目的探讨miR-603抑制宫颈癌细胞增殖和迁移的机制。方法采用基因编辑系统(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated nuclease 9,CRISPR/Cas9)分别敲除宫颈癌细胞SiHa中人乳头瘤病毒16(human papil...目的探讨miR-603抑制宫颈癌细胞增殖和迁移的机制。方法采用基因编辑系统(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated nuclease 9,CRISPR/Cas9)分别敲除宫颈癌细胞SiHa中人乳头瘤病毒16(human papilloma virus 16,HPV16)E6、E7后采用real-time PCR检测miR-603的表达。将宫颈癌细胞SiHa分为4组:mimic NC组、mimic 603组、inhibitor NC组和inhibitor 603组,将mimic NC、mimic 603、inhibitor NC及inhibitor 603分别转染SiHa细胞,通过real-time PCR检测miR-603的表达水平,CCK-8法检测SiHa细胞增殖能力,Transwell小室法检测SiHa细胞迁移能力。双荧光素酶报告试验检测miR-603是否与IQ结构域GTP酶激活蛋白3(IQ motif-containing GTPase activating protein 3,IQGAP3)直接结合,Western blotting检测IQGAP3蛋白表达。UALCAN(The University of Alabama at Birmingham cancer data analysis portal)数据库分析IQGAP3在肿瘤中的表达情况;通过肿瘤细胞系百科全书(Cancer Cell Line Encyclopedia,CCLE)数据库分析IQGAP3在宫颈癌细胞系中的表达;利用分析癌症基因表达和病毒感染的交互式在线数据库(an interactive online database for analysis of gene expression and viral infection in cancer,OncoDB)分析IQGAP3与宫颈癌患者HPV感染的相关性。结果敲除HPV16 E6、E7后miR-603的表达升高(P<0.05)。过表达miR-603后,SiHa细胞的增殖和迁移能力下降(P<0.05);敲低miR-603后,SiHa细胞的增殖和迁移能力增强(P<0.05)。双荧光素酶报告试验提示IQGAP3是miR-603的直接靶点,过表达miR-603后,IQGAP3的表达降低,敲低miR-603可促进IQGAP3的表达。UALCAN数据库显示IQGAP3在多种肿瘤组织中表达高于正常对照,OncoDB数据库分析发现HPV16、18阳性患者IQGAP3表达均高于阴性患者。使用CCLE数据库分析IQGAP3在宫颈癌细胞系的表达,发现HPV阴性C33A细胞中IQGAP3表达明显低于HPV16阳性CASKI、SiHa细胞,以及HPV18阳性HELA、C4I、C4II及MS751细胞。结论敲除HPV16 E6、E7后miR-603表达上调,miR-603可抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖和迁移,这可能与其直接靶向宫颈癌中高表达的IQGAP3有关。展开更多
目的探讨人参皂苷20(S)-Rg3抑制卵巢癌细胞增殖和迁移的机制。方法在西安交通大学第一附属医院收集卵巢癌组织19例,正常卵巢组织18例,采用real-time PCR检测lncRNA KRT18P55的表达。将卵巢癌细胞SKOV3和3AO分别分为2组:阴性对照组和20(S...目的探讨人参皂苷20(S)-Rg3抑制卵巢癌细胞增殖和迁移的机制。方法在西安交通大学第一附属医院收集卵巢癌组织19例,正常卵巢组织18例,采用real-time PCR检测lncRNA KRT18P55的表达。将卵巢癌细胞SKOV3和3AO分别分为2组:阴性对照组和20(S)-Rg3组,通过real-time PCR检测KRT18P55的表达水平,CCK-8和平板克隆实验检测SKOV3和3AO细胞增殖能力,Transwell小室法检测SKOV3和3AO细胞迁移能力。将KRT18P55 siRNA分别转染SKOV3和3AO细胞,通过real-time PCR检测KRT18P55的表达水平,CCK-8和平板克隆实验检测SKOV3和3AO细胞增殖能力,Transwell小室法检测SKOV3和3AO细胞迁移能力。癌症基因组学门户网站(cBioPortal for Cancer Genomics,cBioPortal)提取KRT18P55共表达基因数据;基因功能分析数据库(Gene Annotation and Analysis Resource,Metascape)对KRT18P55及其显著相关基因进行功能富集分析;基因表达谱交互式分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)、阿拉巴马大学癌症数据分析门户(University of Alabama at Birmingham Cancer Data Analysis Portal,UALCAN)在线数据库对筛选的KRT18P55显著相关基因进行表达分析。结果人卵巢癌组织中的KRT18P55表达水平显著高于正常卵巢组织,经20(S)-Rg3处理的卵巢癌细胞SKOV3和3AO的增殖和迁移能力均下降,KRT18P55的表达水平显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。敲低KRT18P55后,卵巢癌细胞的增殖和迁移能力下降(P<0.05)。基因本体(Gene Ontology,GO)功能富集分析显示,KRT18P55可能参与中间丝细胞骨架组成、外源性凋亡信号通路等。GEPIA及UALCAN数据库的表达分析显示,KRT18P55相关性最强的两个基因KRT18、KRT8的mRNA及蛋白水平在卵巢癌中均较正常对照显著增高(P<0.05)。结论人参皂苷20(S)-Rg3可能通过降低KRT18P55的表达水平抑制卵巢癌细胞的增殖与迁移,进而抑制卵巢癌的进展。展开更多
目的探讨基因组拷贝数变异测序(copy number variation sequencing,CNV-seq)技术及染色体核型分析在染色体异常检测中的应用价值。方法采用CNV-seq技术和传统的染色体核型分析对42例患者进行染色体分析,对比分析两种检测方法的优势及局...目的探讨基因组拷贝数变异测序(copy number variation sequencing,CNV-seq)技术及染色体核型分析在染色体异常检测中的应用价值。方法采用CNV-seq技术和传统的染色体核型分析对42例患者进行染色体分析,对比分析两种检测方法的优势及局限性。结果CNV-seq结果显示,42例标本中染色体拷贝数异常7例,检出率为 16.67%;而染色体核型分析结果显示,存在8例染色体异常(其中染色体结构异常6例,数目异常2例),检出率为 19.04%;此外,还检出4例为染色体多态性变异。结论CNV-seq技术不仅能检测出常规的染色体数目和结构异常(尤其能对来源未知的染色体片段提供更为精准的检测信息),还能检测到100 kb以上的染色体片段的微缺失和微重复;CNV-seq技术不能检测染色体平衡易位和倒位等。传统的染色体核型分析联合CNV-seq检测将会为染色体异常患者提供更为精确的临床诊断。展开更多
文摘目的探讨miR-603抑制宫颈癌细胞增殖和迁移的机制。方法采用基因编辑系统(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated nuclease 9,CRISPR/Cas9)分别敲除宫颈癌细胞SiHa中人乳头瘤病毒16(human papilloma virus 16,HPV16)E6、E7后采用real-time PCR检测miR-603的表达。将宫颈癌细胞SiHa分为4组:mimic NC组、mimic 603组、inhibitor NC组和inhibitor 603组,将mimic NC、mimic 603、inhibitor NC及inhibitor 603分别转染SiHa细胞,通过real-time PCR检测miR-603的表达水平,CCK-8法检测SiHa细胞增殖能力,Transwell小室法检测SiHa细胞迁移能力。双荧光素酶报告试验检测miR-603是否与IQ结构域GTP酶激活蛋白3(IQ motif-containing GTPase activating protein 3,IQGAP3)直接结合,Western blotting检测IQGAP3蛋白表达。UALCAN(The University of Alabama at Birmingham cancer data analysis portal)数据库分析IQGAP3在肿瘤中的表达情况;通过肿瘤细胞系百科全书(Cancer Cell Line Encyclopedia,CCLE)数据库分析IQGAP3在宫颈癌细胞系中的表达;利用分析癌症基因表达和病毒感染的交互式在线数据库(an interactive online database for analysis of gene expression and viral infection in cancer,OncoDB)分析IQGAP3与宫颈癌患者HPV感染的相关性。结果敲除HPV16 E6、E7后miR-603的表达升高(P<0.05)。过表达miR-603后,SiHa细胞的增殖和迁移能力下降(P<0.05);敲低miR-603后,SiHa细胞的增殖和迁移能力增强(P<0.05)。双荧光素酶报告试验提示IQGAP3是miR-603的直接靶点,过表达miR-603后,IQGAP3的表达降低,敲低miR-603可促进IQGAP3的表达。UALCAN数据库显示IQGAP3在多种肿瘤组织中表达高于正常对照,OncoDB数据库分析发现HPV16、18阳性患者IQGAP3表达均高于阴性患者。使用CCLE数据库分析IQGAP3在宫颈癌细胞系的表达,发现HPV阴性C33A细胞中IQGAP3表达明显低于HPV16阳性CASKI、SiHa细胞,以及HPV18阳性HELA、C4I、C4II及MS751细胞。结论敲除HPV16 E6、E7后miR-603表达上调,miR-603可抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖和迁移,这可能与其直接靶向宫颈癌中高表达的IQGAP3有关。
文摘目的探讨人参皂苷20(S)-Rg3抑制卵巢癌细胞增殖和迁移的机制。方法在西安交通大学第一附属医院收集卵巢癌组织19例,正常卵巢组织18例,采用real-time PCR检测lncRNA KRT18P55的表达。将卵巢癌细胞SKOV3和3AO分别分为2组:阴性对照组和20(S)-Rg3组,通过real-time PCR检测KRT18P55的表达水平,CCK-8和平板克隆实验检测SKOV3和3AO细胞增殖能力,Transwell小室法检测SKOV3和3AO细胞迁移能力。将KRT18P55 siRNA分别转染SKOV3和3AO细胞,通过real-time PCR检测KRT18P55的表达水平,CCK-8和平板克隆实验检测SKOV3和3AO细胞增殖能力,Transwell小室法检测SKOV3和3AO细胞迁移能力。癌症基因组学门户网站(cBioPortal for Cancer Genomics,cBioPortal)提取KRT18P55共表达基因数据;基因功能分析数据库(Gene Annotation and Analysis Resource,Metascape)对KRT18P55及其显著相关基因进行功能富集分析;基因表达谱交互式分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)、阿拉巴马大学癌症数据分析门户(University of Alabama at Birmingham Cancer Data Analysis Portal,UALCAN)在线数据库对筛选的KRT18P55显著相关基因进行表达分析。结果人卵巢癌组织中的KRT18P55表达水平显著高于正常卵巢组织,经20(S)-Rg3处理的卵巢癌细胞SKOV3和3AO的增殖和迁移能力均下降,KRT18P55的表达水平显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。敲低KRT18P55后,卵巢癌细胞的增殖和迁移能力下降(P<0.05)。基因本体(Gene Ontology,GO)功能富集分析显示,KRT18P55可能参与中间丝细胞骨架组成、外源性凋亡信号通路等。GEPIA及UALCAN数据库的表达分析显示,KRT18P55相关性最强的两个基因KRT18、KRT8的mRNA及蛋白水平在卵巢癌中均较正常对照显著增高(P<0.05)。结论人参皂苷20(S)-Rg3可能通过降低KRT18P55的表达水平抑制卵巢癌细胞的增殖与迁移,进而抑制卵巢癌的进展。
