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兔骨髓间充质干细胞体外分离培养及多向诱导分化 被引量：16
1
作者 徐成峰 胡大海 +3 位作者 赵周婷 张万福 白晓智 蔡维霞 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1002-1005,共4页
背景:间充质干细胞不仅自身免疫原性弱,还可以调节细胞免疫功能,减轻移植物排斥反应,在组织工程中具有良好的应用前景。但骨髓中间充质干细胞含量稀少,约占单个核细胞的十万分之一到百万分之一。目的:建立一种分离、培养扩增兔骨髓间充... 背景:间充质干细胞不仅自身免疫原性弱,还可以调节细胞免疫功能,减轻移植物排斥反应,在组织工程中具有良好的应用前景。但骨髓中间充质干细胞含量稀少,约占单个核细胞的十万分之一到百万分之一。目的:建立一种分离、培养扩增兔骨髓间充质干细胞的方法,观察体外培养骨髓间充质干细胞的生长特性,及其潜在的诱导分化能力。方法:采用灌流法获取兔胫骨骨髓,密度梯度离心法联合贴壁培养法体外纯化扩增,相差显微镜观察其形态学特点,MTT法测定绘制传代骨髓间充质干细胞生长曲线,经成骨诱导液(L-DMEN/F12,体积分数为10%胎牛血清,0.1μmol/L地塞米松,200μmol/L抗坏血酸,10mmol/Lβ-甘油磷酸钠)、成脂诱导液(L-DMEN/F12,体积分数为10%胎牛血清,1μmol/L地塞米松,200μmol/L吲哚美辛,0.5mmol/LIBMX,10mg/L胰岛素)、成软骨诱导液(L-DMEN/F12,体积分数为10%胎牛血清,10μg/L转化生长因子β1,0.1μmol/L地塞米松,50μmol/L抗坏血酸,6.25mg/L胰岛素)体外诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞、脂肪细胞及软骨细胞分化,并分别经碱性磷酸酶染色、油红O染色和甲苯胺蓝染色法鉴定。结果与结论:通过密度梯度离心法联合贴壁培养法可在体外大量扩增、纯化骨髓间充质干细胞,所获细胞具有高度自我更新能力和多向分化潜能,原代及传代骨髓间充质干细胞为梭形。经成骨细胞诱导,细胞碱性磷酸酶染色阳性;经成脂肪细胞诱导,细胞内出现红色脂滴,经成软骨细胞诱导,甲苯胺蓝染色阳性。 展开更多
关键词 间充质干细胞 细胞培养 分化 兔 骨髓间充质干细胞
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姜黄素对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的影响 被引量：5
2
作者 胡晓龙 胡大海 +4 位作者 韩勇彬 蔡维霞 白晓智 杨崇志 计鹏 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第46期9024-9027,共4页
背景:近期研究提示姜黄素可能是一种抗纤维化制剂。目的:以瘢痕疙瘩成纤维细胞为靶细胞,观察不同浓度姜黄素对瘢痕疙瘩成纤维细胞合成胶原的影响。设计、时间及地点:随机对照实验,于2006-10/2007-11在解放军第四军医大学西京医院烧伤与... 背景:近期研究提示姜黄素可能是一种抗纤维化制剂。目的:以瘢痕疙瘩成纤维细胞为靶细胞,观察不同浓度姜黄素对瘢痕疙瘩成纤维细胞合成胶原的影响。设计、时间及地点:随机对照实验,于2006-10/2007-11在解放军第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科完成。材料:瘢痕疙瘩患者的手术标本5份,患者均知情同意。治疗方案经医院医学伦理委员会批准。姜黄素为美国Sigma公司产品。方法:瘢痕疙瘩成纤维细胞体外原代培养,待细胞融合后传代,取第3～6代对数生长期的成纤维细胞用于实验。将不同浓度姜黄素(5,10,20μmol/L)分别对瘢痕疙瘩成纤维细胞干预24～48h,以空白组做对照。主要观察指标:蛋白免疫印迹检测姜黄素作用瘢痕疙瘩成纤维细胞后结缔组织生长因子的表达。荧光定量聚合酶链反应检测姜黄素作用瘢痕疙瘩成纤维细胞后Ⅰ、Ⅲ型前胶原及结缔组织生长因子基因的表达。结果:①姜黄素作用瘢痕疙瘩成纤维细胞48h后,结缔组织生长因子蛋白的表达减少,均低于对照组(P<0.01)。②与对照组相比,不同浓度姜黄素干预组Ⅰ、Ⅲ型前胶原及结缔组织生长因子表达均降低(P<0.01),并且Ⅰ型前胶原表达随着药物浓度的增加,有逐渐降低的趋势,成明显的量效关系。姜黄素20μmol/L组Ⅲ型前胶原表达低于姜黄素10μmol/L组,但差异无显著性意义(P>0.05),姜黄素10μmol/L组结缔组织生长因子表达低于姜黄素5μmol/L组,但差异无显著性意义(P>0.05)。结论:姜黄素对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成有明显抑制作用,其作用机制可能与姜黄素抑制结缔组织生长因子在瘢痕疙瘩成纤维细胞的表达有关。 展开更多
关键词 姜黄素 瘢痕疙瘩 成纤维细胞 结缔组织生长因子 胶原 组织构建
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激活Hacat细胞表面Toll样受体促进创面愈合的机制 被引量：2
3
作者 韩勇彬 胡大海 +3 位作者 杨崇志 蔡维霞 白晓智 胡晓龙 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1272-1276,共5页
目的:细胞表面Toll样受体对激发先天性免疫、抵抗微生物感染有重要作用。最近研究发现激活细胞表面Toll样受体不仅可以预防微生物感染,还可以促进组织再生。实验通过脂多糖激活体外培养的角质细胞株Hacat细胞表面Toll样受体,观察其促进... 目的:细胞表面Toll样受体对激发先天性免疫、抵抗微生物感染有重要作用。最近研究发现激活细胞表面Toll样受体不仅可以预防微生物感染,还可以促进组织再生。实验通过脂多糖激活体外培养的角质细胞株Hacat细胞表面Toll样受体,观察其促进创面愈合的可能机制。方法:实验于2007-07在解放军第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科完成。①实验分组及方法:角质细胞株Hacat由解放军第四军医大学西京医院皮肤科馈赠;脂多糖为Sigma公司产品;小鼠抗人Toll样受体2单克隆抗体、兔抗人Toll样受体4多克隆抗体购于ebioscience公司。体外培养Hacat细胞,根据脂多糖(500ng/L)与Hacat细胞共培养24,48,72h将细胞随机分为脂多糖作用24h组、脂多糖作用48h组、脂多糖作用72h组,另设对照组,只加溶剂二甲基亚枫。②实验评估:蛋白免疫印迹技术检测脂多糖对Hacat细胞Toll样受体2、Toll样受体4及核因子-κB表达的影响;荧光定量聚合酶链反应检测脂多糖作用后Hacat细胞内基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶9及血管内皮生长因子的表达。结果:光学显微镜下正常人皮肤表皮及角质细胞Toll样受体2、Toll样受体4表达呈蓝黑色;脂多糖作用于Hacat细胞24,48,72h后Toll样受体2、Toll样受体4、核因子-κB表达均高于对照组(P<0.01)。与对照组相比,其他3组基质金属蛋白酶3及血管内皮生长因子表达均增高(P<0.01,P<0.05)。脂多糖作用24h组基质金属蛋白酶9表达与对照组差异无显著性(P>0.05),脂多糖作用48,72h组与对照组比较,差异显著(P<0.05)。结论:激活Hacat细胞表面Toll样受体有促进创面愈合作用,其机制可能与脂多糖作用于Toll样受体从而激活核因子-κB信号传导通路促进细胞释放基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶9及血管内皮生长因子等因素有关。 展开更多
关键词 HACAT细胞 TOLL样受体 创面愈合 组织构建
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siRNA沉默NHE1基因对MHCC97-H肝癌细胞侵袭迁移的影响 被引量：2
4
作者 孙伟 王德盛 +6 位作者 杨薛康 周亮 张勇 苟泽鹏 祝普利 张福琴 窦科峰 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2011年第23期2437-2442,共6页
目的:探讨RNA干扰沉默NHE1基因后对人肝癌细胞株MHCC97-H细胞侵袭迁移的影响.方法:应用NHE1基因小干扰RNA(small interferingRNA,siRNA)转染人肝癌细胞株MHCC97-H细胞,同时设立空白对照组和无关对照组.转染成功后采用RT-PCR和Westernblo... 目的:探讨RNA干扰沉默NHE1基因后对人肝癌细胞株MHCC97-H细胞侵袭迁移的影响.方法:应用NHE1基因小干扰RNA(small interferingRNA,siRNA)转染人肝癌细胞株MHCC97-H细胞,同时设立空白对照组和无关对照组.转染成功后采用RT-PCR和Westernblot分别从基因和蛋白水平检测RNA干扰沉默NHE1基因的效果.MTT法测定转染后三组细胞的增殖状况,Transwell小室检测沉默NHE1基因对MHCC97-H细胞侵袭、转移能力的影响,进一步采用免疫荧光观察其对MHCC97-H细胞骨架和伪足的影响.结果:与两对照组比较,转染NHE1-siRNA组NHE1mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);细胞侵袭、迁移实验结果显示,NHE1-siRNA组穿透人工基底膜的细胞数(34.1±5.2,120.2±12.8)较空白对照组(56.9±6.1,235.2±16.8)和转染无关对照组(57.2±6.1,231.9±14.7)均明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05),而空白对照组与无关对照组比较差异无统计学意义;MTT结果显示,转染后48h和72h三组细胞间增殖活性差异无统计学意义;NHE1基因沉默后与两对照组相比,MHCC97-H细胞膜伪足形成减少,细胞内肌动蛋白网排列紊乱.结论:siRNA沉默NHE1基因后可能通过影响MHCC97-H细胞骨架的重组和伪足的形成,从而抑制MHCC97-H细胞的侵袭和迁移能力. 展开更多
关键词 肝癌 钠氢交换蛋白1 RNA干扰 细胞骨架
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