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DNA修复基因XRCC1的194位点多态性与晚期非小细胞肺癌铂类化疗敏感性关系的Meta分析 被引量:11
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作者 李文骏 向华 马庆波 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第21期2417-2420,共4页
目的探讨晚期非小细胞肺癌患者中XRCC1基因多态性与铂类化疗敏感性的关系。方法电子检索1990年1月—2010年1月VIP、CNKI、CBM、万方数据库、PubMed及EBSCO数据库,收集有关晚期非小细胞肺癌患者的XRCC1 Arg194Trp基因多态性与铂类化疗敏... 目的探讨晚期非小细胞肺癌患者中XRCC1基因多态性与铂类化疗敏感性的关系。方法电子检索1990年1月—2010年1月VIP、CNKI、CBM、万方数据库、PubMed及EBSCO数据库,收集有关晚期非小细胞肺癌患者的XRCC1 Arg194Trp基因多态性与铂类化疗敏感性的文献,以非条件Logistic回归校正年龄、性别、吸烟状况等混杂因素后的OR值为效应指标,对文献进行评价筛选、异质性检验。采用RevMan 4.3软件进行Meta分析,计算合并OR值及其95%可信区间(CI)。结果本次Meta共纳入7篇文献,累计病例915例。其中Arg/Trp和Trp/Trp等位基因同Arg/Arg比较,OR值分别为2.63[95%CI(1.96,3.53)]、2.27[95%CI(1.45,3.56)]。结论晚期非小细胞肺癌患者XRCC1基因第194位变异型(Arg/Trp或Trp/Trp)对铂类化疗敏感性优于野生型(Arg/Arg)。 展开更多
关键词 XRCC1 多态性 单核苷酸 非小细胞肺 铂化合物 META分析
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酶促电化学发光法测定血清总胆汁酸 被引量:3
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作者 丁敏 王箭 +1 位作者 张晓清 邓文平 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1793-1796,共4页
利用胆汁酸在氧化型辅酶I(NAD+)共存下被3α-类固醇脱氢酶(3α-HSD)催化脱氢,同时NAD+被还原为还原型辅酶I(NADH)可增强三联吡啶钌(Ru(bpy)32+)的电化学发光(ECL)信号,实现电化学发光法间接检测胆汁酸。检测池中含2.5mmol/LRu(bpy)23+,8... 利用胆汁酸在氧化型辅酶I(NAD+)共存下被3α-类固醇脱氢酶(3α-HSD)催化脱氢,同时NAD+被还原为还原型辅酶I(NADH)可增强三联吡啶钌(Ru(bpy)32+)的电化学发光(ECL)信号,实现电化学发光法间接检测胆汁酸。检测池中含2.5mmol/LRu(bpy)23+,833U/L3α-HSD,70nmol/LNAD+,50mmol/L磷酸盐缓冲液(pH8.0)。ECL强度与胆汁酸的浓度在1.0~100fmol/L范围内呈良好的线性关系,线性方程y=0.7707x+12.04(r=0.9975);检出限为0.02fmol/L;平均回收率为97.5%。本方法与临床采用的酶循环放大法有较好的相关性。 展开更多
关键词 胆汁酸 电化学发光 血清
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外源性重组S100A6蛋白对5株转化细胞系的增殖、迁移能力及β-catenin水平的影响 被引量:2
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作者 马闻 李星星 +4 位作者 王胜 游莉 郭元元 徐兰兰 周兰 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1321-1326,共6页
目的:探讨S100A6对5种转化细胞系株(HEK293、9HTE、CHO、MEF和C3H10T1/2)的增殖、迁移能力和β-catenin水平的影响。方法:通过转化质粒pMoluc-GST-hS100A6到大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达重组S100A6蛋白,为后续实验提供材料;MTT法检测细... 目的:探讨S100A6对5种转化细胞系株(HEK293、9HTE、CHO、MEF和C3H10T1/2)的增殖、迁移能力和β-catenin水平的影响。方法:通过转化质粒pMoluc-GST-hS100A6到大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达重组S100A6蛋白,为后续实验提供材料;MTT法检测细胞增殖,细胞划痕和Transwell法检测细胞迁移,免疫细胞化学法及Western-blotting检测β-catenin表达水平。结果:①通过IPTG诱导表达,从大肠杆菌中收获了高纯度重组S100A6(GST-S100A6);②外源性重组S100A6对作为阳性对照的肿瘤细胞系——人骨肉瘤细胞143B的增殖及迁移均有抑制作用(P<0.05),而对5株转化细胞系的增殖及迁移均无显著影响(P>0.05);③免疫细胞化学法和Western-blotting一致揭示重组S100A6可上调5株转化细胞系的β-catenin水平(P<0.05)。结论:S100A6对5株转化细胞系的增殖、迁移无明显影响,但可上调此5株转化细胞系Wnt/β-catenin水平。 展开更多
关键词 S100A6 转化细胞系 细胞增殖 细胞迁移 Β-CATENIN
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具有时滞的HBV病毒动力学模型稳定性分析 被引量:2
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作者 马庆波 向华 《生物信息学》 2009年第4期326-329,共4页
HBV(HePatitis B virus)是一种具有严重传染性的肝炎病毒,迄今为止,人们对它的免疫和慢性化的机制等方面还不甚了解。本文基于相关的病理知识,对应的建立了具有时滞的微分方程数学模型,系统地探讨了肝炎B病毒与宿主细胞之间的关系,利用L... HBV(HePatitis B virus)是一种具有严重传染性的肝炎病毒,迄今为止,人们对它的免疫和慢性化的机制等方面还不甚了解。本文基于相关的病理知识,对应的建立了具有时滞的微分方程数学模型,系统地探讨了肝炎B病毒与宿主细胞之间的关系,利用Lyapunov函数方法研究了病毒动力学模型感染平衡点的局部稳定性和未感染平衡点全局稳定性,并利用数学模拟验证了理论分析。结果表明时滞的存在不会影响到感染平衡点的局部稳定性,但能影响平衡点到达的时间跨度,对于药物治疗的疗程和治疗时机的确定有参考意义。 展开更多
关键词 LYAPUNOV 全局稳定性 时滞 病毒动力学
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硼替佐米联合化疗对多发性骨髓瘤的疗效与相关血液学指标分析
5
作者 杨再林 张勇 +10 位作者 张伶 夏顺中 裴莉 符刚 秦大兵 白海雁 田小波 朱艳 陈润 徐双年 陈洁平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期975-978,共4页
目的观察硼替佐米治疗多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)的疗效及血液学指标的改变。方法2007年4月至2009年12月本院血液病中心收治的18例多发性骨髓瘤患者,其中7例初治患者与11例复发难治患者,均采用以硼替佐米为主的联合方案化疗,3周... 目的观察硼替佐米治疗多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)的疗效及血液学指标的改变。方法2007年4月至2009年12月本院血液病中心收治的18例多发性骨髓瘤患者,其中7例初治患者与11例复发难治患者,均采用以硼替佐米为主的联合方案化疗,3周为1个疗程,每例患者至少接受1~6个疗程的治疗。观察疗效及相关血液学指标的改变。结果7例初治患者中5例患者完全缓解(CR),后1例行自体造血干细胞移植,2例患者获得部分缓解(PR)。11例复发难治患者中7例达CR,2例达PR,2例无效。患者浆细胞比例、血清总蛋白含量(TP)、球蛋白(G)、M蛋白含量、尿蛋白、β2-微球蛋白、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)等随化疗周期呈明显下降趋势,患者血红蛋白(Hb)、白蛋白(Alb)含量、A/G比值等呈明显的上升趋势。不良反应多为1~2级,常为一过性,包括周围神经病变(4/18)、骨痛(1/18)、胃肠道反应(8/18),经对症治疗后均好转。结论硼替佐米对初发及难治复发多发性骨髓瘤的治疗均有较好疗效,对治疗相关不良反应患者可耐受,相关血液学指标改善明显。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 硼替佐米 疗效 不良反应 血液学指标
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肺炎链球菌CbpA基因疫苗的构建及免疫学特性
6
作者 陈怡婷 陈大鹏 +3 位作者 曹炬 吴凯峰 尹楠林 尹一兵 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第9期800-803,共4页
目的:构建含有肺炎链球菌(SPN)毒力因子CbpA抗原编码基因的重组质粒pcDNA3.1/CbpA,测定其诱导特异性免疫应答的能力并评价其保护效果.方法:PCR扩增SPN CbpA编码基因,将该编码基因克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建pcDNA3.1/CbpA重... 目的:构建含有肺炎链球菌(SPN)毒力因子CbpA抗原编码基因的重组质粒pcDNA3.1/CbpA,测定其诱导特异性免疫应答的能力并评价其保护效果.方法:PCR扩增SPN CbpA编码基因,将该编码基因克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建pcDNA3.1/CbpA重组质粒,经测序鉴定后转染COS-7细胞,WesternBlot鉴定目的蛋白的表达,重组质粒免疫BALB/c小鼠,TIGR4型SPN攻击后,监测其生存时间.结果:CbpA能在COS-7细胞中表达;pcDNA3.1/CbpA重组质粒主动免疫BALB/C小鼠后,体内产生特异性IgG抗体,并诱导小鼠对SPN感染产生有效的保护.结论:成功构建了重组真核表达质粒pcDNA3.1/CbpA,可为SPN基因疫苗的研制提供依据. 展开更多
关键词 肺炎链球菌 cbpA DNA疫苗 免疫应答
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带核定位信号的RARα与JTV1蛋白相互作用的验证实验 被引量:5
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作者 王翀 王东生 +5 位作者 刘北忠 郝坡 刘畅 金丹婷 钟梁 王春光 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期382-384,402,共4页
目的通过实验验证带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)与JTV1蛋白之间的相互作用。方法将表达NLS-RARα诱饵蛋白和JTV1靶蛋白的两种重组表达质粒共转化AH109酵母菌,通过一对一的酵母双杂交技术验证两者在活细胞内的相互作用;构建NL... 目的通过实验验证带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)与JTV1蛋白之间的相互作用。方法将表达NLS-RARα诱饵蛋白和JTV1靶蛋白的两种重组表达质粒共转化AH109酵母菌,通过一对一的酵母双杂交技术验证两者在活细胞内的相互作用;构建NLS-RARα及JTV1蛋白标签融合表达载体并共转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀技术在体外验证二者之间的相互作用。结果NLS-RARα诱饵蛋白和JTV1靶蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆;NLS-RARα及JTV1蛋白标签融合表达载体构建成功,共转染293细胞,抗HA多克隆抗体沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,用抗Myc单克隆抗体进行免疫印迹检测,可以检测到Myc-JTV1蛋白。结论利用酵母双杂交和免疫共沉淀技术验证了NLS-RARα与JTV1间存在相互作用。 展开更多
关键词 NLS-RARα JTV1 酵母双杂交 免疫共沉淀 蛋白质相互作用
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电化学极化玻碳电极构建的葡萄糖生物传感器 被引量:3
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作者 张伟 甄生航 +3 位作者 谢国明 刁奇智 罗鹏 郑军 《传感器与微系统》 CSCD 北大核心 2011年第8期110-112,119,共4页
在硝酸溶液中电化学极化处理玻碳电极(GCE),以硫堇(TH)为电子介体,通过金—硫、金—氮共价键作用和静电吸附作用将纳米金(GNPs)、葡萄糖氧化酶(GOD)和辣根过氧化物酶(HRP)修饰于电极上,最后在电极上滴涂Nafion水溶液制备抗干... 在硝酸溶液中电化学极化处理玻碳电极(GCE),以硫堇(TH)为电子介体,通过金—硫、金—氮共价键作用和静电吸附作用将纳米金(GNPs)、葡萄糖氧化酶(GOD)和辣根过氧化物酶(HRP)修饰于电极上,最后在电极上滴涂Nafion水溶液制备抗干扰膜并固定酶电极,构建了一种新型双酶葡萄糖生物传感器。实验结果表明:电化学极化处理电极提高了生物传感器的性能,传感器响应电流与葡萄糖浓度在1×10-3~18×10-3mol/L范围内有良好的线性关系,R=0.991 7,检出限为5×10-5mol/L。该生物传感器具有良好的灵敏度、抗干扰性和稳定性,可以重复使用。 展开更多
关键词 葡萄糖 电化学极化 硫堇 生物传感器
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肝细胞黏附分子诱导肾癌786-0细胞系凋亡
9
作者 张巧琳 罗春丽 +1 位作者 颜令 吴小候 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2011年第1期73-77,共5页
目的探讨肝细胞黏附分子(HEPACAM)基因转染肾癌细胞对其凋亡的影响。方法将携带HEPACAM基因的重组质粒转染786-0细胞,RT-PCR鉴定HEPACAM基因在786-0中的表达;Hoechst染色结合荧光显微镜观察细胞形态改变;FCM检测细胞周期及细胞凋亡情况;... 目的探讨肝细胞黏附分子(HEPACAM)基因转染肾癌细胞对其凋亡的影响。方法将携带HEPACAM基因的重组质粒转染786-0细胞,RT-PCR鉴定HEPACAM基因在786-0中的表达;Hoechst染色结合荧光显微镜观察细胞形态改变;FCM检测细胞周期及细胞凋亡情况;Western印迹法检测BAX、BCL-2、Cyclin D1蛋白表达变化。结果上调HEPACAM基因表达可诱导786-0细胞凋亡,阻止细胞周期于G0/G1期,并可上调BAX及下调BCL-2和Cyclin D1蛋白水平表达。结论外源导入HEPACAM基因可诱导肾癌细胞凋亡并阻止细胞周期于G0/G1期。 展开更多
关键词 肾癌 肝细胞黏附分子 细胞周期 凋亡
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高效液相色谱-程序波长紫外检测法同时测定血浆中的色氨酸及其代谢物 被引量:12
10
作者 甄乾娜 黄小兰 +2 位作者 张晓清 班艳娜 丁敏 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期435-438,共4页
建立了一种高效液相色谱-程序波长紫外检测法同时测定血浆中色氨酸(Trp)及其主要代谢产物犬尿氨酸(Kyn)和5-羟色胺(5-HT)。以茶碱为内标(IS),采用BDS-Hypersil-C8柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离。流动相为10 mmol/L醋酸钠缓冲液(pH 4.... 建立了一种高效液相色谱-程序波长紫外检测法同时测定血浆中色氨酸(Trp)及其主要代谢产物犬尿氨酸(Kyn)和5-羟色胺(5-HT)。以茶碱为内标(IS),采用BDS-Hypersil-C8柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离。流动相为10 mmol/L醋酸钠缓冲液(pH 4.5)-乙腈(94∶6,v/v),流速为0.6 mL/min;柱温为25℃;紫外检测波长设定:Kyn和IS为360 nm,5-HT为220 nm,Trp为302 nm。3种物质的平均回收率为87%~113%;线性范围分别为3.97~400μmol/L(Trp),0.421~20.2μmol/L(Kyn),4.36~980 nmol/L(5-HT);检出限分别为0.134μmol/L(Trp),0.016 0μmol/L(Kyn),2.03 nmol/L(5-HT)。利用该方法对15例抑郁症患者和15例健康志愿者的血浆进行测定,结果表明两组间Trp的代谢存在显著的差异。 展开更多
关键词 高效液相色谱法 色氨酸 犬尿氨酸 5-羟色胺 血浆
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Notch信号通路在骨形态发生蛋白9诱导的多潜能干细胞成骨分化中的作用 被引量:9
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作者 刘强 翁亚光 +2 位作者 徐道晶 罗敏 唐敏 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第23期2492-2496,共5页
目的初步探讨Notch信号通路对骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导多潜能干细胞成骨分化的作用和机制。方法腺病毒表达载体(AdBM P9/AdGFP、AdHey1/AdRFP)和BMP9/GFP条件培养基处理C2C12细胞,细胞化学染色和活性定... 目的初步探讨Notch信号通路对骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导多潜能干细胞成骨分化的作用和机制。方法腺病毒表达载体(AdBM P9/AdGFP、AdHey1/AdRFP)和BMP9/GFP条件培养基处理C2C12细胞,细胞化学染色和活性定量检测早期成骨标志物碱性磷酸酶(ALP),定量RT-PCR检测Notch信号通路靶基因Hey1,以了解Hey1在AdBMP9介导的成骨分化作用中的表达和作用;采用细胞密度实验和Notch信号通路抑制剂(DAPT)检测Notch信号通路对成骨的影响;在AdBMP9/AdGFP处理下,检测细胞上Notch信号通路配体、受体表达变化。结果 AdBMP9作用下,1、3、5、7dALP活性持续增加(P<0.05);Hey1一过性升高,其与AdBMP9呈剂量依赖性;Hey1可协助BMP9成骨(P<0.05),不能单独起效。80%和40%细胞密度组ALP量和Hey1表达均高于20%组(P<0.05);DAPT组中ALP活性明显降低(P<0.05);在AdBMP9作用下,Notch信号通路配受体有不同程度的上调,其中受体Notch4和配体Jag-1上调最为明显(分别为11.3倍和5.1倍)。结论 Notch信号通路参与BMP9介导的多潜能干细胞成骨分化,其可能的机制是BMP9通过诱导Notch通路配体、受体表达上调使Hey1升高,后者协同成骨。 展开更多
关键词 NOTCH信号通路 骨形态发生蛋白9 多潜能干细胞 发状分裂相关增强子-1 DAPT
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带核定位信号的RARα与谷氨酸氨连接酶蛋白相互作用的胞内外验证 被引量:4
12
作者 吴燕 刘北忠 +4 位作者 王翀 钟梁 朱丹 王春光 金丹婷 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期468-471,共4页
目的通过胞内外实验验证谷氨酸氨连接酶(GLUL)与带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)之间的相互作用。方法将表达GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白的两种重组表达质粒共同转化入AH109酵母菌,采用一对一的酵母双杂交技术验证它们在活... 目的通过胞内外实验验证谷氨酸氨连接酶(GLUL)与带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)之间的相互作用。方法将表达GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白的两种重组表达质粒共同转化入AH109酵母菌,采用一对一的酵母双杂交技术验证它们在活细胞内的相互作用;通过构建GLUL及NLS-RARα蛋白标签融合表达载体,共转染至人胚肾HEK293细胞,利用免疫共沉淀技术在细胞外验证它们之间的相互作用。结果 GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色的阳性克隆;GLUL蛋白及NLS-RARα标签融合表达载体构建成功,共同转染至HEK293细胞,采用抗HA多克隆抗体免疫沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,抗c-Myc单克隆抗体免疫印迹检测,检测到GLUL-cMyc蛋白。结论采用酵母双杂交和免疫共沉淀技术成功地在胞内外验证了GLUL与NLS-RARα之间存在特异性的相互作用。 展开更多
关键词 维甲酸受体Α 核定位信号 谷氨酸氨连接酶 蛋白质相互作用 双杂交系统技术 免疫共沉淀
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高效液相色谱-串联质谱法测定妊娠肝内胆汁淤积患者血清牛磺结合型胆汁酸 被引量:6
13
作者 邓文平 王文娟 +2 位作者 邵勇 邓丹 丁敏 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期732-734,共3页
目的:研究妊娠肝内胆汁淤积症(Intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)患者血清中牛磺结合型胆汁酸的变化。方法:收集ICP及ICP伴糖尿病、ICP伴病毒性肝炎患者和正常孕妇血清,经固相萃取,采用高效液相色谱-串联质谱(Highperfor-manc... 目的:研究妊娠肝内胆汁淤积症(Intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)患者血清中牛磺结合型胆汁酸的变化。方法:收集ICP及ICP伴糖尿病、ICP伴病毒性肝炎患者和正常孕妇血清,经固相萃取,采用高效液相色谱-串联质谱(Highperfor-mance liquid chromatography-tendem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)法测定牛磺结合型胆汁酸的含量。结果:ICP及ICP伴糖尿病、ICP伴病毒性肝炎患者血清中牛磺胆酸(Taurocholicacid,TCA)、牛磺鹅脱氧胆酸(Taurochenodeoxycholic acid,TCDCA)、牛磺脱氧胆酸(Taurodeoxycholic acid,TDCA)分别比正常孕妇有10倍、5倍和3倍以上的显著性增高(P<0.01)。ICP及ICP伴糖尿病、ICP伴病毒性肝炎三组间TCA和TCDCA的差异均有显著性(P<0.05)。结论:ICP患者有特征的血清牛磺结合型胆汁酸变化。 展开更多
关键词 胆汁酸 血清 妊娠肝内胆汁淤积症 高效液相色谱 串联质谱
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核仁磷酸蛋白突变基因表达对NIH3T3细胞增殖和凋亡的影响 被引量:4
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作者 邵会媛 杨再林 +5 位作者 高玉洁 苗宗玉 覃凤娴 陈先春 蔡晓钟 张伶 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期783-786,共4页
目的探讨核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM)突变基因对小鼠NIH3T3成纤维细胞系体外增殖和凋亡的影响以及其分子机制。方法通过脂质体介导将真核表达载体pEGFP-C1-NPMc+转染NIH3T3细胞,G418筛选稳定表达NPM突变蛋白细胞株,RT-PCR和Western... 目的探讨核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM)突变基因对小鼠NIH3T3成纤维细胞系体外增殖和凋亡的影响以及其分子机制。方法通过脂质体介导将真核表达载体pEGFP-C1-NPMc+转染NIH3T3细胞,G418筛选稳定表达NPM突变蛋白细胞株,RT-PCR和Western blot检测NPM突变基因和蛋白的表达。MTT、克隆形成实验检测细胞体外增殖能力;FCM检测细胞周期分布及凋亡水平的改变,并通过对周期调控因子p21及凋亡相关分子Caspase-3活性检测,初步探讨NPM突变参与细胞恶性增殖的分子机制。结果建立了稳定表达NPM突变基因的NIH3T3细胞株。NPM-mA实验组细胞较对照组细胞增殖能力及平板克隆形成率明显增高(P<0.05);甲基纤维素集落形成实验显示各组细胞在甲基纤维素上均不能形成集落;与对照组比较,NPM-mA实验组细胞中G1期细胞比例(42.27±0.86)%显著减低(P<0.01),S期细胞比例(43.08±0.74)%显著增加(P<0.01),同时伴有p21 mRNA水平下降,稳定表达NPM突变基因的NIH3T3细胞凋亡率(1.00±0.13)%明显降低(P<0.01),Caspase-3活性(0.784±0.080)下降(P<0.01)。结论NPM突变基因可促进NIH3T3细胞体外增殖,抑制细胞凋亡发生。 展开更多
关键词 核仁磷酸蛋白 突变 细胞增殖 细胞凋亡 NIH3T3细胞
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结肠癌中S100A2的表达及其与Wnt/β-catenin通路的相关性 被引量:6
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作者 杨勇 朱明才 +1 位作者 段亮 周兰 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第15期1576-1579,共4页
目的探讨钙结合蛋白S100A2与Wnt/β-catenin信号通路关键分子β-catenin、pGSK-3β在人结肠癌组织中的表达和意义以及相关性。方法采用免疫组化和Western blot方法检测42例结肠癌及癌旁正常组织中S100A2、β-catenin和pGSK-3β的表达情... 目的探讨钙结合蛋白S100A2与Wnt/β-catenin信号通路关键分子β-catenin、pGSK-3β在人结肠癌组织中的表达和意义以及相关性。方法采用免疫组化和Western blot方法检测42例结肠癌及癌旁正常组织中S100A2、β-catenin和pGSK-3β的表达情况,分析它们与结肠癌临床病理参数的关系,进一步采用Pearson等级相关分析其相关性。结果①免疫组化显示S100A2和β-catenin主要定位于癌细胞核和(或)细胞质,而pGSK-3β主要定位于癌细胞质;②Western blot结果显示S100A2、β-catenin和pGSK-3β在结肠癌组织中均高表达,明显高于癌旁正常组织(P<0.01),三者在结肠癌DukesC+D期中的表达明显高于A+B期(P<0.01),在有淋巴结转移组的表达明显高于无淋巴结转移组(P<0.01);③S100A2分别与β-catenin、pGSK-3β的表达呈明显正相关(r=0.637,P<0.01;r=0.626,P<0.01)。结论 S100A2可能通过调节Wnt/β-catenin通路关键分子而参与结肠癌的发生、发展。 展开更多
关键词 结肠癌 S100A2 WNT/Β-CATENIN
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GST-hS100A9融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定 被引量:3
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作者 游莉 徐兰兰 +5 位作者 郭元元 邹正渝 黎玉叶 孙双双 罗进勇 周兰 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期253-256,共4页
目的制备GST-hS100A9融合蛋白。方法从pHAHA-hS100A9中PCR扩增获取hS100A9基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-hS100A9;后者转化BL21菌后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组菌表达融合蛋白GST-hS100A9,经谷胱甘肽-琼脂... 目的制备GST-hS100A9融合蛋白。方法从pHAHA-hS100A9中PCR扩增获取hS100A9基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-hS100A9;后者转化BL21菌后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组菌表达融合蛋白GST-hS100A9,经谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠(GS4BB)分离纯化、SDS-PAGE及Western blot鉴定,BCA法蛋白定量,CCK-8测定GST-hS100A9对乳腺癌细胞MCF-7增殖的作用。结果经酶切、测序分析证实pGST-hS100A9质粒构建正确;重组菌株经IPTG诱导后,表达相对分子质量约36 000的蛋白;纯化后纯度达94%;该蛋白可被S100A9的抗体特异识别;该蛋白产量约为20 mg/L菌液;且其抑制MCF-7的增殖。结论成功构建GST-hS100A9融合蛋白的原核表达质粒pGST-hS100A9;该质粒可在BL21中诱导表达GST-hS100A9,产率高,且对MCF-7增殖有抑制作用。 展开更多
关键词 GST-hS100A9融合蛋白 诱导表达 蛋白纯化 蛋白鉴定
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肿瘤坏死因子-α抗结核免疫作用研究进展 被引量:16
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作者 陶昆(综述) 卢贤瑜(审校) 《国际检验医学杂志》 CAS 2006年第2期143-145,共3页
肿瘤坏死因子α(TNFα)是一种多功能的细胞因子,在机体抗结核免疫中扮演着重要角色。它不仅参与巨噬细胞抵抗结核杆菌的感染和结核性肉芽肿的形成,还能诱导巨噬细胞凋亡和其他抗结核细胞因子的释放,同时在铁介导的结核杆菌生长抑制中起... 肿瘤坏死因子α(TNFα)是一种多功能的细胞因子,在机体抗结核免疫中扮演着重要角色。它不仅参与巨噬细胞抵抗结核杆菌的感染和结核性肉芽肿的形成,还能诱导巨噬细胞凋亡和其他抗结核细胞因子的释放,同时在铁介导的结核杆菌生长抑制中起着重要作用。此外,TNFα对结核杆菌休眠状态的维持也不可或缺。本文主要从上述几个方面简要介绍TNFα抗结核的免疫保护作用。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子-Α 分支杆菌 结核 结核/免疫学
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分枝杆菌特征性蛋白的筛选 被引量:3
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作者 胡琦 杨永长 +5 位作者 黄文芳 刘华 喻华 肖代雯 黄波 冯文莉 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2008年第6期541-543,共3页
目的研究分枝杆菌蛋白表达,筛选分枝杆菌特征性蛋白,为分枝杆菌的快速鉴定奠定基础。方法选取分枝杆菌标准菌株,提取细菌蛋白,干化学法测蛋白浓度,应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)检测分枝杆菌蛋白表达,和非分... 目的研究分枝杆菌蛋白表达,筛选分枝杆菌特征性蛋白,为分枝杆菌的快速鉴定奠定基础。方法选取分枝杆菌标准菌株,提取细菌蛋白,干化学法测蛋白浓度,应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)检测分枝杆菌蛋白表达,和非分枝杆菌蛋白指纹图谱比较,筛选分枝杆菌特征性蛋白。重复测定20次分枝杆菌蛋白标本,评价SELDI检测分枝杆菌蛋白分子量的重复性。结果耻垢分枝杆菌ATCC 14468有约20个蛋白峰,结核分枝杆菌ATCC 25177、土地分枝杆菌ATCC 15755、胞内分枝杆菌ATCC 13950、耻垢分枝杆菌ATCC 607有近40个蛋白峰。与非分枝杆菌蛋白指纹图谱相比,4个蛋白峰为分枝杆菌所特有。SELDI重复检测20次分枝杆菌蛋白标本显示同一蛋白峰的分子量变异系数≤0.05%。结论分枝杆菌有其特征性蛋白峰,可能有助于分枝杆菌的快速鉴定。 展开更多
关键词 分枝杆菌 特征性蛋白 表面增强激光解吸电离飞行时间质谱
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PLCε shRNA质粒构建及功能鉴定 被引量:2
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作者 郭永灿 罗春丽 +3 位作者 颜令 欧俐苹 赵懿 蔡晓钟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第17期1657-1660,共4页
目的构建PLCε基因的shRNA表达载体及其功能鉴定。方法设计并合成针对PLCε基因mRNA的寡核苷酸序列,插入绿色荧光蛋白质粒真核表达载体pGenesil中构建重组载体pGenesil-PLCε。重组载体经酶切、测序鉴定后转染膀胱癌细胞,RT-PCR及Wester... 目的构建PLCε基因的shRNA表达载体及其功能鉴定。方法设计并合成针对PLCε基因mRNA的寡核苷酸序列,插入绿色荧光蛋白质粒真核表达载体pGenesil中构建重组载体pGenesil-PLCε。重组载体经酶切、测序鉴定后转染膀胱癌细胞,RT-PCR及Western blot检测对膀胱癌细胞株PLCε的抑制作用,流式细胞术(FCM)及MTT检测其对膀胱癌细胞株增殖活力影响。结果成功构建了针对2个PLCε基因的shRNA表达载体。RT-PCR、Western blot检测结果显示:2个重组质粒载体转染T24细胞株后对PLCεmRNA及对PLCε蛋白表达均有明显抑制,流式细胞术结果表明细胞阻滞于G0/G1期,MTT检测表明重组的载体质粒明显抑制T24细胞增殖活力。结论针对PLCε基因的shRNA能有效抑制膀胱癌T24细胞中PLCε基因的表达及膀胱癌细胞增殖。 展开更多
关键词 载体构建 膀胱癌 SHRNA PLCε
原文传递
带核定位信号的维甲酸受体α与Ubiquilin 1蛋白相互作用的验证(英文) 被引量:2
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作者 朱丹 王翀 +3 位作者 刘北忠 吴燕 钟梁 王春光 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期649-654,共6页
目的:验证带有核定位信号的维甲酸受体α(nuclear localization signal-retinoic acid receptorα,NLS-RARα)与Ubiquilin 1(UBQLN1)蛋白之间的相互作用。方法:将表达NLS-RARα诱饵蛋白和UBQLN1靶蛋白的两种重组表达质粒pGBKT7-NLS-RAR... 目的:验证带有核定位信号的维甲酸受体α(nuclear localization signal-retinoic acid receptorα,NLS-RARα)与Ubiquilin 1(UBQLN1)蛋白之间的相互作用。方法:将表达NLS-RARα诱饵蛋白和UBQLN1靶蛋白的两种重组表达质粒pGBKT7-NLS-RARα及pACT2-UBQLN1共转化AH109酵母菌,通过酵母双杂交技术验证两者在活细胞内的相互作用;构建真核细胞表达载体pCMV-HA-NLS-RARα和pCMV-Myc-UBQLN1,经酶切鉴定后,共转染HEK293细胞,利用抗HA多克隆抗体沉淀,抗Myc单克隆抗体检测验证他们之间的相互作用。结果:pGBKT7-NLS-RARα及pACT2-UBQLN1质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆;构建的重组表达载体pCMV-HA-NLS-RARα和pCMV-Myc-UBQLN1经酶切鉴定成功,转染HEK293细胞后,用免疫共沉淀技术检测到Myc-UBQLN1蛋白的表达。结论:酵母双杂交和免疫共沉淀技术可验证NLS-RARα与UBQLN1之间存在相互作用。 展开更多
关键词 酵母双杂交 免疫共沉淀 蛋白质相互作用
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