重组结核分支杆菌38kD和16kD蛋白用于结核病血清学诊断的价值 被引量：38

1

作者 张小刚 庄玉辉 +5 位作者 何秀云 熊志红 董恩军 李书琳 张永胜 李昕 《中国防痨杂志》 CAS 北大核心 2001年第5期281-283,共3页

目的　探讨国产重组结核分支杆菌蛋白 38kD(rTPA38)和 16kD(rTPA16)用于结核病的诊断价值。方法　以rTPA38和rTPA16为抗原 ,PPD为对照 ,用ELISA法检测血清中特异性抗结核抗体。结果　 2 4 6例肺结核病组 ,rTPA38、rTPA16和PPD检测的灵... 目的　探讨国产重组结核分支杆菌蛋白 38kD(rTPA38)和 16kD(rTPA16)用于结核病的诊断价值。方法　以rTPA38和rTPA16为抗原 ,PPD为对照 ,用ELISA法检测血清中特异性抗结核抗体。结果　 2 4 6例肺结核病组 ,rTPA38、rTPA16和PPD检测的灵敏度分别为 66.3%、63.0 %和 72 .3%。健康献血组、非结核呼吸疾病组和卡介苗接种阳转组血清同时用rTPA38、rTPA16和PPD检测 ,rTPA38特异性分别为 97.6%、96.8%、86.0 %。rTPA16特异性分别为 94 .7%、93.1%、75 .0 %。PPD特异性为93.4 %、85 .7%、67.9%。统计分析显示 ,rTPA38蛋白和PPD检测非结核呼吸疾病组 ,其阳性率有显著性差异 (P <0 .0 5 )。两者检测卡介苗接种阳转组阳性率和血清抗体滴度有显著性差异 (P <0 .0 5 )。rTPA38和rTPA16同时检测 10 8例肺结核病组血清可提高 11.1%的阳性率。结论　rTPA38蛋白抗原有较好的灵敏度和较高特异性 ,是ELISA的可靠抗原 ,与rTPA16联用可提高灵敏度 ,对结核病血清学诊断有较高参考价值。 展开更多

关键词 结核分支杆菌 重组蛋白38kD 结核病 重组蛋白16kD ELISA 血清学诊断

下载PDF 职称材料

应用PCR-SSCP检测结核分支杆菌链霉素耐药基因的研究 被引量：2

2

作者 吴雪琼 庄玉辉 +2 位作者 何秀云 李国利 张晓刚 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 1997年第3期12-14,共3页

结核病耐药问题十分严重，传统的药敏实验需1～2月。Sm是一线抗结核药物，结核分支杆菌耐Sm最常见的分子机制是由于核糖体S12蛋白编码基因（rpsL）突变。该文应用PCR－SSCP分析了62个结核分支杆菌临床分离株的rpsL基因，以H37Rv标准菌... 结核病耐药问题十分严重，传统的药敏实验需1～2月。Sm是一线抗结核药物，结核分支杆菌耐Sm最常见的分子机制是由于核糖体S12蛋白编码基因（rpsL）突变。该文应用PCR－SSCP分析了62个结核分支杆菌临床分离株的rpsL基因，以H37Rv标准菌株为对照，13个药物敏感菌株中12个rpsL基因未见SSCP异常；37个耐Sm株中，31个（83．8％）有rpsL基因泳动异常；12个耐其它抗结核药物林中，仅1个单链DNA泳动异常。因此，PCR－SSCP有希望成为简便、快速地检测结核分支杆菌耐药突变株的方法，弥补常规药敏试验的不足，指导临床治疗。 展开更多

关键词 PCR-SSCP 耐药基因 结核分支杆菌 结核病

下载PDF 职称材料

聚合酶链式反应检测结核杆菌的研究 被引量：1

3

作者 庄玉辉 吴雪琼 +1 位作者 张小刚 李国利 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第5期364-369,共6页

以人型结核杆菌基因组 DNA 为模板,合成二段引物各20个碱基进行聚合酶链式反应(PCR)。经琼脂糖凝胶电泳证实,获得一条245bp 扩增带。PCR 检测的敏感性染色体基因组DNA 为1pg,菌悬液为13个活菌/ml。在特异性试验中,人型结核杆菌、牛型结... 以人型结核杆菌基因组 DNA 为模板,合成二段引物各20个碱基进行聚合酶链式反应(PCR)。经琼脂糖凝胶电泳证实,获得一条245bp 扩增带。PCR 检测的敏感性染色体基因组DNA 为1pg,菌悬液为13个活菌/ml。在特异性试验中,人型结核杆菌、牛型结核杆菌、BCG可见此扩增带。被试的其它14种抗酸菌以及变铅青链霉菌、大肠杆菌质粒 PUC19、星状诺卡氏菌、红球菌均未见该扩增带。54例肺结核痰标本3种方法检查的阳性率分别为:萋尼氏抗酸染色16.7%,培养法14.8%,PCR 37.0%。前2种检查方法分别与 PCR 比较,经统计学处理均有显著性差异(P<0.01)。12例非结核性肺部疾患痰标本抗酸染色和 PCR 均为阴性。结果表明,PCR 技术是快速、敏感、特异诊断结核病的方法。 展开更多

关键词 肺结核 结核杆菌 聚合酶链反应

下载PDF 职称材料

结核杆菌DNA探针板杂交方法及其应用研究 被引量：1

4

作者 吴雪琼 庄玉琼 +1 位作者 张晓刚 李国利 《中国防痨杂志》 CAS 1996年第4期177-180,共4页

我们建立了一种在酶标板上进行ＤＮＡ：ＤＮＡ杂交的方法，该方法与ＥＬＩＳＡ类似，简单、易操作、可半定量，便于临床实验室推广应用。对其杂交条件及影响因素进行了详细的探讨。通过该方法，地高辛标记的结核分支杆菌全染色体ＤＮＡ... 我们建立了一种在酶标板上进行ＤＮＡ：ＤＮＡ杂交的方法，该方法与ＥＬＩＳＡ类似，简单、易操作、可半定量，便于临床实验室推广应用。对其杂交条件及影响因素进行了详细的探讨。通过该方法，地高辛标记的结核分支杆菌全染色体ＤＮＡ探针和１２种分支杆菌、７种非分支杆菌个染色体ＤＮＡ的杂交百分率有显著差别，除卡介苗、堪萨斯分支杆菌杂交百分率超过３０％，其余受试菌株均低于１０％。结果表明在酶标板上进行核酸杂交是完全可行的，利用已知细菌ＤＮＡ定量包被板，与未知的带标记的细菌ＤＮＡ杂交，可达到菌种鉴定的目的。 展开更多

关键词 结核杆菌 DNA探针

下载PDF 职称材料

结核分支杆菌耐链霉素分子机制的研究进展 被引量：1

5

作者 吴雪琼 王秉瑞 《微生物学免疫学进展》 1998年第3期81-83,共3页

链霉素（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ，ＳＭ）是一线抗结核药物，本文概要地介绍了结核分支杆菌耐链霉素的分子机制。最近的研究认为大多数结核分支杆菌分离株耐ＳＭ是由于核糖体蛋白Ｓ１２编码基因（ｒｐｓＬ）和（或）１６ＳｒＲＮＡ编... 链霉素（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ，ＳＭ）是一线抗结核药物，本文概要地介绍了结核分支杆菌耐链霉素的分子机制。最近的研究认为大多数结核分支杆菌分离株耐ＳＭ是由于核糖体蛋白Ｓ１２编码基因（ｒｐｓＬ）和（或）１６ＳｒＲＮＡ编码基因（ｒｒｓ）突变所致。 展开更多

关键词 结核分支杆菌 耐链霉素 分子机制

下载PDF 职称材料

白细胞介素22在结核性胸膜炎与恶性胸腔积液中生物学特性的研究进展 被引量：3

6

作者 原艳明 王仲元 程小星 《中国防痨杂志》 CAS 2013年第5期379-383,共5页

白细胞介素22(IL-22)是IL-10细胞因子家族成员之一,通过与IL-22R1、IL-10R2二聚体结合发挥作用。主要由T辅助细胞(T-helper cell)22(Th22)、Th17和Th1细胞表达,部分自然杀伤细胞(NK细胞)、γδT(T细胞受体的一种)细胞和淋巴组织可诱导(L... 白细胞介素22(IL-22)是IL-10细胞因子家族成员之一,通过与IL-22R1、IL-10R2二聚体结合发挥作用。主要由T辅助细胞(T-helper cell)22(Th22)、Th17和Th1细胞表达,部分自然杀伤细胞(NK细胞)、γδT(T细胞受体的一种)细胞和淋巴组织可诱导(LTi)细胞也可表达。结核性胸腔积液和恶性胸腔积液中都存在显著升高的IL-22,主要来源于受趋化因子作用募集于胸膜腔的外周血CD4+T淋巴细胞和胸膜腔局部在IL-6、IL-23、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等细胞因子作用下分化而来的CD4+T细胞。在胸膜腔中,IL-22通过促进基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)的表达发挥免疫病理作用,并通过介导NK细胞产生溶解因子减少寄生于单核细胞来源的巨噬细胞内的结核分枝杆菌生长。在恶性胸腔积液中,IL-22可通过促进肿瘤细胞增殖、迁移,并且通过增加黏附分子的表达促进与胸膜间皮细胞(pleural mesothelial cells,PMCs)的黏附发挥作用。研究IL-22在上述两种疾病中的作用机制,将会为免疫诊断与治疗开辟新的途径。 展开更多

关键词 白细胞介素类 结核 胸膜 胸腔积液 恶性

下载PDF 职称材料

结核病临床标本中结核分支杆菌利福平耐药基因型的快速测定 被引量：2

7

作者 吴雪琼 庄玉辉 +3 位作者 张俊仙 张晓刚 何秀云 李国利 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 1997年第8期25-28,共4页

目的：建立快速测定结核临床标本中结核分支杆菌RFP耐药性的方法，探讨其应用价值。方法：应用PCR－SSCP银染色法和EB染色法对58株结核分支杆菌临床分离株和17例临床标本的rpoB基因进行分析。结果：PCR－SSCP分析结核分支杆菌rpoB基因... 目的：建立快速测定结核临床标本中结核分支杆菌RFP耐药性的方法，探讨其应用价值。方法：应用PCR－SSCP银染色法和EB染色法对58株结核分支杆菌临床分离株和17例临床标本的rpoB基因进行分析。结果：PCR－SSCP分析结核分支杆菌rpoB基因的敏感性为1～10PgDNA；通过SSCP图谱分析可特异检测结核分支杆菌的rpoB基因突变。32株RFP耐药株中30株（93．8％）发生rpoB基因突变，呈现四种类型的异常SSCP图谱；26株RFP敏感株中1株（3，8％）有rpoB突变。2例涂片阳性培养阳性结核性疾标本有rpoB基因突变，与常规药敏试验相符；5例涂片阳性培养阴性和10例涂阴培阴的结核性标本均未发现rpoB基因突变。结论：大部分结核分支杆菌RFP耐药性产生是由于其rpoB基因突变所致，采用PCR－SSCP方法可快速测定结核病临床标本中结核分支杆菌RFP耐药基因型。 展开更多

关键词 药物耐受性 结核分支杆菌 结核病 利福平

下载PDF 职称材料

母牛分枝杆菌制剂对T淋巴细胞增殖反应影响的研究 被引量：21

8

作者 庄玉辉 李晓明 +5 位作者 李国利 王国治 赵桂芳 张小刚 吴雪琼 沈小兵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期292-297,共6页

以氚标记胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法检测每分钟脉冲数（ＣＰＭ），比较母牛分枝杆菌活菌悬液、辐射杀死菌悬液及高温杀死菌悬液对健康人外周血Ｔ淋巴细胞增殖反应的影响。以此作为评价治疗以细胞介导免疫为主的结核病免疫功能... 以氚标记胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法检测每分钟脉冲数（ＣＰＭ），比较母牛分枝杆菌活菌悬液、辐射杀死菌悬液及高温杀死菌悬液对健康人外周血Ｔ淋巴细胞增殖反应的影响。以此作为评价治疗以细胞介导免疫为主的结核病免疫功能障碍免疫制剂效力的一个重要参数。在加入单一刺激因子实验中，对照组ＣＰＭ为４４８±１３１；加入ＢＣＧ、母牛分枝杆菌活菌悬液。 展开更多

关键词 母牛分枝杆菌 微生物制剂 T淋巴细胞 增殖反应

下载PDF 职称材料

抗酸菌L型(变异)分离培养方法的研究 被引量：12

9

作者 庄玉辉 李国利 张晓刚 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第6期348-349,373,共3页

本文介绍用过滤法和酸碱中和离心法前处理痰标本,在胰胨大豆蛋白胨0.25%琼脂培养基(TSA-L)上,34例肺结核病人L型的阳性率分别为20.6%,14.7%,经统计处理,二者差异不显著(P>0.05);在TSA-L斜面上培养,分别是17.6%,14.7%,二法差异也不显... 本文介绍用过滤法和酸碱中和离心法前处理痰标本,在胰胨大豆蛋白胨0.25%琼脂培养基(TSA-L)上,34例肺结核病人L型的阳性率分别为20.6%,14.7%,经统计处理,二者差异不显著(P>0.05);在TSA-L斜面上培养,分别是17.6%,14.7%,二法差异也不显著(P>0.05)。77例杆菌型培养阴性的肺结核病人L型阳性率为18.2%。除酸碱中和离心法用TSA-L半流体培养基污染率高外,其它方法均可用于痰标本L型的分离培养。 展开更多

关键词 抗酸菌 L型 分离 培养

下载PDF 职称材料

结核杆菌分泌蛋白katG基因的克隆、表达及其诊断价值 被引量：5

10

作者 吴雪琼 张俊仙 +3 位作者 张翠英 张妍 王安生 金关甫 《广东医学》 CAS CSCD 2004年第1期41-43,共3页

目的　获得重组katG(简称rkatG)蛋白 ,研究其免疫学特性 ,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法　应用基因工程技术表达、纯化katG蛋白 ,通过Westernblotting分析其抗原性 ,分别以结核分支杆菌PPD或纯化的rkatG蛋白为抗原 ,通过ELIS... 目的　获得重组katG(简称rkatG)蛋白 ,研究其免疫学特性 ,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法　应用基因工程技术表达、纯化katG蛋白 ,通过Westernblotting分析其抗原性 ,分别以结核分支杆菌PPD或纯化的rkatG蛋白为抗原 ,通过ELISA方法及结核病一步法检测血清中抗结核抗体。结果　重组质粒pET2 4b -katG在大肠杆菌BL2 1 (DE3)细胞内以包涵体形式表达 ,表达量占菌体总蛋白的 2 8 2 %～ 56 3 %左右 ,分子质量约为80 0 0 0 ,Westernblotting分析与抗结核分支杆菌多克隆抗体具有良好的免疫反应性。纯化后的rkatG样品经SDS -PAGE和光密度扫描分析表明其纯度约为 92 75 %,每 1 0 0ml培养菌可获得 2 8mg左右的重组蛋白。以 33例正常人血清的OD值 +2s为正常界限值 ,一步法的特异性和敏感性分别为 87 9%(2 9/ 33) ,65 6 %(2 1 / 32 ) ;PPD分别为93 9%(31 / 33) ,62 5 %(2 0 / 32 ) ;rkatG分别为 97 0 %(32 / 33) ,1 5 2 %(5/ 33)。结论　pET2 4b -katG大肠杆菌工程菌能以包涵体形式表达rkatG蛋白 ,该蛋白具有较高的抗原特异性 ,但检测抗结核抗体的灵敏度低。 展开更多

关键词 结核杆菌 分泌 蛋白katG基因 克隆 表达 诊断 结核病

下载PDF 职称材料

腺苷脱氨酶和聚合酶链反应对结核性胸膜炎的诊断价值 被引量：3

11

作者 吴雪琼 夏湘宣 +3 位作者 庄玉辉 李国利 张晓刚 王巍 《临床肺科杂志》 1998年第1期27-29,共3页

本文对71例单纯性结核性胸膜炎、27例癌性胸腔积液和5例其他原因胸腔积液病例进行调查分析,结核性病例中胸水ADA≥21u/L的占53.52％,胸水ADA≥11u/L的占88.73％,胸水结核杆菌PCR的阳性率为35.21％;而癌性胸水ADA值均小于11u/L,PCR也都... 本文对71例单纯性结核性胸膜炎、27例癌性胸腔积液和5例其他原因胸腔积液病例进行调查分析,结核性病例中胸水ADA≥21u/L的占53.52％,胸水ADA≥11u/L的占88.73％,胸水结核杆菌PCR的阳性率为35.21％;而癌性胸水ADA值均小于11u/L,PCR也都阴性。结果表明ADA对结核性胸水和恶性胸水具有鉴别诊断价值,PCR可在基因水平对结核性胸水作出特异诊断;两者同时检测对结核性胸水的诊断以及与癌性胸水和其它胸水的鉴别诊断具有独特的实用价值。 展开更多

关键词 结核性胸水 ADA 结核性胸膜炎 癌性胸水 腺苷脱氨酶 诊断价值 聚合酶链反应 PCR 鉴别诊断 癌性胸腔积液

下载PDF 职称材料

结核杆菌pcHSP65真核表达载体的构建及其DNA免疫实验 被引量：6

12

作者 居巍 刘君炎 +1 位作者 庄玉辉 叶林柏 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期12-15,20,共5页

目的 :构建以结核分枝杆菌热休克蛋白 65kD基因为基础的核酸疫苗。方法 :采用聚合酶链反应从结核杆菌H37Rv株基因中 ,扩增出HSP65的编码基因 ,经限制性核酸内切酶消化后 ,插入真核表达载体pcDNA3 .1 (- )的相应酶切位点 ,并将此重组质... 目的 :构建以结核分枝杆菌热休克蛋白 65kD基因为基础的核酸疫苗。方法 :采用聚合酶链反应从结核杆菌H37Rv株基因中 ,扩增出HSP65的编码基因 ,经限制性核酸内切酶消化后 ,插入真核表达载体pcDNA3 .1 (- )的相应酶切位点 ,并将此重组质粒免疫动物。结果 :重组质粒的插入基因经序列测定证实为结核分枝杆菌HSP65。DNA免疫小鼠体内产生特异性抗体 ,能抵抗结核杆菌的感染。结论 :以HSP65编码基因为基础的真核表达载体构建成功 ,并能引起特异性动物免疫反应 。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 HSP65 真核表达载体

下载PDF 职称材料

二维凝胶电泳分离结核分枝杆菌胞外蛋白和膜蛋白 被引量：1

13

作者 何秀云 庄玉辉 +2 位作者 张小刚 李国利 丁勤学 《医学研究生学报》 CAS 2002年第2期102-104,共3页

目的 :建立二维凝胶电泳分离结核分枝杆菌 (M .TB)胞外蛋白和膜蛋白的方法。　方法 :M .TBH37Rv菌株在苏通液体培养基培养 3周后获得胞外蛋白和膜蛋白 ,第一相电泳用 pH 3～ 10线性IPG预制胶条进行等电聚焦 ,第二相电泳用SDS PAGE凝胶... 目的 :建立二维凝胶电泳分离结核分枝杆菌 (M .TB)胞外蛋白和膜蛋白的方法。　方法 :M .TBH37Rv菌株在苏通液体培养基培养 3周后获得胞外蛋白和膜蛋白 ,第一相电泳用 pH 3～ 10线性IPG预制胶条进行等电聚焦 ,第二相电泳用SDS PAGE凝胶再分离蛋白。银染PAGE凝胶、干燥 ,用ImageScanner扫描凝胶 ,ImageMaster 2DElite 3 .10 (图像分析软件 )分析 2D图像。　结果 :胞外蛋白和膜蛋白的蛋白质斑点数分别为 90 7和 681,两组蛋白的斑点大部分在酸性区域 (pH <7.0 )。在极碱性区域 ( pH >9.0 ) ,胞外蛋白只有 10个蛋白质斑点 (占1.1% ) ,而膜蛋白有 5 2个蛋白质斑点 (占 7.6% ) ;在极酸性区域 ( pH <4 .0 ) ,膜蛋白只有 15个蛋白质斑点 (占2 .2 % ) ,而胞外蛋白有 99个蛋白质斑点 (占 10 9% )。约 5 0 %的胞外蛋白和膜蛋白相对分子质量 <3 0 0 0 0。　结论 :二维凝胶电泳分离M .TB蛋白是研究M .TB蛋白质组学的重要途径之一。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 二维凝胶电泳 胞外蛋白 膜蛋白

下载PDF 职称材料

结核分枝杆菌对利福平耐药的分子机制 被引量：2

14

作者 吴雪琼 《国外医药（抗生素分册）》 CAS 1998年第3期218-220,共3页

本世纪中叶有效化疗时代的开始,以及生活状况的改善,使结核病受到很大程度的控制,尤其是工业发达国家结核病发病率迅速下降.但结核病仍是一个世界性问题,每年有300万人因之死亡.1985年以来,艾滋病的流行和结核感染者的涌入使美国等欧美... 本世纪中叶有效化疗时代的开始,以及生活状况的改善,使结核病受到很大程度的控制,尤其是工业发达国家结核病发病率迅速下降.但结核病仍是一个世界性问题,每年有300万人因之死亡.1985年以来,艾滋病的流行和结核感染者的涌入使美国等欧美发达国家结核病发病率呈回升趋势.1992年美国发生了几起多重耐药结核病的爆发流行,不仅耐药菌传播快,而且病情发展迅速,从诊断到死亡平均4～6周,尤其在AIDS患者中病死率高达72%～89%,已被视为AIDS以外的第二种流行病.由于常规药敏试验需1～2月时间,根据经验治疗,药物治疗无效的病人仍有传染性,有些病人在药敏结果出来前已死亡,耐药菌不仅在AIDS病人中播散,而且传染给医护人员和其它与AIDS患者接触者.对一线抗结核药物耐药的大多数病人,采用目前标准的结核化疗方案治疗无效.控制这种流行病,是对我们结核防治工作者的一个新的严峻的考验.采用分子遗传学方法进一步了解抗结核药物作用的分子机制,阐明耐药的分子基础,有助于建立快速检测耐药结核菌的诊断试验,开发新的抗结核药物,开展更有效的化疗. 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 利福平 耐药性 分子生物学

下载PDF 职称材料

结核分支杆菌耐利福平耐药基因的检测

15

作者 张小刚 何秀云 +1 位作者 李书琳 张永胜 《中国预防医学杂志》 CAS 2001年第3期188-190,共3页

目的 评估应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术检测rPOB基因突变在结核分支杆菌耐利福平(RFP)耐药性测定中的应用价值。方法 采用PCR-SSCP方法对93株结核分支杆菌临床分离株(其中药物敏感株35株,耐RFP或含耐RFP耐多药株58株)... 目的 评估应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术检测rPOB基因突变在结核分支杆菌耐利福平(RFP)耐药性测定中的应用价值。方法 采用PCR-SSCP方法对93株结核分支杆菌临床分离株(其中药物敏感株35株,耐RFP或含耐RFP耐多药株58株)和33例耐RFP肺结核病人痰标本rPOB基因突变进行检测,并对部分常规药敏试验耐药而用PCR-SSCP未检测到rPOB基因突变的PCR扩增产物阴性菌株用双脱氧末端终止法进行测序分析。结果 以结核分支杆菌H_(37)RV为对照,35株药物敏感株的rPOB基因PCR扩增产物258 bp片段SSCP图谱正常;58株耐RFP分离株中,52株rPOB基因SSCP图谱异常,其敏感性为89.7％。SSCP图谱正常的5株耐RFP的PCR产物经测序证实,4株在531位密码子TCG→TTG,1株在526密码子CAC→TAC,l株未改变。33例耐RFP肺结核病人痰标本有30例PCR扩增阳性,23例SSCP图谱与H_(37)RV株有差异,rPOB突变率为76.7％。结论 PCR-SSCP技术可以快速、准确地检测结核分支杆菌rPOB基因突变,该技术有望直接用于临床标本耐药性检测。 展开更多

关键词 结核分支杆菌 RPOB基因 PCR-SSCP DNA序列分析 利福平 药物敏感性

下载PDF 职称材料

结核分支杆菌Ag85A基因真核表达株的构建

16

作者 郑越 吴雪琼 +1 位作者 冯端浩 张灵霞 《广东医学》 CAS CSCD 2003年第12期1306-1307,共2页

目的　构建结核分支杆菌分泌蛋白Ag85A编码基因的DNA疫苗。方法　以结核分支杆菌H3 7Rv基因组为模板 ,PCR扩增Ag85A编码基因 ,用限制性内切酶消化后 ,插入真核表达载体pVAX1中 ,转化大肠杆菌DH5α ,进行重组子筛选、鉴定。结果　以结核... 目的　构建结核分支杆菌分泌蛋白Ag85A编码基因的DNA疫苗。方法　以结核分支杆菌H3 7Rv基因组为模板 ,PCR扩增Ag85A编码基因 ,用限制性内切酶消化后 ,插入真核表达载体pVAX1中 ,转化大肠杆菌DH5α ,进行重组子筛选、鉴定。结果　以结核分支杆菌H3 7Rv基因组为模板 ,用Ag85A引物PCR扩增出 10 41bp特异性片段 ,以重组子DNA为模板用Ag85A引物PCR扩增为阳性 ,重组子经限制性内切酶消化后可见目的片段 ,所测定序列与报道的Ag85A序列一致。结论　成功地构建了结核分支杆菌Ag85A基因真核表达株 ,该DNA疫苗的免疫效果有待进一步研究。 展开更多

关键词 结核分支杆菌 AG85A 基因真核表达株 构建

下载PDF 职称材料

PCR直接测序法分析结核分枝杆菌katG基因突变 被引量：20

17

作者 吴雪琼 钟敏 +4 位作者 张俊仙 俞伟 张军芝 庄玉辉 贾树林 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期9-11,共3页

为了了解我国结核分枝杆菌耐异烟肼 (INH)分离株katG基因突变情况 ,研究其临床意义。本研究通过聚合酶链反应 (PCR)、PCR 单链构象多态性 (SSCP)和PCR直接测序法 (directsequencing ,DS)分析 92株结核分枝杆菌临床分离株的katG基因。以H... 为了了解我国结核分枝杆菌耐异烟肼 (INH)分离株katG基因突变情况 ,研究其临床意义。本研究通过聚合酶链反应 (PCR)、PCR 单链构象多态性 (SSCP)和PCR直接测序法 (directsequencing ,DS)分析 92株结核分枝杆菌临床分离株的katG基因。以H37Rv标准株为对照 ,2 3株药物敏感株中 ,2 1株katG基因SSCP分析正常 ,2株异常。 36株耐非INH药物的分离株中 ,2 0株katG基因SSCP正常 ,16株异常。 33株耐INH分离株中 ,高度耐INH的 17株 ,其中 4株为katG基因缺失 ,5株katGSSCP异常 ,8株正常 ;低度耐INH的 16株 ,其中 13株KatG基因SSCP异常 ,3株正常。上述所有katGSSCP异常的分离株DS分析均为 315位密码子突变 ,除 1株为AGC→AAC突变外 ,其余均为AGC→ACC突变。结果表明katG基因突变是结核分枝杆菌耐INH产生的主要分子机制 ,其最常见的 315位密码子突变可引起结核分枝杆菌轻度或中度耐INH。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 DNA序列分析 耐药性 PCR

下载PDF 职称材料

加强结核病实验诊断新技术的临床应用研究 被引量：72

18

作者 庄玉辉 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期69-70,共2页

关键词 结核病 实验室诊断 聚合酶链反应 DNA探针 免疫学诊断 分子鉴定

原文传递

结核病实验室诊断新技术研究应用中值得重视的问题 被引量：48

19

作者 庄玉辉 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期133-134,共2页

在结核病传统实验室诊断方法中，抗酸染色镜检阳性率仅３０％左右；结核菌素皮肤试验阳性率约为７５％，但有假阳性问题；培养结果虽可靠，但需时３～８周。因此，多年来国内外学者一直在寻找快速、敏感、特异、简便的实验室诊断方法。... 在结核病传统实验室诊断方法中，抗酸染色镜检阳性率仅３０％左右；结核菌素皮肤试验阳性率约为７５％，但有假阳性问题；培养结果虽可靠，但需时３～８周。因此，多年来国内外学者一直在寻找快速、敏感、特异、简便的实验室诊断方法。在应用新的实验技术过程中，也发现存... 展开更多

关键词 结核病 诊断 实验室诊断

原文传递

我国结核病实验室诊断研究的主要进展 被引量：12

20

作者 吴雪琼 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期477-480,共4页

关键词 中国 结核病 实验室诊断 细菌学诊断 分子生物学诊断 免疫学诊断

原文传递