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NK4基因的克隆及其在Raji细胞中的表达 被引量：5
1
作者 滑世轩 岑东 +3 位作者 赵行 吕建新 涂植光 裴仁治 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期970-975,共6页
目的:克隆NK4基因,构建其重组真核表达载体,并观察其在Raji细胞中的表达。方法:从人肝组织中提取总RNA,行RT-PCR获得NK4基因cDNA,与载体pVITRO2-mcs构建重组真核表达载体,转染Raji细胞。潮霉素B筛选后,采用实时荧光定量PCR、ELISA、细... 目的:克隆NK4基因,构建其重组真核表达载体,并观察其在Raji细胞中的表达。方法:从人肝组织中提取总RNA,行RT-PCR获得NK4基因cDNA,与载体pVITRO2-mcs构建重组真核表达载体,转染Raji细胞。潮霉素B筛选后,采用实时荧光定量PCR、ELISA、细胞免疫组化和半固体培养等方法检测NK4基因在Raji细胞的表达,筛选稳定表达的细胞株。结果:NK4基因获成功克隆并构建了重组真核表达载体pVITRO2-mcs-NK4;转染NK4基因后的Raji细胞经RT-PCR发现存在特异性DNA片段。NK4基因在Raji细胞可稳定表达NK4mR-NA和蛋白,且可抑制Raji细胞的增殖、迁徙和侵袭。结论:NK4基因成功克隆并构建了重组真核表达载体,转染Raji细胞后表达稳定。 展开更多
关键词 基因 NK4 克隆 基因表达 RAJI细胞
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肝功能相关的血清酶学研究进展 被引量：31
2
作者 俸家富 涂植光 《医学综述》 2007年第3期225-231,共7页
肝病是一种常见疾病,肝病的种类较多,但鉴别诊断常常较难。血清酶常用于肝病的诊断或鉴别诊断、疗效观察和预后评估,本文罗列了目前用于反映肝脏损害的酶类,较为全面的综述了血清酶在评价肝功能方面的临床应用。
关键词 肝疾病 血清 酶 肝功能实验
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HGF mRNA实时荧光定量PCR在淋巴瘤的应用
3
作者 岑东 吕建新 +4 位作者 裴仁治 涂植光 余晓林 文阳安 滑世轩 《浙江检验医学》 2008年第1期26-30,共5页
目的构建肝细胞生长因子(HGF)mRNA定量标准,建立实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测体系,探讨在淋巴瘤的应用价值。方法提取总RNA,行RT-PCR,获HGF cDNA目标片段并构建重组质粒,作为定量标准。设计第二引物对和探针,确定扩增条件,优化组分浓度... 目的构建肝细胞生长因子(HGF)mRNA定量标准,建立实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测体系,探讨在淋巴瘤的应用价值。方法提取总RNA,行RT-PCR,获HGF cDNA目标片段并构建重组质粒,作为定量标准。设计第二引物对和探针,确定扩增条件,优化组分浓度,建立HGF实时FQ-PCR检测体系,并进行方法学评价。应用该检测体系定量检测47例淋巴瘤的HGF mRNA表达,并采用受试者工作特征(ROC)曲线法,评价其在淋巴瘤诊断中的敏感度和特异度。结果成功构建了HGF定量标准,结合热启动PCR和降落PCR技术创建了HGF mRNA实时FQ-PCR检测体系。方法学评价实验表明:标准曲线的斜率为-3.513,相关系数为0.999,扩增效率达92.6%;批内、批间和日间变异系数分别为2.1%、4.0%和6.8%;灵敏度达2拷贝/μl。HGF mRNA在对照组和淋巴瘤组的表达分别为0.317±0.192和6.425±2.172,组间差异具统计学意义(P【0.001),但HD组和NHL组的表达无显著差异(P】0.05),而缓解组显著低于复发组(P【0.05)。ROC曲线法提示,当临床诊断界值为3.316时,HGF mRNA对淋巴瘤诊断敏感度和特异度分别为93.6%和100%。结论成功构建了HGF mRNA定量标准。建立的HGF mRNA FQ-PCR检测体系是理想的、可行的,可定量检测淋巴瘤HGF mRNA并具诊断价值。 展开更多
关键词 肝细胞生长因子 实时荧光定量PCR 淋巴瘤
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