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胃癌分子免疫学研究进展 被引量:12
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作者 秦斌 张筱茵 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2009年第2期115-119,共5页
胃癌在世界范围内仍是引起死亡的主要肿瘤之一,其发生进展非常复杂,涉及到多种免疫与分子机制.胃癌的发病机制尚不明确,而Hpylori引起的慢性感染常被认为是引起胃癌发生的机制之一,其中包括CagA及VacA在内的多种分子发挥作用.当胃癌进展... 胃癌在世界范围内仍是引起死亡的主要肿瘤之一,其发生进展非常复杂,涉及到多种免疫与分子机制.胃癌的发病机制尚不明确,而Hpylori引起的慢性感染常被认为是引起胃癌发生的机制之一,其中包括CagA及VacA在内的多种分子发挥作用.当胃癌进展时,肿瘤细胞常通过促进免疫细胞的凋亡或者降低其功能而获得免疫赦免,达到免疫逃逸,参与这一过程的细胞有CD4+、CD8+T细胞、调节T细胞以及树突状细胞.多种生长因子、细胞因子及黏附分子诱导并促进这一过程的发生.而免疫治疗已经被作为胃癌的辅助治疗被广泛研究,并且已经取得了可喜的成果. 展开更多
关键词 胃癌 分子机制 免疫反应
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建立夹心ELISA检测RANTES方法及在小肠移植中的应用
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作者 康振华 王春艳 +3 位作者 王为忠 杜建军 郑建勇 王磊 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期874-877,共4页
背景:RANTES及其受体介导的细胞免疫是同种异体小肠移植急性排斥反应发生的重要组成部分,小肠移植后血清中RANTES水平有可能作为早期检测急性排斥反应发生的较敏感的免疫指标。目的:建立夹心ELISA检测RANTES的方法,并将其应用于大鼠小... 背景:RANTES及其受体介导的细胞免疫是同种异体小肠移植急性排斥反应发生的重要组成部分,小肠移植后血清中RANTES水平有可能作为早期检测急性排斥反应发生的较敏感的免疫指标。目的:建立夹心ELISA检测RANTES的方法,并将其应用于大鼠小肠移植模型,探讨其作为检测早期急性排斥反应指标的可能性。方法:以辣根过氧化物酶标记RANTES mAbs,通过竞争ELISA检测抗RANTES mAb识别的表位,建立双夹心ELISA试剂盒并检测其敏感性,然后将其应用于大鼠小肠移植模型中RANTES的检测。结果与结论:以anti-RNATES mAb No.2(5mg/L)为包被抗体,HRP-anti-RNATES mAb No.4(1∶800)为酶标抗体建立了双抗体夹心ELISA法,其敏感性达到0.5μg/L。异基因大鼠小肠移植模型术后血清RANTES明显增高。提示成功建立了特异性强、灵敏度良好的检测RANTES的双抗体夹心ELISA法,为早期诊断小肠移植排斥反应提供了一种新的方法。 展开更多
关键词 夹心ELISA 单克隆抗体 RANTES 小肠 移植
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多肽pd20与肿瘤坏死因子α融合蛋白的纯化及生物学活性鉴定
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作者 呼圣娟 姜荣兴 +2 位作者 师红利 沈皓 谢华红 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1358-1361,1365,共5页
背景多肽pd20是具有胃癌肝转移导向性的新多肽分子,为研究其是否具有携带抗癌药物或抑癌基因靶向性治疗胃癌肝转移的作用,本研究将其与肿瘤坏死因子α(TNF-α)进行基因融合,构建原核表达载体,对重组融合蛋白进行诱导表达。目的将pd20-T... 背景多肽pd20是具有胃癌肝转移导向性的新多肽分子,为研究其是否具有携带抗癌药物或抑癌基因靶向性治疗胃癌肝转移的作用,本研究将其与肿瘤坏死因子α(TNF-α)进行基因融合,构建原核表达载体,对重组融合蛋白进行诱导表达。目的将pd20-TNF-α融合蛋白进行蛋白纯化,并对纯化后蛋白进行鉴定和生物学活性检测。方法用Ni-NTA柱法纯化pd20-TNF-α融合蛋白并进行Western blotting检测;采用L929细胞毒法进行pd20-TNF-α融合蛋白的生物学活性检测;用流式细胞术检测不同浓度融合蛋白作用于胃癌肝高转移潜能细胞XGC9811-L的早期凋亡率,此实验分为5组:pd20-TNF-α100.00、25.00、6.25 U/ml分别为A、B、C组,不加融合蛋白的为D组,流式细胞凋亡的KB组为E组;细胞侵袭实验观察融合蛋白对胃癌肝高转移潜能细胞XGC9811-L转移能力的影响,此实验分为4组:pd20-TNF-α组、TNF-α组、XGC9811-L组和对照肽组。结果通过Ni-NTA柱纯化,在咪唑浓度为200 mmol/L时获得纯化的目标pd20-TNF-α融合蛋白,蛋白纯度可达92%;纯化后的蛋白具有与抗TNF-α单抗结合的能力。L929细胞毒法显示:pd20-TNF-α融合蛋白对L929细胞有明显的杀伤力,杀伤活性可达7.6×106U/ml。凋亡实验显示:A^E 5组细胞早期凋亡率间有差异〔(9.04±0.08)%、(6.96±1.21)%、(5.99±0.02)%、(0.73±0.02)%、(0.01±0.00)%;F=2.57,P<0.05〕。细胞侵袭实验显示:pd20-TNF-α组、TNF-α组、XGC9811-L组、对照肽组单位时间内的穿膜细胞数有差异〔(26.5±5.9)、(36.0±3.2)、(63.5±5.0)、(64.0±6.8)个;F=49.87,P<0.01〕。结论本研究成功纯化了pd20-TNF-α融合蛋白,并证实该蛋白有明显的生物学活性,具有促进胃癌细胞早期凋亡和抑制胃癌细胞侵袭的能力。 展开更多
关键词 融合蛋白质类 pd20 肿瘤坏死因子Α 纯化 生物学活性
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白细胞相关免疫球蛋白样受体2(CD306)真核表达载体构建及蛋白的纯化与鉴定
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作者 王春艳 康振华 +2 位作者 谢鑫 李妍 金伯泉 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2009年第50期9928-9932,共5页
背景:目前国内外对白细胞相关免疫球蛋白样受体(leukocyte-associated immunoglobulin like-receptor,LAIR)家族中LAIR1的生物学功能研究已较清晰,而关于LAIR-2分子在机体内的生物学功能尚缺乏相关报道。目的:为进一步研究LAIR-2的体内... 背景:目前国内外对白细胞相关免疫球蛋白样受体(leukocyte-associated immunoglobulin like-receptor,LAIR)家族中LAIR1的生物学功能研究已较清晰,而关于LAIR-2分子在机体内的生物学功能尚缺乏相关报道。目的:为进一步研究LAIR-2的体内生物学功能,构建其真核表达载体,纯化并鉴定蛋白。设计、时间及地点:单一样本观察实验,于2007-06/2008-06在解放军第四军医大学完成。材料:载体pIg/3c由英国牛津大学徐小宁博士惠赠。载体pcDNA3.1由荷兰Meyaard博士惠赠。中国仓鼠卵巢细胞系CHO由解放军第四军医大学免疫学教研室冻存。方法:构建pIg/3c-LAIR-2及pcDNA3.1-LAIR-2两个真核表达载体,电转染法转染CHO细胞建立稳定表达LAIR-2-Fc融合蛋白及LAIR-2全长蛋白分子的细胞株,通过Westernblot、细胞免疫化学、流式细胞术分析实验鉴定真核表达LAIR-2蛋白分子与抗原核表达LAIR-2mAbs的结合活性。主要观察指标:稳定转染细胞系的建立及真核表达蛋白的纯化和鉴定。LAIR-2蛋白与相应单克隆抗体的结合活性。结果:构建真核表达载体并成功转染CHO细胞,建立稳定分泌LAIR-2-Fc融合蛋白的转染细胞系及稳定分泌LAIR-2蛋白的转染细胞系,分别命名为CHO/LAIR-2-Fc以及CHO/LAIR-2。Westernblot实验表明真核表达的LAIR-2全长蛋白分子均可与三株抗LAIR-2mAb1A7、3H12及4A9发生特异性结合反应。免疫细胞化学、流式细胞术分析实验结果表明抗原核细胞表达蛋白的三株LAIR-2单克隆抗体中,1A7不能结合pcDNA3.1-LAIR-2转染的CHO细胞内的LAIR-2,面3H12和4A9均可以很好结合细胞内的LAIR-2。结论:实验成功构建了pIg/3c-LAIR-2及pcDNA3.1-LAIR-2两个真核表达载体,成功转染CHO细胞并建立稳定表达LAIR-2-Fc融合蛋白及LAIR-2全长蛋白分子的细胞株。真核表达的LAIR-2蛋白分子与抗原核表达的LAIR-2mAbs有良好的结合活性。 展开更多
关键词 LAIR-2 CD306 真核表达 蛋白 鉴定
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