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MicroRNA-338-3p真核表达载体的构建及其对胃癌细胞SGC-7901增殖的影响 被引量：2
1
作者 郭波 王文静 +5 位作者 赵正豪 赵凌宇 汪鲁敏 胡丽丽 宋土生 黄辰 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期442-446,共5页
目的构建microR-338-3p(miR-338-3p)过表达载体并探究其对人胃癌SGC-7901细胞系体外增殖的影响。方法以pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体为基础,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切和纯化后与人工合成miR-338-3p的寡聚核苷酸进行连接,转化至E.C... 目的构建microR-338-3p(miR-338-3p)过表达载体并探究其对人胃癌SGC-7901细胞系体外增殖的影响。方法以pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体为基础,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切和纯化后与人工合成miR-338-3p的寡聚核苷酸进行连接,转化至E.Coli Top10后,经过DNA测序、BLAST检测及验证;将构建成功的载体瞬时转染入SGC-7901细胞系中,应用Real-time PCR检测miR-338-3p的表达水平,利用MTT法检测细胞增殖的改变。结果测序验证成功构建了miR-338-3p的真核表达载体;瞬时转染SGC-7901细胞后miR-338-3p表达水平有显著增加,能够抑制SGC-7901细胞的体外增殖。结论成功构建了miR-338-3p的真核表达载体,获得了瞬时表达miR-338-3p的人胃癌SGC-7901细胞系,初步证实miR-338-3p过表达可抑制肿瘤细胞的增殖。 展开更多
关键词 miR-338-3p 胃癌 表达载体 细胞增殖
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Hsa-miR-106a在胃癌组织中的表达及其临床意义 被引量：4
2
作者 郭波 王文静 +5 位作者 赵凌宇 常素娥 童东东 杨阳 宋土生 黄辰 《山西医科大学学报》 CAS 2014年第1期12-15,共4页
目的分析hsa-miR-106a在胃癌组织中相对于正常组织的表达及其与病理分级及临床分期的关系。方法从石蜡组织包埋的19例胃癌及19例正常组织中提取总RNA,应用Real-time PCR方法检测miR-106a的表达情况,并分析其与胃癌病理分级及临床分期的... 目的分析hsa-miR-106a在胃癌组织中相对于正常组织的表达及其与病理分级及临床分期的关系。方法从石蜡组织包埋的19例胃癌及19例正常组织中提取总RNA,应用Real-time PCR方法检测miR-106a的表达情况,并分析其与胃癌病理分级及临床分期的关系。结果 miR-106a在胃癌组织中有14例高表达,5例低表达,在胃癌组织中的表达明显高于正常组织(P<0.01),其表达与胃癌的病理分级、临床分期密切相关。结论 miR-106a可能参与了胃癌的发生、发展过程。 展开更多
关键词 hsa-miR-106a 微小RNA 胃癌 病理分级
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HERG基因G572R突变体表达载体的构建及其稳定转染细胞系的建立 被引量：1
3
作者 杨阳 黄娜 +5 位作者 高岭 常素娥 郭波 胡丽丽 宋土生 黄辰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期308-311,共4页
目的构建HERG基因G572R突变体表达载体并建立其稳定转染HEK293的细胞系。方法应用重叠延伸PCR构建HERG-G572R突变体表达载体,经G418筛选稳定转染细胞系,通过Real-Time PCR,Western blot及测序鉴定稳定转染细胞系。结果经序列比对,证明HE... 目的构建HERG基因G572R突变体表达载体并建立其稳定转染HEK293的细胞系。方法应用重叠延伸PCR构建HERG-G572R突变体表达载体,经G418筛选稳定转染细胞系,通过Real-Time PCR,Western blot及测序鉴定稳定转染细胞系。结果经序列比对,证明HEK-HERG-G572R突变体表达载体构建成功,Real-Time PCR,Western blot及测序证明稳定转染细胞系构建成功。结论该方法可成功构建的HKE-HERG-G572R细胞株,为药物个体化治疗提供工具。 展开更多
关键词 HERG基因 HEK293 转染 突变体
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MiR-214表达载体的构建及其对肝癌细胞Hep3B增殖的影响
4
作者 杨阳 常素娥 +8 位作者 胡丽丽 高岭 何康 汪鲁敏 童东东 郭波 蔡东晖 宋土生 黄辰 《山西医科大学学报》 CAS 2015年第3期193-197,共5页
目的构建pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-214表达载体,并检测其对肝癌Hep3B细胞增殖的影响。方法以人的基因组DNA为模板,利用PCR扩增miR-214前体序列,构建pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-214表达载体,序列比对及实时定量PCR验证miR-214表达载体是否... 目的构建pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-214表达载体,并检测其对肝癌Hep3B细胞增殖的影响。方法以人的基因组DNA为模板,利用PCR扩增miR-214前体序列,构建pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-214表达载体,序列比对及实时定量PCR验证miR-214表达载体是否构建成功,MTT实验检测miR-214对肝癌Hep3B细胞增殖的影响。结果序列比对及实时定量PCR验证miR-214表达载体构建成功。将成功构建的miR-214表达载体导入肝癌细胞Hep3B,发现其对细胞增殖具有抑制作用。结论本研究成功构建miR-214表达载体并证明miR-214可能参与肝癌发展的过程。 展开更多
关键词 miR-214 肝癌 分子克隆技术
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替米沙坦通过调节Krüppel样因子4的表达延缓心肌纤维化
5
作者 尚粉青 张玎 +1 位作者 赵朝 雷霆 《中国心血管杂志》 2016年第2期135-139,共5页
目的研究SHR大鼠心肌Krüppel样因子4(KLF4)及其相关因子变化,同时观察替米沙坦治疗后的效果。方法 10周左右的SHR大鼠分别给予生理盐水和替米沙坦10 mg·kg-1·d-1干预(WKY为对照组)。8周后测血压,左室重量及左室重量指数... 目的研究SHR大鼠心肌Krüppel样因子4(KLF4)及其相关因子变化,同时观察替米沙坦治疗后的效果。方法 10周左右的SHR大鼠分别给予生理盐水和替米沙坦10 mg·kg-1·d-1干预(WKY为对照组)。8周后测血压,左室重量及左室重量指数评定左室肥厚情况;同时观察心肌组织中KLF4、内皮一氧化氮合酶(e NOS)及纤溶酶原激活抑制物-1(PAI-1)、基质金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)和Ⅳ型胶原的mRNA和蛋白表达水平的变化。为进一步明确其机制,用AngⅡ刺激内皮细胞,同时测定KLF4的表达进一步明确病理机制。结果 SHR大鼠血压、左室重量(LVW)及左室重量指数(LVW/BW)较WKY大鼠明显增加(均为P<0.05),替米沙坦可以显著降低血压,逆转SHR大鼠的LVW及LVW/BW变化(均为P<0.01)。SHR大鼠KLF4、e NOS的mRNA及蛋白表达水平较WKY大鼠显著降低(均为P<0.05),而替米沙坦治疗组KLF4的表达较SHR组明显增加(均为P<0.05);相反,SHR大鼠PAI-1、TIMP-1和Ⅳ型胶原的mRNA及蛋白水平较WKY大鼠明显增加(均为P<0.05),而替米沙坦治疗后较SHR组明显降低(均为P<0.05)。AngⅡ作用于内皮细胞,e NOS的磷酸化明显降低(2.37±0.22比1.57±0.31)(P<0.05),同时PAI-1、TIMP-1和Ⅳ型胶原的表达明显增加(均为P<0.05),过表达KLF4可以使e NOS的磷酸化显著回升(1.57±0.31比2.08±0.28)(P<0.05),同时PAI-1、TIMP-1和Ⅳ型胶原的表达较AngⅡ作用下明显减低(均为P<0.05)。结论KLF4在高血压大鼠心肌心肌纤维化过程中发挥重要作用,替米沙坦降压治疗可以明显延缓或逆转此病理过程。 展开更多
关键词 替米沙坦 高血压 纤维化 Krüppel样因子-4
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MicroRNA-17家族真核表达载体的构建及其对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响 被引量：1
6
作者 王晓霏 孙宏飞 +4 位作者 陈妍珂 赵凌宇 杨阳 宋土生 黄辰 《山西医科大学学报》 CAS 2015年第6期523-527,607,共6页
目的构建miR-17家族(miR-17、miR-20a、miR-20b、miR-93、miR-106a、miR-106b)真核表达载体,探究它们对人肝癌SMMC-7721细胞体外增殖的影响。方法通过Eco RⅠ和HindⅢ双酶切真核表达载体pc DNA6.2-GW/Em GFP-miR,得到大片段后与人工合成... 目的构建miR-17家族(miR-17、miR-20a、miR-20b、miR-93、miR-106a、miR-106b)真核表达载体,探究它们对人肝癌SMMC-7721细胞体外增殖的影响。方法通过Eco RⅠ和HindⅢ双酶切真核表达载体pc DNA6.2-GW/Em GFP-miR,得到大片段后与人工合成的miR-17家族成熟体5p的寡聚核苷酸连接,通过DNA测序、BLAST检验以及双酶切电泳方法验证是否成功构建miR-17家族的真核表达载体。将构建成功的载体,用Lipofectamine2000瞬时转染人肝癌SMMC-7721细胞,应用real-time PCR方法检测miR-17家族表达水平,用CCK8法检测细胞增殖能力的变化。结果双酶切真核表达载体pc DNA6.2-GW/Em GFP-miR,得到的大片段与人工合成的miR-17家族成熟体5p寡聚核苷酸连接,通过DNA测序、BLAST检验及双酶切电泳的方法验证成功构建了miR-17家族真核表达载体。瞬时转染人肝癌SMMC-7721细胞后miR-17家族表达水平有了显著增加,能够促进SMMC-7721细胞的体外增殖。结论成功构建miR-17家族真核表达载体,得到瞬时转染miR-17家族的人肝癌SMMC-7721细胞,并观察到miR-17家族过表达可以促进人肝癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 miR-17家族 肝癌 表达载体 细胞增殖
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沉默信息调节因子1对胃癌侵袭的影响及其机理研究 被引量：6
7
作者 赵伟 陈锐 +5 位作者 刘芮菡 常帅 谯瞧 刘俊松 张振良 车向明 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2014年第4期425-431,共7页
目的研究沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白在胃癌组织中的表达及其对胃癌侵袭的影响和可能机理。方法采用免疫组化SP法检测46例胃癌组织中SIRT1和血管内皮生长因子A(VEGF-A)蛋白的表达;采用Kaplan-Meier法分析SIRT1蛋白和VEGF-A蛋白表达对... 目的研究沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白在胃癌组织中的表达及其对胃癌侵袭的影响和可能机理。方法采用免疫组化SP法检测46例胃癌组织中SIRT1和血管内皮生长因子A(VEGF-A)蛋白的表达;采用Kaplan-Meier法分析SIRT1蛋白和VEGF-A蛋白表达对胃癌患者预后的影响;采用Western blot法检测GES-1人胃黏膜细胞株及SGC7901人胃癌细胞株中SIRT1蛋白和VEGF-A蛋白的表达;采用siRNA小干扰技术特异性干扰SGC7901细胞株中SIRT1基因的表达后,检测SIRT1蛋白和VEGF-A蛋白的表达;通过细胞侵袭实验检测不同处理后SGC7901细胞侵袭能力的变化。结果与正常胃黏膜组织比较,胃癌组织中SIRT1蛋白和VEGF-A蛋白均呈高表达(P<0.050)。SIRT1蛋白阳性表达患者的生存情况较差(P=0.001),SIRT1及VEGF-A蛋白均呈阳性表达者的生存情况较差(P=0.006),但VEGF-A蛋白表达与胃癌患者的预后无关(P=0.091)。SGC7901细胞中SIRT1蛋白(P=0.010)和VEGF-A蛋白(P=0.020)的表达较GES-1细胞上调。构建SIRT1-siRNA特异性抑制SIRT1基因的表达后(siRNA阳性组),SIRT1蛋白和VGEF-A蛋白的表达均下调(P=0.010),且SGC7901细胞的侵袭能力下降(P=0.000)。结论 SIRT1基因可能通过促进VEGF-A蛋白的表达而促进胃癌的侵袭,其可能是抑制胃癌侵袭的一个治疗靶点。 展开更多
关键词 沉默信息调节因子1 血管内皮生长因子A 胃癌 侵袭能力
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