体外培养成人脂肪间充质干细胞生物学特性及向心肌样细胞的诱导分化 被引量：4

1

作者 张卫泽 陈跃武 +4 位作者 陈永清 哈小琴 马凌 秦勉 洪志斌 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2006年第37期14-17,i0002,共5页

目的:体外分离培养成人脂肪组织来源的间充质干细胞,探索其基本生物学特性及向心肌细胞诱导分化的潜能,为心肌再生提供理想的自体干细胞来源。方法:实验于2005-01/12在解放军兰州军区兰州总医院医学实验中心完成。取本院微创外科中心一... 目的:体外分离培养成人脂肪组织来源的间充质干细胞,探索其基本生物学特性及向心肌细胞诱导分化的潜能,为心肌再生提供理想的自体干细胞来源。方法:实验于2005-01/12在解放军兰州军区兰州总医院医学实验中心完成。取本院微创外科中心一急性单纯性阑尾炎患者大网膜脂肪组织(取得家属同意并告知仅用作实验室研究)。体外分离成人脂肪组织来源的间充质干细胞并传代扩增培养。采用相差显微镜及透射电镜观察细胞形态学特点,四氮唑蓝比色法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期及CD44、CD34的表达,第4代细胞用5-氮胞苷诱导使其向心肌细胞分化,免疫细胞化学鉴定心肌样细胞。结果:①分离培养的脂肪间充质干细胞经传代纯化后细胞形态呈均一梭形生长,电镜显示细胞较为幼稚,核大,核仁明显,常染色质多,异染色质少,细胞器结构及种类简单,以粗面内质网和线粒体为主。②细胞生长曲线呈“S”形,第1和2天为细胞生长潜伏期,第3天开始进入对数生长期,第7天达顶点,群体细胞倍增时间为18～20h。③流式细胞仪检测91.83%细胞CD44表达阳性、CD34阴性。④细胞周期分析显示76.2%细胞处于G0/G1期,S期细胞占8.7%,G2/M细胞占15.1%。⑤5-氮胞苷诱导后4周免疫细胞化学显示部分细胞缝隙连接蛋白-43表达阳性,表达率约为(29.0±1.2)%。结论:成人脂肪组织存在细胞活力旺盛的间充质干细胞且易于体外分离扩增,并在体外一定条件下具有向心肌细胞分化的潜能,可望成为心肌再生医学理想的自体干细胞种子来源。 展开更多

关键词 干细胞 脂肪组织 细胞分化 心肌

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携带KGF基因重组腺病毒载体的构建与鉴定 被引量：1

2

作者 贾庆华 哈小琴 +1 位作者 吕同德 刘春杰 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期64-67,共4页

目的:构建携带角化细胞生长因子(Keratinocyte growth factor,KGF)的腺病毒载体并观察其在细胞中的表达。方法:通过PCR从pcDNA3-KGFpIRES2-EGFP-KGF质粒中扩增出目的片段KGF,定向克隆至穿梭质粒载体pShuttle-CMV中,构建pShuttle-KGF。... 目的:构建携带角化细胞生长因子(Keratinocyte growth factor,KGF)的腺病毒载体并观察其在细胞中的表达。方法:通过PCR从pcDNA3-KGFpIRES2-EGFP-KGF质粒中扩增出目的片段KGF,定向克隆至穿梭质粒载体pShuttle-CMV中,构建pShuttle-KGF。经酶切及测序鉴定后,再将KGF定向克隆至重组腺病毒骨架载体pAdxsi,构建携带KGF的重组腺病毒载体(pAdxsi-GFP-KGF)。酶切鉴定正确后,转染人胚肾细胞系HEK293细胞,进行重组腺病毒的包装、生产及纯化,半数组织感染量法(50%tissue culture infective dose,TCID50)测定重组腺病毒滴度。用重组腺病毒及空病毒Ad-null(作为阴性对照)转染人肺腺癌细胞A549,荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白的表达,ELISA鉴定KGF的表达。结果:成功构建了携带KGF的重组腺病毒,纯化后病毒滴度达1.6×1010 pfu/ml。Ad-KGF转染A549细胞后24 h在荧光显微镜下即可观察到绿色荧光蛋白,48 h表达更强,ELISA实验证实细胞表达KGF。结论:成功构建了携带KGF的重组腺病毒,为下一步研究KGF用于肺纤维化治疗研究奠定了实验基础。 展开更多

关键词 角化细胞生长因子 腺病毒 构建 表达

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慢性铅中毒肾脏改变的病理形态观察 被引量：5

3

作者 杨霄鹏 惠玲 +2 位作者 昌业伟 贾庆华 哈小琴 《职业与健康》 CAS 2012年第5期546-547,共2页

目的建立长期饮用高铅水的大鼠铅中毒模型,了解慢性铅中毒肾组织病理学改变。方法 72只Wistar大鼠随机分为对照组和低、中、高铅剂量组,采用自由饮水染毒30、90和180 d后建立动物模型,动态观察大鼠的一般毒性,通过Mallory-Parker染色法... 目的建立长期饮用高铅水的大鼠铅中毒模型,了解慢性铅中毒肾组织病理学改变。方法 72只Wistar大鼠随机分为对照组和低、中、高铅剂量组,采用自由饮水染毒30、90和180 d后建立动物模型,动态观察大鼠的一般毒性,通过Mallory-Parker染色法观察各组大鼠肾组织及其他主要脏器的病理改变。结果染毒组大鼠尤其是高铅暴露组自主活动减少。染毒组尤其是高铅组大鼠肾组织的病理改变是肾小管损伤明显,管腔可见深灰蓝色铅颗粒沉积。脑、心、肝、肺等脏器随着醋酸铅的剂量加大,作用时间延长,出现不同程度受损,损伤程度与染毒时间和剂量有关。结论大鼠铅中毒模型建立和铅暴露可引起大鼠肾组织及主要脏器受损,为进一步探讨铅致肾组织损害的分子毒理学机制奠定基础。 展开更多

关键词 铅中毒 肾损害 病理学改变

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醋酸铅对人肾小管上皮细胞凋亡及超微结构的影响 被引量：2

4

作者 贾庆华 哈小琴 +2 位作者 杨霄鹏 昌业伟 杨志华 《中华劳动卫生职业病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期674-677,共4页

目的探讨醋酸铅对人肾小管上皮细胞（HK-2）凋亡的作用及对超微结构的影响。方法经5、10、20μmol／L醋酸铅染毒HK-2细胞24h后，Hoehest33342染色法观察细胞形态学变化，透射电子显微镜下观察细胞超微结构的变化，分光光度计检测细胞培... 目的探讨醋酸铅对人肾小管上皮细胞（HK-2）凋亡的作用及对超微结构的影响。方法经5、10、20μmol／L醋酸铅染毒HK-2细胞24h后，Hoehest33342染色法观察细胞形态学变化，透射电子显微镜下观察细胞超微结构的变化，分光光度计检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶（LDH）活力、丙二醛（MDA）含量，DNALadder实验检测醋酸铅对HK-2基因组的影响，应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果Hoehest33342-PI染色显示，染铅组细胞呈凋亡形态学改变。透射电子显微镜下观察发现，染铅组细胞胞质内出现空泡，核固缩，核膜结构模糊，并出现凋亡小体。染铅组细胞培养上清中LDH活力及MDA含量较对照组明显升高，差异有统计学意义（P〈0．01）。HK-2基因结果显示，染铅组出现较为明显的DNA损伤现象。5、10、20μmol／L染铅组细胞凋亡率分别为14．16％±2．94％、19．45％±2．73％、25．01％±3．97％，均明显高于对照组（5．81％±2．18％），差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论醋酸铅可促进HK-2细胞凋亡，进而影响肾脏正常功能。 展开更多

关键词 铅 脱噬作用 基因 乳酸脱氢酶 丙二醛

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醋酸铅对小鼠星形胶质细胞的凋亡作用 被引量：3

5

作者 蒋军军 贾庆华 +3 位作者 刘春杰 董芳 吕同德 哈小琴 《工业卫生与职业病》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期224-229,共6页

目的探讨醋酸铅对小鼠星形胶质细胞的凋亡作用,为进一步研究铅对血—脑屏障的损伤提供理论基础。方法用不同浓度醋酸铅(0、5、10、20、40μmol/L)染毒对数生长期小鼠星形胶质细胞C8(6、12、24、48 h)后,MTT法检测细胞生长情况;倒置相差... 目的探讨醋酸铅对小鼠星形胶质细胞的凋亡作用,为进一步研究铅对血—脑屏障的损伤提供理论基础。方法用不同浓度醋酸铅(0、5、10、20、40μmol/L)染毒对数生长期小鼠星形胶质细胞C8(6、12、24、48 h)后,MTT法检测细胞生长情况;倒置相差显微镜观察细胞形态;分光光度计检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力、丙二醛(MDA)含量,了解细胞损伤程度;免疫组化检测P53、Bax、Bcl-2的表达;PI-Hoechst33342染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果不同浓度醋酸铅染毒不同时间,各染毒组细胞生长活力较对照组明显降低(P<0.01),并存在浓度与时间依赖关系;醋酸铅(5、10μmol/L)染毒24 h组,形态学观察细胞密度较对照组降低,突触缩短变细,细胞间连接减少;培养上清液中染毒组LDH、MDA含量较对照组明显升高(P<0.01),P53、Bax表达上升,Bcl-2表达降低;PI-Hoechst33342双重染色和流式细胞仪检测显示,染毒组细胞凋亡率较对照组明显升高。结论醋酸铅可明显抑制小鼠星形胶质细胞生长,并通过Bax/Bcl-2比值升高促使凋亡,进而影响血—脑屏障。 展开更多

关键词 醋酸铅 星形胶质细胞 凋亡 血-脑屏障

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醋酸铅对体外培养人肾小管上皮细胞的毒性效应 被引量：1

6

作者 贾庆华 蒋军军 哈小琴 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2010年第6期49-52,56,共5页

目的探讨醋酸铅对人肾小管上皮细胞系HK-2的毒性效应。方法醋酸铅处理HK-2后,Giemsa及HE染色法检测观察细胞形态学变化;细胞免疫化学法检测凋亡相关蛋白P53、Bax、Bcl-2的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果经10μmol/L和20μmol/L醋... 目的探讨醋酸铅对人肾小管上皮细胞系HK-2的毒性效应。方法醋酸铅处理HK-2后,Giemsa及HE染色法检测观察细胞形态学变化;细胞免疫化学法检测凋亡相关蛋白P53、Bax、Bcl-2的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果经10μmol/L和20μmol/L醋酸铅处理48h后,Giemsa及HE染色均显示醋酸铅组细胞成凋亡形态学改变。HK-2的细胞免疫化学结果示醋酸铅组的P53和Bax阳性表达升高,而Bcl-2的阳性表达下降。流式细胞仪检测结果表明,醋酸铅组细胞凋亡率较对照组明显升高。结论醋酸铅可损伤HK-2,促进其凋亡及影响肾脏。 展开更多

关键词 醋酸铅 肾小管 上皮细胞 细胞凋亡

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醋酸铅对人股动脉内皮细胞超微结构及凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响 被引量：1

7

作者 贾庆华 蒋军军 哈小琴 《中国预防医学杂志》 CAS 2010年第8期801-804,共4页

目的探讨醋酸铅对人股动脉内皮细胞超微结构及凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响。方法实验设染毒组,10、20μmol/L醋酸铅处理体外培养的人股动脉内皮细胞24 h后,用透射电镜观察细胞超微结构的变化;细胞免疫化学法、Western blot法检测Ca... 目的探讨醋酸铅对人股动脉内皮细胞超微结构及凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响。方法实验设染毒组,10、20μmol/L醋酸铅处理体外培养的人股动脉内皮细胞24 h后,用透射电镜观察细胞超微结构的变化;细胞免疫化学法、Western blot法检测Caspase-3的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率。设不加醋酸铅为对照组。结果经染醋酸铅24 h后电镜观察发现染毒组细胞染色质固缩、边移,核质间隙增宽,20μmol/L醋酸铅染毒组凋亡小体形成;细胞免疫化学、Western blot结果显示醋酸铅组的Caspase-3阳性表达较对照组明显升高;流式细胞仪检测发现醋酸铅染毒组细胞凋亡率较对照组显著升高(P<0.05)。结论醋酸铅可诱发人股动脉内皮细胞凋亡,其机制可能与Capase-3的活化有关。 展开更多

关键词 醋酸铅 人股动脉内皮细胞(HFAEC) 超微结构 Caspase-3 细胞凋亡

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醋酸铅对小鼠星形胶质细胞凋亡及Caspase-3表达影响 被引量：1

8

作者 贾庆华 蒋军军 哈小琴 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2010年第6期513-515,517,共4页

目的探讨醋酸铅对小鼠星形胶质细胞凋亡和Caspase-3表达的影响。方法 10μmol/L醋酸铅处理小鼠星形胶质细胞24、48 h后,采用Hoechst33258染色法观察细胞形态学变化;聚合酶链反应(PCR)、细胞免疫化学法测定Caspase-3的转录与表达水平;流... 目的探讨醋酸铅对小鼠星形胶质细胞凋亡和Caspase-3表达的影响。方法 10μmol/L醋酸铅处理小鼠星形胶质细胞24、48 h后,采用Hoechst33258染色法观察细胞形态学变化;聚合酶链反应(PCR)、细胞免疫化学法测定Caspase-3的转录与表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果经10μmol/L醋酸铅处理24、48 h后小鼠星形胶质细胞呈凋亡形态学改变。Caspase-3转录与表达水平升高,醋酸铅组细胞凋亡率与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论醋酸铅可促进小鼠星形胶质细胞凋亡,Caspase-3参与了凋亡过程。 展开更多

关键词 醋酸铅 星形胶质细胞 CASPASE-3 凋亡 小鼠

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醋酸铅对原代培养大鼠皮层神经元的毒性效应 被引量：1

9

作者 哈小琴 陆润兰 +2 位作者 蒋军军 刘春杰 董芳 《职业与健康》 CAS 2010年第8期841-844,共4页

目的探讨醋酸铅对体外培养大鼠皮层神经元的毒性效应。方法用不同浓度的醋酸铅(50、100和200μg/ml)染毒后,原代培养乳大鼠皮层神经元,通过中性红染色和PI-Hoechst 33342双染色法观察醋酸铅作用6、12、24和48h对细胞存活的影响;结果PI-H... 目的探讨醋酸铅对体外培养大鼠皮层神经元的毒性效应。方法用不同浓度的醋酸铅(50、100和200μg/ml)染毒后,原代培养乳大鼠皮层神经元,通过中性红染色和PI-Hoechst 33342双染色法观察醋酸铅作用6、12、24和48h对细胞存活的影响;结果PI-Hoechst 33342双染色结果表明,各组醋酸铅染毒12h后,部分细胞出现核固缩,随着醋酸铅浓度的增加和培养时间的延长,出现核固缩细胞增多,呈红色荧光细胞比例增加,凋亡细胞增加。对照组细胞凋亡比例明显低与中浓度和高浓度醋酸铅组P<0.05)。中性红染色结果表明,不同浓度醋酸铅作用皮层神经元不同时间后各染铅组细胞活性随时间的延长而降低,但除高醋酸铅染毒组在24和48h较6h差异有统计学意义(P<0.05)外,其余差异均无统计学意义(P>0.05)。各染铅组细胞活性随染铅剂量的增加而降低,尤其是高铅组与对照组及低铅组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论低、中、高浓度醋酸铅(50、100、200μg/ml)作用皮层神经元12h后细胞存活都明显低于正常对照组,并呈剂量和时间依赖关系。 展开更多

关键词 醋酸铅 皮层神经元 毒性

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乙酸铅对人星形胶质细胞超微结构及凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

10

作者 贾庆华 哈小琴 +1 位作者 蒋军军 吕同德 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1013-1015,F0003,共4页

为探讨乙酸铅对人星形胶质细胞超微结构及凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响,将处于对数生长期人星形胶质细胞(细胞密度约5×103个/ml)分别暴露于0(对照)、10、20μmol/L乙酸铅,培养24 h后,采用倒... 为探讨乙酸铅对人星形胶质细胞超微结构及凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响,将处于对数生长期人星形胶质细胞(细胞密度约5×103个/ml)分别暴露于0(对照)、10、20μmol/L乙酸铅,培养24 h后,采用倒置相差显微镜观察细胞的形态学变化,采用透射电镜观察细胞超微结构的变化,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用细胞免疫化学法检测Caspase-3的表达,采用Western blot法检测细胞中Caspase-3表达量。结果显示,显微镜下观察发现,乙酸铅染毒人星形胶质细胞变小、变圆,细胞间隙变大,细胞部分脱落。透射电镜观察发现,乙酸铅染毒细胞胞质内出现空泡,核固缩,核膜结构模糊,线粒体数目减少、空泡化。流式细胞仪检测结果表明,乙酸铅染毒组细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞免疫化学法和Western Blot法检测结果显示,乙酸铅染毒人星形胶质细胞Caspase-3表达量均高于对照组,并且表达量随着染铅剂量增加而升高。提示乙酸铅可诱发人星形胶质细胞凋亡,其机制可能与Capase-3的活化有关。 展开更多

关键词 乙酸铅 人星形胶质细胞 超微结构 天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3 细胞凋亡

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醋酸铅对体外培养人肾小球系膜细胞超微结构的影响

11

作者 贾庆华 哈小琴 +1 位作者 杨志华 吕同德 《工业卫生与职业病》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期25-28,共4页

目的探讨醋酸铅对人肾小球系膜细胞(human renal mesangial cells,HRMC)超微结构的影响。方法醋酸铅处理HRMC后,Giemsa染色法观察细胞形态学变化;透射电镜观察细胞超微结构的变化;DNA梯(DNA Ladder)实验检测醋酸铅对HRMC基因组的影响;... 目的探讨醋酸铅对人肾小球系膜细胞(human renal mesangial cells,HRMC)超微结构的影响。方法醋酸铅处理HRMC后,Giemsa染色法观察细胞形态学变化;透射电镜观察细胞超微结构的变化;DNA梯(DNA Ladder)实验检测醋酸铅对HRMC基因组的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 10μmol/L醋酸铅染毒HRMC 24、48h后,Giemsa染色显示出细胞成凋亡形态学改变。透射电镜观察细胞胞质内出现空泡,核固缩,核膜结构模糊,并出现凋亡小体。HRMC基因出现较为明显的DNA损伤现象。流式细胞仪检测细胞凋亡率较对照组明显升高(P<0.05)。结论醋酸铅可促进HRMC凋亡,影响肾脏正常功能。 展开更多

关键词 醋酸铅 人肾小球系膜细胞 凋亡 超微结构

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重组腺病毒介导肝细胞生长因子基因对铅致动脉内皮细胞损伤的保护作用

12

作者 贾庆华 徐娟 +3 位作者 杨志华 杨霄鹏 哈小琴 昌业伟 《公共卫生与预防医学》 2011年第2期8-11,共4页

目的观察重组腺病毒介导肝细胞生长因子基因(Ad-HGF)对铅致动脉内皮细胞损伤的保护作用,为Ad-HGF保护血脑屏障提供理论依据。方法实验设正常组、转染组、铅染组、转染加铅染毒组。转染加铅染毒组用Ad-HGF转染动脉内皮细胞48 h后,加入20... 目的观察重组腺病毒介导肝细胞生长因子基因(Ad-HGF)对铅致动脉内皮细胞损伤的保护作用,为Ad-HGF保护血脑屏障提供理论依据。方法实验设正常组、转染组、铅染组、转染加铅染毒组。转染加铅染毒组用Ad-HGF转染动脉内皮细胞48 h后,加入20μmol/L的醋酸铅,24 h、48 h后分别用G iem sa染色法观察细胞形态学变化;细胞免疫化学法检测P53的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果染色显示出铅单独染毒组细胞成凋亡形态学改变。转染加铅染毒组动脉内皮细胞的免疫化学结果显示P53阳性表达较对照组下降。MTT结果表明铅处理不同时间点(6 h、12 h、18 h、24 h、48 h)后,转染加铅染毒组细胞增殖率与铅单独染毒组比较没有显著升高(P>0.05),转染组的增殖率略高于对照组(P<0.05)。醋酸铅组细胞凋亡率较对照组明显升高,转染组较未转染组比较细胞凋亡率明显下降。结论 Ad-HGF具有抗细胞凋亡作用,为解释Ad-HGF对铅致血脑屏障的损伤保护效应提供有力的理论和实验依据。 展开更多

关键词 AD-HGF 铅 动脉内皮细胞 凋亡 血-脑屏障

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肝细胞生长因子对铅致人肾小球系膜细胞损伤的保护效应的机制

13

作者 姜东红 贾庆华 +3 位作者 杨志华 董菊子 邓芝云 李晓云 《职业与健康》 CAS 2013年第21期2747-2750,共4页

目的初步探讨肝细胞生长因子(HGF)防护铅处理致人肾小球系膜细胞(HMC)损伤的作用机制。方法将HMC分为对照组(C组)、Pb 10μmol/L组和HGF+Pb 10μmol/L组,在6、12、24、48 h分别通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率和用流式细胞仪检测凋亡率... 目的初步探讨肝细胞生长因子(HGF)防护铅处理致人肾小球系膜细胞(HMC)损伤的作用机制。方法将HMC分为对照组(C组)、Pb 10μmol/L组和HGF+Pb 10μmol/L组,在6、12、24、48 h分别通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率和用流式细胞仪检测凋亡率;实时荧光定量-PCR检测各组细胞中Caspase-3的表达水平。结果 MTT检测结果显示,Pb 10μmol/L组HMC在6、12、24、48 h细胞生长存活率均显著低于HGF+Pb 10μmol/L组(P<0.01);流式凋亡检测结果显示,HMC在10μmol/L醋酸铅染毒6、12、24和48 h后,HGF+Pb 10μmol/L组在各个时间点细胞凋亡率显著低于Pb 10μmol/L组(P<0.01)。实时荧光定量-PCR检测结果显示,在HMC铅染毒48 h后,HGF+Pb 10μmol/L组Caspase-3的表达量显著低于Pb 10μmol/L组(P<0.01)。结论铅促进HMC细胞的凋亡,而HGF通过降低Caspase-3的表达抑制HMC的凋亡,从而发挥对铅致HMC细胞损伤的保护作用。 展开更多

关键词 肝细胞生长因子(HGF) 醋酸铅 人肾小球系膜细胞(HMC) 凋亡

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