缺氧条件下自噬在视网膜血管内皮细胞血管生成中的作用 被引量：8

1

作者 李蓉 杜军辉 +3 位作者 姚杨 于照祥 樊卓 常伟平 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期187-193,共7页

目的研究缺氧条件下自噬对体外培养的小鼠视网膜血管内皮细胞（RVECs）增生、迁移和管腔形成的影响。方法取清洁级C57BL/6J小鼠50只，采用组织块培养法分离和培养小鼠RVECs，采用CD34免疫荧光染色法对培养细胞进行鉴定。将生长良好的RV... 目的研究缺氧条件下自噬对体外培养的小鼠视网膜血管内皮细胞（RVECs）增生、迁移和管腔形成的影响。方法取清洁级C57BL/6J小鼠50只，采用组织块培养法分离和培养小鼠RVECs，采用CD34免疫荧光染色法对培养细胞进行鉴定。将生长良好的RVECs分为正常对照组、缺氧对照组及缺氧＋3-甲基腺嘌呤（3-MA）组。正常对照组细胞常规培养，缺氧对照组细胞在氧体积分数1%的环境下培养24 h，缺氧＋3-MA组细胞先用5 mmol/L 3-MA预处理4 h，然后在上述缺氧环境下培养24 h。采用Western blot法检测自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ）比值及细胞中Beclin-1的表达；透射电子显微镜下观察细胞内形成的自噬小体的超微结构；分别采用Click-iT EdU试剂盒、细胞划痕法和Matrigel胶法检测细胞增生率、细胞迁移情况及细胞管腔形成情况。 结果原代培养后5～7 d培养的细胞呈铺路石样排列生长，CD34表达阳性。透射电子显微镜下缺氧对照组细胞自噬小体明显多于正常对照组和缺氧＋3-MA组。正常对照组、缺氧对照组和缺氧＋3-MA组细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值分别为0.243±0.030、0.658±0.032和0.405±0.095，Beclin-1蛋白相对表达量分别为0.260±0.040、0.650±0.071和0.461±0.089；细胞增生率分别为（45.93±6.39）%、（22.74±2.35）%和（24.12±3.59）%；细胞划痕愈合率分别为（36.02±5.84）%、（57.26±11.98）%和（18.16±9.73）%；细胞管腔形成数分别为（29.20±6.10）、（41.40±4.04）和（22.00±2.92）个；总体比较差异均有统计学意义（F＝35.86、23.53、34.28、21.12、23.27，均P〈0.01）。与正常对照组相比，缺氧对照组细胞的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin-1蛋白相对表达均明显增加，细胞增生率明显下降，划痕愈合率和管腔形成数明显增加，缺氧＋3-MA组细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、Beclin-1蛋白相对表达量、划痕愈合率和细胞管腔形成数较缺氧对照组明显降低。结论缺氧激活小鼠RVECs自噬，进而促进细胞迁移和管腔形成，自噬抑制剂3-MA可抑制自噬小体活性，并抑制RVECs的迁移和管腔形成能力。 展开更多

关键词 自噬 血管生成 缺氧 视网膜新生血管 缺血性视网膜病变 细胞培养 近交系C57BL 小鼠

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自噬在高糖条件下视网膜色素上皮细胞表达血管内皮生长因子促进RF/6A细胞血管生成中的作用 被引量：6

2

作者 李蓉 姚杨 +3 位作者 杜军辉 姚国敏 王小娣 张进 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2019年第8期714-718,共5页

目的研究高糖条件下诱导的人视网膜色素上皮细胞株(ARPE-19)自噬对其表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),及恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)迁移和管腔形成的影响。方法根据不同干预将ARPE-19细胞... 目的研究高糖条件下诱导的人视网膜色素上皮细胞株(ARPE-19)自噬对其表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),及恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)迁移和管腔形成的影响。方法根据不同干预将ARPE-19细胞随机分为对照组、高糖组及3-甲基腺嘌呤(3-MA)+高糖组。对照组细胞在无糖DMEM培养基中常规培养24 h,高糖组细胞在DMEM培养基中加入30 mmol·L^-1葡萄糖溶液处理24 h,3-MA+高糖组细胞先用10 mmol·L^-1 3-MA处理24 h,然后更换培养基再加入30 mmol·L^-1葡萄糖溶液处理24 h。Western blot法检测细胞自噬标志性蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule-related protein 1 light chain 3,LC3)II型和I型的比值(LC3-II/LC3-I)、Beclin-1及细胞中自噬相关基因3(autophagy-related gene 3,Atg3)的蛋白表达。ELISA法检测ARPE-19细胞上清液中VEGF的蛋白表达。比较三组ARPE-19细胞LC3-II/LC3-I、Beclin-1、Atg3及VEGF的蛋白表达量。然后将以上三组ARPE-19细胞上清液分别加入RF/6A细胞培养基中,将RF/6A细胞也按以上方法分组,分别采用Transwell法及Matrigel胶法检测并比较三组RF/6A细胞迁移数及细胞管腔形成数。结果对照组、高糖组和3-MA+高糖组ARPE-19细胞中LC3-II/LC3-I比值分别为0.405±0.095、0.932±0.024和0.635±0.048;Beclin-1蛋白相对表达量分别为0.205±0.035、0.590±0.120和0.425±0.082;Atg3蛋白相对表达量分别为0.277±0.035、0.539±0.071和0.389±0.019。ARPE-19细胞上清液中VEGF的蛋白表达量三组分别为(44.03±9.08)ng·L^-1、(205.70±17.90)ng·L^-1和(112.52±21.06)ng·L^-1;RF/6A细胞迁移数三组分别为(125.60±6.35)个、(153.60±19.20)个和(67.40±7.95)个;细胞管腔形成数三组分别为(12.22±0.84)个、(18.44±1.68)个和(5.44±0.51)个;整体比较差异均有统计学意义(均为P<0.01)。与对照组相比,高糖组ARPE-19细胞的LC3-II/LC3-I比值、Beclin-1及Atg3蛋白相对表达量均明显增加(均为P<0.01),VEGF表达水平均明显升高(P<0.01),RF/6A细胞迁移数和管腔形成数均明显增加(均为P<0.01),3-MA+高糖组ARPE-19细胞中LC3-II/I比值、Beclin-1和Atg3蛋白相对表达量、VEGF表达量、RF/6A细胞迁移数和细胞管腔形成数均较高糖组明显降低(均为P<0.01)。结论高糖激活ARPE-19细胞自噬,进而上调VEGF的表达并促进RF/6A细胞迁移和管腔形成,自噬抑制剂3-MA可抑制ARPE-19细胞自噬,并下调VEGF的表达从而抑制RF/6A细胞的血管形成能力。 展开更多

关键词 自噬 血管生成 高糖 血管内皮生长因子 视网膜新生血管 糖尿病视网膜病变 细胞培养

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糖代谢异常者血浆同型半胱氨酸水平与周围神经病变的关系 被引量：4

3

作者 润琳 王芳 +5 位作者 李小凤 王翔 杜军辉 成淑英 张利红 农晰婷 《山西医科大学学报》 CAS 2018年第7期842-845,共4页

目的探讨糖代谢异常、初诊断2型糖尿病患者血浆同型半胱氨酸水平与糖尿病周围神经病变的关系。方法于我院门诊及住院患者中就诊的糖代谢异常(IGT)者38例(IGT组)及2型糖尿病(T2DM)患者42例(T2DM组),于我院健康体检中心随机抽取健康对照20... 目的探讨糖代谢异常、初诊断2型糖尿病患者血浆同型半胱氨酸水平与糖尿病周围神经病变的关系。方法于我院门诊及住院患者中就诊的糖代谢异常(IGT)者38例(IGT组)及2型糖尿病(T2DM)患者42例(T2DM组),于我院健康体检中心随机抽取健康对照20名(C组)。分别对三组人群检测血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平,并使用肌电图仪分别检测三组人群的感觉神经及运动神经传导速度。再将三组人群依据Hcy浓度分别于组内分为亚组1(Hcy<15μmol/L)和亚组2(Hcy≥15μmol/L)。结果 IGT组和T2DM组分别与C组比较,血浆Hcy水平均显著升高(P<0.05),感觉、运动神经传导速度显著下降(P<0.05)。三组人群内各亚组间进行比较,正常对照组亚组间,感觉、运动神经传导速度无显著性差异(P>0.05);IGT亚组间,感觉、运动神经传导速度无显著性差异(P>0.05);T2DM亚组间,亚组2感觉、运动神经传导速度均显著下降(P<0.05)。结论糖代谢异常时,高浓度同型半胱氨酸血症对神经系统损伤不显著,高浓度血糖伴随高浓度同型半胱氨酸血症加重了神经系统的损伤。 展开更多

关键词 2型糖尿病 糖代谢异常 同型半胱氨酸 周围神经病变

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脂联素对高糖条件下RF/6A细胞的保护作用 被引量：3

4

作者 李蓉 杜军辉 +2 位作者 姚国敏 王小娣 姚杨 《山西医科大学学报》 CAS 2019年第2期169-174,共6页

目的观察脂联素(adiponectin,APN)对高糖培养条件下恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(monkey choroid-retinalendothelial cell line,RF/6A)增殖及凋亡的影响。方法将体外培养的生长良好的RF/6A细胞随机分为空白对照组(PBS)、甘露醇对照... 目的观察脂联素(adiponectin,APN)对高糖培养条件下恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(monkey choroid-retinalendothelial cell line,RF/6A)增殖及凋亡的影响。方法将体外培养的生长良好的RF/6A细胞随机分为空白对照组(PBS)、甘露醇对照组(25 mmol/L甘露醇)、高糖组(25 mmol/L D-葡萄糖)、高糖+APN组(25 mmol/L D-葡萄糖+10μg/mlAPN),各组加入不同的药物处理48 h。分别采用CCK-8法检测细胞增殖,Western blot检测细胞凋亡关键蛋白Bax、Bcl-2的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果高糖组(71. 42%±2. 29%)和高糖+APN组(90. 87%±1. 68%)细胞增殖率低于空白对照组(100%±0%)和甘露醇对照组(99. 09%±0. 46%)(P <0. 001);与高糖组相比,高糖+APN组细胞增殖率明显升高(P <0. 001)。高糖组和高糖+APN组的RF/6A细胞Bax的相对表达量高于空白对照组和甘露醇对照组(P <0. 001)。高糖组和高糖+APN组细胞Bcl-2的相对表达量低于空白对照组和甘露醇对照组(P <0. 001)。与高糖组相比,高糖+APN组细胞Bax的表达明显降低,Bcl-2的表达明显升高(均P <0. 001)。高糖组及高糖+APN组细胞凋亡率均比空白对照组和甘露醇对照组增多(P <0. 001)。与高糖组相比,高糖+APN组细胞凋亡率明显减少(P <0. 001)。结论 APN处理可抑制高糖培养条件下的RF/6A细胞凋亡,促进细胞增殖,提示APN对视网膜血管内皮细胞具有一定的保护效应。 展开更多

关键词 脂联素 高糖培养 视网膜血管内皮细胞 凋亡 细胞增殖

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自噬抑制剂3-MA抑制高糖条件下猴脉络膜视网膜血管内皮细胞血管形成 被引量：8

5

作者 杜军辉 刘佳丽 +4 位作者 马乐 李蓉 张中 李俊琪 成静 《临床眼科杂志》 2015年第5期456-460,共5页

目的研究高浓度葡萄糖对体外培养的猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)自噬水平的影响,探讨自噬抑制剂3-MA对RF/6A细胞新生血管形成的影响。方法取体外培养的生长良好的RF/6A细胞用于实验,将细胞随机分为4组,分别是对照组、低糖组(5 mmo... 目的研究高浓度葡萄糖对体外培养的猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)自噬水平的影响,探讨自噬抑制剂3-MA对RF/6A细胞新生血管形成的影响。方法取体外培养的生长良好的RF/6A细胞用于实验,将细胞随机分为4组,分别是对照组、低糖组(5 mmol/L的D-葡萄糖)、高糖组(25 mmol/L的D-葡萄糖)、高糖+3-MA组(5 m M的3-MA预处理细胞后加入含25 mmol/L的D-葡萄糖培养液培养)。24 h后通过MTT法检测细胞活力,细胞划痕法检测细胞迁移,基质胶(Matrigel)法检测血管管腔形成,观察高糖对RF/6A细胞活力、迁移、管腔形成的影响及其3-MA的作用。结果 1同对照组比较,低糖组RF/6A细胞活力下降,高糖组RF/6A细胞活力进一步下降(P<0.05),高糖+3-MA组细胞活力较低糖与高糖组明显提高(P<0.05);2对照组、低糖组、高糖组、高糖+3-MA组细胞迁移面积(像素)分别是:40250±2015,44528±2273,55793±2158,39726±1983,组间差异具有统计学意义(P<0.05);3对照组、低糖组、高糖组、高糖+3-MA组RF/6A细胞管腔形成数分别为16.9±3.3,19.8±3.6,24.7±1.9,10.9±3.3,组间差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,D-葡萄糖促进RF/6A细胞管腔形成(P<0.05),而3-MA能够显著抑制RF/6A细胞管腔的形成。结论高糖能够抑制RF/6A细胞活力,促进RF/6A细胞迁移和管腔形成,通过3-MA预处理可以一定程度恢复细胞活力,显著抑制高糖诱导的细胞迁移和管腔形成。提示自噬可能参与调控高糖诱导的视网膜新生血管形成。 展开更多

关键词 糖尿病视网膜病变 新生血管 细胞自噬

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高糖环境对视网膜血管内皮细胞自噬的影响及机制 被引量：4

6

作者 姚国敏 李蓉 +3 位作者 姚杨 杜军辉 王小娣 邓颖 《临床眼科杂志》 2019年第4期361-366,共6页

目的研究高糖培养环境对恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)自噬的影响及机制。方法将体外培养的RF/6A细胞随机分为对照组、高糖组和3-甲基腺嘌呤(3-MA)+高糖组,对照组细胞在无糖培养基中培养,高糖组细胞在培养基中加入25mMD-glucos... 目的研究高糖培养环境对恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)自噬的影响及机制。方法将体外培养的RF/6A细胞随机分为对照组、高糖组和3-甲基腺嘌呤(3-MA)+高糖组,对照组细胞在无糖培养基中培养,高糖组细胞在培养基中加入25mMD-glucose进行培养,3-MA+高糖组用5mg/ml3-MA预处理1.5h,然后置于含25mMD-glucose的培养基中继续培养。培养48h后,采用Westernblot法检测各组细胞的自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)、Atg5及关键信号通路蛋白PI3K、AKT、mTOR的表达,采用可表达mCherry-GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒感染细胞,激光共聚焦显微镜下观察细胞内自噬的变化。结果①对照组、高糖组、3-MA+高糖组细胞中的LC3B-II/LC3B-I值、Atg5值分别为(0.19±0.02、0.58±0.06和0.43±0.04)和(0.35±0.05、0.96±0.06和0.83±0.06),组间总体比较差异均有统计学意义(LC3B-II/LC3B-I:F=55.58,P=0.000;Atg5:F=100.35,P=0.000)。高糖组细胞中LC3B-II/LC3B-I值和Atg5值均明显高于对照组和3-MA+高糖组,差异均有统计学意义(均P<0.05),3-MA+高糖组的LC3B-II/LC3B-I值和Atg5值均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。②对照组、高糖组、3-MA+高糖组细胞中的PI3K值、AKT值和mTOR值分别为(0.93±0.06、0.94±0.07和0.89±0.07)、(0.95±0.05、0.94±0.04和0.90±0.02)和(0.81±0.04、0.82±0.04和0.80±0.02),组间总体比较差异均无统计学意义(均P>0.05);三组磷酸化蛋白p-PI3K值、p-AKT值和p-mTOR值分别为(0.74±0.02、0.40±0.02和0.70±0.02)、(0.87±0.02、0.47±0.02和0.77±0.06)和(0.76±0.03、0.38±0.02和0.70±0.02),组间总体比较差异均有统计学意义(p-PI3K:F=249.92,P=0.000;p-AKT:F=100.94,P=0.000;p-mTOR:F=218.21,P=0.000)。高糖组细胞中p-PI3K、p-AKT和p-mTOR值均明显低于对照组和3-MA+高糖组,差异均有统计学意义(均P<0.05),3-MA+高糖组的p-PI3K、p-AKT和p-mTOR值均低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。③对照组细胞浆中出现较弱的GFP(绿点)和mCherry(红点)荧光信号,高糖组黄点(红绿荧光融合)和红点明显多于对照组,自噬增强;3-MA+高糖组黄点和红点较高糖组减少,自噬减弱。结论高糖环境通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路激活RF/6A细胞自噬。 展开更多

关键词 自噬 高糖 RF/6A PI3K/AKT/MTOR

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糖尿病视网膜病变分级诊疗措施初探 被引量：2

7

作者 杜军辉 张磊 +2 位作者 姚杨 石蕊 林小波 《糖尿病新世界》 2018年第7期190-191,共2页

糖尿病视网膜病变是糖尿病患者群体在临床病程的持续发展演化过程中,因多种因素的影响而发生的严重并发症,是临床中引致病理性致盲事件发生的重要因素,切实做好针对糖尿病视网膜病变发生的管理干预工作,对于控制和降低患者严重并发症的... 糖尿病视网膜病变是糖尿病患者群体在临床病程的持续发展演化过程中,因多种因素的影响而发生的严重并发症,是临床中引致病理性致盲事件发生的重要因素,切实做好针对糖尿病视网膜病变发生的管理干预工作,对于控制和降低患者严重并发症的发生具有重要意义。2017年国家卫生计生委办公厅为了做好糖尿病视网膜病变防治工作,结合糖尿病分级诊疗要求,研究制定了《糖尿病视网膜病变分级诊疗服务技术方案》,通过分级诊疗制度的实施,有助于早期发现糖尿病视网膜病变,并给予早期干预,从而降低患者的疾病负担。但是在该服务技术方案实施过程中,具体的实施措施仍有待进一步细化、完善。该文针对糖尿病视网膜病变分级诊疗的措施,进行初步探讨。 展开更多

关键词 糖尿病视网膜病变 分级诊疗模式 措施

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自噬抑制剂3-MA对缺氧诱导的人视网膜色素上皮细胞表达TNF-α的抑制作用

8

作者 李蓉 郭丹萍 +1 位作者 杜军辉 姚杨 《临床眼科杂志》 2018年第5期455-459,共5页

目的研究自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对缺氧条件下人视网膜色素上皮(RPE)细胞表达肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法将体外培养的ARPE-19细胞随机分为对照组、缺氧组和3-MA+缺氧组,对照组细胞在常氧条件下培养,缺氧组细胞在缺氧箱(1... 目的研究自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对缺氧条件下人视网膜色素上皮(RPE)细胞表达肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法将体外培养的ARPE-19细胞随机分为对照组、缺氧组和3-MA+缺氧组,对照组细胞在常氧条件下培养,缺氧组细胞在缺氧箱(1%O2/5%CO2/94%N2)中进行培养,3-MA+缺氧组先在培养基中加入10 m M 3-MA,然后置于缺氧箱中继续培养。采用Western blot法检测各组细胞的自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3 B (LC3B)、Beclin-1及p62的表达;采用ELISA法检测各组细胞上清液中TNF-α的浓度。结果 (1)对照组、缺氧组、3-MA+缺氧组细胞的TNF-α浓度分别为(59. 46±5. 22) pg/ml、(135. 80±11. 30) pg/ml和(105. 88±10. 42) pg/ml,总体比较差异有统计学意义(F=50. 53,P=0. 000),缺氧组的TNF-α浓度明显高于对照组和3-MA+缺氧组,差异均有统计学意义(均P <0. 01),3-MA+缺氧组的TNF-α浓度高于对照组,差异有统计学意义(P <0. 01)。(2)对照组、缺氧组、3-MA+缺氧组细胞中的LC3B-II/LC3B-I值、Beclin-1值及p62值分别为(0. 20±0. 03、0. 58±0. 07和0. 40±0. 09)、(0. 32±0. 04、0. 97±0. 05和0. 78±0. 06)和(1. 03±0. 02、0. 32±0. 10和0. 78±0. 08),组间总体比较差异均有统计学意义(LC3B-II/LC3B-I:F=21. 73,P=0. 002; Beclin-1:F=149. 34,P=0. 000; p62:F=69. 53,P=0. 000)。缺氧组细胞中LC3B-II/LC3B-I值和Beclin-1值均明显高于对照组和3-MA+缺氧组,差异均有统计学意义(均P <0. 05),3-MA+缺氧组的LC3B-II/LC3B-I值和Beclin-1值均高于对照组,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。缺氧组细胞中p62值明显低于对照组和3-MA+缺氧组,差异均有统计学意义(均P <0. 01),3-MA+缺氧组的p62值低于对照组,差异有统计学意义(P <0. 01)。结论缺氧激活RPE细胞自噬并促进其TNF-α的表达,自噬抑制剂3-MA可在一定程度上抑制自噬进程,从而发挥抑制细胞表达TNF-α的作用。 展开更多

关键词 自噬 视网膜色素上皮 肿瘤坏死因子-Α 缺氧

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血管内皮细胞生长因子抑制剂对视网膜血管内皮细胞自噬的促进作用 被引量：4

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作者 李蓉 杜军辉 +1 位作者 姚杨 李晓艳 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2018年第10期935-939,共5页

目的观察血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)抑制剂对小鼠视网膜血管内皮细胞(retinal vascular endothelial cells,RVECs)自噬水平的影响。方法将RVECs随机分为五组:正常对照组、缺氧对照组、自噬抑制剂3... 目的观察血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)抑制剂对小鼠视网膜血管内皮细胞(retinal vascular endothelial cells,RVECs)自噬水平的影响。方法将RVECs随机分为五组:正常对照组、缺氧对照组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)组、VEGF抑制剂(anti-VEGF)组和3-MA+anti-VEGF组。采用Western blot法检测RVECs中两种自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)及Beclin-1的表达;计算绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)阳性斑点细胞占比;透射电子显微镜下观察细胞内形成的自噬体的超微结构。结果正常对照组、缺氧对照组、3-MA组、anti-VEGF及3-MA+anti-VEGF组的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ分别为0.182±0.125、0.587±0.101、0.309±0.151、0.914±0.037及0.585±0.098;Beclin-1分别为0.205±0.035、0.590±0.120、0.425±0.082、0.842±0.087及0.607±0.022;GFP阳性斑点细胞比例分别为17.107%±3.521%、90.278%±2.684%、82.591%±4.490%、94.798%±1.760%及89.472%±3.764%。与正常对照组相比,缺氧对照组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin-1蛋白表达增高,GFP阳性斑点细胞的比例增加(均为P<0.05),同时自噬体增多。与缺氧对照组相比,3-MA组的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达水平及GFP阳性斑点细胞比率降低(均为P<0.05),同时自噬体减少;anti-VEGF组的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达水平及GFP阳性斑点细胞比率升高(均为P<0.05),同时自噬体增多。与anti-VEGF组相比,3-MA+anti-VEGF组的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1蛋白表达水平及GFP阳性斑点细胞比率降低(均为P<0.05),同时自噬体减少。结论VEGF抑制剂对缺氧状态下视网膜血管内皮细胞的自噬水平有促进作用。 展开更多

关键词 自噬 血管内皮细胞生长因子 缺氧 视网膜血管内皮细胞

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自噬对视网膜色素上皮细胞表达bFGF及TGF-β2的调控作用 被引量：2

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作者 田瑾 李蓉 +1 位作者 杜军辉 姚杨 《山西医科大学学报》 CAS 2018年第8期943-948,共6页

目的观察缺氧条件下自噬对视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)表达碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)及转化生长因子β2(transforming growth factor,TGF-β2)的调控作用。方法将体外培... 目的观察缺氧条件下自噬对视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)表达碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)及转化生长因子β2(transforming growth factor,TGF-β2)的调控作用。方法将体外培养生长良好的ARPE-19细胞随机分为4组:对照组(常氧条件下培养),缺氧组(在1%O_2/5%CO_2/94%N_2缺氧箱中培养24h),缺氧+3-MA组(加入10 mmol/L自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤,3-MA)及缺氧+CQ组(加入50μmol/L自噬抑制剂氯喹,CQ),后三组均在缺氧箱中培养24 h。采用Western blot法检测细胞自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B(microtubule associated protein 1 light chain 3 B,LC3B)、Beclin-1及p62的表达,ELISA法检测细胞上清液中b FGF及TGF-β2的浓度。结果正常对照组、缺氧组、缺氧+3-MA组和缺氧+CQ组细胞中LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值分别为0.24±0.02,0.50±0.05,0.34±0.01和0.67±0.05;Beclin-1相对表达量分别为0.32±0.040,0.97±0.05,0.78±0.06和0.54±0.01;p62相对表达量分别为1.03±0.02,0.32±0.10,0.78±0.08和0.96±0.02;b FGF的浓度(pg/ml)分别为1 771.01±110.38,3 709.79±262.68,3 026.24±230.39和2 610.01±183.52;TGF-β2的浓度(pg/ml)分别为256.11±27.63,516.85±57.94,439.45±17.53和353.58±33.12。与正常对照组相比,缺氧组细胞的LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值、Beclin-1的蛋白表达明显增加,p62明显下降(P<0.05),b FGF及TGF-β2水平升高(P<0.05)。与缺氧组相比,缺氧+3-MA组或缺氧+CQ组抑制自噬能明显减少或增加LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ的表达,减少Beclin-1的表达,增加p62的表达,同时减少b FGF及TGF-β2的表达。结论缺氧导致RPE细胞自噬激活,进一步调控RPE细胞b FGF及TGF-β2的表达。 展开更多

关键词 自噬 视网膜色素上皮细胞 BFGF TGF-Β2 细胞缺氧

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脂肪因子Chemerin促进RF/6A细胞增殖、迁移和管腔形成 被引量：1

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作者 杜军辉 马楼艳 +4 位作者 李蓉 张中 李俊琪 朱夏茹 成静 《中华眼视光学与视觉科学杂志》 CAS CSCD 2018年第2期104-108,共5页

目的：研究Chemerin对体外培养的恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞（RF/6A细胞）增殖、迁移和管腔形成的影响。方法：实验研究。取体外培养的生长良好的RF/6A细胞用于实验，将细胞随机分为4组，分别是对照组、5 ng/ml浓度Chemerin组、10 ... 目的：研究Chemerin对体外培养的恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞（RF/6A细胞）增殖、迁移和管腔形成的影响。方法：实验研究。取体外培养的生长良好的RF/6A细胞用于实验，将细胞随机分为4组，分别是对照组、5 ng/ml浓度Chemerin组、10 ng/ml浓度Chemerin组、20 ng/ml浓度Chemerin组。在RPMI-1640 培养液中进行培养24、48 h后，采用MTT法检测细胞增殖，划痕法检测细胞迁移，基质胶法检测细胞管腔形成。多组间比较采用单因素方差分析。结果：MTT检测结果提示，同对照组比较，10、20 ng/ml浓度Chemerin能够显著促进细胞增殖，组间差异均有统计学意义（P ＜0.05），5 ng/ml浓度组与对照组差异无统计学意义；划痕法检测细胞迁移结果提示，同对照组比较，3 种Chemerin浓度均能够显著促进细胞迁移，呈剂量依赖性，组间差异均有统计学意义（P ＜0.05）；基质胶法检测细胞管腔形成结果提示，同对照组比较，3 种Chemerin浓度均能够显著促进细胞管腔形成，呈剂量依赖性，组间差异均有统计学意义（P ＜0.05）。结论：脂肪因子Chemerin能够促进RF/6A细胞增殖、迁移和管腔形成，提示Chemerin在视网膜新生血管形成中起重要作用。 展开更多

关键词 CHEMERIN 视网膜病变 新生血管

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基于社区居民健康档案的糖尿病视网膜病变远程筛查模式 被引量：6

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作者 杜军辉 张中 《中华全科医师杂志》 2014年第6期433-434,共2页

糖尿病视网膜病变是糖尿病患者致盲的主要原因，早期发现对预后至关重要。利用社区居民健康档案对糖尿病患者进行眼底筛查，尤其是远程筛查模式对于早期发现本病及进行相关医学研究，具有重要价值。

关键词 糖尿病视网膜病变 疾病管理

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非甾体抗炎药物局部点眼辅助治疗AMD研究进展 被引量：6

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作者 杜军辉 李蓉 《中华眼视光学与视觉科学杂志》 CAS CSCD 2015年第2期122-125,共4页

治疗AMD的主要方法是玻璃体腔内注射抗血管内皮生长因子（VEGF）药物,但其最大的缺点是费用高、需要重复注药,一方面使经济困难的患者丧失了治疗机会,另一方面,反复眼内注射也增加了许多并发症的发生机会.因此,如何减少注药次数是该治... 治疗AMD的主要方法是玻璃体腔内注射抗血管内皮生长因子（VEGF）药物,但其最大的缺点是费用高、需要重复注药,一方面使经济困难的患者丧失了治疗机会,另一方面,反复眼内注射也增加了许多并发症的发生机会.因此,如何减少注药次数是该治疗最需要解决的问题.非甾体抗炎药（NSAID）具有抗炎、抗新生血管生成的作用,已有研究表明NSAID辅助抗VEGF药物治疗AMD可以提高治疗效果,减少抗VEGF药物玻璃体腔注药次数,并降低黄斑中心厚度.现对NSAID治疗CNV的机制以及动物实验和临床试验的相关研究进展进行综述,以期促进更多的眼科同仁关注此种辅助治疗方法,并开展更进一步的研究。 展开更多

关键词 年龄相关性黄斑变性 非甾体抗炎药 溴芬酸钠 奈帕芬胺 血管内皮生长因子

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