抑制钙结合蛋白S100A4表达缓解小鼠脓毒血症相关肺损伤的研究

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作者 陈科 莫诗卉 +4 位作者 张丁山 何菁菁 晏世荣 吴通前 余芳 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第23期67-73,共7页

目的探讨抑制钙结合蛋白S100A4表达在脓毒血症相关肺损伤中的意义及潜在的调控机制。方法复制脓毒血症模型小鼠,部分加氯硝柳胺Niclosamide预处理,收集肺泡灌洗液和肺组织。BCA蛋白定量法检测小鼠肺泡灌洗液总蛋白浓度;酶联免疫吸附试... 目的探讨抑制钙结合蛋白S100A4表达在脓毒血症相关肺损伤中的意义及潜在的调控机制。方法复制脓毒血症模型小鼠,部分加氯硝柳胺Niclosamide预处理,收集肺泡灌洗液和肺组织。BCA蛋白定量法检测小鼠肺泡灌洗液总蛋白浓度;酶联免疫吸附试验检测肺S100A4蛋白含量;苏木精-伊红染色评估小鼠肺部炎症;免疫组织化学检测肺S100A4蛋白和紧密连接蛋白Occludin表达情况,Western blotting检测潜在信号分子的表达。结果与Con组比较,LPS组小鼠肺泡灌洗液总蛋白浓度升高(P<0.05),与Con组比较,肺S100A4水平差异无统计学意义(P>0.05);免疫组织化学染色结果显示,肺支气管上皮细胞高表达S100A4,且LPS组S100A4表达较Con组升高(P<0.05),Occludin表达较Con组降低(P<0.05);Western blotting结果显示,LPS组STAT_(3)和MAPK3表达较Con组升高(P<0.05)。与LPS组比较,Niclosamide预处理可有效降低小鼠肺支气管上皮细胞S100A4表达(P<0.05),一定程度上恢复Occludin表达和下调STAT_(3)、MAPK3表达。结论Niclosamide可能通过STAT_(3)、MAPK3信号下调S100A4和上调Occludin表达,进而缓解脓毒血症相关肺损伤。 展开更多

关键词 脓毒血症 肺损伤 钙结合蛋白S100A4 氯硝柳胺 紧密连接 信号分子

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S100A4在肥大细胞的表达及血清S100A4含量的检测对过敏性哮喘的诊断价值

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作者 莫诗卉 陶甜 +4 位作者 王晨予 晏世荣 李静 吴通前 余芳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期826-833,共8页

目的初步研究S100钙结合蛋白A4(S100A4)是否参与肥大细胞脂质代谢以及对过敏性哮喘的临床意义。方法从基因表达数据集(GEO)数据库中下载过敏性哮喘相关的单细胞RNA(scRNA)表达矩阵GSE213085,使用R包进行数据可视化处理。通过体外培养C5... 目的初步研究S100钙结合蛋白A4(S100A4)是否参与肥大细胞脂质代谢以及对过敏性哮喘的临床意义。方法从基因表达数据集(GEO)数据库中下载过敏性哮喘相关的单细胞RNA(scRNA)表达矩阵GSE213085,使用R包进行数据可视化处理。通过体外培养C57肥大细胞,慢病毒感染肥大细胞建立S100A4低表达的细胞系,实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测S100A4的mRNA和蛋白水平,实时荧光定量PCR检测脂质代谢相关基因ATP柠檬酸合成酶(ACLY)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)、CD36、溶质载体家族27a成员6(SCL27a6)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)的mRNA水平。采集过敏性哮喘的患者和健康对照人群外周血,ELISA检测血清S100A4水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析S100A4对疾病的诊断效能,并计算曲线下面积(AUC)。结果用scRNA数据集GSE213085鉴定出26225个细胞,提取出肥大细胞进行后续分析,功能富集分析结果表明,肥大细胞特征基因集中于脂质代谢相关的途径。肥大细胞低表达S100A4时,其脂质代谢相关基因ACLY、ACC1、CD36、SCL27a6、PPARα表达下调。ELISA检测显示过敏性哮喘患者血清S100A4较健康对照人群升高,ROC曲线发现,血清S100A4含量对过敏性哮喘具有一定诊断效能(AUC=0.746)。结论S100A4可能参与肥大细胞脂质代谢调节,血清S100A4检测对过敏性哮喘诊断可能有一定价值。 展开更多

关键词 过敏性哮喘 肥大细胞 S100钙结合蛋白A4(S100A4) 生物信息学分析 受试者特征曲线

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成年小鼠触液神经元体外分离培养及自我更新能力的鉴定

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作者 上官泽宇 陈婵娟 +5 位作者 李琦哲 谭伟 颜海健 王春庆 豆晓伟 李青 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第13期2728-2735,共8页

背景:课题组前期成功在体外分离培养乳鼠触液神经元,尚无研究报道有效分离培养高纯度成年小鼠触液神经元的方法,且触液神经元的自我更新能力是否随着年龄发生变化尚无研究。目的:建立一种高纯度成年小鼠触液神经元体外分离培养的方法,... 背景:课题组前期成功在体外分离培养乳鼠触液神经元,尚无研究报道有效分离培养高纯度成年小鼠触液神经元的方法,且触液神经元的自我更新能力是否随着年龄发生变化尚无研究。目的:建立一种高纯度成年小鼠触液神经元体外分离培养的方法,并鉴定成年小鼠触液神经元与乳鼠触液神经元在体外的自我更新能力。方法:从成年3月龄小鼠颈髓分离含有触液神经元的原代细胞贴壁培养并利用融合多模态成像基因的慢病毒转染细胞,通过嘌呤霉素筛选得到高纯度成年小鼠触液神经元细胞,在完全培养基中悬浮培养。通过免疫荧光检测成年小鼠触液神经元表达神经干细胞标记物巢蛋白(Nestin)及SOX2情况,观察成年小鼠触液神经元体外成球与传代能力;将同等数量(5×10^(3))的第3代成年小鼠及乳鼠触液神经元在同等条件下分为2组,分别接种在含有完全培养基的超低黏附培养板中,在体积分数5%CO_(2),37℃恒温箱悬浮培养,通过体外成球、CCK8实验、qPCR和Western blot鉴定成年小鼠及乳鼠触液神经元的自我更新能力。结果与结论:①实验成功在成年小鼠体内分离出高纯度触液神经元,在体外表达Nestin及SOX2,能形成神经球并连续传代。②成年小鼠触液神经元体外自我更新能力较乳鼠相比明显减弱,细胞培养到第4天时乳鼠触液神经元已经形成直径约为150μm的神经球,而成年小鼠触液神经元所形成的神经球直径仅为40μm(P<0.0001)。③CCK8增殖实验结果表明,成年小鼠触液神经元的增殖活性在培养后各时间点显著弱于乳鼠(P<0.0001)。④qPCR和Western blot检测发现成年小鼠触液神经元Nestin及SOX2的mRNA(P<0.0001)和蛋白表达量(P<0.01)较乳鼠显著下降。⑤上述结果证实,成年小鼠触液神经元的体外自我更新能力显著弱于乳鼠。 展开更多

关键词 脊髓损伤 成年小鼠触液神经元 内源性神经干细胞 自我更新能力 体外培养 细胞提纯 融合多模态成像基因的慢病毒 干细胞潜能鉴定

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多发性硬化症患者及动物模型相关免疫细胞比例的变化

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作者 何菁菁 晏世荣 +3 位作者 吴通前 杨秀兰 沈雪 余芳 《贵州医科大学学报》 CAS 2024年第4期515-521,共7页

目的探究多发性硬化症(MS)患者及动物模型相关免疫细胞比例变化。方法选取28例MS患者作为MS组,同期25例健康体检者作为对照组(HCs组),收集两组受检者外周血血常规参数,流式细胞术检测其淋巴细胞亚群百分比;采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白片... 目的探究多发性硬化症(MS)患者及动物模型相关免疫细胞比例变化。方法选取28例MS患者作为MS组,同期25例健康体检者作为对照组(HCs组),收集两组受检者外周血血常规参数,流式细胞术检测其淋巴细胞亚群百分比;采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白片段35-55(MOG 35-55)在C57BL/6小鼠身上构建实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)模型,10只小鼠均分为对照组(control组,皮下注射等量PBS)与EAE组(注射MOG 35-55),于造模后第15天取2组小鼠大脑、脊髓和脾脏,流式细胞术检测大脑、脊髓和脾脏相关免疫细胞百分比。结果MS组患者外周血单核细胞(Mono)和嗜酸性粒细胞(Eos)比例较HCs组显著下调(P<0.05),B细胞比例显著上调(P<0.01),T细胞比例显著下调(P<0.01);EAE组小鼠较control组小鼠大脑和脊髓中淋巴细胞(CD45^(+))、巨噬细胞(CD45^(+)、CD11b^(+))、CD4^(+)T比例显著升高(P<0.01),CD8^(+)T比例显著下调(P<0.01);脾脏中巨噬细胞(CD11b^(+)、F4/80^(+))、中性粒细胞(CD11b^(+)、GR-1^(+))比例显著上调(P<0.001),CD4^(+)T比例显著下调(P<0.01)。结论MS患者及动物模型机体存在免疫细胞比例失调现象。 展开更多

关键词 多发性硬化症 动物模型 实验性自身免疫性脑脊髓膜炎 淋巴细胞亚群 免疫细胞比例失调 血脑屏障

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利妥昔单抗对多发性硬化症复发期患者外周血NK细胞 功能

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作者 何菁菁 晏世荣 +3 位作者 吴通前 杨秀兰 沈雪 余芳 《贵州医科大学学报》 CAS 2024年第5期691-696,共6页

目的观察利妥昔单抗对多发性硬化症(MS)复发期患者外周血NK细胞活化及ADCC功能的影响及机制。方法选取MS复发期病例(n=28),并将无自身免疫疾病及重大感染疾病的受试者作为健康对照组(n=25),提取两组被检者外周血单个核细胞(PBMCs),检测... 目的观察利妥昔单抗对多发性硬化症(MS)复发期患者外周血NK细胞活化及ADCC功能的影响及机制。方法选取MS复发期病例(n=28),并将无自身免疫疾病及重大感染疾病的受试者作为健康对照组(n=25),提取两组被检者外周血单个核细胞(PBMCs),检测利妥昔单抗处理前后B细胞、自然杀伤细胞(NK)细胞比例及NK细胞活化水平;建立PBMCs与人慢性髓源白血病细胞系K562细胞直接接触共培养体系,检测利妥昔单抗处理后NK细胞抗体依赖细胞介导细胞毒性作用(ADCC)的效应因子释放。结果利妥昔单抗能诱导MS复发期组和健康对照组外周血中B细胞和NK细胞比例显著下调,且能诱导健康对照组的NK细胞活化及ADCC功能的显著上调,但对MS复发期患者NK细胞的活化及ADCC功无明显影响。结论利妥昔单抗可诱导MS复发期患者B细胞及NK细胞比例下调,但对NK细胞的活化及其ADCC功能无明显影响。 展开更多

关键词 多发性硬化症 利妥昔单抗 自然杀伤细胞 细胞活化 效应因子 抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用

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Notch3调控Hes2逆转三阴性乳腺癌上皮-间质转化的机制研究

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作者 田园 牟雅君 +1 位作者 杨文秀 豆晓伟 《天津医药》 CAS 北大核心 2022年第8期785-790,共6页

目的 探究 Notch3逆转三阴性乳腺癌(TNBC)上皮-间质转化(EMT)及抑制肿瘤转移的分子机制。方法 将 Notch3过表达质粒(pcDNA3.1-Notch3-GFP)及其阴性对照质粒(pcDNA3.1-NC-GFP)、Hes2敲低的小分子干扰质 粒(si-Hes2-GFP)及其阴性对照质粒(... 目的 探究 Notch3逆转三阴性乳腺癌(TNBC)上皮-间质转化(EMT)及抑制肿瘤转移的分子机制。方法 将 Notch3过表达质粒(pcDNA3.1-Notch3-GFP)及其阴性对照质粒(pcDNA3.1-NC-GFP)、Hes2敲低的小分子干扰质 粒(si-Hes2-GFP)及其阴性对照质粒(si-NC-GFP)转染 TNBC MDA-MB-231细胞,分为对照组(不进行任何转染)、 pc-NC组(转染 pcDNA3.1-NC-GFP)、Notch3过表达组(pc-Notch3组,转染 pcDNA3.1-Notch3-GFP)、Notch3过表达+ si-NC 组(pc-Notch3+si-NC 组 ,共 转 染 pcDNA3.1-Notch3-GFP 和 si-NC-GFP)、Notch3 过 表 达 +Hes2 敲 低 组(pc Notch3+si-Hes2组,共转染 pcDNA3.1-Notch3-GFP和 si-Hes2-GFP)。采用实时荧光定量 PCR和 Western blot分别检 测细胞 Notch3、Hes2 mRNA和蛋白表达;细胞计数试剂盒-8检测细胞增殖活性;划痕愈合实验和 Transwell小室实验 检测细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测细胞 EMT相关蛋白[E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)]表 达。结果 与对照组和 pc-NC组比较,pc-Notch3组和 pc-Notch3+si-NC组 Notch3、Hes2 mRNA和蛋白、E-cadherin蛋 白水平显著升高,细胞增殖活性、迁移率、穿膜细胞数、Vimentin蛋白水平显著降低(P<0.05);与 pc-Notch3组和 pc Notch3+si-NC组比较,pc-Notch3+si-Hes2组 Hes2 mRNA和蛋白、E-cadherin蛋白水平显著降低,细胞增殖活性、迁移 率、穿膜细胞数、Vimentin蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论 Notch3可能通过上调 Hes2来逆转 TNBC的 EMT,抑 制肿瘤转移。 展开更多

关键词 三阴性乳腺癌 上皮-间质转化 NOTCH3 Hes2 MDA-MB-231细胞 肿瘤转移

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贵州地区HBeAg阳性乙型肝炎病毒高载量孕妇母婴阻断的临床研究 被引量：16

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作者 张宝芳 程明亮 +7 位作者 张权 赵雪珂 余蕾 杨京 邓开盛 张莉莎 王珺 胡亚欣 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期945-950,共6页

目的观察贵州地区HBeAg阳性高载量乙型肝炎孕妇母婴阻断的有效性、安全性及相关母婴结局。方法回顾性收集2016年5月至2017年07月感染科、产科的门诊及住院病例,分为干预组、非干预组及非乙型肝炎孕妇组,每组75例。干预组为HBsAg及HBeAg... 目的观察贵州地区HBeAg阳性高载量乙型肝炎孕妇母婴阻断的有效性、安全性及相关母婴结局。方法回顾性收集2016年5月至2017年07月感染科、产科的门诊及住院病例,分为干预组、非干预组及非乙型肝炎孕妇组,每组75例。干预组为HBsAg及HBeAg均阳性,HBV DNA≥10^6 IU/ml乙型肝炎孕妇并于孕24~28周开始至分娩前进行抗HBV治疗,根据口服药物又分为:替诺福韦(TDF)组或替比夫定(LDT)组;非干预组为HBsAg及HBeAg均阳性,HBV DNA阳性乙型肝炎孕妇,孕期未用抗HBV药物;非乙型肝炎孕妇为正常未感染HBV孕妇。3组产妇所生婴幼儿均接受国家标准规范的乙型肝炎计划免疫接种,观察及统计出生时所孕孕周,出生时Apgar评分、分娩方式、喂养方式、性别及7个月龄时定量检测血清乙型肝炎标志物(HBVM)及HBV DNA。应用时间分辨荧光免疫定量分析法检测HBVM,荧光定量PCR技术检测HBV DNA;统计孕期干预组在用药前(孕12~24周),用药4周(孕28~32周),分娩前(孕36~40周)肝功能指标、HBsAg、HBeAg、HBV DNA变化及药物不良反应,治疗应答情况。计量资料数据组间比较采用t检验,组内比较采用秩和检验进行统计分析。结果干预组治疗用药:TDF组和LDT组在人口统计学和临床特征方面没有差异,包括肝功能检测指标、HBsAg、HBeAg及log10HBV DNA水平。log10HBV DNA与治疗前(TDF组:4.84 ± 2.01;LDT组:5.08±1.99)相比,TDF与LDT在孕期治疗结束时(TDF组:3.06±0.66;LDT组:3.51±1.20)均显著降低(P<0.05),治疗应答率100%。干预组服药均未出现严重不良反应。3组孕妇所分娩的婴幼儿HBV母婴传播感染结局:非干预组婴儿7个月龄时检测HBsAg阳性率为20.0%(15/75),HBeAg阳性率为17.3%(13/75)及HBV DNA阳性率为17.3%(13/75),其HBV母婴传播感染率为20%(15/75)。进一步分析非干预组婴幼儿HBV感染与母亲HBV DNA载量的关系,发现母婴传播感染者其母亲HBV DNA均≥10^6 IU/ml。干预组婴儿7个月龄时检测HBsAg、HBeAg及HBV DNA均阴性,HBV母婴传播感染率为0,HBV母婴阻断率为100%,而且其婴幼儿均有不同程度的乙型肝炎保护性抗体出现(抗-HBs,均值为144.33 mIU/ml),其抗体滴度高于非干预组及非乙型肝炎孕妇,与非干预组(抗-HBs,均值为65.91 mIU/ml)及非乙型肝炎孕妇(抗-HBs,均值为58.43 mIU/ml)比较,差异有统计学意义(P<0.05),与抗病毒药及分娩方式及喂养方式之间无明显相关性。结论非干预组发生了HBV母婴传播,母婴传播感染者其母亲分娩前HBV DNA均≥106 IU/ml.提示HBeAg阳性,高载量HBV DNA复制是发生乙型肝炎母婴传播的独立危险因素。因此,针对乙型肝炎高危孕妇,需产前药物干预及产后标准联合免疫阻断,才能从真正临床上实现乙型肝炎母婴零传播。 展开更多

关键词 肝炎病毒 乙型 肝炎抗体 孕妇 母婴阻断 乙型肝炎保护胜抗体

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SASH1基因杂合变异c.1574C>G(p.T525R)可促进黑色素合成增加

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作者 陈红宇 张景 +4 位作者 曾珍 杨娉娉 熊宇 张淼 周定安 《天津医药》 CAS 北大核心 2023年第7期756-761,共6页

目的报告1例由SASH1基因c.1574C>G(p.T525R)变异位点导致的遗传性泛发性色素异常症(DUH)患者,并通过体外功能实验探讨该变异对黑色素表达的影响。方法采集先证者及其父母外周血,提取DNA,利用全外显子组测序、Sanger测序技术明确致病... 目的报告1例由SASH1基因c.1574C>G(p.T525R)变异位点导致的遗传性泛发性色素异常症(DUH)患者,并通过体外功能实验探讨该变异对黑色素表达的影响。方法采集先证者及其父母外周血,提取DNA,利用全外显子组测序、Sanger测序技术明确致病性基因;生物信息学分析基因变异位点有害性;小鼠黑色素瘤细胞B16为细胞模型,Western blot分析SASH1基因c.1574C>G(p.T525R)变异对小眼相关转录因子(MITF)、酪氨酸酶(Tyrosinase)蛋白表达量的影响;体外黑色素定量实验分析该变异位点对人皮肤黑色素瘤细胞SK-MEL-1和B16细胞黑色素合成的影响。结果基因测序结果显示,先证者检出SASH1基因c.1574C>G(p.T525R)变异;生物信息学分析该变异对蛋白质结构和功能造成影响的概率较大;Western blot结果显示该变异上调了黑色素合成过程中最关键的MITF及Tyrosinase的表达量;体外黑色素定量分析该变异可促使B16和SK-MEL-1细胞合成黑色素增加。结论SASH1基因c.1574C>G(p.T525R)杂合变异与DUH发生相关,且该变异可促进黑色素瘤细胞合成黑色素增加。 展开更多

关键词 黑素类 小眼畸形相关转录因子 遗传性泛发性色素异常症 SASH1基因

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抑癌基因SASH1在乳腺癌中结合Vimentin并负性调节Vimentin的表达

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作者 杨娉娉 张景 +3 位作者 陈红宇 张淼 周定安 方文 《天津医药》 CAS 北大核心 2023年第9期904-908,共5页

目的寻找参与抑癌基因SASH1调节乳腺癌发生发展的伙伴分子,并分析两者的相关性以及在乳腺癌发生发展中的作用。方法利用液相色谱-串联质谱联用(LC-MS/MS)技术和免疫共沉淀技术分析与SASH1结合并可能调节乳腺癌发生发展的分子。免疫组织... 目的寻找参与抑癌基因SASH1调节乳腺癌发生发展的伙伴分子,并分析两者的相关性以及在乳腺癌发生发展中的作用。方法利用液相色谱-串联质谱联用(LC-MS/MS)技术和免疫共沉淀技术分析与SASH1结合并可能调节乳腺癌发生发展的分子。免疫组织化学和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测30例正常乳腺组织和123例乳腺癌组织SASH1和波形蛋白(Vimentin)的表达水平,并在乳腺癌中分析两者之间的相关性。Western blot检测乳腺癌细胞中敲低SASH1对Vimentin表达的影响。结果SASH1与Vimentin存在相互作用的可能性为100%。免疫共沉淀证实SASH1与Vimentin可发生蛋白相互作用。免疫组织化学染色结果显示,与正常乳腺组织相比,乳腺癌组织中SASH1表达降低而Vimentin表达增高,且两者呈负相关(P<0.01)。Western blot实验证实在16例乳腺癌组织和对应的癌旁组织中,乳腺癌组织表现出SASH1低表达,而Vimentin高表达。在乳腺癌细胞中敲低SASH1后Vimentin的表达增高。结论SASH1可能通过负性调节Vimentin的表达参与乳腺癌的发生发展。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 波形蛋白 SASH1 蛋白相互作用

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急性发热性嗜中性皮病伴噬血现象1例 被引量：2

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作者 赵珮伶 王珺 +3 位作者 张权 刘咏梅 穆茂 程明亮 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期756-758,共3页

回顾性分析1例青年男性Sweet病患者的诊治经过;搜索Pub Med数据库中相关的文献进行总结。该例患者发热长达1月余,皮损严重,合并骨骼、淋巴、血液系统的损害,诊断为急性发热性嗜中性皮病伴噬血现象,给予泼尼松治疗后好转。

关键词 急性发热性嗜中性皮病 噬血现象

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银杏黄酮苷元对多柔比星治疗肝癌的增效减毒作用 被引量：4

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作者 宋忠军 朱晓青 +2 位作者 何艳 李勇军 陆苑 《中国药房》 CAS 北大核心 2022年第16期1937-1942,1949,共7页

目的研究银杏黄酮苷元(GA)对多柔比星(DOX)治疗肝癌的增效减毒作用。方法于ICR小鼠右腋皮下单次接种肝癌细胞H22以建立荷瘤模型,并将造模成功的小鼠随机分为模型对照组、DOX组(2.5 mg/kg,隔天尾静脉注射1次)、GA组(30 mg/kg,每天灌胃1次... 目的研究银杏黄酮苷元(GA)对多柔比星(DOX)治疗肝癌的增效减毒作用。方法于ICR小鼠右腋皮下单次接种肝癌细胞H22以建立荷瘤模型,并将造模成功的小鼠随机分为模型对照组、DOX组(2.5 mg/kg,隔天尾静脉注射1次)、GA组(30 mg/kg,每天灌胃1次)和GA+DOX组(给药方法同单药组),每组6只。药物干预周期为15 d。观察各组小鼠的一般生长情况,称定其体质量、瘤体质量并计算抑瘤率,采用金氏公式评估联合用药的效果(Q)。检测各组小鼠血清中甲胎蛋白(AFP)水平,肿瘤组织的病理改变、细胞凋亡情况和血小板-内皮细胞黏附分子1(CD31)的表达水平,以及心脏指数、血清B型钠尿肽(BNP)和N末端脑钠肽前体(NT-pro BNP)水平、心脏病理改变和心肌纤维化情况。结果DOX组、GA组、GA+DOX组小鼠的体质量变化百分比(GA组除外)、瘤体质量均较模型对照组显著降低(P<0.05或P<0.01),且GA+DOX组的瘤体质量显著低于DOX组(P<0.01);3个药物组的抑瘤率分别为54.29%、42.50%、89.29%,两药联合的Q为1.21。各药物组小鼠肿瘤组织均有不同程度坏死,血清AFP水平和肿瘤组织中CD31的表达水平均较模型对照组显著降低(P<0.05或P<0.01),肿瘤组织坏死面积百分比和细胞凋亡阳性率(单药组除外)均显著增高(P<0.05或P<0.01),且GA+DOX组的细胞凋亡阳性率显著高于DOX组(P<0.05)。DOX组小鼠的心脏指数显著低于模型对照组(P<0.05),DOX组、GA+DOX组小鼠的血清BNP、NT-pro BNP水平均显著高于模型对照组(P<0.05或P<0.01),GA+DOX组小鼠的心脏病理改变和心肌纤维化程度均较DOX组轻微。结论GA和DOX联用具有协同抑瘤作用;GA可增加DOX的促细胞凋亡作用,并有助于降低后者的心脏毒性。 展开更多

关键词 银杏黄酮苷元 多柔比星 增效减毒 肝癌 H22荷瘤小鼠

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重症肌无力患者治疗间期外周血记忆T细胞和滤泡T细胞及相关细胞因子水平变化的监测 被引量：2

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作者 马岚 吴通前 +2 位作者 何菁菁 沈雪 余芳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期257-262,共6页

目的观察在重症肌无力(MG)治疗间期,T细胞亚群和炎性细胞因子及乙酰胆碱受体(AChR)抗体的变化,探讨其在MG发病机制中的作用。方法选取MG并处于治疗间期的患者30例及健康对照组20例,用流式细胞仪检测其外周血中CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细... 目的观察在重症肌无力(MG)治疗间期,T细胞亚群和炎性细胞因子及乙酰胆碱受体(AChR)抗体的变化,探讨其在MG发病机制中的作用。方法选取MG并处于治疗间期的患者30例及健康对照组20例,用流式细胞仪检测其外周血中CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、中枢记忆T(CD4^(+)CD45RO^(+)CCR7^(+))细胞、效应记忆T(CD4^(+)CD45RO^(+)CCR7-)细胞、滤泡辅助T(CD4^(+)CXCR5^(+))细胞、滤泡调节T(CD4^(+)CXCR5^(+)FOXP3^(+))细胞所占百分比情况;利用流式液相蛋白定量技术(CBA)检测外周血白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-12、IL-17及γ干扰素(IFN-γ)的水平;ELISA检测IL-7及AChR抗体的含量。结果与健康对照相比,MG患者外周血中CD4^(+)CXCR5^(+)T细胞、CD4^(+)CD45RO^(+)CCR7-T细胞、CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞及CD4/CD8比值未见明显变化,CD4^(+)CD45RO^(+)CCR7^(+)T细胞明显降低,CD4^(+)CXCR5^(+)FOXP3^(+)T细胞明显增加;MG患者IL-2、IL-4、IL-12、IL-17及IFN-γ水平均高于健康对照,而IL-7低于健康对照,AChR抗体水平无明显变化。各细胞因子水平与各T细胞亚群间未发现有明显相关性。结论治疗间期MG患者存在较为独特的记忆T细胞和滤泡T细胞表型及相关细胞因子水平变化。 展开更多

关键词 重症肌无力 记忆T细胞 滤泡T细胞 细胞因子 细胞免疫

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Notch1信号通路对小鼠触液神经元体外增殖能力的调节作用 被引量：1

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作者 何宇祺 林宗龙 +5 位作者 王硕 陈立 王洪超 施晓会 豆晓伟 李青 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期262-270,共9页

目的:探讨Notch1信号通路在调节小鼠触液神经元增殖中的作用。方法:(1)取出生24h内C57BL/6小鼠延髓组织,消化后提取细胞,经流式细胞分选得到触液神经元(cerebrospinal fluid-contacting neurons, CSFcNs)。将CSF-cNs悬浮培养并传代。(2)... 目的:探讨Notch1信号通路在调节小鼠触液神经元增殖中的作用。方法:(1)取出生24h内C57BL/6小鼠延髓组织,消化后提取细胞,经流式细胞分选得到触液神经元(cerebrospinal fluid-contacting neurons, CSFcNs)。将CSF-cNs悬浮培养并传代。(2)将CSF-cNs传至第2代,培养0h、24h、48h、72h、96h、120h时应用CCK-8法检测CSF-cNs光密度(optical density,OD)值,培养5d时应用免疫荧光检测CSF-cNs特异性标志物多囊肾病2型1通道蛋白(polycystic kidney disease 2 like 1,PKD2L1)与神经干细胞标志物Nestin、Sox2及增殖标志物Ki67共表达情况。(3)将第3代CSF-cNs分为4组:对照组、Jagged-1组、二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组、γ-分泌酶抑制剂(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯[(3,5-difluorophenylacetyl)-L-alanyl-L-2-phenylglycine tert-butyl ester,DAPT]组。对照组采用无血清神经培养液培养;Jagged-1组采用无血清神经培养液+5μmol/L Jagged-1培养;DMSO组采用无血清神经培养液+0.05%DMSO培养;DAPT组采用无血清神经培养液+50μmol/L DAPT培养。培养0h、24h、48h、72h、96h、120h时应用CCK-8法检测各组CSF-cNs的OD值;培养5d时应用Western Blot检测各组CSF-cNs PKD2L1、Notch1、Notch受体胞内段(NICD)、Hes1、β-actin蛋白表达情况,应用免疫荧光法检测各组CSF-cNs增殖标志物Ki67蛋白荧光强度(arbitrary unit,A.U.)值。结果:(1)提取的细胞经流式细胞分选后得到的CSF-cNs纯度为(94.5±2.03)%,存活率为(93.64±2.35)%。CSF-cNs可连续传代并形成神经球。(2)第2代CSF-cNs培养0h、24h、48h、72h及96h时的OD值具有统计学差异(P<0.05),96h与120h的OD值无统计学差异(P=0.44)。CSF-cNs中PKD2L1可与Nestin、Sox2或Ki67共表达。(3)第3代CSF-CNS分组处理后各组细胞PKD2L1蛋白表达量无统计学差异(P=0.27)。Jagged-1组细胞Notch1、NICD、Hes1蛋白表达量均较对照组升高(P<0.01);72h、96h、120h的OD值较对照组均显著性升高(P_(72h)=0.03,P_(96h)=0.02,P_(120h)=0.01);Ki67蛋白A.U.值较对照组显著性升高(P<0.01)。DAPT组细胞Notch1、NICD、Hes1蛋白表达量较对照组均显著性减低(P<0.01);72h、96h、120h的OD值与对照组比较均显著性降低(P<0.01);Ki67蛋白A.U.值较对照组显著性降低(P<0.01)。DMSO组各项指标与对照组比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:CSF-cNs在体外具有神经干细胞潜能;激活Notch1信号通路可增强CSF-cNs的增殖能力,抑制Notch1信号通路可降低CSF-cNs的增殖能力。 展开更多

关键词 触液神经元 神经干细胞 Notch1信号通路 增殖 大鼠

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钙结合蛋白S100A4对鸡卵清白蛋白诱导的免疫应答作用

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作者 吴通前 马岚 +4 位作者 金筱茜 周萍萍 李静 袁锐 余芳 《贵州医科大学学报》 CAS 2020年第12期1371-1375,共5页

目的:探究钙结合蛋白S100A4对鸡卵清白蛋白(OVA)诱导的免疫应答作用。方法:10只C57BL/6雌性野生型(WT)小鼠随机均分OVA组(右踝关节注射OVA 20μg)与OVA联合S100A4蛋白组(右踝关节注射OVA 20μg和S100A4蛋白5μg混合液,即联合组),注射2... 目的:探究钙结合蛋白S100A4对鸡卵清白蛋白(OVA)诱导的免疫应答作用。方法:10只C57BL/6雌性野生型(WT)小鼠随机均分OVA组(右踝关节注射OVA 20μg)与OVA联合S100A4蛋白组(右踝关节注射OVA 20μg和S100A4蛋白5μg混合液,即联合组),注射2周后收集2组小鼠引流淋巴结和血清,采用流式细胞术检测引流淋巴结T细胞与树突状细胞(DC)及其活化百分比,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中OVA特异性免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白E(IgE)的水平。结果:流式细胞术检测结果显示,联合组小鼠引流淋巴结中T细胞(CD3+)、DC(CD11c+)、活化T细胞(CD3+CD69+)及活化DC(CD11c+MHC-Ⅱ+)百分比均高于OVA组(P<0.05);ELISA检测结果显示,联合组小鼠血清中OVA特异性IgG明显高于OVA组(P<0.01)。结论:S100A4蛋白能够促进OVA诱导的免疫应答,起着免疫佐剂的作用。 展开更多

关键词 佐剂 免疫 钙结合蛋白 鸡卵清白蛋白 免疫应答 踝关节免疫 细胞活化

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钙结合蛋白S100A4调节小鼠骨髓源肥大细胞活化的作用

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作者 吴通前 金筱茜 +4 位作者 马岚 周萍萍 李静 袁锐 余芳 《贵州医科大学学报》 CAS 2020年第12期1365-1370,共6页

目的:探讨钙结合蛋白S100A4调节小鼠骨髓源肥大细胞(BMMC)活化的作用。方法:8~10周龄野生型(WT)和S 100 A 4基因敲除(S 100 A 4-/-)C57BL/6健康雄性小鼠各2只,取胫骨与股骨提取骨髓进行骨髓源肥大细胞(BMMC)培养并鉴定;以成熟WT BMMC为... 目的:探讨钙结合蛋白S100A4调节小鼠骨髓源肥大细胞(BMMC)活化的作用。方法:8~10周龄野生型(WT)和S 100 A 4基因敲除(S 100 A 4-/-)C57BL/6健康雄性小鼠各2只,取胫骨与股骨提取骨髓进行骨髓源肥大细胞(BMMC)培养并鉴定;以成熟WT BMMC为模型细胞,实验分为S100A4蛋白处理组(1500μg/L S100A4蛋白)和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组(S100A4蛋白等量体积PBS),分别于培养第1、2及3周采用甲苯胺蓝染色鉴定小鼠成熟BMMC,采用化学发光法检测各组小鼠成熟BMMC中β-氨基己糖苷酶(β-hex)的吸光度(OD),采用流式细胞术检测各组小鼠成熟BMMC的S100A4蛋白表达和白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-13(IL-13)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的荧光强度并计算相对荧光指数(rFI);以成熟WT和S 100 A 4-/-BMMC为模型细胞,实验分为WT离子霉素(ION)处理组(1500μg/L ION)、WT PBS对照组(ION等量体积PBS)、S 100 A 4-/-ION处理组(1500μg/L ION)及S 100 A 4-/-PBS对照组(ION等量体积PBS),采用化学发光法检测各组小鼠成熟BMMC中β-hex的吸光度(OD)。结果:BMMC培养至3周时基本成熟,并表达S100A4蛋白;S100A4蛋白处理组成熟BMMC中β-hex、IL-5、IL-6、IL-13及TNF-α水平高于PBS对照组(P<0.05或P<0.01);WT ION处理组成熟BMMCβ-hex、IL-5、IL-6、IL-13及TNF-α水平高于WT PBS对照组(P<0.01),S 100 A 4-/-ION处理组成熟BMMC中β-hex、IL-5及IL-6明显高于S 100 A 4-/-PBS对照组(P<0.05),S 100 A 4-/-ION处理组成熟BMMC中β-hex、IL-5、IL-6、IL-13及TNF-α水平均低于WT ION处理组(P<0.05)。结论:S100A4蛋白能够直接诱导成熟BMMC活化,S 100 A 4基因的缺失可抑制成熟BMMC活化及炎性因子的产生。 展开更多

关键词 小鼠 基因敲除 肥大细胞 钙结合蛋白 β-氨基己糖苷酶 炎性因子 肥大细胞活化

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银杏黄酮苷元联合阿霉素协同抗肝癌的细胞代谢组学研究 被引量：4

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作者 陆苑 王艳丽 +5 位作者 宋忠军 朱晓青 刘春花 陈际宇 李勇军 何艳 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第18期5040-5051,共12页

该研究基于高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用仪探究银杏黄酮苷元(ginkgo flavone aglycone,GA)联合阿霉素(doxorubicin,DOX)对H22肝癌细胞的抑制作用及作用机制。首先考察不同浓度GA和DOX对H22细胞存活率的影响,以组合指... 该研究基于高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用仪探究银杏黄酮苷元(ginkgo flavone aglycone,GA)联合阿霉素(doxorubicin,DOX)对H22肝癌细胞的抑制作用及作用机制。首先考察不同浓度GA和DOX对H22细胞存活率的影响,以组合指数(combination index,CI)对两者的联合用药进行评价。将实验分为对照组(CON)、DOX组、GA组、联合用药组(GDOX),通过代谢组学策略探寻联合用药较单独用药后显著改变的代谢标志物,分析可能的代谢通路和作用机制。结果显示,以30μg·mL^(-1)GA与0.5μmol·LDOX作为联合给药浓度,CI为0.808,表明两者联合发挥协同抗肿瘤作用。代谢组学分析鉴定出L-精氨酸、L-酪氨酸和L-缬氨酸等23种代谢标志物,以氨基酸类物质为主。与CON组相比,DOX治疗后22种代谢标志物被显著下调,GA治疗后17种代谢标志物被显著下调。相较于DOX和GA组,GDOX联合用药进一步下调了这些代谢标志物在肝癌中的水平,这可能是两者联合起到增效作用的原因。通路富集分析中找到5条关键代谢通路,包括谷胱甘肽代谢,苯丙氨酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢,β-丙氨酸代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解。这表明GA联合DOX的协同抗肿瘤作用,可能是通过干预多种氨基酸的代谢,进而影响肿瘤细胞的能量供应实现。 展开更多

关键词 银杏黄酮苷元 阿霉素 H22细胞 肝细胞癌 细胞代谢组学 协同作用

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重性抑郁障碍患者外周血白细胞SIRT1与炎性因子表达及相关性研究 被引量：7

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作者 王雅静 王艺明 +4 位作者 李佩璠 王骏文 徐鹏飞 宋江兰 邱凌鹤 《中华行为医学与脑科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期431-436,共6页

目的探讨重性抑郁障碍患者外周血中SIRT1及相关炎性调控因子的表达变化,分析SIRT1与抑郁及炎性调控因子的相关性。方法选取重性抑郁障碍患者40例(病例组),健康正常对照40例(对照组)。采用汉密尔顿抑郁量表(Hamilton depression scale,HA... 目的探讨重性抑郁障碍患者外周血中SIRT1及相关炎性调控因子的表达变化,分析SIRT1与抑郁及炎性调控因子的相关性。方法选取重性抑郁障碍患者40例(病例组),健康正常对照40例(对照组)。采用汉密尔顿抑郁量表(Hamilton depression scale,HAMD-17)评估抑郁障碍患者的抑郁程度,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-PCR)方法检测外周血白细胞中SIRT1、Elf-1、NF-κB、IL-1β、GM-CSF mRNA水平的表达情况;采用酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测外周血血浆中SIRT1、Elf-1、NF-κB、IL-1β、GM-CSF蛋白表达水平。采用Pearson相关分析SIRT1与NF-κB、Elf-1、抑郁严重程度的相关性。结果(1)与对照组比较,SIRT1 mRNA在病例组中表达明显降低(P<0.01),Elf-1、NF-κB、IL-1β、GM-CSF mRNA在病例组中表达明显升高(P<0.01);(2)病例组血浆SIRT1蛋白表达量[(8.23±1.78)ng/ml]低于对照组[(9.13±1.63)ng/ml](P<0.01),病例组血浆Elf-1蛋白表达量[(1 921.67±271.07)pg/ml]、NF-κB蛋白表达量[(2 057.29±260.44)pg/ml]、IL-1β蛋白表达量[(186.60±31.00)pg/ml]、GM-CSF蛋白表达量[(183.69±28.87)pg/ml]高于对照组[(1 512.92±284.54)pg/ml,(1 537.18±313.82)pg/ml,(144.79±31.48)pg/ml,(162.82±27.90)pg/ml](均P<0.01);(3)SIRT1 mRNA表达水平与重性抑郁障碍严重程度呈负相关(r=-0.51,P<0.01),与Elf-1、NF-κB mRNA表达水平呈负相关(r=-0.66,P<0.01;r=-0.64,P<0.01)。结论SIRT1在重性抑郁障碍患者外周血中的表达水平与重性抑郁障碍患者抑郁严重程度相关,这可能与重性抑郁障碍患者外周血白细胞中SIRT1的表达降低激活NF-κB以及Elf-1通路,并进一步使GM-CSF、IL-1β的表达增高有关。 展开更多

关键词 重性抑郁障碍 SIRT1 基因表达 ELF-1 NF-ΚB

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人硫氧还蛋白1在大肠杆菌中的重组表达及其对高糖导致的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用 被引量：3

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作者 罗红 朱颜鑫 +3 位作者 赵兵兵 智妍 兰露莎 江滟 《华西药学杂志》 CAS CSCD 2017年第3期266-269,共4页

目的克隆人硫氧还蛋白1(h TRX1)基因并构建其原核表达载体,获得重组人硫氧还蛋白1(rh TRX1),评价rh TRX1对高糖导致的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。方法采用逆转录PCR方法扩增h TRX1基因片段,插入p ET22b(+)质粒并转化大肠杆... 目的克隆人硫氧还蛋白1(h TRX1)基因并构建其原核表达载体,获得重组人硫氧还蛋白1(rh TRX1),评价rh TRX1对高糖导致的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。方法采用逆转录PCR方法扩增h TRX1基因片段,插入p ET22b(+)质粒并转化大肠杆菌Rosetta-gami(2),获得工程菌Rosetta-gami(2)-p ET22ab(+)/h TRX1。用SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定重组蛋白的正确性,用镍亲和层析纯化重组蛋白。采用高糖制备HUVEC损伤模型,MTT比色法检测HUVEC的存活率,生化方法测定HUVEC中乳酸脱氢酶(LDH)的外漏率以及细胞上清液中一氧化氮(NO)的水平。结果构建的工程菌及其产生的重组蛋白rh TRX1正确。与正常对照组比较,高糖损伤组HUVEC的存活率降低、LDH外漏率明显升高,NO的水平明显地降低。不同剂量rh TRX1处理组HUVEC的存活率升高、LDH的外漏率明显降低,NO的水平明显地升高。结论成功克隆并在大肠杆菌中表达rh TRX1、获得结构正确的rh TRX1,rh TRX1对高糖诱导的HUVEC损伤具有保护作用。 展开更多

关键词 人硫氧还蛋白 基因克隆 原核表达 重组蛋白 脐静脉内皮细胞 高糖损伤 体外实验 保护作用

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