表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对免疫性肝损伤的保护作用及其机制研究 被引量：4

1

作者 于淑静 周莲娣 +3 位作者 魏彩冰 孙宗良 张起辉 陶崑 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1458-1461,共4页

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对雷公藤甲素(TP)诱导的免疫性肝损伤的保护性作用及其作用机制。方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为4组,即正常对照组、EGCG对照组、TP组、EGCG治疗组。以赖氏法检测血清中ALT水平,以分光光度法检... 目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对雷公藤甲素(TP)诱导的免疫性肝损伤的保护性作用及其作用机制。方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为4组,即正常对照组、EGCG对照组、TP组、EGCG治疗组。以赖氏法检测血清中ALT水平,以分光光度法检测肝匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)的变化情况,以HE染色观测小鼠肝脏组织形态学变化,以ELISA方法检测肝脏中白细胞介素(IL)-17和IL-6的表达水平,以Western blot方法检测肝脏中Toll样受体4(TLR4)的表达情况。结果:TP组小鼠血清转氨酶水平明显高于正常对照组(P<0.005),EGCG对照组与正常对照组比较无变化(P>0.05),而EGCG治疗组小鼠血清转氨酶水平与TP组相比下降明显(P<0.005)。TP组小鼠肝脏病理切片示较多肝细胞坏死和中性粒细胞浸润,EGCG对照组和正常对照组小鼠肝脏形态学基本正常,EGCG治疗组示肝细胞炎症坏死程度较TP组有大幅减轻。TP组小鼠肝脏中MDA、IL-17及IL-6水平明显高于正常对照组(P<0.005),而SOD和GSH水平明显低于正常对照组(SOD,P<0.05;GSH,P<0.005),EGCG对照组与正常对照组比较无变化(P>0.05),EGCG治疗组小鼠肝脏中MDA、IL-17及IL-6水平均下降明显(P<0.005),而SOD和GSH水平均增高,与TP组比较有显著性差异(SOD,P<0.05;GSH,P<0.005)。TP组肝脏TLR4蛋白表达水平高于正常对照组,EGCG对照组与正常对照组比较无变化(P>0.05),而EGCG治疗组TLR4水平显著降低。结论:EGCG对TP所致小鼠肝损伤有明显的保护作用,可能与其抗氧化作用及对炎症因子的调节有关。 展开更多

关键词 表没食子儿茶素没食子酸酯 雷公藤甲素 肝损伤 炎症因子 抗氧化作用

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巨噬细胞Coronin-1的表达与非Mtb源性自噬相关性的实验研究 被引量：3

2

作者 李黎 陈全 +2 位作者 周芳妮 刘革力 张路渝 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期613-619,共7页

目的:研究巨噬细胞Coronin-1与非Mtb源性细胞自噬的相关性及其可能信号通路。方法:分别构建过表达Coronin-1的p EGFP-C1-Coronin-1质粒和干扰Coronin-1表达的p Genesil-1-Coronin-1质粒,通过G418加压筛选其RAW264.7细胞稳定转染株,即Cor... 目的:研究巨噬细胞Coronin-1与非Mtb源性细胞自噬的相关性及其可能信号通路。方法:分别构建过表达Coronin-1的p EGFP-C1-Coronin-1质粒和干扰Coronin-1表达的p Genesil-1-Coronin-1质粒,通过G418加压筛选其RAW264.7细胞稳定转染株,即Coronin-1高表达细胞株(RAW264.7-Cor.Plus)和Coronin-1低表达细胞株(RAW264.7-Cor.Minus)。将RAW264.7-Cor.Plus组、RAW264.7组和RAW264.7-Cor.Minus组细胞分别采取完全培养基(空白处理对照)、饥饿、雷帕霉素、环孢素A等因素处理后,通过RT-PCR法检测Beclin-1的基因转录水平,Western blot法检测Coronin-1、LC3BⅡ/LC3BⅠ及Beclin-1的蛋白表达水平。结果:Coronin-1过表达质粒和siRNA质粒均构建成功,其细胞稳定筛选株具有过表达或抑制表达Coronin-1特性。1空白处理三组细胞,Western blot法检测LC3BⅡ/LC3BⅠ的比值:RAW264.7-Cor.Minus组>RAW264.7组>RAW264.7-Cor.Plus组;Western blot法检测Beclin-1:RAW264.7-Cor.Minus组>RAW264.7组>RAW264.7-Cor.Plus组;RTPCR法检测Beclin-1转录水平,趋势同Western blot;2饥饿处理三组细胞,LC3BⅡ/LC3BⅠ的比值:RAW264.7-Cor.Minus组<RAW264.7组<RAW264.7-Cor.Plus组;3雷帕霉素处理RAW264.7细胞,其Coronin-1蛋白被显著抑制;雷帕霉素和环孢素A分别处理RAW264.7-Cor.Plus细胞,其LC3BⅡ/LC3BⅠ比值明显较空白处理组高。结论:巨噬细胞Coronin-1与非Mtb源性细胞自噬具有相关性。在营养充足状态下,Coronin-1可抑制细胞自噬;在饥饿状态下,Coronin-1可促进细胞自噬。Coronin-1对自噬的调控可能与m TOR和钙离子信号通路有关。 展开更多

关键词 巨噬细胞 Coronin-1 自噬 雷帕霉素 环孢素A 结核分枝杆菌

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雷公藤甲素致小鼠肝损伤的机制研究 被引量：6

3

作者 于淑静 魏彩冰 +1 位作者 陶崑 周莲娣 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期472-476,共5页

本文研究雷公藤甲素致肝损伤作用机制。将雌性C57BL/6小鼠20只随机分为2组,并以雷公藤甲素造模,通过检测血清中谷丙转氨酶(ALT)水平变化,以及观察小鼠肝脏组织切片HE染色结果,了解肝脏损伤情况;RT-PCR法检测小鼠肝脏中白细胞介素(IL)-17... 本文研究雷公藤甲素致肝损伤作用机制。将雌性C57BL/6小鼠20只随机分为2组,并以雷公藤甲素造模,通过检测血清中谷丙转氨酶(ALT)水平变化,以及观察小鼠肝脏组织切片HE染色结果,了解肝脏损伤情况;RT-PCR法检测小鼠肝脏中白细胞介素(IL)-17、IL-6、维甲酸孤儿核受体(ROR-γt)mRNA表达水平,ELISA法检测IL-17、IL-6蛋白表达水平,Western blot法检测小鼠肝脏中TLR4蛋白表达水平。与对照组比较,雷公藤甲素模型组小鼠血清ALT水平显著升高(P<0.005),HE染色切片显示较多的肝细胞坏死和炎症细胞浸润,IL-17、IL-6、ROR-γt mRNA表达水平和IL-17、IL-6蛋白表达水平显著升高(P<0.005),此外,TLR4蛋白表达水平显著升高(P<0.005)。结果表明,雷公藤甲素所导致的肝损伤可能通过激活TLR4信号,增加IL-17、IL-6的表达,影响Th17特异性转录因子ROR-γt,进而促进Th17细胞活化,增强其致炎功能。 展开更多

关键词 雷公藤甲素 肝损伤 炎症因子 C57BL/6小鼠

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槲皮素通过核因子E2相关因子/抗氧化应答元件(Nrf2/ARE)信号通路发挥对免疫性肝损伤的保护作用 被引量：13

4

作者 魏彩冰 周莲娣 +3 位作者 张育珍 张家维 张起辉 陶崑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期300-304,共5页

目的研究槲皮素对雷公藤甲素致小鼠免疫性肝损伤的保护作用,并探索该作用与核因子E2相关因子/抗氧化应答元件(Nrf2/ARE)信号通路的相关性。方法 50只C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、(20、50、80)mg/kg槲皮素预处理组,每组10只,槲... 目的研究槲皮素对雷公藤甲素致小鼠免疫性肝损伤的保护作用,并探索该作用与核因子E2相关因子/抗氧化应答元件(Nrf2/ARE)信号通路的相关性。方法 50只C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、(20、50、80)mg/kg槲皮素预处理组,每组10只,槲皮素预处理组每日上述不同剂量的槲皮素1次,连续10 d。实验末期,除正常组外其余各组小鼠灌胃给予雷公藤甲素(500μg/kg)建立免疫性肝损伤模型,22 h后测定小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)表达水平、肝组织谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平、HE染色观察肝脏组织病理改变、实时定量PCR检测血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、谷氨酰半脱氨酸连接酶催化亚单位(GCLC)表达量、Western blot法检测细胞核内Nrf2表达水平。结果与模型组相比,槲皮素高剂量组可以明显降低小鼠血清ALT、AST水平,下调肝组织MDA表达水平并提高GSH、SOD含量,明显改善肝组织病理损伤情况,且高剂量槲皮素组可显著诱导Nrf2转位入核,其下游相关基因HO-1、NQO1、GCLC的表达量也显著上升。中剂量槲皮素组具有一定的保护作用,低剂量槲皮素组效果不明显。结论高剂量槲皮素可保护雷公藤甲素引起的免疫性肝损伤,并且该保护作用与激活抗氧化应激Nrf2/ARE信号通路有关。 展开更多

关键词 槲皮素 免疫性肝损伤 雷公藤甲素 Nrf2/ARE信号通路 氧化应激

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冠蛋白1参与分枝菌酸诱导巨噬细胞的泡沫化 被引量：1

5

作者 周芳妮 陈全 +2 位作者 周静瑶 刘革力 张路渝 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期451-456,共6页

目的研究巨噬细胞冠蛋白1(coronin-1)与分枝菌酸(MA)诱导巨噬细胞泡沫化的相关性及其可能机制。方法根据冠蛋白1表达水平的差异,实验分为RAW264.7-Cor.Plus、RAW264.7和RAW264.7-Cor.Minus三组。各组细胞经100μg/m L MA包被的聚苯乙烯... 目的研究巨噬细胞冠蛋白1(coronin-1)与分枝菌酸(MA)诱导巨噬细胞泡沫化的相关性及其可能机制。方法根据冠蛋白1表达水平的差异,实验分为RAW264.7-Cor.Plus、RAW264.7和RAW264.7-Cor.Minus三组。各组细胞经100μg/m L MA包被的聚苯乙烯微球作用24 h后提取总蛋白,用Western blot法检测细胞冠蛋白1的表达水平。分别用(0、25、50、75、100)μg/m L MA包被聚苯乙烯微球作为吞噬颗粒,在2μmol/L松胞菌素D(cty D)处理前、后,分别吞噬24 h^8 d,用总胆固醇(TC)酶法测定试剂盒、游离胆固醇(FC)酶法测定试剂盒分别检测各组细胞TC、FC,再通过胆固醇酯(CE)和CE/TC比值定量评估巨噬细胞泡沫化水平。将cty D处理细胞(RAW264.7-cty D、RAW264.7-cty D-MA)及其对照组分别用异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽(FITC-phalloidin)染色,计算纤维型肌动蛋白(F-actin)重排率。结果各组细胞受MA诱导后,其冠蛋白1的表达量显著高于相应对照组,其表达量从高至低依次为RAW264.7-Cor.Plus、RAW264.7、RAW264.7-Cor.Minus。表达不同水平冠蛋白1的各组细胞的泡沫化水平与MA包被剂量和MA作用时间呈正比;冠蛋白1表达量最高的RAW264.7-Cor.Plus细胞泡沫化水平最高,冠蛋白1表达量最低的RAW264.7-Cor.Minus细胞泡沫化水平最低;cty D抑制巨噬细胞F-actin显著降低MA诱导的细胞泡沫化水平,但抑制F-actin对冠蛋白1与MA诱导细胞泡沫化的正相关性并无显著影响;经鬼笔环肽染色后,MA诱导组细胞的F-actin重排率显著高于非MA诱导的对照组细胞。结论 MA可诱导巨噬细胞冠蛋白1的表达,其表达水平与MA诱导的细胞泡沫化呈正相关,F-actin参与MA诱导的细胞泡沫化过程,但F-actin并非冠蛋白1调控MA诱导细胞泡沫化的关键和唯一途径。 展开更多

关键词 巨噬细胞 冠蛋白1(coronin-1) 分枝菌酸 泡沫细胞 纤维型肌动蛋白(F-actin)

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分枝菌酸诱导巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立及鉴定 被引量：3

6

作者 喻岚 陈全 +2 位作者 李黎 刘革力 张路渝 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期983-985,共3页

目的探讨分枝菌酸(MA)包被聚苯乙烯微球诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞泡沫细胞化的条件及特性。方法将RAW264.7细胞分为空白对照组和分别包被(0、25、50、75、100)μg/mL MA的聚苯乙烯微球实验组,分别将细胞与聚苯乙烯微球混匀、共同孵育24... 目的探讨分枝菌酸(MA)包被聚苯乙烯微球诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞泡沫细胞化的条件及特性。方法将RAW264.7细胞分为空白对照组和分别包被(0、25、50、75、100)μg/mL MA的聚苯乙烯微球实验组,分别将细胞与聚苯乙烯微球混匀、共同孵育24、48、72 h、5 d和8 d后,油红O染色后显微镜下观察细胞形态,采用总胆固醇试剂盒和游离胆固醇试剂盒测定各组泡沫细胞内胆固醇酯的含量,采用MTT法检测细胞增殖水平。结果当包被MA浓度为75μg/mL、吞噬时间为24 h时,RAW264.7能形成典型的泡沫细胞,其细胞内胆固醇酯相对含量为60.98%±1.32%;随着吞噬时间延长,形成泡沫细胞所需的MA的浓度逐渐递减;且随着细胞泡沫化程度增加,细胞增殖活力逐渐减弱。结论 MA包被聚苯乙烯微球可快速诱导巨噬细胞形成泡沫细胞,MA浓度与细胞泡沫化程度呈正相关,且有时间依赖性。 展开更多

关键词 分枝菌酸 聚苯乙烯微球 巨噬细胞 胆固醇酯 泡沫细胞

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Ipr1重组卡介苗对小鼠结核病的治疗效果 被引量：1

7

作者 候艳 陈全 +3 位作者 王瑜伟 严莎 吕玉春 郭荫广 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第22期2262-2265,共4页

目的评估携带小鼠胞内病原体抗性基因1(intracellular pathogen resistance1,Ipr1)质粒(pBOGI)的重组卡介苗(BCG)对结核分枝杆菌(Mtb)感染的治疗效果。方法BALB/c小鼠30只,随机分为3组:分别滴鼻给予磷酸盐缓冲液(PBS)、BCG和重组BCG,2... 目的评估携带小鼠胞内病原体抗性基因1(intracellular pathogen resistance1,Ipr1)质粒(pBOGI)的重组卡介苗(BCG)对结核分枝杆菌(Mtb)感染的治疗效果。方法BALB/c小鼠30只,随机分为3组:分别滴鼻给予磷酸盐缓冲液(PBS)、BCG和重组BCG,2周后用人型Mtb H37Rv标准株感染所有小鼠;感染后分别用PBS、BCG和重组BCG治疗7次;末次治疗后处死小鼠,检测肺脾荷菌量,肺脾脏器指数,血清IFN-γ、IL-10及TNF-α分泌水平和肺脾组织中Ipr1的表达,同时观察小鼠肺脾组织病理改变情况。结果重组BCG组肺脾荷菌量比PBS组和BCG组显著降低(P<0.01);重组BCG组肺脾脏器指数比PBS组和BCG组显著降低(P<0.05);重组BCG组血清IFN-γ分泌水平比PBS组和BCG组显著升高(P<0.01)。用免疫组化检测到小鼠肺脾组织中有Ipr1表达。PBS组肺组织病理改变以渗出为主,病变广泛;重组BCG组肺部病变最轻,肺泡结构基本正常;BCG组病变范围局限,病变程度界于PBS组与重组BCG组之间;各组间比较脾脏病理改变不明显。结论携带小鼠Ipr1基因的重组BCG对结核分枝杆菌感染有一定的治疗作用。 展开更多

关键词 细胞内病原体抗性基因1 结核分枝杆菌 卡介苗

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敲低花生四烯酸5脂加氧酶(Alox5)基因促进K562/ADM细胞凋亡 被引量：4

8

作者 雒钰杰 徐敏 +1 位作者 高雯琬 陶崑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1398-1403,共6页

目的研究短发夹RNA(shRNA)敲低花生四烯酸5脂加氧酶(Alox5)基因对慢性粒细胞白血病耐药细胞K562/ADM细胞凋亡的影响。方法设计并合成3对针对人Alox5基因的靶向shRNA片段,插入到p Genesil-1干扰载体中,经过酶切和测序验证,成功构建p Gene... 目的研究短发夹RNA(shRNA)敲低花生四烯酸5脂加氧酶(Alox5)基因对慢性粒细胞白血病耐药细胞K562/ADM细胞凋亡的影响。方法设计并合成3对针对人Alox5基因的靶向shRNA片段,插入到p Genesil-1干扰载体中,经过酶切和测序验证,成功构建p Genesil-1-shRNA-Alox5重组质粒,转染K562/ADM细胞,实时定量PCR和Western blot法检测Alox5 mRNA及蛋白水平,筛选最好干扰组。选择较高干扰效率的p Genesil-1-shRNA-Alox5重组质粒组作为实验组,采用实时定量PCR检测K562/ADM细胞bcr/abl mRNA水平、Western blot法检测BCR/ABL融合蛋白水平、流式细胞术检测细胞凋亡率。结果酶切及测序结果显示重组质粒构建成功。与阴性对照组(p Genesil-1-K562/ADM)和空白K562/ADM细胞组相比,转染p Genesil-1-shRNA-Alox5重组质粒组的K562/ADM细胞Alox5 mRNA和蛋白水平均明显降低。敲低K562/ADM细胞Alox5后,bcr/abl mRNA、BCR/ABL融合蛋白水平均显著降低、细胞凋亡率显著增加。结论敲低Alox5基因后,K562/ADM细胞bcr/abl mRNA和BCR/ABL融合蛋白表达水平下降,细胞凋亡率增加。 展开更多

关键词 慢性粒细胞白血病(CML) BCR/ABL 花生四烯酸5脂加氧酶(Alox5) K562/ADM细胞

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槲皮素拮抗雷公藤甲素诱导的小鼠肝损伤的机制研究 被引量：10

9

作者 魏彩冰 周莲娣 +2 位作者 张家维 张起辉 陶崑 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期684-688,共5页

目的探究槲皮素(quercetin,QE)对雷公藤甲素(triptolide,TP)诱发肝损伤的拮抗机制。方法取40只C57BL/6小鼠,随机平均分为正常对照组、TP模型组、低剂量QE(20 mg/kg)组和高剂量QE(80 mg/kg)组。低剂量QE组和高剂量QE组进行预处理给药,按0... 目的探究槲皮素(quercetin,QE)对雷公藤甲素(triptolide,TP)诱发肝损伤的拮抗机制。方法取40只C57BL/6小鼠,随机平均分为正常对照组、TP模型组、低剂量QE(20 mg/kg)组和高剂量QE(80 mg/kg)组。低剂量QE组和高剂量QE组进行预处理给药,按0.2 mL/10 g量连续灌胃10 d,2次/d,其余各组灌胃等量生理盐水。末次给药4 h后,除正常对照组外,各组单次灌胃500μg/kg TP进行造模。造模22 h后取血,处死小鼠,肝切片HE染色观察肝组织病理学改变;检测小鼠血清中谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)活性;测定肝匀浆液中还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平;采用ELISA方法检测肝匀浆液中白细胞介素(IL)-17、IL-10和IL-6分泌情况;Western blot测定Toll样受体4(TLR4)蛋白表达水平。结果与正常对照组比较, TP模型组肝小叶结构萎缩甚至消失,肝细胞坏死明显,炎性细胞浸润;小鼠血清中ALT、AST和MDA水平异常升高,SOD和GSH水平降低,IL-6和IL-17分泌水平升高,IL-10分泌水平下降,TLR4蛋白水平升高(P<0.05)。与TP模型组相比, QE组肝组织损伤和炎症细胞浸润减轻,血清中ALT、AST、MDA、IL-6和IL-17水平均下降,TLR4表达水平下调(P<0.05),且高剂量QE组改变更为明显(P<0.05,与低剂量QE组比较)。结论槲皮素可通过减轻氧化损伤促进抗氧化,调控细胞因子的分泌,减轻TP诱导的肝损伤。 展开更多

关键词 雷公藤甲素 槲皮素 肝损伤 细胞因子 氧化应激

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分枝菌酸诱导巨噬细胞泡沫细胞化对细胞自噬的影响 被引量：5

10

作者 李黎 陈全 +2 位作者 喻岚 刘革力 张路渝 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2015年第6期846-851,共6页

研究分枝菌酸(mycolic acid,MA)诱导的巨噬细胞泡沫细胞化对巨噬细胞自噬的影响,探讨MA促巨噬细胞泡沫细胞化的机制。构建LC3真核表达质粒(p EGFP-LC3B),转染RAW264.7细胞后获得其稳定转染细胞株(RAW264.7/p EGFP-LC3B);用MA诱导RAW264.... 研究分枝菌酸(mycolic acid,MA)诱导的巨噬细胞泡沫细胞化对巨噬细胞自噬的影响,探讨MA促巨噬细胞泡沫细胞化的机制。构建LC3真核表达质粒(p EGFP-LC3B),转染RAW264.7细胞后获得其稳定转染细胞株(RAW264.7/p EGFP-LC3B);用MA诱导RAW264.7/p EGFP-LC3B获得RAW264.7/p EGFP-LC3B泡沫细胞。实验分为三组:RAW264.7细胞组、RAW264.7/p EGFP-LC3B细胞组及MA诱导的RAW264.7/p EGFP-LC3B泡沫细胞组。通过RT-PCR法检测各组细胞中自噬相关基因Becn1、LC3B的转录水平,Western blot法检测各组细胞自噬标志蛋白LC3B II/I的表达水平。RTPCR检测结果显示,RAW264.7/p EGFP-LC3B泡沫细胞组的Becn1基因及LC3B基因的转录水平明显较其他两组低(P<0.05)。Western blot检测结果显示,RAW264.7/p EGFP-LC3B泡沫细胞组LC3B II/I比值明显较其他两组低(P<0.05)。由此可见,当巨噬细胞被MA诱导成为泡沫巨噬细胞后,其自噬功能显著降低。该研究证明,MA可能通过抑制巨噬细胞自噬,引起脂代谢失衡,进而发生巨噬细胞泡沫细胞化。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 分枝菌酸 巨噬细胞 泡沫细胞 自噬

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冠蛋白-1不同表达水平对巨噬细胞iNOS、TLRs表达以及凋亡的影响 被引量：5

11

作者 周静瑶 陈全 +2 位作者 周芳妮 刘革力 张路渝 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2017年第2期148-156,共9页

冠蛋白-1(Coronin-1)在真核细胞中广泛表达,涉及钙离子稳态、细胞骨架动力学、免疫及炎症反应等多种细胞功能。该研究探讨了冠蛋白-1不同表达水平对巨噬细胞诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、Toll样受体(Toll... 冠蛋白-1(Coronin-1)在真核细胞中广泛表达,涉及钙离子稳态、细胞骨架动力学、免疫及炎症反应等多种细胞功能。该研究探讨了冠蛋白-1不同表达水平对巨噬细胞诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)表达和凋亡的影响并探讨其分子机制。根据冠蛋白-1表达水平的差异,实验细胞分为RAW264.7-Cor.Plus、RAW264.7、RAW264.7-Cor.Minus 3组。各组细胞分别经4μmol/L钙调磷酸酶抑制剂环孢素A(cyclosporin A,Cs A)处理24 h或2μmol/L肌动蛋白聚合抑制剂松胞菌素D(cytochalasin D,cyt D)处理48 h,同时设未处理对照,再分别用Real-time PCR法检测iNOS m RNA水平,Western blot法检测细胞TLR2、TLR4、TLR9及钙调磷酸酶(calcineurin,Ca N)的蛋白质水平,流式细胞术检测细胞凋亡百分率。各组细胞用四甲基异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽(TRITC-phalloidin)染色后,计算纤维型肌动蛋白(F-actin)重排率。结果显示,冠蛋白-1过表达细胞相对于冠蛋白-1正常表达细胞,其iNOSm RNA水平以及TLR2、TLR4、TLR9蛋白表达水平和细胞凋亡率均显著降低(P<0.05);Cs A作用后,RAW264.7-Cor.Plus的iNOS m RNA水平以及TLR2、TLR4、TLR9蛋白质水平和细胞凋亡率均较未处理对照细胞显著增加(P<0.05),RAW264.7和RAW264.7-Cor.Plus细胞的Ca N水平较未处理对照细胞显著降低(P<0.05);cyt D作用后,与未处理对照细胞相比,iNOS m RNA水平及细胞凋亡率无显著性差异(P>0.05),但TLRs的表达显著降低(P<0.05);经鬼笔环肽染色后,RAW264.7-Cor.Plus细胞F-actin重排率显著高于RAW264.7细胞(P<0.05)。以上结果表明,冠蛋白-1过表达不仅促进了巨噬细胞F-actin重排,而且下调了iNOS、TLRs水平并且抑制细胞凋亡,其分子机制与冠蛋白-1促进钙调磷酸酶调控的Ca^(2+)信号通路有关。 展开更多

关键词 巨噬细胞 冠蛋白-1 INOS TLRs F-ACTIN 凋亡 钙调磷酸酶

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肌动蛋白解聚对巨噬细胞TLRs的表达及细胞凋亡的影响 被引量：2

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作者 贺静荣 陈全 +4 位作者 吴蕊鑫 刘佳霖 王毅 刘革力 张路渝 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2018年第12期1992-2001,共10页

在肺癌等的癌细胞中,脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)等致炎因子介导的促瘤效应涉及Toll样受体(Toll like receptors, TLRs)/纤维型肌动蛋白(fibrous actin, F-actin)通路。该研究探讨了外源性松胞菌素D(cytochalasin D, cytD)和细胞... 在肺癌等的癌细胞中,脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)等致炎因子介导的促瘤效应涉及Toll样受体(Toll like receptors, TLRs)/纤维型肌动蛋白(fibrous actin, F-actin)通路。该研究探讨了外源性松胞菌素D(cytochalasin D, cytD)和细胞内源过表达的重组肌动蛋白解聚因子丝切蛋白(Cofilin-1)所诱导的肌动蛋白解聚对巨噬细胞TLR2、TLR4和TLR9的表达和细胞凋亡水平的影响。分别用6种不同浓度的cytD处理RAW264.7小鼠巨噬细胞48 h,用Western blot检测6组细胞TLR2、TLR4、TLR9的表达水平。构建重组pEGFP-N1-Cofilin-1质粒并转染RAW264.7细胞,设置空质粒对照和空白细胞对照组。用Real-time PCR法和Western blot检测细胞转染前后Cofilin-1表达水平;Western blot检测巨噬细胞TLR2、TLR4、TLR9的表达情况;用流式细胞术检测3组细胞的凋亡水平。结果显示,终浓度≥1.5μmol/L的cytD处理细胞后, RAW264.7细胞表达TLR2明显降低(P<0.05);终浓度≥1.0μmol/L的cytD处理细胞后,巨噬细胞表达TLR4、TLR9明显降低(P<0.05)。重组质粒转染组细胞的cofilin-1 mRNA及Cofilin-1蛋白水平均高于空质粒对照组和空白细胞对照组(P<0.05),且其TLR2、TLR4、TLR9蛋白表达水平和细胞凋亡水平均显著低于空质粒对照组和空白细胞对照组(P<0.05)。结果表明,外源性cytD和巨噬细胞内源性高表达的Cofilin-1蛋白均可下调巨噬细胞TLR2、TLR4、TLR9的表达,其中,细胞高表达的Cofilin-1蛋白还显著降低了细胞凋亡率。该文通过揭示肌动蛋白解聚对巨噬细胞TLRs的表达及细胞凋亡的抑制,为进一步研究炎症与肿瘤的关系及分子机制奠定了基础。 展开更多

关键词 巨噬细胞 F-ACTIN Cofilin-1 TLRS 凋亡

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巨噬细胞冠蛋白-1 siRNA对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响 被引量：1

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作者 吴蕊鑫 陈全 +2 位作者 贺静荣 刘革力 张路渝 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2018年第6期884-891,共8页

巨噬细胞冠蛋白-1(Coronin-1)与结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)逃逸免疫杀伤有关。该研究探讨了p S-EGFP-SP-Coronin-1si RNA重组质粒靶向抑制巨噬细胞Coronin-1表达后对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响。用该质粒转染小鼠... 巨噬细胞冠蛋白-1(Coronin-1)与结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)逃逸免疫杀伤有关。该研究探讨了p S-EGFP-SP-Coronin-1si RNA重组质粒靶向抑制巨噬细胞Coronin-1表达后对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响。用该质粒转染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,采用RT-PCR法和Western blot检测质粒转染前后细胞Coronin-1的表达水平。以耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)分别感染转染质粒组细胞和对照组细胞,通过细胞内细菌菌落计数和细胞爬片抗酸染色法评估巨噬细胞转染质粒前后对细菌的吞噬能力;利用流式细胞术检测转染质粒组细胞及对照组细胞吞噬耻垢分枝杆菌后不同时段的细胞凋亡水平。结果显示,该质粒能显著抑制RAW264.7细胞Coronin-1的m RNA水平及蛋白表达水平;感染耻垢分枝杆菌6 h后,转染质粒组细胞内细菌数显著高于对照组细胞(P<0.05);感染耻垢分枝杆菌48 h后,转染质粒组细胞凋亡水平显著高于对照组细胞(P<0.05)。以上结果表明,p S-EGFP-SP-Coronin-1si RNA重组质粒能显著抑制巨噬细胞Coronin-1的表达,并可显著促进巨噬细胞吞噬细菌和凋亡杀菌,为开发靶向巨噬细胞Coronin-1的抗结核基因治疗措施奠定基础。 展开更多

关键词 巨噬细胞 冠蛋白-1 小干扰RNA 结核分枝杆菌 耻垢分枝杆菌

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维甲酸核受体RARα真核表达载体的构建、突变纠正及表达

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作者 候艳 陈全 王瑜伟 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2009年第10期898-901,共4页

目的构建维甲酸核受体RARα真核表达载体,并检测其在人肺腺癌细胞A549中表达。方法从小鼠巨噬细胞RAW264.7中提取总RNA,以RT-PCR法扩增RARαcDNA,克隆至真核表达载体pDsRed1-C1中,测序结果显示RARα第1040位A→G,导致其编码蛋白的氨基... 目的构建维甲酸核受体RARα真核表达载体,并检测其在人肺腺癌细胞A549中表达。方法从小鼠巨噬细胞RAW264.7中提取总RNA,以RT-PCR法扩增RARαcDNA,克隆至真核表达载体pDsRed1-C1中,测序结果显示RARα第1040位A→G,导致其编码蛋白的氨基酸发生改变。通过二次PCR将其纠正,重组载体RedC1-RARα转化大肠埃希菌Top10,筛选阳性克隆做酶切及测序鉴定。脂质体瞬时转染A549细胞,在荧光显微镜下观察RARα的表达。RT-PCR法检测RARα的mRNA水平表达。结果通过RT-PCR及二次PCR得到RARαcDNA,构建其真核表达载体,脂质体瞬时转染A549细胞得到了成功表达,RARα基因产物定位于细胞核内。结论成功构建维甲酸核受体RARα真核表达载体,且证实RARα编码蛋白定位于细胞核内,本研究结果为进一步探讨结核分枝杆菌固有免疫机制奠定了基础。 展开更多

关键词 维甲酸核受体 细胞内病原体抗性基因1 二次PCR 突变纠正 转染

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