利用淋巴细胞杂交瘤技术建立分泌特异性McAb杂交瘤细胞系,从中提取已重排的编码功能性Ig DNA 基因组(组建DNA文库)或成熟的IgH,L链mRNA片段(组建cDNA文库及制备探针),从而获得编码特异性McAb的V区基因。利用基因重组技术,将此来源于小...利用淋巴细胞杂交瘤技术建立分泌特异性McAb杂交瘤细胞系,从中提取已重排的编码功能性Ig DNA 基因组(组建DNA文库)或成熟的IgH,L链mRNA片段(组建cDNA文库及制备探针),从而获得编码特异性McAb的V区基因。利用基因重组技术,将此来源于小鼠特异性IgH、L链的V区基因分别与编码人IgH、L链的C区基因相重组,构成鼠/人嵌合的Ig重组基因。然后将此重组嵌合Ig基因导入真核表达质粒(多为pSV2-ypt和pSV2-neo)_4经磷酸钙沉淀技术,原生质体融合技术或电穿孔导入技术(以后2种方法较为实用且转化频率较高),将此质粒转染哺乳动物非分泌型骨髓瘤细胞如Sp2/0等,经选择性培养基培养,从中筛选分必完整功能性的鼠/人嵌合McAb。将此cMcAb临床应用于人体内进行诊断和治疗时,具有原鼠亲本McAb特异性结合抗原的能力,同时还具备优于亲本鼠McAb的介导补体,细胞对靶抗原的杀伤和吞噬作用。而且不引起过敏反应或干扰治疗效果。从而给临床诊断,治疗恶性肿瘤。病毒,细菌等感染提供了一种新颖的免疫治疗试剂、本文对近年来鼠/人嵌合McAb的研究进展,基本技术及原理,优越性及不足之处作了简要阐述,并认为制备嵌合McAb是今后制备并取代人McAb研制及应用的一种发展趋向。展开更多
目的本研究旨在探讨CD4+Foxp3+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)稳态与慢性HIV-1感染者疾病进程及免疫活化的相关性。方法选择50例慢性HIV-1感染者,包括AIDS患者15例(AIDS组)、典型进展(typical progressor,TP)患者25例(TP组)、长...目的本研究旨在探讨CD4+Foxp3+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)稳态与慢性HIV-1感染者疾病进程及免疫活化的相关性。方法选择50例慢性HIV-1感染者,包括AIDS患者15例(AIDS组)、典型进展(typical progressor,TP)患者25例(TP组)、长期非进展(long-termnon-progressor,LTNP)患者10例(LTNP组),另选健康对照者(healthycontrol,HC)15例(HC组)。用流式细胞仪检测Treg的增殖标志Ki-67和凋亡标志半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶-3,同时检测Treg的活化标志CD38和人白细胞抗原-DR。结果在HC组和慢性HIV-1感染者中,Treg的增殖和凋亡速率均显著高于CD4+Foxp3-非调节性T细胞,这种稳态的改变在TP组和AIDS组中更为明显。进一步研究发现Treg增殖和凋亡与其活化程度呈正相关。结论慢性HIV-1感染导致Treg的过度活化,进而导致Treg稳态的改变。Treg稳态可以作为预测HIV/AIDS患者疾病进展的一项指标。展开更多
文摘利用淋巴细胞杂交瘤技术建立分泌特异性McAb杂交瘤细胞系,从中提取已重排的编码功能性Ig DNA 基因组(组建DNA文库)或成熟的IgH,L链mRNA片段(组建cDNA文库及制备探针),从而获得编码特异性McAb的V区基因。利用基因重组技术,将此来源于小鼠特异性IgH、L链的V区基因分别与编码人IgH、L链的C区基因相重组,构成鼠/人嵌合的Ig重组基因。然后将此重组嵌合Ig基因导入真核表达质粒(多为pSV2-ypt和pSV2-neo)_4经磷酸钙沉淀技术,原生质体融合技术或电穿孔导入技术(以后2种方法较为实用且转化频率较高),将此质粒转染哺乳动物非分泌型骨髓瘤细胞如Sp2/0等,经选择性培养基培养,从中筛选分必完整功能性的鼠/人嵌合McAb。将此cMcAb临床应用于人体内进行诊断和治疗时,具有原鼠亲本McAb特异性结合抗原的能力,同时还具备优于亲本鼠McAb的介导补体,细胞对靶抗原的杀伤和吞噬作用。而且不引起过敏反应或干扰治疗效果。从而给临床诊断,治疗恶性肿瘤。病毒,细菌等感染提供了一种新颖的免疫治疗试剂、本文对近年来鼠/人嵌合McAb的研究进展,基本技术及原理,优越性及不足之处作了简要阐述,并认为制备嵌合McAb是今后制备并取代人McAb研制及应用的一种发展趋向。
文摘目的本研究旨在探讨CD4+Foxp3+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)稳态与慢性HIV-1感染者疾病进程及免疫活化的相关性。方法选择50例慢性HIV-1感染者,包括AIDS患者15例(AIDS组)、典型进展(typical progressor,TP)患者25例(TP组)、长期非进展(long-termnon-progressor,LTNP)患者10例(LTNP组),另选健康对照者(healthycontrol,HC)15例(HC组)。用流式细胞仪检测Treg的增殖标志Ki-67和凋亡标志半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶-3,同时检测Treg的活化标志CD38和人白细胞抗原-DR。结果在HC组和慢性HIV-1感染者中,Treg的增殖和凋亡速率均显著高于CD4+Foxp3-非调节性T细胞,这种稳态的改变在TP组和AIDS组中更为明显。进一步研究发现Treg增殖和凋亡与其活化程度呈正相关。结论慢性HIV-1感染导致Treg的过度活化,进而导致Treg稳态的改变。Treg稳态可以作为预测HIV/AIDS患者疾病进展的一项指标。
