志物及功能鉴定。方法利用小鼠股骨和胫骨肌肉群分布的位置特点,快速游离出C57BL/6雄性小鼠的股骨... 目的通过快速高效获取小鼠骨髓有核细胞,建立小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow dendritic cell,BMDC)模型,并对BMDC进行表面特异性标志物及功能鉴定。方法利用小鼠股骨和胫骨肌肉群分布的位置特点,快速游离出C57BL/6雄性小鼠的股骨和胫骨,获取骨髓细胞,使用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant murine granulocyte-macrophage colony stimulating factor,rmGM-CSF)和重组小鼠白细胞介素4(recombinant murine interleukin-4,rmIL-4)诱导培养成BMDC。光镜下观察细胞形态,流式细胞术检测BMDC的特异标志物CD11c,进行纯度鉴定。将BMDC分为2组:对照组和LPS组(1μg/ml),采用流式细胞术检测特异性标志物CD11c、CD86、CD80、CD40和MHCⅡ分子,CCK-8实验检测BMDC对脾脏淋巴细胞增殖能力的影响,qRT-PCR和Western blot检测BMDC中NF-κB的表达情况,进行功能鉴定。结果诱导培养7 d,镜下观察BMDC具有树突状突起的典型形态,CD11c表达可达97.4%,表明BMDC纯度能够满足后续实验需要。流式细胞术结果显示,与对照组比较,LPS组BMDC中特异性标志物CD86、CD80、CD40和MHCⅡ分子的荧光强度和阳性率显著增强(P<0.01)。CCK-8实验结果显示,与对照组比较,LPS组BMDC刺激淋巴细胞增殖的能力明显增强(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,与对照组比较,LPS组BMDC中NF-κB的表达上调(P<0.001)。Western blot结果表明,与对照组比较,LPS组BMDC内p-NF-κB的表达上调(P<0.01)。结论成功建立了简单高效的体外诱导培养的BMDC模型,为DC免疫功能的基础研究和转化应用奠定了实验基础。 展开更多

关键词 股骨 胫骨 骨髓细胞 诱导培养 树突状细胞 脂多糖 表面标志物

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苦参碱联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响 被引量：2

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作者 郝艳梅 纪俊莉 +2 位作者 刘纯艺 张楠 宫雅娟 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1739-1746,共8页

目的探究苦参碱(Mat)联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及可能机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度Mat单药和联合LY294002对K562细胞增殖的影响;将K562细胞分为对照组、Mat组、LY294002组和Mat+LY294002组,... 目的探究苦参碱(Mat)联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及可能机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度Mat单药和联合LY294002对K562细胞增殖的影响;将K562细胞分为对照组、Mat组、LY294002组和Mat+LY294002组,分别采用0.4 g/L Mat及10μmol/L LY294002单独或联合干预48 h后,应用光学显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术annexinⅤ-FITC/PI双标记检测细胞凋亡,PI单标记检测细胞周期变化,Western blot法检测Mat联合LY294002对K562细胞p-mTOR、p-PI3K、Akt、p-Akt、CyclinD1、Bcl-2、Caspase-9蛋白表达的影响。结果CCK-8结果显示,不同浓度Mat单药和联合LY294002均可抑制K562细胞的增殖,具有时间和浓度依赖性,且联合组增殖抑制率比单药组明显升高(P<0.01)。形态学检查显示,联合用药组比单药组凋亡表现更明显。流式细胞结果显示,与对照组及单药组相比,联合组显著促进细胞凋亡[(42.50±2.63)%,P<0.01],显著增加了细胞周期G0/G1期细胞比率[(57.23±1.44)%,P<0.01]。Western blot结果表明,两药联合后K562细胞p-mTOR、CyclinD1、p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白表达水平明显增高(P<0.01),Caspase-9蛋白表达水平下降(P<0.01)。结论Mat和LY294002联合应用可以增强对K562细胞生长抑制的协同作用,其机制可能是通过有效下调PI3K/Akt信号通路中的p-Akt表达,使p-mTOR、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达下调,Caspase-9蛋白表达上调来实现的。 展开更多

关键词 急性髓系白血病 苦参碱 LY294002 细胞凋亡 细胞周期 AKT

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miR-372-5p促进结直肠癌细胞的转移:通过靶向PTEN调控PI3K/AKT/CXCL12信号通路 被引量：3

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作者 时秀茹 魏可 +3 位作者 吴雨伦 王文锐 杨清玲 陈昌杰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1191-1197,共7页

目的探讨miR-372-5p通过靶向PTEN调控PI3K/AKT/CXCL12信号通路对结直肠癌细胞迁移能力的影响及机制。方法qRT-RCR检测miR-372-5p在结直肠癌和癌旁组织及结直肠癌细胞和正常肠上皮细胞中的表达;生物信息学和双荧光素酶实验验证miR-372-5p... 目的探讨miR-372-5p通过靶向PTEN调控PI3K/AKT/CXCL12信号通路对结直肠癌细胞迁移能力的影响及机制。方法qRT-RCR检测miR-372-5p在结直肠癌和癌旁组织及结直肠癌细胞和正常肠上皮细胞中的表达;生物信息学和双荧光素酶实验验证miR-372-5p与PTEN的靶向关系;Western blotting检测转染inhibitor-NC/mimics-NC(miR-372-5p抑制剂/类似物的阴性对照)、miR-inhibitor(miR-372-5p抑制剂)、miR-mimics(miR-372-5p类似物)以及共转染miR-inhibitor+si-PTEN(PTEN干扰)、miR-mimics+PI3K抑制剂对PTEN、CXCL12表达和PI3K/AKT信号通路激活水平的影响;Transwell实验、划痕实验检测以上各组、共转染miR-mimics+si-CXCL12(CXCL12干扰)以及转染mimics-NC、miR-mimics后的HCT116条件培养基对细胞迁移能力的影响。结果结直肠癌组织中miR-372-5p较癌旁组织表达升高,相对于NCM460,HCT116较SW620中miR-372-5p表达上调更显著(P<0.01);双荧光素酶实验证实PTEN是miR-372-5p的潜在靶基因(P<0.05)。相较于NC组,miR-mimics可降低PTEN蛋白表达水平,增加CXCL12蛋白表达水平和AKT磷酸化水平,提高HCT116迁移能力;而miR-inhibitor则导致相反的结果(P<0.05),si-PTEN可中和miR-inhibitor的作用(P<0.01);PI3K抑制剂可降低CXCL12的蛋白表达水平,并抑制HCT116迁移能力(P<0.05),而miR-mimics可中和这一作用(P<0.01);miR-mimics转染HCT116的条件培养基可提高NCM460的迁移能力(P<0.01),联合si-CXCL12可逆转miR-mimics对HCT116转移的促进作用(P<0.01)。结论miR-372-5p通过靶向PTEN激活PI3K/AKT信号通路,上调CXCL12的表达,从而促进结直肠癌细胞的迁移能力。 展开更多

关键词 结直肠癌 转移 miR-372-5p CXCL12

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前列腺素D2对胃癌干细胞增殖、侵袭、凋亡及干性的影响 被引量：3

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作者 汪非凡 王娜 +6 位作者 高培垚 陈阿敏 黄岩 马丽 汪晶 许颖 张强 《山西医科大学学报》 CAS 2022年第10期1203-1211,共9页

目的探讨前列腺素D2(prostaglandins D2,PGD2)对胃癌干细胞(gastric cancer stem cell,GCSC)的调控作用及其机制。方法将胃癌细胞SGC-7901通过无血清培养法富集GCSC。通过流式细胞术检测SGC-7901和无血清培养富集的GCSC中干性标志物乙... 目的探讨前列腺素D2(prostaglandins D2,PGD2)对胃癌干细胞(gastric cancer stem cell,GCSC)的调控作用及其机制。方法将胃癌细胞SGC-7901通过无血清培养法富集GCSC。通过流式细胞术检测SGC-7901和无血清培养富集的GCSC中干性标志物乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrogenase 1,ALDH1)和CD44的阳性率,Western blot检测SGC-7901和无血清培养富集的GCSC中干性标志物锌指蛋白转录因子4(spalt-like transcription factor 4,SALL4)和CD44的蛋白表达以验证富集的GCSC是否满足后续实验需要。将不同浓度的PGD2(2.5,5,7.5,10,15μg/ml)作用于富集的GCSC,通过CCK-8实验检测半数抑制浓度(IC_(50))作为后续实验PGD2给药浓度。将富集的GCSC分为3组:空白组、DMSO组和PGD2组。通过CCK-8、平板克隆、Transwell实验检测PGD2对GCSC增殖、侵袭能力的影响,流式细胞术检测PGD2对GCSC凋亡能力的影响。通过Western blot技术检测PGD2刺激后,GCSC中侵袭相关蛋白(MMP-2、MMP-9)和凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)、肿瘤干细胞干性标志物(SALL4、CD44)的表达以及JAK2/STAT3通路相关蛋白(磷酸化JAK2、磷酸化STAT3)的调控情况。结果流式细胞术结果显示与胃癌细胞SGC-7901相比,无血清培养富集的GCSC中干性标志物ALDH1和CD44表达增加(P<0.05),Western blot结果显示无血清培养富集的GCSC中干性标志物SALL4、CD44表达上调(P<0.05),表明GCSC富集成功,满足后续实验需要。CCK-8实验结果显示PGD2对GCSC具有明显的抑制作用,并呈浓度依赖性,PGD2的IC_(50)为8μg/ml,选择PGD2(8μg/ml)作为后续实验条件。CCK-8、平板克隆和Transwell实验表明,与空白组和DMSO组相比,PGD2组GCSC增殖及侵袭能力下降(P<0.01)。流式细胞术结果显示PGD2可促进GCSC凋亡(P<0.05)。另外,Western blot结果显示,与空白组和DMSO组相比,PGD2组MMP-2、MMP-9、CD44、SALL4、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),Bax蛋白表达上调(P<0.05)。此外,与空白组和DMSO组相比,PGD2组磷酸化JAK2、磷酸化STAT3的蛋白水平明显降低(P<0.05),而JAK2、STAT3蛋白水平无明显变化。结论PGD2可能通过调控JAK2/STAT3通路抑制GCSC增殖、侵袭与干性,促进其凋亡。 展开更多

关键词 胃癌干细胞 前列腺素D2 增殖 侵袭 凋亡 干性

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miR-16-5p通过靶向YWHAQ调控乳腺癌耐药细胞的凋亡与迁移能力 被引量：1

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作者 朱海涛 毛慧兰 +3 位作者 陶爽 王文锐 陈昌杰 杨清玲 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1476-1485,共10页

目的 探究miR-16-5p对乳腺癌紫杉醇耐药细胞生物学活性的影响及分子机制。方法 以人乳腺癌亲本细胞(SKBR-3)与乳腺癌紫杉醇耐药细胞(SKBR-3/PR)为研究对象。实验设空白对照组、阴性对照组、miR-16-5p类似物组(miR-16-5p mimics)、miR-16... 目的 探究miR-16-5p对乳腺癌紫杉醇耐药细胞生物学活性的影响及分子机制。方法 以人乳腺癌亲本细胞(SKBR-3)与乳腺癌紫杉醇耐药细胞(SKBR-3/PR)为研究对象。实验设空白对照组、阴性对照组、miR-16-5p类似物组(miR-16-5p mimics)、miR-16-5p抑制剂组(miR-16-5p inhibitor),YWHAQ干扰组(si-YWHAQ),以及联合组(miR-16-5p mimics+si-YWHAQ)。利用qRT-PCR检测乳腺癌组织与癌旁组织、SKBR-3与SKBR-3/PR间miR-16-5p的表达水平。使用生信数据对miR-16-5p的靶基因做预测,双荧光素酶实验验证靶向结合。免疫印迹检测细胞YWHAQ、Bcl-2和Bax表达。CCK-8和Transwell检测细胞增殖迁移能力。流式细胞术检测耐药细胞周期凋亡改变。结果 qRT-PCR显示乳腺癌组织中miR-16-5p水平低于癌旁组织(-1.19±1.90 vs 1.59±1.76,P<0.01)。生物信息预测YWHAQ是miR-16-5p的靶基因,荧光素酶实验证实miR-16-5p能够靶向调节YWHAQ(P<0.01)。相对于SKBR-3细胞,SKBR-3/PR细胞中miR-16-5p表达水平降低(P<0.01),YWHAQ表达水平增高(P<0.05)。Western blot结果显示miR-16-5p类似物能够抑制YWHAQ表达,miR-16-5p抑制剂能够促进YWHAQ表达(P<0.01)。相对于对照组,miR-16-5p类似物能够将耐药细胞阻滞在G0/G1期[(55.61±1.99)%vs(43.06±1.53)%,P<0.01],抑制细胞增殖和迁移能力(P<0.01),促进细胞凋亡[(10.37±0.23)%vs(3.81±0.88)%,P<0.01],YWHAQ干扰组细胞迁移能力下降,凋亡率升高,miR-16-5p类似物组与YWHAQ干扰组细胞的Bax蛋白表达增加,YWHAQ与Bcl-2蛋白水平降低。相对于miR-16-5p类似物组,联合组细胞迁移能力被抑制(75.75±29.85 vs 181.11±11.71,P<0.01),凋亡率显著升高[(24.20±2.43)%vs(14.10±4.47)%,P<0.01]。结论 miR-16-5p能够通过靶向调节YWHAQ调控Bcl-2/Bax的表达,从而改变乳腺癌紫杉醇耐药细胞的生物学活性。 展开更多

关键词 乳腺癌 耐药 miR-16-5p YWHAQ

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P4HA2通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进肝癌的发生和发展 被引量：2

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作者 商玲 姜雯迪 +1 位作者 张俊丽 武文娟 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期665-672,共8页

目的 探讨脯氨酸4-羟化酶Ⅱ(P4HA2)在肝癌细胞发生发展中的作用及相关机制。方法 利用GEPIA、Human Protein Atlas数据库预测P4HA2在肝癌中的表达情况,利用K-M plotter在线数据库分析P4HA2的表达情况与肝癌预后的关系,采用qRT-PCR和West... 目的 探讨脯氨酸4-羟化酶Ⅱ(P4HA2)在肝癌细胞发生发展中的作用及相关机制。方法 利用GEPIA、Human Protein Atlas数据库预测P4HA2在肝癌中的表达情况,利用K-M plotter在线数据库分析P4HA2的表达情况与肝癌预后的关系,采用qRT-PCR和Western blot检测肝癌细胞和正常肝细胞中P4HA2的表达。构建慢病毒载体,用携带P4HA2 shRNA和Con shRNA的慢病毒载体分别转染肝癌SNU-449和Hep-3B细胞系,建立沉默表达P4HA2的细胞株(shP4HA2组)和对照组细胞株(NC组)。采用CCK-8、集落形成试验、划痕实验和Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。采用Western blot实验检测上皮-间质转化和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达情况。结果 在线数据库分析结果显示,肝癌组织中P4HA2表达高于正常肝组织(P<0.05)。同时,肝癌细胞系中P4HA2 mRNA和蛋白表达水平也高于正常肝细胞(P<0.01)。慢病毒干扰后,与NC组相比,shP4HA2组中mRNA和蛋白表达水平下降(P<0.05)。P4HA2基因表达沉默后,细胞的增殖、迁移和侵袭受到抑制。Western blot显示,相对于NC组,shP4HA2组的E-cadherin蛋白表达上升,N-cadherin、Snail蛋白表达下降(P<0.05),在PI3K/AKT/mTOR通路中,磷酸化的PI3K(P-PI3K)、AKT(P-AKT)和m TOR(P-mTOR)显示出较低的水平(P<0.05)。结论 P4HA2通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路影响肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭,促进肝癌的发生发展。 展开更多

关键词 肝癌 脯氨酸4-羟化酶II 迁移侵袭 PI3K/AKT/MTOR

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SPOP上调c-Jun蛋白表达并促进肾癌细胞的增殖和侵袭 被引量：5

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作者 吴林慧 余珂 +3 位作者 崔悦 朱雪莲 杨正 马佳 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期447-452,共6页

目的探讨SPOP对肾癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等的影响及潜在的作用机制。方法体外培养肾癌细胞株786-O、A704、Caki-2,对照组(EV)和过表达组(SPOP)质粒采用脂质体法转染至上述肾癌细胞株;分别利用克隆形成实验及MTT法检测SPOP基因对... 目的探讨SPOP对肾癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等的影响及潜在的作用机制。方法体外培养肾癌细胞株786-O、A704、Caki-2,对照组(EV)和过表达组(SPOP)质粒采用脂质体法转染至上述肾癌细胞株;分别利用克隆形成实验及MTT法检测SPOP基因对肾癌细胞株增殖的影响;采用TUNEL法检测SPOP基因对肾癌细胞株凋亡的影响;利用创伤愈合实验和Transwell实验检测SPOP基因对肾癌细胞株迁移和侵袭能力的作用;运用Real-time PCR和Western blotting技术检测转染后肾癌细胞株SPOP和c-Jun的mRNA水平以及相关蛋白的表达情况。结果在786-O、A704、Caki-2细胞上调SPOP的表达能促进肾癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);与对照组相比,SPOP组的肾癌细胞株786-O、Caki-2的凋亡率较对照组相对减少(P<0.05);Real-time PCR结果显示,c-Jun mRNA的表达水平未发生改变,但Western blotting结果显示,SPOP组肾癌细胞株786-O、Caki-2的SPOP蛋白表达明显高于对照组(P<0.05),c-Jun蛋白的表达也明显高于对照组(P<0.05)。结论SPOP能促进肾癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制肾癌细胞的凋亡,潜在的机制可能为促进c-Jun的表达。 展开更多

关键词 SPOP C-JUN 肾癌 增殖 迁移 侵袭 凋亡

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FBXO22在急性髓系白血病中的表达分析

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作者 吴冬会 杨艳丽 +5 位作者 周黎黎 马丽 汪晶 程阳 徐旺旺 李玉云 《蚌埠医学院学报》 CAS 2022年第11期1573-1575,1579,共4页

目的:检测急性髓系白血病(AML)病人骨髓细胞FBXO22基因表达水平,分析其与病人临床指征的相关性。方法:收集AML病人92例,其中初发组41例,完全缓解(CR)组28例,部分缓解(PR)组23例,另选取肾性贫血、缺铁性贫血病人30例作为对照组。实时荧... 目的:检测急性髓系白血病(AML)病人骨髓细胞FBXO22基因表达水平,分析其与病人临床指征的相关性。方法:收集AML病人92例,其中初发组41例,完全缓解(CR)组28例,部分缓解(PR)组23例,另选取肾性贫血、缺铁性贫血病人30例作为对照组。实时荧光定量PCR法测定并比较各组病人骨髓细胞中FBXO22 mRNA相对表达量。分析初发组病人FBXO22 mRNA相对表达量与病人性别、年龄、血常规参数、临床分型的相关性。结果:各组病人FBXO22 mRNA表达水平间差异有统计学意义(P<0.01),其中PR组和初发组均低于对照组和CR组(P<0.05),而对照组和CR组、PR组和初发组间差异均无统计学意义(P>0.05)。初发组病人中,不同血小板计数病人的FBXO22 mRNA表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。相关分析显示,初发组病人血小板计数与FBXO22 mRNA相对表达水平呈明显正相关关系(r=0.492,P<0.01)。结论:AML病人骨髓细胞FBXO22表达降低,且与血小板计数呈正相关关系。 展开更多

关键词 急性髓系白血病 FBXO22 血小板计数

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基于网络药理学与分子对接探讨紫草素治疗乙型病毒性肝炎的作用机制

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作者 朱亚 高俊杰 吴竞 《包头医学院学报》 CAS 2022年第11期28-33,共6页

目的:通过网络药理学方法系统化探究紫草素治疗乙型病毒性肝炎的功效网络,并用分子对接技术进行验证。方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和药物靶标分析网站(Pharm Mapper)获取紫草素的有效化合物及作用靶点,利用在线人... 目的:通过网络药理学方法系统化探究紫草素治疗乙型病毒性肝炎的功效网络,并用分子对接技术进行验证。方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和药物靶标分析网站(Pharm Mapper)获取紫草素的有效化合物及作用靶点,利用在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)、人类基因数据库(GeneCards)、基因疾病关联数据库(DisGeNET)、毒性与基因比较数据库(CTD)获取乙型病毒性肝炎的疾病靶点,经靶点映射获取紫草素与乙肝的共同作用靶点,通过STRING数据库获取靶点之间的关系信息,应用Cytoscape 3.8.2做可视化处理,并通过R语言进行基因本体论(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。运用AutoDockTools完成分子对接。结果:共获得AKT丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)、血清白蛋白(ALB)以及非受体酪氨酸激酶(原癌基因SRC),丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、表皮生长因子受体(EGFR)等63个作用靶点,经GO富集分析得到1779个生物学过程、41个细胞组分、108个分子功能,经KEGG富集分析得到79条相关通路,其中主要与PI3K/Akt通路密切相关。分子对接显示靶蛋白与主要化学成分结合能较强,结合力好。结论:紫草素以多靶点、多通路的特点实现抗乙肝的作用,为后期实验验证提供依据。 展开更多

关键词 紫草素 乙型病毒性肝炎 网络药理学 分子对接技术 分子机制

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