肝细胞生长因子对ALL小鼠骨髓移植后GVHD和血清Th1/Th2相关细胞因子的影响 被引量：7

1

作者 夏云金 高清平 +3 位作者 万楚成 程范军 王为民 郭仁慈 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期35-38,共4页

为了观察肝细胞生长因子 (HGF)对急性淋巴细胞白血病 (ALL)小鼠异基因骨髓移植 (allo BMT)后GVHD和血清Th1 Th2相关细胞因子的影响 ,BALB c小鼠ALL模型建立后 ,接受 11Gy全身照射 ,将昆明小鼠骨髓移植给该ALL模型小鼠。随机将BALB c小鼠... 为了观察肝细胞生长因子 (HGF)对急性淋巴细胞白血病 (ALL)小鼠异基因骨髓移植 (allo BMT)后GVHD和血清Th1 Th2相关细胞因子的影响 ,BALB c小鼠ALL模型建立后 ,接受 11Gy全身照射 ,将昆明小鼠骨髓移植给该ALL模型小鼠。随机将BALB c小鼠分A、B两组 ,A组移植后 0天至 7天皮下注射HGF ,B组皮下注射PBS。移植后观察A、B两组的GVHD症状和肝、小肠、皮肤的病理学变化 ;移植后第 8天取血检测IFN γ和IL 4水平。结果表明 :A组的GVHD症状积分低于B组 (P <0 .0 5 ) ;A、B两组的IFN γ均高于正常组 (P值分别 <0 0 5和0 0 0 1) ,但A组低于B组 (P <0 .0 1) ;A、B两组的IL 4均低于正常组 (P <0 .0 5 ) ,而A组的IL 4高于B组 (P <0 .0 5 )。结论 :HGF可减轻GVHD的严重程度 ,与HGF有调节Th1 Th2相关细胞因子趋于平衡的作用有关。 展开更多

关键词 肝细胞生长因子 急性淋巴细胞白血病 骨髓移植 GVHD TH1 TH2

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rhG-CSF对小鼠骨髓间充质干细胞的动员作用 被引量：5

2

作者 刘岐焕 程范军 +3 位作者 陈龙 唐俊明 王家宁 高清平 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第4期790-794,共5页

为了研究rhG-CSF体内应用对小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)的动员作用,将30只小鼠随机分为2组:rhG-CSF组和对照组,分别给予皮下注射rhG-CSF80μg/(kg.d)和等量生理盐水,连续5天,在最后1次注射后分别于6,12和168小时取小鼠骨髓和外周血,以1&#... 为了研究rhG-CSF体内应用对小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)的动员作用,将30只小鼠随机分为2组:rhG-CSF组和对照组,分别给予皮下注射rhG-CSF80μg/(kg.d)和等量生理盐水,连续5天,在最后1次注射后分别于6,12和168小时取小鼠骨髓和外周血,以1×106单个核细胞(MNC)接种于12孔培养板14天,对形成的成纤维细胞集落(CFU-F)进行计数,用胰蛋白酶消化后应用流式细胞术测定表面抗原并进行成脂,成骨诱导。结果表明:rhG-CSF组骨髓形成的CFU-F数均较对照组明显增加(p<0.01)。6小时取材较12小时,168小时取材形成的CFU-F数目多(p<0.01),12小时与168小时CFU-F差异无统计学意义。流式细胞术检测骨髓CFU-F显示CD34-、CD133-、CD90+、CD105+,骨髓CFU-F具有成脂、成骨分化的能力。rhG-CSF组6小时取材外周血具有类似骨髓的CFU-F,出现的频率为(0.50±0.11)×10-6,与对照组比较差异有显著性(p<0.05)。结论:rhG-CSF可使小鼠骨髓间充质干细胞增殖加速,但时间短暂,其高峰在rhG-CSF应用5天后的6小时内。rhG-CSF对小鼠间充质干细胞也有动员能力,但作用较弱。 展开更多

关键词 重组人粒细胞集落刺激因子 骨髓间充质干细胞 CFU-F

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鼠尾胶在小鼠外周血间充质干细胞分离培养中的作用 被引量：4

3

作者 刘岐焕 陈龙 +3 位作者 程范军 唐俊明 王家宁 高清平 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第21期4017-4020,共4页

背景:动物和人外周血中分离出的间充质干细胞生长繁殖受分离方法、培养条件等因素的影响。目的:采用重组人粒细胞集落刺激因子动员小鼠外周血间充质干细胞,体外培养条件中加入鼠尾胶包被,观察其对细胞分离、培养、增殖的影响。设计、时... 背景:动物和人外周血中分离出的间充质干细胞生长繁殖受分离方法、培养条件等因素的影响。目的:采用重组人粒细胞集落刺激因子动员小鼠外周血间充质干细胞,体外培养条件中加入鼠尾胶包被,观察其对细胞分离、培养、增殖的影响。设计、时间及地点:开放性实验,于2005-05/2007-12在郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所完成。材料:昆明小鼠20只随机分为鼠尾胶包被组和不包被对照组,每组10只。方法:小鼠皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子80μg/(kg·d)连续动员5d,最后一次注射后6h取外周血。肝素抗凝后,采用全血细胞分离培养,用含体积分数为0.15胎牛血清DMEM培养基,分别接种于包被和未包被鼠尾胶的12孔板,接种密度为1×105/孔,48h后半量换液以后每3天换液1次,培养10d。主要观察指标:①鼠尾胶包被的培养板对形成成纤维样细胞集落的影响。②成纤维样细胞集落中的间充质干细胞表面标记流式检测结果。③成纤维样细胞集落成骨、成脂肪诱导后嗜银法和油红O法染色鉴定。结果:①使用鼠尾胶包被的培养板可增加重组人粒细胞集落刺激因子动员后外周血成纤维样细胞集落出现的频率(P<0.05)。②经流式细胞术鉴定形成成纤维样细胞集落的细胞不表达CD34、CD133,表达CD90、CD105。③成骨、成脂肪诱导后细胞嗜银法和油红O法染色鉴定均呈阳性。结论:培养的细胞符合公认间充质干细胞的特征,鼠尾胶可增加培养皿的黏附性促进间充质干细胞分离。 展开更多

关键词 间充质干细胞 集落形成单位测定 粒细胞集落刺激因子

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粒细胞集落刺激因子对小鼠骨髓间充质干细胞的作用 被引量：3

4

作者 刘岐焕 程范军 +3 位作者 陈龙 唐俊明 王家宁 高清平 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 2007年第3期336-340,F0003,共6页

目的:研究不同剂量下重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对小鼠骨髓间充质干细胞的动员作用。方法:32只小鼠随机分成4组,分别给予0,20,40,80μg/kg rhG-CSF皮下注射,每日1次,连续5 d,最后一次注射后6 h分别取骨髓和外周血,以1×106... 目的:研究不同剂量下重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对小鼠骨髓间充质干细胞的动员作用。方法:32只小鼠随机分成4组,分别给予0,20,40,80μg/kg rhG-CSF皮下注射,每日1次,连续5 d,最后一次注射后6 h分别取骨髓和外周血,以1×106分别接种于含10%胎牛血清的DMEM培养基的12孔板中培养10 d,计数成纤维样集落(CFU-F)的个数,对形成的CFU-F消化后收集细胞,流式细胞术检测表面抗原表达并进行成脂、成骨诱导。结果:骨髓所形成的CFU-F与rhG-CSF剂量成正比,外周血也有类似骨髓的成纤维样集落,但出现的频率极低。骨髓CFU-F流式检测呈CD34-、CD133-、CD90+、CD105+,具有成脂、成骨分化的能力。结论:rhG-CSF可促进骨髓间充质干细胞增殖,且随rhG-CSF剂量增大,促增殖作用越强。rhG-CSF也有动员小鼠间充质干细胞的能力,但作用较弱。 展开更多

关键词 间充质干细胞 粒细胞集落刺激因子 增殖 动员

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睾丸原发的NK/T细胞淋巴瘤1例报告并文献复习 被引量：4

5

作者 曾琴兵 程范军 +4 位作者 高清平 朱正鹏 刘岐焕 鱼强 吕建 《临床血液学杂志》 CAS 2009年第1期35-39,共5页

目的:探讨睾丸原发的NK/T细胞淋巴瘤的临床和病理特征及有效的诊治措施。方法:报道1例睾丸原发的NK/T细胞淋巴瘤,对手术标本行光镜观察、免疫组化检查及EB病毒DNA的PCR分析,并进行文献复习。结果:患者表现为无痛性左侧睾丸肿大,有向对... 目的:探讨睾丸原发的NK/T细胞淋巴瘤的临床和病理特征及有效的诊治措施。方法:报道1例睾丸原发的NK/T细胞淋巴瘤,对手术标本行光镜观察、免疫组化检查及EB病毒DNA的PCR分析,并进行文献复习。结果:患者表现为无痛性左侧睾丸肿大,有向对侧睾丸、脾、中枢神经系统(CNS)等部位播散的自然倾向;肿瘤细胞免疫表型为CD56、CD45RO、CD3ε阳性,CD20、CD79α、CD5、Bcl-2、胎盘碱性磷酸酶(PLAP)均为阴性;PCR检测肿瘤细胞EB病毒DNA为阳性;病理诊断为左侧睾丸NK/T细胞淋巴瘤。结论:睾丸原发的NK/T细胞淋巴瘤罕见,病情进展快,应尽早行病理组织学、免疫组化、EB病毒相关检查及T细胞受体(TCR)基因重排研究以确定诊断,目前治疗效果差,需探索新的治疗策略以提高生存率。 展开更多

关键词 淋巴瘤 NK细胞 T细胞 睾丸 CD56

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不同剂量TPO对小鼠骨髓MSC增殖的影响 被引量：2

6

作者 柴海霞 程范军 +3 位作者 刘岐焕 唐俊明 杨建业 王家宁 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第4期859-862,共4页

为了探讨不同剂量血小板生成素(TPO)对小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)增殖的影响,将20只昆明小鼠(35±5 g)随机分为低、中、高3个剂量实验组与对照组。给实验组分别腹腔注射TPO 25、50和100μg/kg,而给对照组腹腔注射生理盐水0.1 ml/g,... 为了探讨不同剂量血小板生成素(TPO)对小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)增殖的影响,将20只昆明小鼠(35±5 g)随机分为低、中、高3个剂量实验组与对照组。给实验组分别腹腔注射TPO 25、50和100μg/kg,而给对照组腹腔注射生理盐水0.1 ml/g,每日1次,连用5日。每组分别于最后1次注射后12小时收集小鼠骨髓,计数骨髓有核细胞数(BMNC),以106/cm2接种、培养并计数原代成纤维样细胞集落形成单位(CFU-F),同时对其进行成骨、成脂肪诱导分化,用流式细胞术检测BMNC中CD90+、CD105+、CD34+细胞比例并鉴定CFU-F的表型。结果显示:与对照组相比,实验组所获得的BMNC、CD90+、CD105+、CD34+细胞比例和CFU-F集落数明显增加(p<0.05)。3个剂量中以50μg/kg TPO组增加最明显,但50μg/kg组的CFU-F集落数与100μg/kg TPO组的CFU-F集落数相比,差异无统计学意义(p>0.05)。CFU-F样MSC具有成骨、成脂肪分化的能力。结论:TPO促进BMNC数、CD90+、CD105+细胞数和CFU-F集落数增多,即促进骨髓MSC的增殖,但是TPO促进骨髓MSC增殖的作用不随剂量的增加而增加。 展开更多

关键词 血小板生成素 间充质干细胞 细胞增殖

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重组人红细胞生成素促进体外培养的人骨髓间充质干细胞增殖 被引量：1

7

作者 曾琴兵 程范军 +5 位作者 张卫国 唐俊明 陈龙 刘歧焕 高清平 王家宁 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第6期1392-1397,共6页

为了观察重组人红细胞生成素(rhEPO)对人骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖活性的影响,抽取健康志愿者的骨髓液,贴壁培养获取第3代细胞,通过细胞形态特征、细胞表面抗原及诱导分化的方法进行MSCs鉴定;取经过鉴定的第3代MSC(P3-MSC)加入不同浓... 为了观察重组人红细胞生成素(rhEPO)对人骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖活性的影响,抽取健康志愿者的骨髓液,贴壁培养获取第3代细胞,通过细胞形态特征、细胞表面抗原及诱导分化的方法进行MSCs鉴定;取经过鉴定的第3代MSC(P3-MSC)加入不同浓度rhEPO(0.5、1、5、10、50U/ml)后培养,应用细胞计数法及MTT法检测细胞增殖,用流式细胞术(FCM)分析细胞周期。结果发现:骨髓贴壁培养获取的第3代细胞同时表达CD105和CD90,不表达CD34和CD45,并可被诱导分化为脂肪、骨及软骨细胞,被鉴定为MSC。MTT结果显示EPO处理组的光密度值(OD)均高于对照组(p<0.05);50U/ml浓度EPO组作用最显著,细胞计数法获得的结果与其一致。FCM细胞周期分析表明,rhEPO能明显降低G0/G1期细胞比例,并提高S+G2/M期细胞比例,与对照组相比,差异均具有显著统计学意义(p<0.01)。结论:EPO能促进体外培养的人骨髓MSCs增殖,该效应与EPO调节其进入细胞增殖周期有关。 展开更多

关键词 红细胞生成素 间充质干细胞 细胞周期 细胞增殖

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骨髓间充质干细胞成纤维样集落的培养方法及多向分化潜能 被引量：2

8

作者 刘岐焕 程范军 +3 位作者 高清平 陈龙 唐俊明 王家宁 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2006年第13期35-37,i0002,共4页

目的:建立原代小鼠骨髓间充质干细胞成纤维样集落的培养方法,了解间充质干细胞的培养特性及其多向分化潜能。方法:实验于2004-10/2005-10在郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所完成。①间充质干细胞的分离:选取SPF级2月龄昆明种小鼠30... 目的:建立原代小鼠骨髓间充质干细胞成纤维样集落的培养方法,了解间充质干细胞的培养特性及其多向分化潜能。方法:实验于2004-10/2005-10在郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所完成。①间充质干细胞的分离:选取SPF级2月龄昆明种小鼠30只,无菌条件下抽取双侧股骨、胫骨骨髓,制成骨髓单细胞悬液,计数有核细胞的密度。②血清浓度对成纤维样集落的影响:调整有核细胞密度为5×108L-1,分别接种于体积分数为0.02,0.05,0.1,0.15,0.2,0.25的胎牛血清-DMEM培养基中,每种血清浓度各4孔,1mL/孔,24h后换液。随后每72h换液,连续观察2周。③有核细胞密度对成纤维样集落的影响:分别调整有核细胞至106L-1,107L-1,2.5×108L-1,5×108L-1,109L-1,分别接种于12孔板中,每种密度4孔,24h后换液。随后每72h换液,连续观察2周,瑞氏吉姆萨染色后计数成纤维样集落的个数。④成骨与成脂肪诱导:调整有核细胞密度在5×108L-1,接种于预包被鼠尾胶的12孔板中培养。24h换液,去除未贴壁的细胞,以后每48h换液1次,换液后加入成骨诱导液、成脂肪诱导液。观察各血清浓度下细胞生长情况,消化培养板中的成纤维样集落流式细胞仪检测CD34,CD133,CD90,CD105。VonKossa和油红O法染色鉴定间充质干细胞成骨与成脂肪诱导情况。结果:①不同血清浓度对成纤维样集落形成的影响:胎牛血清-DMEM培养液体积分数为0.02,0.05时,细胞可保持成纤维样,但增殖较慢;体积分数为0.15,0.2,0.25时,细胞增殖较快,但细胞易分化;体积分数为0.1时,细胞可基本保持成纤维样,且增殖速度适中。②有核细胞不同接种密度对成纤维样集落形成的影响:有核细胞接种密度为106L-1,107L-1时,每孔成纤维样集落数为0～1个。接种密度高于109L-1时,每孔成纤维样集落之间出现交叉或融合。接种密度分别为2.5×108L-1,5×108L-1,109L-1时,10d左右可见典型的成纤维样集落。成纤维样集落个数与所接种有核细胞密度呈正相关。③成纤维样集落中的间充质干细胞表面标记流式检测结果:成纤维样集落中的间充质干细胞呈CD34-,CD133-,CD90+,CD105+,分别各占2.5%,3.1%,67%和78%。④间充质干细胞成骨与成脂肪诱导情况:成脂肪诱导2周后成纤维样集落中(80±7)%的间充质干细胞出现脂滴,成骨诱导2周后成纤维样集落出现矿物结节。分别以油红O和VonKossa’s矿化结节特异性染色后,成脂肪诱导中成纤维样集落(85±6)%的细胞胞浆呈红色,成骨诱导中大多数的成纤维样集落中心位置出现钙结节。结论:全骨髓接种合适密度的有核细胞可形成典型的成纤维样集落,且成纤维样集落具有成骨、成脂肪等多向分化潜能。 展开更多

关键词 干细胞移植 骨髓细胞 间质细胞 集落形成单位测定 细胞分化

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局限性淋巴结淀粉样变性1例 被引量：1

9

作者 刘岐焕 程范军 +1 位作者 朱正鹏 李守红 《临床血液学杂志》 CAS 2009年第6期625-626,共2页

关键词 淀粉样变 淋巴结 免疫组织化学

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肝细胞生长因子对异基因骨髓移植小鼠血清TNF-α、IFN-γ、IL-4水平的影响 被引量：1

10

作者 夏云金 万楚成 +2 位作者 程范军 高清平 郭仁慈 《郧阳医学院学报》 2005年第1期1-3,共3页

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)后血清TNF-α、IFN-γ、IL-4的影响.方法:BALB/c小鼠接受60钴11Gy全身照射,将昆明小鼠骨髓移植给该BALB/c小鼠.随机将BALB/c小鼠分A、B两组,A组移植后0～7 d皮下注射HGF,B... 目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)后血清TNF-α、IFN-γ、IL-4的影响.方法:BALB/c小鼠接受60钴11Gy全身照射,将昆明小鼠骨髓移植给该BALB/c小鼠.随机将BALB/c小鼠分A、B两组,A组移植后0～7 d皮下注射HGF,B组皮下注射PBS,移植后第8天取血检测TNF-α、IFN-γ和IL-4水平.结果:A组的TNF-α、IFN-γ均低于B组(P<0.01);A组的IL-4高于B组(P<0.05).结论:HGF对小鼠allo-BMT后的细胞因子失衡具有调节作用. 展开更多

关键词 血清TNF-α 异基因骨髓移植 肝细胞生长因子 IFN-γ IL-4 BALB/c小鼠 水平 ALLO-BMT 细胞因子失衡 皮下注射 全身照射 ^60钴 昆明小鼠 调节作用 HGF 移植后 PBS B组 血检测

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乳腺癌误诊为特发性嗜酸性粒细胞增多症1例分析 被引量：1

11

作者 刘岐焕 程范军 《中国误诊学杂志》 CAS 2006年第18期3580-3580,共1页

关键词 乳腺肿瘤/诊断 嗜酸细胞增多综合征/诊断 误诊

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自体造血干细胞移植治疗难治性类风湿关节炎1例 被引量：1

12

作者 刘岐焕 程范军 +3 位作者 鱼强 陈赵玲 郑芳 刘晓虹 《郧阳医学院学报》 2008年第5期457-458,共2页

关键词 关节炎 类风湿 造血干细胞移植

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肢体僵硬、吞咽困难、多浆膜腔积液

13

作者 刘岐焕 刘婧依 +3 位作者 叶林秀 陈赵玲 鱼强 程范军 《疑难病杂志》 CAS 2010年第4期303-304,共2页

患者，男，73岁。因肢体及腰背部僵硬发紧10个月，张口受限、吞咽困难1个月于2009年4月13日入院。10个月前无诱因出现四肢及腰背部肌肉僵硬紧缩感，弯腰、下蹲、双臂上举、后伸困难，1个月前出现张口受限，伸舌、咀嚼、吞咽食物费力，... 患者，男，73岁。因肢体及腰背部僵硬发紧10个月，张口受限、吞咽困难1个月于2009年4月13日入院。10个月前无诱因出现四肢及腰背部肌肉僵硬紧缩感，弯腰、下蹲、双臂上举、后伸困难，1个月前出现张口受限，伸舌、咀嚼、吞咽食物费力，饮水呛咳，声音嘶哑。近日来出现双下肢水肿，行走费力。 展开更多

关键词 POEMS综合征 骨髓瘤 多发性

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肢端麻木及淋巴细胞增多与肾脏占位1例

14

作者 刘岐焕 程范军 《疑难病杂志》 CAS 2008年第6期372-373,共2页

关键词 末梢神经炎 白血病 淋巴细胞性 慢性 RICHTER综合征

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氟达拉宾治疗原发性巨球蛋白血症1例

15

作者 刘岐焕 程范军 《临床血液学杂志》 CAS 2006年第4期245-246,共2页

原发性巨球蛋白血症，又称华氏巨球蛋白血症（WM），系单克隆的B淋巴细胞恶性增殖，血清中出现大量单克隆IgM。本病发病率低，多见于老年人，临床表现非特异，误诊率高，常规化疗效果欠佳。现将我院确诊的原发性巨球蛋白血症1例报告如下。

关键词 血巨球蛋白症 氟达拉宾 治疗

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rhEPO和rhG-CSF对小鼠CD90^+细胞的动员作用

16

作者 郑芳 陈龙 +3 位作者 程范军 刘岐焕 张有顺 邹灿 《郧阳医学院学报》 2009年第1期1-4,共4页

目的:探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)和重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对小鼠外周血CD90+细胞的动员作用。方法:30只雄性昆明小鼠随机分为对照组、rhG-CSF组和rhEPO组。rhG-CSF 40μg.kg-1.d-1、rhEPO 250 IU.kg-1.d-1连续皮下注... 目的:探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)和重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对小鼠外周血CD90+细胞的动员作用。方法:30只雄性昆明小鼠随机分为对照组、rhG-CSF组和rhEPO组。rhG-CSF 40μg.kg-1.d-1、rhEPO 250 IU.kg-1.d-1连续皮下注射5 d;对照组连续皮下注射生理盐水。每组均于最后一次注射后6 h收集外周血,计数有核细胞(ANC)和单个核细胞(MNC),流式细胞仪检测外周血ANC中CD90+、CD34+CD90+和CD90+CD34-细胞的比例。结果:应用rhG-CSF和rhEPO动员后,小鼠外周血中ANC和MNC的数量均较对照组增加(P<0.05),但rhG-CSF和rhEPO两组之间无差异(P>0.05)。流式细胞术检测显示rhEPO组外周血ANC中CD90+细胞比例为(56.49±9.06)%,较rhG-CSF组明显增加(P<0.05);而rhG-CSF组和对照组CD90+细胞占ANC的比例无明显差异(P>0.05)。rhEPO组的CD90+CD34-细胞比例增至(53.5±8.9)%,占CD90+细胞中绝大多数。结论:rhEPO和rhG-CSF均有较强的造血干细胞动员能力,但rhEPO对CD90+细胞的动员作用强于rhG-CSF,提示rhEPO对早期造血干细胞可能具有更强的动员作用。 展开更多

关键词 促红细胞生成素 粒细胞集落刺激因子 动员 外周血 造血干细胞

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重组人粒细胞集落刺激因子促进骨髓间充质干细胞增殖 被引量：11

17

作者 刘岐焕 程范军 +3 位作者 高清平 陈龙 唐俊明 王家宁 《中华器官移植杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期532-534,共3页

目的探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响。方法将昆明小鼠随机分为2组(n=15),G-CSF组采髓前皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)80μg·kg-1·d-1,连用5d,对照组皮下注射等... 目的探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响。方法将昆明小鼠随机分为2组(n=15),G-CSF组采髓前皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)80μg·kg-1·d-1,连用5d,对照组皮下注射等量生理盐水。每组分别于最后一次注射后6h、12h及7d(168h)取小鼠骨髓,分离、培养MSCs,计数成纤维样细胞集落形成单位(CFU-F)的个数;应用流式细胞仪检测单个核细胞(MNCs)细胞周期及CFU-F细胞表面抗原特征。结果应用rhG-CSF后,培养MNCs所获得的CFU-F数目增加(P<0.01),CFU-F数与取材时间(6h、12h、7d)呈负相关(P<0.05),但12h取材者与7d取材者比较,CFU-F数目的差异无统计学意义(P>0.05)。MNCs培养形成的CFU-F,其细胞表面抗原呈CD34-、CD133-、CD90+、CD105+,分别占2.5%、3.1%、67.0%和78.0%。G-CSF组各时间点获得的MNCs,其G0/G1期细胞百分率较对照组低(P<0.05),而S+G2/M期增高(P<0.05),且6h取材者S+G2/M期细胞百分率明显高于12h和7d取材者(P<0.05)。结论rhG-CSF可促进骨髓MNCs进入细胞增殖周期,增殖的高峰在应用G-CSF后6h左右。 展开更多

关键词 粒细胞集落刺激因子 重组 间质干细胞 细胞周期 细胞增殖

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促血小板生成素对小鼠骨髓干细胞增殖的影响 被引量：4

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作者 柴海霞 程范军 +4 位作者 高清平 陈龙 唐俊明 刘岐焕 王家宁 《中华器官移植杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期86-89,共4页

目的探讨促血小板生成素（TPO）对小鼠骨髓有核细胞（BMNc）的细胞周期及骨髓干细胞增殖的影响。方法将昆明小鼠随机分为实验组与对照组，每组15只。实验组腹腔注射TPO 50μg·kg^-1·d^-1，连用5d；对照组腹腔注射生理盐水0．1... 目的探讨促血小板生成素（TPO）对小鼠骨髓有核细胞（BMNc）的细胞周期及骨髓干细胞增殖的影响。方法将昆明小鼠随机分为实验组与对照组，每组15只。实验组腹腔注射TPO 50μg·kg^-1·d^-1，连用5d；对照组腹腔注射生理盐水0．1ml·g^-1·d^-1。每组分别于最后1次注射后6h、12h及168h收集BMNC，检测BMNC的细胞周期及表达CD34’的抗原绝对数；计数BMNC，以1×10^6细胞／cm^2接种培养并计数原代成纤维样细胞集落形成单位（CFU-F）。结果应用TPO后的细胞周期显示，实验组在6h和12h取材BMNC的G0／G1期细胞百分率较对照组低12％～8％（P〈0．05），而S＋Q期增高12％～8％（P〈0．05）；实验组BMNC表达CD34^＋的抗原绝对数较对照组明显增加1～2倍（P〈0．05）；实验组所获得CFU-F集落数比对照组增加3～9倍（P〈0．01）。结论TPO促进CD34^＋细胞增加的同时，还可促进小鼠BMNC进入细胞周期，促进CFU—F集落数增多，即促进骨髓间充质干细胞（MSC）增殖，有利于改善造血干细胞移植（HSCT）的效果。 展开更多

关键词 血小板生成素 间质干细胞 细胞周期 细胞增殖

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粒细胞集落刺激因子促进骨髓源间充质干细胞活性的机制 被引量：3

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作者 陈龙 程范军 +5 位作者 刘岐焕 唐俊明 曾琴兵 孔霞 郭凌郧 王家宁 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期169-174,共6页

本文旨在探讨粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)促进骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)活性的机制。采用经典的全骨髓贴壁法培养MSCs,通过成骨、成脂肪等多向诱导分化以及流式细胞仪分析... 本文旨在探讨粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)促进骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)活性的机制。采用经典的全骨髓贴壁法培养MSCs,通过成骨、成脂肪等多向诱导分化以及流式细胞仪分析其表面标记(CD133、CD34、CD90、CD105)等鉴定MSCs特征;以第三代MSCs为实验材料,采用MTT法分析G-CSF(20μg/mL)对MSCs活性的影响。随后以50nmol/L wortmannin(磷酰肌醇-3激酶阻断剂)、50μmol/LPD98059(细胞外信号调节激酶阻断剂)、30μmol/LSB203580(丝裂原活化蛋白激酶阻断剂)、10μmol/LH89[蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)抑制剂]、20μmol/LY27632(Rho激酶特异抑制剂)、1μmol/Lrapamycin[雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)特异性阻断剂]、10mmol/L straurosporine[蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)阻断剂]、6nmol/LG0697(PKCα抑制剂)、50μmol/L Pseudo Z(PKCζ抑制剂)等分别处理MSCs,观察G-CSF影响MSCs活性的信号机制。结果显示,培养的第三代MSCs呈现出CD90、CD105强阳性,具有成骨、成脂肪等多向分化能力;G-CSF促进MSCs活性,H89、Y27632、PseudoZ不能抑制G-CSF对MSCs的激活作用,wortmannin、rapamycin、PD98059、SB203580、G0697部分抑制G-CSF对MSCs的激活作用,straurosporine可完全抑制G-CSF对MSCs的激活作用。以上结果提示,G-CSF激活MSCs效应与AKT-mTOR-PKC途径密切相关,且PKC处于中心环节。 展开更多

关键词 粒细胞集落刺激因子 间充质干细胞 蛋白激酶C

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重组人促红细胞生成素促进体外培养的人骨髓间充质干细胞增殖 被引量：4

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作者 曾琴兵 程范军 +5 位作者 陈龙 唐俊明 刘歧焕 张卫国 高清平 王家宁 《中华器官移植杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期21-25,共5页

目的观察重组人促红细胞生成素（rhEPO）对人骨髓间充质干细胞（MSCs）增殖的影响，并探讨其可能机制。方法抽取健康志愿者的骨髓液，采用贴壁培养法获取第3代MSCs（P3-MSCs），通过细胞形态特征观察、细胞免疫表型检测以及诱导分化的... 目的观察重组人促红细胞生成素（rhEPO）对人骨髓间充质干细胞（MSCs）增殖的影响，并探讨其可能机制。方法抽取健康志愿者的骨髓液，采用贴壁培养法获取第3代MSCs（P3-MSCs），通过细胞形态特征观察、细胞免疫表型检测以及诱导分化的方法鉴定MSCs。取经过鉴定的P3-MSCs，分别与不同浓度（0．5、1、5、10、50IU／ml）rhEPO共培养，应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖；以过量特异性抗体封闭EPO受体（EPOR），再用MTT法观察P3-MSCs增殖情况；采用免疫荧光细胞化学染色法检测P3-MSCs的EPOR表达，用Western印迹检测增殖信号通路蛋白表达。结果贴壁培养获取的P3-MSCs同时高表达CD105和CD90，低表达CD34和CD45，并可被诱导分化为脂肪、成骨及软骨细胞。MTT结果显示，给予EPO后，MSCs的增殖明显增强，以浓度为10IU／ml者的作用最为显著；同时加入抗EPOR抗体封闭EPOR后，MsCs的增殖率明显降低（P〈0．01）。P3-MSCs的EPOR表达阳性；用10IU／ml EPO刺激4d后，EPOR、磷酸化蛋白酪氨酸激酶2（pJAK2）及磷酸化信号转导和转录因子-5（pSTAT-5）的表达均明显上调。结论EPO能促进体外培养的骨髓MSCs增殖，该效应经EPOR介导，并与JAK2-STAT5信号途径有关。 展开更多

关键词 红细胞生成素 重组 骨髓 间质干细胞 细胞增殖

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