目的探讨乙酰化STAT3对DIRAS2基因表达的调控及其在三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞增殖中的作用。方法通过数据库查询、Western blotting和qRT-PCR分析TNBC组织和细胞中DIRAS2和乙酰化STAT3的表达水平。选取TNB...目的探讨乙酰化STAT3对DIRAS2基因表达的调控及其在三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞增殖中的作用。方法通过数据库查询、Western blotting和qRT-PCR分析TNBC组织和细胞中DIRAS2和乙酰化STAT3的表达水平。选取TNBC细胞系MDA-MB-231和SUM159,通过慢病毒或质粒构建DIRAS2过表达及STAT3野生或Lys685位点突变的细胞株。利用CCK-8实验评估DIRAS2和STAT3乙酰化对TNBC细胞增殖的影响。应用Western blotting、焦磷酸测序、ChIP和IP技术研究乙酰化STAT3对DIRAS2表达的调控作用及机制。结果DIRAS2在TNBC组织和细胞中表达较低。焦磷酸测序分析发现,与正常乳腺上皮细胞相比,TNBC细胞中DIRAS2启动子区域的CpG岛甲基化水平升高,并促进癌细胞增殖。此外,TNBC细胞中STAT3的乙酰化程度增加,而DIRAS2启动子甲基化状态随着STAT3乙酰化的增加而发生改变。ChIP和IP实验表明,乙酰化STAT3可与DIRAS2启动子结合,而STAT3 Lys685位点突变会破坏STAT3与DNMT1的相互作用。结论在TNBC中,乙酰化STAT3通过招募DNMT1诱导DIRAS2基因启动子甲基化,从而导致DIRAS2表达缺失和癌细胞增殖。展开更多
目的探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)对人前列腺癌ARCaP细胞上皮细胞间质转化的影响。方法比较人前列腺癌ARCaPE细胞和ARCaPM细胞形态学差异,通过Western blot实验比较ARCaPE细胞和ARCaPM细胞E-cadherin表达水平差异;通过Transwell体外侵袭实...目的探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)对人前列腺癌ARCaP细胞上皮细胞间质转化的影响。方法比较人前列腺癌ARCaPE细胞和ARCaPM细胞形态学差异,通过Western blot实验比较ARCaPE细胞和ARCaPM细胞E-cadherin表达水平差异;通过Transwell体外侵袭实验比较ARCaPE细胞和ARCaPM细胞体外侵袭能力差异;通过real time RT-PCR实验比较ARCaPE细胞和ARCaPM细胞TNF-α表达水平差异;通过重组人TNF-α蛋白处理ARCaPE细胞,观察比较处理组与对照组在形态学、E-cadherin表达及体外侵袭能力方面的差异。结果ARCaPE细胞呈类似铺路石样的类圆形,细胞间连接紧密,呈岛屿状生长。ARCaPM细胞排列松散,部分细胞拉长呈纺锤形。与ARCaPE细胞相比,ARCaPM细胞E-cadherin表达下调,但具有更高的体外侵袭能力和更高的TNF-α表达水平。通过重组人TNF-α蛋白处理ARCaPE细胞,可使其排列松散,细胞拉长呈纺锤形,E-cadherin表达下调,并获得较高体外侵袭能力。结论TNF-α可诱导人前列腺癌ARCaP细胞EMT。展开更多
文摘目的探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)对人前列腺癌ARCaP细胞上皮细胞间质转化的影响。方法比较人前列腺癌ARCaPE细胞和ARCaPM细胞形态学差异,通过Western blot实验比较ARCaPE细胞和ARCaPM细胞E-cadherin表达水平差异;通过Transwell体外侵袭实验比较ARCaPE细胞和ARCaPM细胞体外侵袭能力差异;通过real time RT-PCR实验比较ARCaPE细胞和ARCaPM细胞TNF-α表达水平差异;通过重组人TNF-α蛋白处理ARCaPE细胞,观察比较处理组与对照组在形态学、E-cadherin表达及体外侵袭能力方面的差异。结果ARCaPE细胞呈类似铺路石样的类圆形,细胞间连接紧密,呈岛屿状生长。ARCaPM细胞排列松散,部分细胞拉长呈纺锤形。与ARCaPE细胞相比,ARCaPM细胞E-cadherin表达下调,但具有更高的体外侵袭能力和更高的TNF-α表达水平。通过重组人TNF-α蛋白处理ARCaPE细胞,可使其排列松散,细胞拉长呈纺锤形,E-cadherin表达下调,并获得较高体外侵袭能力。结论TNF-α可诱导人前列腺癌ARCaP细胞EMT。
