整体护理对根治性膀胱切除术后患者生存质量的影响 被引量：5

1

作者 王小英 桂定文 毛俊彪 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2016年第2期106-108,共3页

膀胧癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,全球发病率居恶性肿瘤第十一位[1].在我国,男性膀胧癌发病率位居全身恶性肿瘤第七位,女性排在第十位以后[2].对早期肌层浸润性和复发性、多发性非肌层浸润性膀胧癌的治疗仍首选膀胧癌根治术,但该... 膀胧癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,全球发病率居恶性肿瘤第十一位[1].在我国,男性膀胧癌发病率位居全身恶性肿瘤第七位,女性排在第十位以后[2].对早期肌层浸润性和复发性、多发性非肌层浸润性膀胧癌的治疗仍首选膀胧癌根治术,但该手术难度高,创伤大,术中需截取一段肠管代替膀胧并行腹壁造口. 展开更多

关键词 根治性膀胱切除 生存质量 术后患者 整体护理 全身恶性肿瘤 非肌层浸润性 癌发病率 泌尿系统

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miR-370-5p对前列腺癌细胞周期及增殖的影响 被引量：2

2

作者 黄耿 姜卫东 +1 位作者 毛青 桂定义 《医学研究杂志》 2017年第8期180-184,共5页

目的研究miR-370-5p导入对前列腺癌细胞株DU-145和LNCaP细胞周期和增殖的影响。方法合成miR-370-5p(实验组)和ds Control(阴性对照组),分别转染至两个细胞株。利用Real-time PCR和Western blot法分别检测细胞转染后p21、CDK4、Cyclin D1... 目的研究miR-370-5p导入对前列腺癌细胞株DU-145和LNCaP细胞周期和增殖的影响。方法合成miR-370-5p(实验组)和ds Control(阴性对照组),分别转染至两个细胞株。利用Real-time PCR和Western blot法分别检测细胞转染后p21、CDK4、Cyclin D1 mRNA和蛋白的表达变化。流式细胞术分析细胞周期变化,利用MTT法和集落形成实验分析细胞活力和增殖能力。结果 Real-time PCR结果提示,转染miR-370-5p后DU-145和LNCa P细胞中p21 mRNA水平分别上调3.43倍(P<0.01)和3.06倍(P<0.01),CDK4 mRNA水平分别下调0.51倍(P<0.01)和0.43倍(P<0.01),Cyclin D1 mRNA水平分别下调0.31倍(P<0.01)和0.35倍(P<0.01)。Western blot法检测结果符合这一趋势。流式细胞术检测结果显示,转染miR-370-5p后,位于S期和G_2/M期的细胞比例下降,位于G_0/G_1期的细胞比例则上升,说明细胞周期被阻滞在G_0/G_1期。MTT分析结果显示,与ds Control组相比,转染mi R-370-5p后,DU-145和LNCaP细胞活力明显降低。集落形成实验显示,miR-370-5p组的集落数数量明显较少,细胞增殖能力降低。结论 mi R-370-5p能显著激活前列腺癌细胞中p21蛋白的表达,抑制前列腺癌细胞周期的进展和增殖。 展开更多

关键词 miR-370-5p P21 细胞周期 增殖 前列腺癌

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肾癌伴肾上腺及睾丸转移1例 被引量：1

3

作者 毛俊彪 张青汉 +1 位作者 陈小刚 袁远 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2017年第6期366-366,368,共2页

肾癌患者初诊时约1/4已经发生转移,其转移脏器发生率依次为肺48.4%、骨23.2%、肝脏12.9%、肾上腺5.2%、皮肤1.9%、脑1.3%、其他部位7.10%,其中11.9%的患者为多脏器转移[1]。但肾癌转移到睾丸国内未见报道。我院于2017年5月收治了1例左... 肾癌患者初诊时约1/4已经发生转移,其转移脏器发生率依次为肺48.4%、骨23.2%、肝脏12.9%、肾上腺5.2%、皮肤1.9%、脑1.3%、其他部位7.10%,其中11.9%的患者为多脏器转移[1]。但肾癌转移到睾丸国内未见报道。我院于2017年5月收治了1例左肾癌伴左侧肾上腺及左侧睾丸转移病例,结合文献复习,报告如下。患者,男,64岁。因＂左侧阴囊肿胀不适3个月＂入院。 展开更多

关键词 睾丸转移 肾上腺 左肾癌 多脏器转移 癌患者 文献复习 阴囊肿胀 发生率

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5例阴茎阴囊皮肤湿疹样癌围手术期护理体会 被引量：1

4

作者 王小英 桂定文 毛俊彪 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2017年第3期183-184,共2页

阴茎阴囊皮肤湿疹样癌又名阴茎阴囊Paget病,是较为罕见的男性外生殖器恶性肿瘤。治疗主要行阴茎阴囊Paget病灶切除术,术中需行腹股沟淋巴结清扫及创面修复,手术创面大,对术后护理要求较高。2014年12月至2016年12月我科共收治阴茎阴囊Pa... 阴茎阴囊皮肤湿疹样癌又名阴茎阴囊Paget病,是较为罕见的男性外生殖器恶性肿瘤。治疗主要行阴茎阴囊Paget病灶切除术,术中需行腹股沟淋巴结清扫及创面修复,手术创面大,对术后护理要求较高。2014年12月至2016年12月我科共收治阴茎阴囊Paget病患者5例,经过精心治疗和护理,患者恢复良好,痊愈出院。现将护理体会报告如下。 展开更多

关键词 皮肤湿疹样癌 阴茎阴囊 PAGET 围手术期护理 护理要求 病灶切除术 男性外生殖器 创面修复 负压引流管 阴茎体

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外源性小分子双链RNA激活肾癌细胞野生型P53蛋白表达作用的研究

5

作者 黄耿 桂定文 +1 位作者 姜卫东 叶志华 《医学研究杂志》 2018年第5期183-187,共5页

目的通过转染外源性低分子双链RNA(dsRNA)ds P53~285至人肾癌细胞系ACHN和786-O,观察其激活肾癌细胞中抑癌蛋白野生型P53的表达作用。方法根据对肾癌细胞的不同处理分为3组,即空白对照(mock)组、阴性对照(转染ds Control)组和实验(ds P5... 目的通过转染外源性低分子双链RNA(dsRNA)ds P53~285至人肾癌细胞系ACHN和786-O,观察其激活肾癌细胞中抑癌蛋白野生型P53的表达作用。方法根据对肾癌细胞的不同处理分为3组,即空白对照(mock)组、阴性对照(转染ds Control)组和实验(ds P53-285)组。荧光实时定量聚合酶链反应(QPCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测P53 mRNA、P21 mRNA和相应蛋白的表达水平。MTT法和集落形成实验检测各组细胞活力及增殖能力。结果 QPCR检测显示ds P53-285能明显促进两种肾癌细胞中P53 mRNA和P21 mRNA水平的升高;与阴性对照组ds Control组相比,ds P53-285分别上调ACHN和786-O细胞中P53 mRNA的表达2.84倍(P<0.01)和3.20倍(P<0.01),ds P53-285分别上调ACHN和786-O细胞中P21mRNA的表达2.33倍(P<0.01)和2.59倍(P<0.01);mock组与ds Control组相比,两种细胞系中P53 mRNA和P21 mRNA的表达差异均没有统计学意义(P>0.05)。Western blot法检测显示在两种细胞系中,P53蛋白、P21蛋白表达水平的上调与相应的P53 mRNA、P21 mRNA水平的上调一致。MTT检测结果显示,与ds Control组相比,转染ds P53-285后,ACHN和786-O细胞活力显著降低(P<0.01),mock组与ds Control组无明显差异(P>0.05)。集落形成实验显示,ds P53-285组的集落数数量显著较少(P<0.05),mock组与ds Control组无明显差异(P>0.05)。结论外源性ds P53-285能显著激活肾癌细胞中P53基因的表达,激活的P53蛋白为野生型而非突变型,并可以显著抑制肾癌细胞的生长。 展开更多

关键词 DSRNA P53 P21 肾癌

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下调长链非编码RNA FGD5-AS1抑制肾癌细胞增殖和侵袭的机制研究 被引量：3

6

作者 叶志华 付金伦 +3 位作者 桂定文 罗帅 王静 王小英 《国际医药卫生导报》 2021年第19期2969-2972,共4页

目的研究lncRNAFGD5-AS1对肾癌细胞增殖、侵袭的影响及分子机制。方法2020年7月至2021年2月,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测FGD5-AS1在肾癌细胞中的表达。以表达最高的肾癌细胞为对象,分别转染小干扰siRNA-FGD5-AS1质粒(... 目的研究lncRNAFGD5-AS1对肾癌细胞增殖、侵袭的影响及分子机制。方法2020年7月至2021年2月,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测FGD5-AS1在肾癌细胞中的表达。以表达最高的肾癌细胞为对象,分别转染小干扰siRNA-FGD5-AS1质粒(实验组)和阴性对照质粒(对照组)。qRT-PCR检测FGD5-AS1和细胞因子信号转导抑制因子6(suppressorof cytokinesignaling 6,SOCS6)mRNA的表达。Westernblotting检测SOCS6和NF-κB信号通路蛋白表达。二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)实验和Transwell侵袭实验检测细胞增殖和侵袭。结果肾癌细胞株中FGD5-AS1表达均高于近端肾小管细胞(P<0.01),FGD5-AS1在ACHN细胞中表达最多(P<0.01)。对照组和实验组FGD5-AS1表达分别为(1.01±0.09)和(0.20±0.03),差异有统计学意义(t=8.46,P<0.01);SOCS6 mRNA的表达分别为(0.33±0.05)和(1.02±0.13),差异有统计学意义(t=5.05,P<0.01)。与对照组相比,实验组SOCS6蛋白表达增加,NF-κB信号通路蛋白表达均明显降低,实验组ACHN细胞增殖能力降低(均P<0.05)。对照组和实验组的侵袭细胞数分别为(80.49±10.50)个和(32.29±8.03)个,差异有统计学意义(t=3.65,P<0.05)。结论FGD5-AS1在肾癌细胞株中表达增加,下调FGD5-AS1表达可通过正向调控SOCS6基因表达抑制肾癌细胞的增殖和侵袭。 展开更多

关键词 肾肿瘤 FGD5-AS1 细胞增殖 细胞侵袭

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抑制高迁移率族蛋白A2对肾癌细胞侵袭转移能力的影响 被引量：1

7

作者 叶志华 黄耿 桂定文 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2018年第1期39-42,47,共5页

目的观察小干扰RNA(siRNA)抑制高迁移率族蛋白A2(HMGA2)基因表达对人肾癌细胞系786-O迁移、侵袭能力的影响。方法人肾癌细胞系786-O扩大培养后分为3组:空白对照组(Ctrl组)、阴性对照组(NC组)和siHMGA2组。NC组、siHMGA2组分别转染阴性对... 目的观察小干扰RNA(siRNA)抑制高迁移率族蛋白A2(HMGA2)基因表达对人肾癌细胞系786-O迁移、侵袭能力的影响。方法人肾癌细胞系786-O扩大培养后分为3组:空白对照组(Ctrl组)、阴性对照组(NC组)和siHMGA2组。NC组、siHMGA2组分别转染阴性对照siRNA和HMGA2siRNA,Ctrl组常规培养。采用反转录聚合酶链反应和Western免疫印迹法检测转染后HMGA2mRNA和蛋白的表达;Western免疫印迹法检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白钙粘蛋白E和波形蛋白的表达;划痕实验检测细胞迁移能力的变化;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果 siHMGA2组HMGA2mRNA和蛋白表达水平较Ctrl组和NC组显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);siHMGA2组钙粘蛋白E表达水平较Ctrl组、NC组明显升高,波形蛋白表达水平较后两组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);siHMGA2组细胞迁移能力较Ctrl组显著降低,siHMGA2组细胞侵袭能力较Ctrl组及NC组显著降低。结论抑制HMGA2的表达可抑制肾癌细胞系786-O细胞的迁移和侵袭能力,其作用可能是通过抑制EMT实现的。 展开更多

关键词 高迁移率族蛋白A2 肾癌 迁移 侵袭

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微小RNA-206通过干扰CDK4和GAK的表达对前列腺癌细胞生长的影响 被引量：3

8

作者 黄耿 姜卫东 +1 位作者 毛青 桂定文 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2017年第7期485-489,共5页

目的 探讨微小RNA-206（miR-206）对前列腺癌细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）和细胞周期素G相关蛋白激酶（GAK）表达的干扰作用及对前列腺癌细胞生长的影响.方法前列腺癌细胞株DU-145和PC-3为转染对象,转染miR-NC为对照组,转染mi... 目的 探讨微小RNA-206（miR-206）对前列腺癌细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）和细胞周期素G相关蛋白激酶（GAK）表达的干扰作用及对前列腺癌细胞生长的影响.方法前列腺癌细胞株DU-145和PC-3为转染对象,转染miR-NC为对照组,转染miR-206为实验组.荧光实时定量PCR（qRT-PCR）检测CDK4和GAK mRNA的表达水平.Western blotting检测CDK4和GAK蛋白的表达水平.流式细胞术检测细胞周期分布.EdU增殖实验和集落形成实验检测细胞增殖能力.结果在DU-145和PC-3细胞株中,miR-NC组CDK4 mRNA表达量分别为1.00±0.09、1.00±0.10,GAK mRNA表达量为1.00±0.05、1.00±0.06;与之相比,两细胞株miR-206组中CDK4 mRNA表达明显下降,分别为0.36±0.18（t=6.572,P=0.001）、0.43±0.17（t=5.794,P=0.001）,GAK mRNA表达量亦明显下降,分别为0.23±0.04（t=22.420,P〈0.001）、0.32±0.08（t=14.500,P〈0.001）.Western blotting实验结果与qRT-PCR结果一致.流式细胞术检测结果显示,分别与两细胞株miR-NC组比较,转染miR-206后前列腺癌细胞在S期（23.60%±5.68%∶32.53%±4.52%,t=2.462,P=0.049;22.09%±4.35%∶30.96%±4.86%,t=2.720,P=0.035）和G2-M期（16.28%±7.12%∶26.63%±4.33%,t=2.484,P=0.048;14.60%±1.62%∶24.68%±7.13%,t=2.758,P=0.033）的细胞比例下降,在G0-G1期（60.13%±5.82%∶40.84%±5.37%,t=4.872,P=0.003;63.31%±3.27%∶44.36%±3.82%,t=7.533,P〈0.001）的细胞比例升高.EdU增殖实验结果显示,转染miR-206的细胞增殖能力明显减弱（22.56±3.81∶38.90±8.51,t=3.503,P=0.013;25.12±6.42∶48.45±8.92,t=4.244,P=0.005）.集落形成实验结果显示,两细胞株miR-NC组形成的集落数分别为218.66±44.59、177.35±24.49,miR-206组形成的集落数分别为125.38±32.80（t=3.370,P=0.015）、82.65±14.05（t=6.708,P=0.001）,提示miR-206组细胞增殖能力降低.结论 miR-206可通过干扰CDK4和GAK的表达显著抑制前列腺癌细胞的生长,提示miR-206可能成为前列腺癌的分子靶向治疗工具. 展开更多

关键词 微RNAS 前列腺肿瘤 细胞增殖 细胞周期蛋白依赖性激酶4 细胞周期素G相关蛋 白激酶

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40岁以上男性精子DNA损伤与其精液常规参数的关系分析 被引量：5

9

作者 伍文兵 李文威 《中国男科学杂志》 CAS CSCD 2018年第3期47-51,共5页

目的分析40岁以上男性精子DNA损伤与其精液常规参数的关系。方法收集本院148例>40岁不育男性患者精液以及120例>40岁已生育体检男性精液,采用计算机辅助精液分析系统和双尾彗星实验检测常规精液参数及精子DNA损伤情况,分析>40... 目的分析40岁以上男性精子DNA损伤与其精液常规参数的关系。方法收集本院148例>40岁不育男性患者精液以及120例>40岁已生育体检男性精液,采用计算机辅助精液分析系统和双尾彗星实验检测常规精液参数及精子DNA损伤情况,分析>40岁男性精子DNA损伤与其精液常规参数的关系。结果 >40岁组不育男性精液的总活力、前向运动率和顶体反应率显著低于>40岁正常组,DNA碎片化指数(DFI)值显著高于>40岁正常组,差异具有统计学意义(P<0.05);>40岁不育男性中,DFI值≤30%组(112例)精子浓度、总活力、正常形态率、前向运动率和顶体反应率均显著高于DFI>30%组(36例)(P<0.05),其DFI值与精子浓度、总活力、正常形态率、前向运动率和顶体反应率呈显著负相关;>40岁不育男性中,精子单链损伤比例高组(108例)精子浓度、总活力、正常形态率、前向运动率和顶体反应率均显著高于双链损伤比例高组(40例)(P<0.05),其双链损伤指数/DFI(DSB-DFI/DFI)值与精子浓度、总活力、正常形态率、前向运动率和顶体反应率呈显著负相关,而单链损伤指数/DFI(SSB-DFI/DFI)值与精液各参数无显著相关性。结论 >40岁不育男性精液参数异常和DNA损伤情况较同龄已育男性严重,精液DNA碎片化指数和双链损伤类型对40岁以上不育男性生殖情况具有一定评估价值。 展开更多

关键词 不育 男性 年龄因素 精子 DNA损伤

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miR-1236模拟物转染对前列腺癌细胞生长影响 被引量：1

10

作者 黄耿 毛青 +1 位作者 桂定文 姜卫东 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2017年第14期966-970,共5页

目的 miR-1236为新发现的具有肿瘤抑制作用的RNA。本研究旨在探讨外源性miR-1236转染对前列腺癌细胞p21基因的激活作用及对其生长的影响。方法根据对前列腺癌细胞的不同处理分为阴性对照组(转染dsControl)和实验组(转染miR-1236)2组。qR... 目的 miR-1236为新发现的具有肿瘤抑制作用的RNA。本研究旨在探讨外源性miR-1236转染对前列腺癌细胞p21基因的激活作用及对其生长的影响。方法根据对前列腺癌细胞的不同处理分为阴性对照组(转染dsControl)和实验组(转染miR-1236)2组。qRT-PCR检测p21、细胞周期依赖性激酶CDK4和CDK6mRNA的表达变化。蛋白质印迹检测p21、CDK4和CDK6蛋白的表达变化。流式细胞术检测细胞周期分布。MTS法检测细胞活力,集落形成实验检测细胞增殖能力。结果与dsControl组相比,转染miR-1236后2种细胞中p21mRNA表达分别上调2.16(t=12.67,P<0.01)和2.26倍(t=10.93,P<0.01);CDK4mRNA的表达分别下调0.56(t=6.617,P<0.01)和0.43倍(t=5.698,P<0.01);CDK6mRNA的表达分别下调0.78(t=3.101,P<0.05)和0.71倍(t=3.841,P<0.01)。蛋白质印迹检测结果与qRT-PCR结果相符。流式细胞术结果显示,转染miR-1236后,位于S期和G2/M期的细胞比例明显下降,位于G0/G1期的细胞比例明显增大。MTS法显示,与dsControl组相比,转染miR-1236 2种细胞活力明显下降。dsControl组DU145和PC-3细胞形成的集落数分别为241±37.64和254.33±38.18;miR-1236组DU145和PC-3细胞形成的集落数明显减少,分别为99.67±34.2(t=3.939,P<0.05)和81±35.55(t=4.354,P<0.05),提示细胞增殖能力降低。结论外源性miR-1236能通过激活前列腺癌细胞中p21蛋白的表达并显著抑制其生长,可能成为前列腺癌基因靶向治疗的新靶点。 展开更多

关键词 miR-1236 前列腺癌 P21 增殖

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外源性dsRNA对肾透明细胞癌细胞中p21表达的影响

11

作者 黄耿 姜卫东 +1 位作者 毛青 桂定文 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2017年第7期481-484,共4页

目的 探讨dsP21-555转染对肾透明细胞癌细胞株ACHN和786-O中抑癌基因p21表达的影响.方法 肾透明细胞癌细胞分别使用脂质体Lipofectamine 3000转染dsControl和dsP21-555.荧光实时定量PCR（RT-qPCR）及Western blotting分别检测分析p21 m... 目的 探讨dsP21-555转染对肾透明细胞癌细胞株ACHN和786-O中抑癌基因p21表达的影响.方法 肾透明细胞癌细胞分别使用脂质体Lipofectamine 3000转染dsControl和dsP21-555.荧光实时定量PCR（RT-qPCR）及Western blotting分别检测分析p21 mRNA及蛋白的表达情况.流式细胞术（FCM）检测细胞周期分布,使用细胞活力实验（MTS法）和集落培养实验分析细胞活力和增殖能力.结果 在ACHN和786-O细胞株中,dsP21-555组p21 mRNA的表达（2.86±0.33、1.96±0.35）相比dsControl组（1.05±0.34、1.01±0.14）,分别升高至2.72倍（t=7.640,P〈0.001）和1.95倍（t=5.058,P=0.002）.Western blotting实验证明两种细胞株中P21蛋白表达水平的上升与p21 mRNA上调相一致.FCM结果显示,转染dsP21-555后,细胞周期被阻滞在G0-G1期（57.08%±5.66%∶46.06%±4.60%,t=3.023,P=0.023;61.58%±6.23%∶42.25±6.08%,t=4.444,P=0.004）.MTS结果显示,转染dsP21-555后两种细胞的活力较dsControl组明显下降,其吸光度分别为0.85±0.20∶1.27±0.13,t=3.410,P=0.014;1.04±0.25∶1.55±0.10,t=3.758,P=0.009.集落培养实验显示,两细胞株dsControl组形成的集落数分别为110.91±26.21、129.89±22.87,dsP21-555组形成的集落数分别为59.37±14.23（t=3.456,P=0.014）、71.26±21.38（t=3.745,P=0.010）,表明dsP21-555组细胞增殖能力明显降低.结论 dsP21-555可明显上调肾透明细胞癌细胞中p21基因的表达,并显著抑制癌细胞的生长,提示dsP21-555可能成为一种新型的基因治疗工具. 展开更多

关键词 肾肿瘤 癌基因蛋白质p21(ras) 细胞增殖 dsP21-555

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人工合成小分子RNA对前列腺癌细胞周期及增殖的影响

12

作者 黄耿 姜卫东 +1 位作者 毛青 桂定文 《国际泌尿系统杂志》 2017年第5期649-652,共4页

目的 研究人工合成的dsP21-555对前列腺癌细胞株PC-3和LNCaP细胞周期和增殖的影响.方法 合成dsP21-555（实验组）和dsControl（阴性对照组）,分别转染至PC-3和LNCaP.使用Real-time PCR及Western blotting分别检测分析前列腺癌细胞转染后... 目的 研究人工合成的dsP21-555对前列腺癌细胞株PC-3和LNCaP细胞周期和增殖的影响.方法 合成dsP21-555（实验组）和dsControl（阴性对照组）,分别转染至PC-3和LNCaP.使用Real-time PCR及Western blotting分别检测分析前列腺癌细胞转染后的p21 mRNA及p21蛋白的表达情况.流式细胞术检测细胞周期分布,使用MTF实验及集落形成实验检测细胞的活力及增殖能力.结果 转染dsP21-555后PC-3和LNCaP细胞中的p21mRNA水平分别上调至2.90倍（P＜0.01）和2.05倍（P＜0.01）.Western blotting实验结果符合这一趋势.流式细胞术检测显示,转染dsP21-555后,在S期和G2/M期的细胞比例下降,在G0/G1期的细胞比例则增加.MTT实验显示,与dsControl组相比,转染dsP21-555后,PC-3和LNCaP细胞的活力明显降低.集落形成实验显示,dsP21-555组的集落的数量较少,细胞增殖能力降低.结论 人工合成的dsP21-555能明显激活前列腺癌细胞中p21基因的表达,并显著抑制前列腺癌细胞周期的进展和增殖. 展开更多

关键词 前列腺肿瘤 RNA 细胞周期 细胞增殖

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miR-206对膀胱癌细胞生长的影响及分子作用机制研究

13

作者 黄耿 姜卫东 +1 位作者 毛青 桂定文 《国际泌尿系统杂志》 2018年第1期55-58,共4页

目的 探讨miR-206对膀胱癌细胞T24和5637生长的影响及分子作用机制.方法 根据对膀胱癌细胞的不同处理,分为对照组（转染miR-NC）和实验组（转染miR-206）.EdU增殖实验和集落形成实验检测转染后膀胱癌细胞的增殖能力.流式细胞术检测膀胱... 目的 探讨miR-206对膀胱癌细胞T24和5637生长的影响及分子作用机制.方法 根据对膀胱癌细胞的不同处理,分为对照组（转染miR-NC）和实验组（转染miR-206）.EdU增殖实验和集落形成实验检测转染后膀胱癌细胞的增殖能力.流式细胞术检测膀胱癌细胞转染后的细胞周期分布.荧光实时定量PCR（qRT-PCR）和Western Blot检测CDK4和GAK表达水平的变化.结果 EdU增殖实验显示转染miR-206的膀胱癌细胞的增殖能力明显下降.集落形成实验显示,相比转染miR-NC组,miR-206组膀胱癌细胞形成的集落数数量更少.流式细胞术结果显示,转染miR-206后膀胱癌细胞在S期和G2/M期的细胞比例明显下降,而在G0/G1期的细胞比例明显升高.qRT-PCR和Western Blot结果显示,相比miR-NC,转染miR-206后T24和5637中CDK4和GAK表达水平均明显下降（P＜0.01）.结论 miR-206可显著抑制膀胱癌细胞的生长,其机制为miR-206干扰CDK4和GAK的表达,抑制膀胱癌细胞的细胞周期进展. 展开更多

关键词 膀胱肿瘤 细胞增殖 细胞周期

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miR-1291通过调控锌指蛋白8基因的表达对肾癌细胞周期及增殖的影响 被引量：6

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作者 叶志华 黄耿 +1 位作者 付金伦 桂定文 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2018年第3期129-133,共5页

目的 探讨微小RNA-1291（miR-1291）对肾癌细胞中锌指蛋白8（PHF8）基因表达的调控作用和对肾癌细胞周期及增殖的影响。方法 实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测肾癌细胞株OSRC-2、ACHN、A498、786-O和人类近端肾小管上皮细胞H... 目的 探讨微小RNA-1291（miR-1291）对肾癌细胞中锌指蛋白8（PHF8）基因表达的调控作用和对肾癌细胞周期及增殖的影响。方法 实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测肾癌细胞株OSRC-2、ACHN、A498、786-O和人类近端肾小管上皮细胞HK-2中miR-1291表达水平，以表达量最低的肾癌细胞株为实验对象分别转染miR-1291（miR-1291组）和miR-NC（miR-NC组）。qRT-PCR检测转染后细胞中miR-1291和PHF8 mRNA的表达水平。Western blotting检测PHF8、细胞周期蛋白依赖性激酶6（CDK6）和Cyclin D1蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因系统检测miR-1291对PHF8转录活性的影响。流式细胞术检测细胞周期分布。四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验和集落形成实验分别检测细胞活力和增殖能力。结果肾癌细胞株OS-RC-2、ACHN、A498、786-O和人类近端肾小管上皮细胞HK-2中miR-1291的表达量分别为0.64±0.17、0.60±0.15、0.29±0.08、0.63±0.08、1.01±0.17，差异有统计学意义（F=13.790，P〈0.001）。与肾癌细胞株OS-RC2、ACHN、786-O相比，A498细胞株中的miR-1291表达量最低（P=0.002，P=0.006，P=0.003）。转染后的miR-NC组和miR1291组A498细胞中miR-1291表达量分别为1.00±0.03和775.25±329.91，差异有统计学意义（t=4.694，P=0.003）；PHF8 mRNA表达量分别为1.00±0.11和0.57±0.18，差异有统计学意义（t=4.122，P=0.006）。Western blotting实验结果与qRT-PCR结果一致，且CDK6和Cyclin D1蛋白表达明显降低。双荧光素酶报告基因显示miR-1291可以直接作用于靶基因PHF8的3′-非翻译区,抑制荧光素酶活性。与miR-NC组比较，转染miR-1291后肾癌细胞在S期（23.40±4.29∶32.19±2.64，t=3.491，P=0.013）和G2M期（14.38±4.05∶25.59±6.01，t=3.095，P=0.021）的细胞比例下降，在G0-G1期的细胞比例升高（62.22±7.56∶42.22±5.23，t=4.351，P=0.005）。MTT实验显示，转染miR-1291的细胞活力明显下降。集落形成实验显示，A498细胞在miR-NC组和miR-1291组形成的集落数分别为246.64±39.94和87.34±21.93，差异有统计学意义（t=6.993，P〈0.001）。结论miR-1291在肾癌细胞株中表达显著下降，miR-1291可通过靶向干扰PHF8基因的表达显著抑制肾癌细胞的增殖，可能有助于开发新的肾癌治疗靶点。 展开更多

关键词 肾肿瘤 微RNAS 细胞周期 细胞增殖 锌指蛋白8

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miR-1280通过激活p21基因的表达对膀胱癌细胞周期及增殖的影响 被引量：5

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作者 叶志华 黄耿 +1 位作者 付金伦 桂定文 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2018年第3期134-138,共5页

目的探讨微小RNA-1280（miR-1280）对膀胱癌细胞株BIU-87细胞p21基因表达的激活作用及对膀胱癌细胞周期及增殖的影响。方法实时定量荧光聚合酶链反应（qRT-PCR）检测膀胱癌细胞株T24、5637、J82、BIU-87和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中miR... 目的探讨微小RNA-1280（miR-1280）对膀胱癌细胞株BIU-87细胞p21基因表达的激活作用及对膀胱癌细胞周期及增殖的影响。方法实时定量荧光聚合酶链反应（qRT-PCR）检测膀胱癌细胞株T24、5637、J82、BIU-87和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中miR-1280表达水平。选取表达量最低的膀胱癌细胞，分别转染miR-1280模拟物（实验组）和miR-NC（对照组），qRT-PCR检测两组细胞中miR-1280和p21 mRNA表达水平。染色质免疫共沉淀（ChIP）实验验证miR-1280与p21基因启动子的靶向作用。Western blotting分别检测两组细胞中p21、细胞周期依赖性激酶1（CDK1）、细胞周期蛋白A2（Cyclin A2）mRNA和蛋白的表达。流式细胞术检测细胞周期。四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖能力。结果qRTPCR结果提示，膀胱癌细胞株T24、5637、J82、BIU-87和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中miR-1280表达分别为0.503±0.094、0.611±0.054、0.567±0.077、0.257±0.032和1.014±0.090，差异有统计学意义（F=1.880，P〈0.001）。与膀胱癌细胞株T24、5637、J82相比，BIU-87细胞株中的miR-1280表达量最低（P=0.026，P=0.003，P=0.008）。与对照组相比，实验组BIU-87细胞中miR-1280表达显著升高（1041.000±157.500∶1.023±0.118，t=6.606，P〈0.001），p21 mRNA表达亦显著升高（5.280±0.660∶1.007±0.070，t=6.440，P〈0.001）。Western blotting结果显示P21蛋白表达上调，CDK1和Cyclin A2蛋白表达下调。ChIP实验结果显示，相比miR-NC转染组，生物素修饰的miR-1280在p21基因启动子区域的富集倍数显著增加（1.246±0.171∶0.519±0.087，t=3.787，P=0.009）。实验组BIU-87细胞G0-G1期细胞比例较对照组明显升高（68.360%±3.064%∶46.970%±3.971%，t=4.263，P=0.005）。MTT结果显示，与对照组相比，转染miR1280后的BIU-87细胞从第3天（0.826±0.099∶1.224±0.057，t=3.505，P=0.013）开始增殖能力明显降低。结论miR-1280可通过结合p21基因启动子区域，激活膀胱癌细胞BIU-87中p21基因的表达，从而阻滞细胞周期的进展，抑制细胞的增殖，为膀胱癌的靶向治疗提供了一个新靶点。 展开更多

关键词 微RNAS 膀胱肿瘤 原癌基因蛋白质p21(ras)RNA激活

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lncRNA PEBP1P2通过CARD10基因调控NF-κB信号通路对肾细胞癌细胞增殖和迁移的影响 被引量：2

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作者 叶志华 付金伦 +3 位作者 桂定文 罗帅 王静 王小英 《国际外科学杂志》 2021年第9期595-599,I0004,共6页

目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)PEBP1P2在肾细胞癌组织中的表达及对肾细胞癌细胞增殖和迁移的影响。方法:采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测51例肾细胞癌组织及肾细胞癌细胞株中PEBP1P2的表达。以PEBP1P2表达最低的A498细胞为转染对... 目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)PEBP1P2在肾细胞癌组织中的表达及对肾细胞癌细胞增殖和迁移的影响。方法:采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测51例肾细胞癌组织及肾细胞癌细胞株中PEBP1P2的表达。以PEBP1P2表达最低的A498细胞为转染对象,设转染PEBP1P2质粒的细胞为PEBP1P2组,转染阴性对照质粒的细胞为NC组。qPCR检测两组细胞PEBP1P2的表达。MTT法和Transwell迁移实验检测肾细胞癌细胞的增殖能力和迁移能力。qPCR和Western blotting法分别检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶招募域家族分子10( CARD10)基因及NF-κB通路蛋白的表达。计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用 LSD- t检验。 结果:肾细胞癌组织中PEBP1P2的表达低于癌旁组织(t=4.89, P<0.01)。肾细胞癌细胞中PEBP1P2的表达低于正常肾小管上皮细胞(P<0.01)。PEBP1P2组和NC组A498细胞中PEBP1P2表达分别为(11.01±1.26)和(1.06±0.19),PEBP1P2组明显高于NC组(t=7.81, P<0.01)。过表达PEBP1P2可显著抑制肾细胞癌细胞的增殖能力(P<0.05)和迁移能力(t=3.65, P<0.05)。过表达PEBP1P2可显著抑制肾细胞癌A498细胞中 CARD10基因的表达(t=6.83, P<0.01),抑制NF-κB信号通路蛋白的转导。 结论:PEBP1P2在肾细胞癌组织表达明显降低,过表达PEBP1P2可显著抑制肾细胞癌A498细胞的增殖和迁移能力,其分子机制可能是PEBP1P2通过下调 CARD10基因表达抑制NF-κB信号通路转导。 展开更多

关键词 长链非编码RNA 肾细胞癌 细胞增殖 细胞迁移

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lncRNA ZFPM2-AS1在膀胱癌中的表达及对细胞迁移和增殖的影响 被引量：1

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作者 叶志华 彭伟 +1 位作者 桂定文 王小英 《中国医师杂志》 CAS 2021年第3期354-358,共5页

目的分析长链非编码RNA(lncRNA)ZFPM2-AS1在膀胱癌组织和细胞株中的表达,观察下调ZFPM2-AS1对膀胱癌细胞迁移和增殖的影响并探讨其分子机制。方法实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测51对膀胱癌组织及癌旁组织、膀胱癌细胞株(j82、5... 目的分析长链非编码RNA(lncRNA)ZFPM2-AS1在膀胱癌组织和细胞株中的表达,观察下调ZFPM2-AS1对膀胱癌细胞迁移和增殖的影响并探讨其分子机制。方法实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测51对膀胱癌组织及癌旁组织、膀胱癌细胞株(j82、5637、biu-87、T24)及人正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中ZFPM2-AS1的表达。选取表达最高的膀胱癌细胞,分别转染小干扰siRNA-ZFPM2-AS1质粒和阴性对照质粒,定义为实验组和对照组,qRT-PCR检测两组细胞ZFPM2-AS1的表达。Transwell迁移实验和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分别检测两组细胞迁移能力和增殖能力。qRT-PCR检测两组细胞中上游移码突变体1(UPFI)mRNA的表达。Western blot检测两组细胞中UPF1和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路蛋白的表达。结果膀胱癌组织中ZFPM2-AS1的表达量明显高于癌旁组织(P<0.01),膀胱癌细胞株中ZFPM2-AS1的表达量明显高于人正常膀胱上皮细胞(P<0.01),BIU-87细胞中ZFPM2-AS1的表达量最高(P<0.01)。与对照组相比,实验组BIU-87细胞中ZFPM2-AS1表达量明显降低[(1.01±0.06)vs(0.16±0.04),t=12.28,P<0.01]。与对照组相比,实验组BIU-87细胞迁移能力降低(P<0.05),从第2天开始BIU-87细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。与对照组相比,实验组BIU-87细胞中UPFI mRNA表达量明显降低[(1.00±0.02)vs(0.28±0.04),t=15.49,P<0.01]。Western Wot结果提示,实验组BIU-87细胞中UPF1蛋白表达量降低(P<0.05),mT0R、GRB2、IRS1和p-PI3K等tnTOR信号通路蛋白表达量降低(P<0.05).结论ZFPM2-AS1在膀胱癌组织和细胞株中高表达,下调ZFPM2-AS1可抑制BIU-87细胞的迁移能力和增殖能力,其分子机制可能与抑制UPF1基因表达有关. 展开更多

关键词 RNA 长链非编码 膀胱肿瘤 细胞迁移 细胞增殖 上游移码突变体1

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长链非编码RNA AL117378.1对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响 被引量：2

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作者 叶志华 付金伦 +1 位作者 王小英 姜卫东 《国际外科学杂志》 2020年第1期13-17,F0003,共6页

目的探讨长链非编码RNA AL117378.1对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响。方法选取2016年8月—2017年12月鄂东医疗集团黄石市中心医院收治的14例膀胱癌患者的肿瘤组织及癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测14例膀胱癌组织及... 目的探讨长链非编码RNA AL117378.1对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响。方法选取2016年8月—2017年12月鄂东医疗集团黄石市中心医院收治的14例膀胱癌患者的肿瘤组织及癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测14例膀胱癌组织及对应的癌旁组织、膀胱癌细胞株(5637、J82、T24、BIU-87)及对应的人膀胱正常上皮细胞(SV-HUC-1)中AL117378.1的表达水平。以表达水平最低的膀胱癌细胞株为对象分别转染阴性对照质粒(对照组)和载有AL117378.1的质粒(实验组)。qRT-PCR检测转染后细胞中AL117378.1和非受体型蛋白质酪氨酸磷酸酶9(PTPN9)mRNA的表达水平。Western blotting检测PTPN9、上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、细胞周期蛋白依懒性激酶4(CDK4)和细胞周期蛋白A2(Cyclin A2)蛋白的表达水平。四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验和Transwell侵袭实验分别检测两组细胞的增殖能力和侵袭能力。计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用两独立样本t检验。结果膀胱癌组织中AL117378.1的表达低于癌旁组织(P<0.01)。膀胱癌细胞株中AL117378.1的表达均低于人膀胱正常上皮细胞(P<0.01),其中AL117378.1在J82细胞中的表达水平最低(P<0.01)。对照组和实验组J82细胞中AL117378.1的相对表达量分别为1.02±0.11和7.96±1.06,差异具有统计学意义(t=6.51,P<0.01);PTPN9 mRNA的相对表达量分别为1.01±0.08和4.99±0.50,差异具有统计学意义(t=7.84,P<0.01)。Western blotting实验结果显示,PTPN9和E-cadherin蛋白表达升高,α-SMA、CDK4和Cyclin A2蛋白表达降低。MTT实验结果显示,转染AL117378.1的细胞增殖能力明显下降(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,对照组和实验组的侵袭细胞数分别为(97.96±13.71)个和(38.02±7.51)个,差异具有统计学意义(t=3.84,P<0.01)。结论AL117378.1在膀胱癌组织和细胞株(5637、J82、T24、BIU-87)中表达均明显减少,AL117378.1可通过正向调控PTPN9基因的表达明显抑制膀胱癌细胞的增殖和侵袭。 展开更多

关键词 膀胱肿瘤 细胞增殖 细胞侵袭 长链非编码RNA

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长链非编码RNA RP11-363G15.2通过抑制锌指蛋白8基因的表达对肾癌细胞迁移和增殖的影响 被引量：1

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作者 雷晓琴 叶志华 +1 位作者 王小英 谢芳 《国际泌尿系统杂志》 2020年第3期473-477,共5页

目的探讨长链非编码RNA-RP11-363G15.2在肾癌中的表达及对肾癌细胞PHF8基因表达的抑制作用。方法实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测12对肾癌组织及癌旁组织、肾癌细胞株(ACHN、OS-RC-2、786-O、A498)及人近端肾小管细胞HK-2中RP11-... 目的探讨长链非编码RNA-RP11-363G15.2在肾癌中的表达及对肾癌细胞PHF8基因表达的抑制作用。方法实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测12对肾癌组织及癌旁组织、肾癌细胞株(ACHN、OS-RC-2、786-O、A498)及人近端肾小管细胞HK-2中RP11-363G15.2的表达。选取表达水平最低的肾癌细胞,分别转染RP11-363G15.2质粒(实验组)和阴性对照质粒(对照组)。qRT-PCR检测两组细胞中RP11-363G15.2和锌指蛋白8(PHF8)mRNA的表达。Western blot检测两组细胞中PHF8、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期依赖性激酶6(CDK6)、波形蛋白(Vimentin)和神经-钙粘素(N-cadherin)蛋白的表达。Transwell迁移实验和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分别检测两组细胞的迁移能力和增殖能力。结果qRT-PCR结果提示,肾癌组织中RP11-363G15.2的表达明显低于癌旁组织(P<0.01),肾癌细胞株中RP11-363G15.2的表达均明显低于人近端肾小管细胞(P<0.01),OS-RC-2细胞中RP11-363G15.2的表达最低(P<0.01)。与对照组相比,实验组OS-RC-2细胞中RP11-363G15.2表达明显增加[(1.06±0.19)vs.(11.09±1.48),t=6.75,P<0.01],PHF8 mRNA表达明显降低[(1.01±0.09)vs.(0.31±0.05),t=6.66,P<0.01]。Western blot结果提示PHF8蛋白表达减少,CDK6、Cyclin D1、Vimentin和N-cadherin蛋白表达减少。与对照组相比,转染RP11-363G15.2后的OS-RC-2细胞迁移能力降低(P<0.01),从第3天开始细胞增殖能力明显降低(P<0.01)。结论RP11-363G15.2在肾癌中低表达,RP11-363G15.2可通过下调肾癌细胞OS-RC-2中PHF8基因的表达,抑制细胞的迁移能力和增殖能力,可能为肾癌的治疗提供了一个新的分子靶点。 展开更多

关键词 肾肿瘤 RNA 信使 锌指蛋白8 细胞运动 细胞增殖

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