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丙型肝炎病毒核心蛋白基因的克隆及表达
1
作者
孙菊
楚雍烈
+3 位作者
姜凤良
景晓红
柴长斌
解颖馨
《西安交通大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期609-611,615,共4页
目的在大肠杆菌中表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白基因片段。方法以HCV全长cDNA质粒为模板进行PCR扩增,获得366bp的核心蛋白基因片段。将其插入连接载体pMD18-T vector中,酶切后再与表达载体pBV220连接,构建重组表达载体pBV220/HCV-C。...
目的在大肠杆菌中表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白基因片段。方法以HCV全长cDNA质粒为模板进行PCR扩增,获得366bp的核心蛋白基因片段。将其插入连接载体pMD18-T vector中,酶切后再与表达载体pBV220连接,构建重组表达载体pBV220/HCV-C。经鉴定后温度诱导表达,采用SDS-PAGE电泳及Western-blot检测核心蛋白基因的蛋白表达。结果经温度诱导后获得目的基因的非融合表达,SDS-PAGE电泳显示在14000 u处有一表达条带;Western-blot结果显示其具有HCV抗原特异性。结论丙型肝炎病毒核心蛋白基因成功表达,对临床诊断试剂和HCV基因疫苗的研制有一定的意义。
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关键词
丙型肝炎病毒
核心蛋白
pBV220载体
基因表达
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职称材料
应用酵母双杂交技术筛选与前S1蛋白反式激活蛋白3结合的肝细胞蛋白基因
2
作者
卫萍
成军
+3 位作者
楚庸烈
伦永志
张黎颖
洪源
《新乡医学院学报》
CAS
2010年第4期329-332,共4页
目的用酵母双杂交技术筛选白细胞中乙型肝炎病毒(HBV)前S1蛋白反式激活蛋白3(PS1TP3)的结合蛋白。方法通过聚合酶链反应扩增获得的PS1TP3基因,构建诱饵质粒pGBKT7-PS1TP3,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝细胞文库的质粒...
目的用酵母双杂交技术筛选白细胞中乙型肝炎病毒(HBV)前S1蛋白反式激活蛋白3(PS1TP3)的结合蛋白。方法通过聚合酶链反应扩增获得的PS1TP3基因,构建诱饵质粒pGBKT7-PS1TP3,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝细胞文库的质粒pACT2的单倍体酵母细胞Y187进行配合,在涂有X-α-Gal营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)上进行双重筛选,提取阳性酵母克隆的质粒转化大肠杆菌经BglII酶切后测序,进行生物信息学分析。结果筛选出30个与PS1TP3相互作用的蛋白,其中包括泛素蛋白酶E2、丝裂原活化蛋白激酶、β2-微球蛋白、磷酸酯酶张力蛋白等已知功能基因及4个未知功能序列,以及拼接新基因1个。结论成功克隆出PS1TP3蛋白的结合蛋白,为研究PS1TP3的分子生物学功能及HBV的致病机制提供了新的思路和线索。
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关键词
前S1蛋白反式激活蛋白3
乙型肝炎病毒
酵母双杂交
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职称材料
题名
丙型肝炎病毒核心蛋白基因的克隆及表达
1
作者
孙菊
楚雍烈
姜凤良
景晓红
柴长斌
解颖馨
机构
西安医学院微生物与免疫学教研室
西安
交通大
学
医学院
病原
生物
学
教研室
出处
《西安交通大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期609-611,615,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30470089)
国家高技术研究发展计划(863)资助项目(No.2002AA21416)
文摘
目的在大肠杆菌中表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白基因片段。方法以HCV全长cDNA质粒为模板进行PCR扩增,获得366bp的核心蛋白基因片段。将其插入连接载体pMD18-T vector中,酶切后再与表达载体pBV220连接,构建重组表达载体pBV220/HCV-C。经鉴定后温度诱导表达,采用SDS-PAGE电泳及Western-blot检测核心蛋白基因的蛋白表达。结果经温度诱导后获得目的基因的非融合表达,SDS-PAGE电泳显示在14000 u处有一表达条带;Western-blot结果显示其具有HCV抗原特异性。结论丙型肝炎病毒核心蛋白基因成功表达,对临床诊断试剂和HCV基因疫苗的研制有一定的意义。
关键词
丙型肝炎病毒
核心蛋白
pBV220载体
基因表达
Keywords
hepatitis C virus
core protein
pBV220 vector
gene expression
分类号
R512.63 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
应用酵母双杂交技术筛选与前S1蛋白反式激活蛋白3结合的肝细胞蛋白基因
2
作者
卫萍
成军
楚庸烈
伦永志
张黎颖
洪源
机构
西安医学院微生物与免疫学教研室
北京地坛医院
西安
交通大
学
医学院
微生物
学
与免疫
学
教研室
大连大
学
医学院
病原
生物
学
教研室
出处
《新乡医学院学报》
CAS
2010年第4期329-332,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(编号:C03011402
C39970674)
军队回国留学人员启动基金项目(编号:98H038)
文摘
目的用酵母双杂交技术筛选白细胞中乙型肝炎病毒(HBV)前S1蛋白反式激活蛋白3(PS1TP3)的结合蛋白。方法通过聚合酶链反应扩增获得的PS1TP3基因,构建诱饵质粒pGBKT7-PS1TP3,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝细胞文库的质粒pACT2的单倍体酵母细胞Y187进行配合,在涂有X-α-Gal营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)上进行双重筛选,提取阳性酵母克隆的质粒转化大肠杆菌经BglII酶切后测序,进行生物信息学分析。结果筛选出30个与PS1TP3相互作用的蛋白,其中包括泛素蛋白酶E2、丝裂原活化蛋白激酶、β2-微球蛋白、磷酸酯酶张力蛋白等已知功能基因及4个未知功能序列,以及拼接新基因1个。结论成功克隆出PS1TP3蛋白的结合蛋白,为研究PS1TP3的分子生物学功能及HBV的致病机制提供了新的思路和线索。
关键词
前S1蛋白反式激活蛋白3
乙型肝炎病毒
酵母双杂交
Keywords
pre-S1 transactivated protein 3
hepatitis B virus
yeast two-hybrid
分类号
Q781 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
丙型肝炎病毒核心蛋白基因的克隆及表达
孙菊
楚雍烈
姜凤良
景晓红
柴长斌
解颖馨
《西安交通大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2007
0
下载PDF
职称材料
2
应用酵母双杂交技术筛选与前S1蛋白反式激活蛋白3结合的肝细胞蛋白基因
卫萍
成军
楚庸烈
伦永志
张黎颖
洪源
《新乡医学院学报》
CAS
2010
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
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引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
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