目的探讨hsa-miR-200a对人子宫内膜腺癌HEC-1B细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法应用荧光实时定量PCR(FQ-PCR)法检测hsa-miR-200a在人子宫内膜腺癌细胞HEC-1B中的表达水平;人工合成hsa-miR-200a模拟物、抑制剂,分别转染HEC-1B细胞...目的探讨hsa-miR-200a对人子宫内膜腺癌HEC-1B细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法应用荧光实时定量PCR(FQ-PCR)法检测hsa-miR-200a在人子宫内膜腺癌细胞HEC-1B中的表达水平;人工合成hsa-miR-200a模拟物、抑制剂,分别转染HEC-1B细胞;采用MTT法、流式细胞仪检测上调及抑制hsa-miR-200a的表达对HEC-1B细胞增殖活性与凋亡的影响;运用生物信息学分析hsa-miR-200a指向的与增殖和凋亡相关的靶基因;Western blot、FQ-PCR检测转染前后靶蛋白及其mRNA的表达水平。结果子宫内膜腺癌细胞HEC-1B表达hsa-miR-200a;FQ-PCR检测hsa-miR-200a模拟物、抑制剂转染HEC-1B细胞成功;MTT法检测结果表明hsa-miR-200a抑制剂转染组中细胞增殖抑制明显;流式细胞仪检测结果表明hsa-miR-200a抑制剂转染组中细胞凋亡增加;生物信息学分析结果表明hsa-miR-200a调控的靶基因是SON、Pdcd4、磷酸酶-张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN);靶蛋白PTEN在转染模拟物组表达下调,抑制剂组中表达上调,且转染前后靶基因mRNA水平无显著变化,而蛋白SON、Pdcd4的表达量没有显著变化。结论 HEC-1B细胞中hsa-miR-200a表达与PTEN蛋白表达呈负相关,表明hsa-miR-200a可能通过调节PTEN蛋白表达水平从而影响HEC-1B细胞的增殖与凋亡。展开更多
采用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)分析妊娠早期胚胎绒毛和子宫蜕膜组织细胞的蛋白质组。结果发现一个等电点约6.6、分子量约38kDa的蛋白质点在蜕膜组织中表达明显下调,经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定其胶内...采用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)分析妊娠早期胚胎绒毛和子宫蜕膜组织细胞的蛋白质组。结果发现一个等电点约6.6、分子量约38kDa的蛋白质点在蜕膜组织中表达明显下调,经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质量指纹谱(peptide mass fingerprint,PMF)和数据库搜索鉴定此蛋白质点为膜联蛋白-A1(ANXA1)。进一步采用RT-PCR、Western印迹和免疫组织化学技术分析了ANXA1在胚胎绒毛和子宫蜕膜组织细胞中的表达情况,证实了ANXA1 mRNA水平及其蛋白质在蜕膜组织细胞中呈现低水平表达,实验结果提示ANXA1可能在滋养细胞浸润和胎盘形成过程中发挥重要作用。展开更多
文摘目的探讨hsa-miR-200a对人子宫内膜腺癌HEC-1B细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法应用荧光实时定量PCR(FQ-PCR)法检测hsa-miR-200a在人子宫内膜腺癌细胞HEC-1B中的表达水平;人工合成hsa-miR-200a模拟物、抑制剂,分别转染HEC-1B细胞;采用MTT法、流式细胞仪检测上调及抑制hsa-miR-200a的表达对HEC-1B细胞增殖活性与凋亡的影响;运用生物信息学分析hsa-miR-200a指向的与增殖和凋亡相关的靶基因;Western blot、FQ-PCR检测转染前后靶蛋白及其mRNA的表达水平。结果子宫内膜腺癌细胞HEC-1B表达hsa-miR-200a;FQ-PCR检测hsa-miR-200a模拟物、抑制剂转染HEC-1B细胞成功;MTT法检测结果表明hsa-miR-200a抑制剂转染组中细胞增殖抑制明显;流式细胞仪检测结果表明hsa-miR-200a抑制剂转染组中细胞凋亡增加;生物信息学分析结果表明hsa-miR-200a调控的靶基因是SON、Pdcd4、磷酸酶-张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN);靶蛋白PTEN在转染模拟物组表达下调,抑制剂组中表达上调,且转染前后靶基因mRNA水平无显著变化,而蛋白SON、Pdcd4的表达量没有显著变化。结论 HEC-1B细胞中hsa-miR-200a表达与PTEN蛋白表达呈负相关,表明hsa-miR-200a可能通过调节PTEN蛋白表达水平从而影响HEC-1B细胞的增殖与凋亡。
文摘采用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)分析妊娠早期胚胎绒毛和子宫蜕膜组织细胞的蛋白质组。结果发现一个等电点约6.6、分子量约38kDa的蛋白质点在蜕膜组织中表达明显下调,经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质量指纹谱(peptide mass fingerprint,PMF)和数据库搜索鉴定此蛋白质点为膜联蛋白-A1(ANXA1)。进一步采用RT-PCR、Western印迹和免疫组织化学技术分析了ANXA1在胚胎绒毛和子宫蜕膜组织细胞中的表达情况,证实了ANXA1 mRNA水平及其蛋白质在蜕膜组织细胞中呈现低水平表达,实验结果提示ANXA1可能在滋养细胞浸润和胎盘形成过程中发挥重要作用。
