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人参皂苷Rg1协同rhBMP-2对人牙髓干细胞成牙分化作用研究 被引量：6
1
作者 王萍 周玥 王亚平 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期89-91,共3页
目的:探讨不同浓度人参皂苷Rg1、重组骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)及两者联合应用对体外培养的人牙髓干细胞(DPSCs)成牙分化的影响。方法:酶消化法获得DPSCs,采用碱性磷酸酶(ALP)活性检测和实时荧光定量RT-PCR测定牙本质涎磷蛋白1(DSPP)和... 目的:探讨不同浓度人参皂苷Rg1、重组骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)及两者联合应用对体外培养的人牙髓干细胞(DPSCs)成牙分化的影响。方法:酶消化法获得DPSCs,采用碱性磷酸酶(ALP)活性检测和实时荧光定量RT-PCR测定牙本质涎磷蛋白1(DSPP)和牙本质基质蛋白1(DMPl)mRNA的表达以检测不同浓度人参皂苷Rg1(0.1,0.5,2.5,5,10,20μmol/L)及rhBMP-2(25,50,100,200ng/ml)单独及联合应用对DP-SCs成牙分化的影响。结果:人参皂苷Rg1(2.5,5和10μmol/L)组的ALP活性明显高于同期对照组(P<0.001),5μmol/L组ALP活性明显高于其它浓度组(P<0.001);浓度为50,100,200ng/ml的rhBMP-2其ALP活性明显高于同期对照组(P<0.001),100ng/ml rhBMP-2组ALP活性最强。联合应用人参皂苷Rg1(5μmol/L)和rhBMP-2(100ng/ml)DSPP和DMP1 mRNA的表达明显高于单独应用组(P<0.001)。结论:人参皂苷Rg1可促进体外培养的DPSCs成牙本质分化,人参皂苷:Rg1协同rhBMP-2能明显增强DPSCs成牙本质分化。 展开更多
关键词 人参皂苷RG1 骨形态发生蛋白2 牙髓干细胞 分化
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脑缺血后移植骨髓神经组织定向干细胞的分布与分化
2
作者 李琳 张兴秀 +2 位作者 王健 姜容 郑敏 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1031-1035,共5页
目的观察骨髓神经组织定向干细胞(NTCSCs)经静脉移植后在脑缺血大鼠脑内的分布和分化情况。方法采用DMEM/F12(1:1)无血清神经干细胞条件培养基,从SD大鼠骨髓中分离、培养NTCSCs,应用免疫组化法对所获细胞及其分化情况进行鉴定,RT-PCR检... 目的观察骨髓神经组织定向干细胞(NTCSCs)经静脉移植后在脑缺血大鼠脑内的分布和分化情况。方法采用DMEM/F12(1:1)无血清神经干细胞条件培养基,从SD大鼠骨髓中分离、培养NTCSCs,应用免疫组化法对所获细胞及其分化情况进行鉴定,RT-PCR检测Nestin、CXCR4、CD31、βⅢ-tubulin及GFAP mRNA的表达水平。采用改良Zea-Longa线栓法制作SD大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,造模成功24h后经尾静脉注射1ml DAPI标记的NTCSCs。移植后第1、3、5、7d处死大鼠,制备脑组织冰冻切片,荧光显微镜观察NTCSCs在脑组织的分布,激光共聚焦显微镜观察NTCSCs的分化情况。结果分离培养获得的NTCSCs在神经干细胞培养条件下形成神经球,并表达神经干细胞标志巢蛋白Nestin及SDF-1受体CXCR4,可分化成βⅢ-tubulin、GFAP阳性细胞;RT-PCR检测结果显示NTCSCs表达Nestin、CXCR4、CD31、βⅢ-tubulin、GFAP mRNA。静脉移植后NTCSCs能够进入大鼠脑内,移植后第3天观察到DAPI标记的NTCSCs主要分布在缺血损伤部位,第7天时有少量NTCSCs分化为GFAP阳性细胞。结论分离培养的NTCSCs具有神经干细胞特性,移植后可能进入缺血脑组织,部分细胞表达GFAP。 展开更多
关键词 骨髓 神经组织定向干细胞 干细胞移植 颅内栓塞
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神经干细胞衰老与核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件信号通路的关系 被引量：7
3
作者 吴奇 王顺和 +7 位作者 程霄 向玥 陈粼波 汪子玲 肖含先之 姜蓉 王璐 王亚平 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期815-820,共6页
目的建立D-半乳糖(D-gal)诱导小鼠神经干细胞(NSCs)体外衰老模型,探讨NSCs衰老与细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路的关系。方法取新生C57BL/6J小鼠全脑,分离、鉴定NSCs,培养至第3代,随机分为对照组和衰老组。... 目的建立D-半乳糖(D-gal)诱导小鼠神经干细胞(NSCs)体外衰老模型,探讨NSCs衰老与细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路的关系。方法取新生C57BL/6J小鼠全脑,分离、鉴定NSCs,培养至第3代,随机分为对照组和衰老组。对照组细胞在NSCs培养基中常规培养48 h,衰老组细胞在对照组基础上加入D-gal(终浓度为10 g/L)。细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测NSCs增殖活力;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测衰老阳性神经球百分率;锥虫蓝染色检测细胞存活率;酶标比色法检测细胞培养上清液中超氧化物歧化酶(SOD)与过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;Western boltting检测NSCs中Nrf2和血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达水平;Real-time PCR检测GCLC和GCLM基因表达水平。结果与对照组相比,衰老组NSCs增殖活力明显下降,锥虫蓝染色显示,NSCs存活率下降明显,SA-β-gal染色阳性神经球百分率显著上升,SOD活性与CAT活性均显著降低,MDA含量显著升高,NSCs中Nrf2/ARE信号通路相关蛋白Nrf2和HO-1表达水平显著下调,通路相关GCLC和GCLM基因表达下调。结论采用D-gal可以构建NSCs体外衰老模型,其氧化损伤机制可能与抑制Nrf2/ARE抗氧化信号通路有关。 展开更多
关键词 D-半乳糖 神经干细胞 衰老 细胞核相关因子2/抗氧化反应原件信号通路 实时定量聚合酶链反应 小鼠
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小鼠造血干细胞体外衰老模型的构建及其相关生物学 被引量：4
4
作者 周玥 杨斌 +1 位作者 姚欣 王亚平 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期686-692,共7页
目的建立造血干细胞(HSCs)体外衰老模型,探讨其衰老的相关生物学调控机制,为寻找延缓HSC衰老方法奠定基础。方法用免疫磁性分选法分离、纯化小鼠Sca-1+HSCs,用流式细胞术鉴定分选细胞纯度,免疫荧光检测分选细胞Sca-1+表达。用三丁基过... 目的建立造血干细胞(HSCs)体外衰老模型,探讨其衰老的相关生物学调控机制,为寻找延缓HSC衰老方法奠定基础。方法用免疫磁性分选法分离、纯化小鼠Sca-1+HSCs,用流式细胞术鉴定分选细胞纯度,免疫荧光检测分选细胞Sca-1+表达。用三丁基过氧化氢(t-BHP)100μmol/L诱导Sca-1+HSCs 6h,建立HSCs衰老体外模型。采用造血祖细胞集落培养,细胞周期分析和衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察衰老HSCs的生物学特点。DNA印迹法(Southern blotting)与TRAP-PCR SYBR Green染色法检测HSCs端粒长度和端粒酶活性。RT-PCR法检测衰老相关基因p16Ink4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1 mRNA的表达水平。结果免疫磁性分选法分离、纯化的Sca-1+HSCs纯度可达(87.33±1.25)%。100μmol/L的t-BHP作用Sca-1+HSCs 6h,其体外培养形成造血祖细胞集落能力,自我更新及多向分化潜能显著低于对照组,处于G1期细胞比例增加,SA-β-gal染色阳性细胞数增加。衰老Sca-1+HSCs的端粒缩短,端粒酶活性下降,p16Ink4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1mRNA的表达水平明显增高。结论用t-BHP能建立Sca-1+HSCs体外细胞衰老模型,提示p16Ink4a-Rb通路和p19Arf-Mdm2-p53-p21Cip1/Waf1通路在t-BHP诱导Sca-1+HSCs衰老过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 造血干细胞 衰老 体外模型 端粒 端粒酶 衰老相关β-半乳糖苷酶染色 流式细胞术 反转录-聚合酶链反应 小鼠
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不可逆性电穿孔致山羊肝脏组织凋亡与坏死的实验研究 被引量：4
5
作者 刘颖 周玮 +3 位作者 熊正爱 李成祥 姚陈果 姜蓉 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期356-360,共5页
目的评价不可逆性电穿孔(IRE)消融山羊肝脏组织的效果,以及消融区域肝细胞坏死、凋亡与电场分布的关系。方法取4～6月龄山羊作为研究对象,对其给予IRE处理:经彩色超声探头引导电极针经皮定位肝脏,施加120个脉冲电场(固定电压2000V、脉宽... 目的评价不可逆性电穿孔(IRE)消融山羊肝脏组织的效果,以及消融区域肝细胞坏死、凋亡与电场分布的关系。方法取4～6月龄山羊作为研究对象,对其给予IRE处理:经彩色超声探头引导电极针经皮定位肝脏,施加120个脉冲电场(固定电压2000V、脉宽100μs、频率1Hz)。24h后处死动物,取电极针周围肝脏组织标本(包括脉冲电场处理区域中心部分和处理区域与正常组织交界区)和正常组织(作为对照)。将标本进行处理后,分别行HE染色观察组织的病理学变化;采用DNA ladder和TUNEL法检测组织细胞凋亡,采用流式细胞仪分析细胞周期。结果病理学观察可见,消融处理区的肝细胞完全坏死,与正常组织分界清晰,围绕电极针的中心区域呈现凝固性坏死。TUNEL法显示凋亡细胞主要集中在处理区与正常组织的交界区。DNA ladder法在处理区与正常组织交界区组织检测到400～1000bp的梯状条带。流式细胞术分析显示,脉冲电场处理区细胞DNA二倍体峰前面出现亚二倍体凋亡峰。结论采用IRE消融山羊肝脏组织,细胞在电场强度分布最高处(即围绕电极针的中心区域)呈现凝固性坏死;在电极针周边处理区域,随电场强度衰减,肝细胞仍呈现出凋亡迹象。 展开更多
关键词 脉冲电场 电穿孔 不可逆性 肝脏 凋亡 坏死
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重庆医科大学附属儿童医院过敏性鼻炎患儿吸入性变应原特应性阳性率变化趋势分析 被引量：4
6
作者 袁龙 李科琼 +5 位作者 陈益 王宏 白燕 袁轲 李静 陈地龙 《中国实用儿科杂志》 CSCD 北大核心 2016年第12期937-940,共4页
目的观察重庆医科大学附属儿童医院0～12岁过敏性鼻炎（allergic rhinitis，AR）患儿吸入性变应原流行变化趋势，为儿童过敏性鼻炎防治方向提供科学依据。方法选取2006年1月至2013年10月就诊于重庆医科大学附属儿童医院耳鼻喉科的重庆地... 目的观察重庆医科大学附属儿童医院0～12岁过敏性鼻炎（allergic rhinitis，AR）患儿吸入性变应原流行变化趋势，为儿童过敏性鼻炎防治方向提供科学依据。方法选取2006年1月至2013年10月就诊于重庆医科大学附属儿童医院耳鼻喉科的重庆地区0～12岁通过皮肤点刺试验（skin pricktest，SPT）确诊的过敏性鼻炎患儿10983例．按年龄分为幼儿（〈3岁）、学龄前儿童（≥3～7岁）、学龄儿童（≥7～12岁）三组。回顾性分析患儿吸入性变应原随时间的流行变化趋势。结果2006--2013年间重庆医科大学附属儿童医院AR患儿吸入性变应原特应性阳性率呈现先上升后下降的趋势（二次曲线模型：R^2=0．836，校正R^2=0．770；回归模型的ANOVA检验：F=12．727，P=0．011），且与气象因素有一定相关性；随着年龄增长，屋尘螨、粉尘螨、热带螨、蟑螂、猫毛、狗毛、艾蒿阳性率总体上呈上升趋势（分别为121．200、123．060、103．237、104．784、17．042、8．515和11．256；P分别为0．000、0．000、0．000、0．000、0．000、0．014和0．004）。结论AR患儿吸入性变应原特应性阳性率的变化与该地区的气象因素、年龄有一定相关性，且随着年龄的增长，各变应原阳性率有趋势性。 展开更多
关键词 皮肤点刺试验 过敏性鼻炎 吸入性变应原 儿童
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当归多糖对K562细胞EpoR介导的信号转导通路研究 被引量：4
7
作者 宋姝丹 华自森 +1 位作者 王亚平 王建伟 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期15-18,共4页
目的:研究当归多糖(APS)对K562细胞中EpoR介导的JAK2/STAT5信号转导通路的影响。方法:实验分为APS组(200mg/L APS)及阴性对照组(常规培养) ,两组细胞培养24h加入5×103IU/L Epo刺激,Western blot法检测Epo刺激不同时间后K562细胞核... 目的:研究当归多糖(APS)对K562细胞中EpoR介导的JAK2/STAT5信号转导通路的影响。方法:实验分为APS组(200mg/L APS)及阴性对照组(常规培养) ,两组细胞培养24h加入5×103IU/L Epo刺激,Western blot法检测Epo刺激不同时间后K562细胞核、浆蛋白中JAK2、STAT5的表达变化;免疫沉淀法检测其活性改变;采用免疫细胞化学技术和荧光显微镜观察其分布。结果:两组细胞培养24h加入Epo继续刺激对JAK2的表达影响不大,但APS组JAK2的活性较阴性对照组增强;Epo继续刺激K562细胞核中STAT5的表达及活性APS组都较阴性对照组增强。结论:APS在促进正常造血过程中,可能在EpoR介导的信号转导过程中增强JAK2、STAT5的酪氨酸磷酸化发挥重要作用。 展开更多
关键词 当归多糖 K562 信号转导 JAK STAT
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骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠溃疡性结肠炎(英文) 被引量：2
8
作者 汪维伟 徐艳华 +2 位作者 姜蓉 段征 陈晓云 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第32期6025-6031,共7页
背景:近年已有干细胞移植修复慢性肠炎受损组织的报道,但其治疗机制尚不明确。目的:观察移植骨髓间充质干细胞在溃疡性结肠炎大鼠结肠的分布及分化情况,及对大鼠结肠黏膜的修复作用。方法:取经鉴定的第3代大鼠骨髓间充质干细胞1×10... 背景:近年已有干细胞移植修复慢性肠炎受损组织的报道,但其治疗机制尚不明确。目的:观察移植骨髓间充质干细胞在溃疡性结肠炎大鼠结肠的分布及分化情况,及对大鼠结肠黏膜的修复作用。方法:取经鉴定的第3代大鼠骨髓间充质干细胞1×106个,应用Hoechst 33342进行荧光标记,并将其经尾静脉移植入溃疡性结肠炎大鼠体内,分别于移植后3,7,14d取材。结果与结论:骨髓间充质干细胞移植后3d,大鼠结肠即可见荧光标记的细胞,移植后14d,大鼠结肠荧光标记细胞仍较多,此时可见部分标记细胞表达细胞角蛋白。同时骨髓间充质干细胞移植后14d,溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜白细胞介素10表达增高,肿瘤坏死因子α表达降低,结肠黏膜的病理损伤明显好转。说明移植的骨髓间充质干细胞可迁移至结肠溃疡部位并分化为上皮细胞,同时可通过调节炎性因子的表达促进溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜损伤的修复。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 移植 溃疡性结肠炎 细胞角蛋白 肿瘤坏死因子Α 白细胞介素10
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辐射损伤导致造血干/祖细胞衰老的机理研究 被引量：2
9
作者 张琛 孙可 +6 位作者 耿珊 刘典锋 张先平 刘俊 徐春燕 王建伟 王亚平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期233-236,241,共5页
目的探讨辐射损伤导致骨髓造血干/祖细胞(HSC/HPC)衰老的可能机制。方法雄性C57BL/6J小鼠随机分为辐照组和假辐照组,辐照组小鼠经6.5 Gy的X射线全身一次性辐照,假辐照组小鼠处理同辐照组,但不辐照。辐照后24 h免疫磁珠分选法分离并计数... 目的探讨辐射损伤导致骨髓造血干/祖细胞(HSC/HPC)衰老的可能机制。方法雄性C57BL/6J小鼠随机分为辐照组和假辐照组,辐照组小鼠经6.5 Gy的X射线全身一次性辐照,假辐照组小鼠处理同辐照组,但不辐照。辐照后24 h免疫磁珠分选法分离并计数两组小鼠的Sca-1+造血干/祖细胞细胞(Sca-1+HSC/HPC),流式细胞术检测细胞周期,β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测衰老细胞百分率;混合造血祖细胞集落(CFU-Mix)培养观察分选细胞增殖分化能力,单细胞凝胶电泳(SCGE)检测辐照导致细胞的DNA损伤,RT-PCR检测细胞衰老相关基因p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1mRNA的表达;Westernblot法检测p16INK4a、p21Cip1/Waf1蛋白表达。结果免疫磁性分析法分离纯度的Sca-1+HSC/HPC可达94%,辐照后小鼠每支股骨的Sca-1+HSC/HPC数量急剧下降,细胞出现G1期阻滞;形成CFU-Mix集落数量和形成集落的细胞数明显降低;SA-β-Gal染色阳性率显著增高,彗星实验显示细胞拖尾明显延长;p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1mRNA表达明显增强,p16INK4a、p21Cip1/Waf1蛋白的表达水平上调。结论辐射导致HSC/HPC DNA的损伤和衰老相关生物学改变,p16INK4a-Rb和p19Arf-p53-p21Cip1/Waf1信号通路可能起一定作用。 展开更多
关键词 造血干 祖细胞 电离辐照 细胞衰老 DNA损伤
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当归多糖诱导K562细胞向红系样细胞分化及其信号转导通路研究 被引量：2
10
作者 宋姝丹 华自森 +1 位作者 王建伟 王亚平 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期897-901,共5页
目的探讨当归多糖(APS)诱导K562细胞向红系样细胞分化相关的信号转导通路。方法实验分组:对照组采用常规方法培养;APS组在常规培养基础上加入APS(终浓度100～500mg/L),分别培养12h、1d、2d、3d。联苯胺染色与分光光度法检测经APS诱导后K... 目的探讨当归多糖(APS)诱导K562细胞向红系样细胞分化相关的信号转导通路。方法实验分组:对照组采用常规方法培养;APS组在常规培养基础上加入APS(终浓度100～500mg/L),分别培养12h、1d、2d、3d。联苯胺染色与分光光度法检测经APS诱导后K562细胞向红系样细胞分化的血红蛋白表达;激光扫描共焦显微镜观察JAK2、信号转导和转录激活因子5(STAT5)在各组细胞内的分布;Westernblotting检测细胞核、质蛋白中JAK2、STAT5的表达变化;免疫沉淀法检测质蛋白中JAK2的磷酸化改变。结果经APS诱导后K562细胞的联苯胺染色阳性率增高,随着APS诱导浓度增加K562细胞合成血红蛋白也增加;APS诱导K562细胞12h、24h和48h,核蛋白中STAT5表达较对照组增加,质蛋白中STAT5表达减少;APS组与对照组K562细胞的JAK2表达未见显著差异,但APS组的JAK2磷酸化强于对照组。结论APS可诱导K562细胞向红系样细胞分化,其机制可能与APS启动JAK2的酪氨酸磷酸化,继而引起STAT5核转位,通过信号转导通路的调控影响细胞的增殖分化。 展开更多
关键词 当归多糖 JAK2 转录激活因子5 信号转导 免疫印迹法 K562细胞
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包皮成纤维细胞的生物学特性研究 被引量：4
11
作者 黎晓莉 张雁 吴宏 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期41-44,共4页
目的：探讨人包皮成纤维细胞的生物学特性，为人胚胎生殖细胞（Human embryonic germ cells．hEG cell）长期体外培养打下基础。方法：探索分离包皮成纤维细胞的方法；采用免疫细胞化学法、MTT法、流式细胞术等对人包皮成纤维细胞进行... 目的：探讨人包皮成纤维细胞的生物学特性，为人胚胎生殖细胞（Human embryonic germ cells．hEG cell）长期体外培养打下基础。方法：探索分离包皮成纤维细胞的方法；采用免疫细胞化学法、MTT法、流式细胞术等对人包皮成纤维细胞进行生长形态观察，纯度鉴定，生长曲线及细胞周期检测，并就不同浓度丝裂霉素作用不同时间对人包皮成纤维细胞生长的影响进行研究。结果：0．25％胰酶，4℃消化过夜（12～16h）较37℃，5％CO2孵育2h更容易分离表皮和真皮；包皮成纤维细胞波形蛋白染色呈强阳性，纯度达95％以上；细胞生长曲线没有明显的滞留期，在1-6d处于快速增殖期，第7d开始处于平台期；细胞周期大多数处于Go／G，期，细胞周期与细胞生长曲线保持一致。丝裂霉素抑制包皮成纤维细胞增殖的适宜浓度及时间为12．5ug／ml作用2．5h。结论：包皮成纤维细胞的生物学特性表明其可以作为人EG细胞长期体外培养的饲养层。 展开更多
关键词 生物学特性 包皮成纤维细胞 饲养层
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人牙髓细胞的体外培养及生物学特性研究 被引量：2
12
作者 王萍 王亚平 +1 位作者 周玥 杨明聪 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期174-176,共3页
目的:从年轻恒牙的牙髓组织中分离培养牙髓细胞,研究其表型及生物学特性。方法:选取因正畸或阻生拔除的年轻健康双尖牙或第三磨牙,取出牙髓,组织块酶消化法分离培养人牙髓细胞,免疫细胞化学检测第3代人牙髓细胞表面标志,并对体外培养的... 目的:从年轻恒牙的牙髓组织中分离培养牙髓细胞,研究其表型及生物学特性。方法:选取因正畸或阻生拔除的年轻健康双尖牙或第三磨牙,取出牙髓,组织块酶消化法分离培养人牙髓细胞,免疫细胞化学检测第3代人牙髓细胞表面标志,并对体外培养的人牙髓细胞的矿化能力进行研究。结果:体外培养的人牙髓细胞表达Ⅰ型胶原及波形丝蛋白,少数细胞增殖可形成克隆并表达间充质干细胞的表面标志STRO-1。体外连续培养可形成钙化结节,加入矿化诱导液后钙化结节形成时间明显提前,牙髓细胞碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性增高。结论:人牙髓细胞中含有少量干细胞,体外培养的人牙髓细胞可向成牙本质细胞分化并形成钙化结节,体外矿化诱导可促进牙髓细胞向成牙本质细胞分化。 展开更多
关键词 牙髓细胞 细胞培养 矿化 碱性磷酸酶
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当归多糖对脐血造血细胞冷冻损伤的可恢复性研究 被引量：4
13
作者 杨慧 吴宏 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1684-1688,共5页
目的探讨当归多糖(APS)是否具有恢复脐血造血细胞冷冻损伤的作用及与造血生长因子(HGFs)联合促进冷冻复苏后脐血单个核细胞(MNC)体外扩增的效应。方法将冷冻30d的脐血MNC复苏后,立即在常规培养体系中分别加入APS0、50、100、200、400μg... 目的探讨当归多糖(APS)是否具有恢复脐血造血细胞冷冻损伤的作用及与造血生长因子(HGFs)联合促进冷冻复苏后脐血单个核细胞(MNC)体外扩增的效应。方法将冷冻30d的脐血MNC复苏后,立即在常规培养体系中分别加入APS0、50、100、200、400μg/mL,或同时加入HGFs组合,培养24h或14d,采用MNC计数,台盼蓝拒染实验、MTT法、CFU-Mix集落形成实验以及流式细胞术计数CD34+细胞等方法分别观察APS促进冷冻损伤的脐血造血细胞恢复的能力以及APS联合HGFs对脐血造血细胞的扩增能力。结果冷冻复苏后加入一定质量浓度的APS可使脐血MNC数量与台盼蓝拒染率明显增加,造血细胞的增殖能力显著提高,CFU-Mix集落产率明显提高(P<0.05),且能明显提高冻存脐血MNC中CD34+细胞率(P<0.05);一定质量浓度的APS联合HGFs可显著提高冷冻复苏后的脐血MNC扩增倍数及CFU-Mix集落产率(P<0.05);其作用无明显量效关系。结论APS能提高冷冻复苏后脐血造血细胞的活力、增殖能力以及CD34+细胞率,可促进脐血造血细胞冷冻损伤的恢复;与HGFs联合可促进冷冻复苏后的脐血MNC体外扩增。 展开更多
关键词 当归多糖(APS) 脐血 造血细胞 冷冻保存
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淫羊藿苷对糖尿病大鼠阴茎组织细胞凋亡及亚硝基谷胱甘肽还原酶表达的影响 被引量：2
14
作者 李丹 谢怡 魏莎莉 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期633-635,638,共4页
目的：探讨淫羊藿苷对糖尿病大鼠阴茎组织细胞凋亡以及亚硝基谷胱甘肽还原酶（GSNOR）表达的影响.方法：采用链尿佐菌素（STZ）建立糖尿病大鼠模型.分为正常对照组、糖尿病模型组、糖尿病淫羊藿苷干预组（高、中、低剂量分别为30、70、1... 目的：探讨淫羊藿苷对糖尿病大鼠阴茎组织细胞凋亡以及亚硝基谷胱甘肽还原酶（GSNOR）表达的影响.方法：采用链尿佐菌素（STZ）建立糖尿病大鼠模型.分为正常对照组、糖尿病模型组、糖尿病淫羊藿苷干预组（高、中、低剂量分别为30、70、100 mg·kg^-1·d^-1,灌胃,连用21 d）.TUNEL法检测阴茎组织细胞凋亡,免疫印迹检测GSNOR表达.结果：淫羊藿苷高、中剂量组阴茎勃起组织细胞凋亡指数降低,与模型组比较差异有统计学意义.淫羊藿苷干预组阴茎组织GSNOR蛋白表达增加,中、高剂量组与模型组比较差异有统计学意义.结论：淫羊藿苷能抑制糖尿病大鼠阴茎组织细胞凋亡并上调GSNOR蛋白表达. 展开更多
关键词 亚硝基谷胱甘肽还原酶 淫羊藿苷 糖尿病 阴茎海绵体 细胞凋亡
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放大倍数和包埋介质对睾丸组织体视学研究的影响 被引量：4
15
作者 赵圆宇 王亚平 +2 位作者 郭洋 张仁东 杨正伟 《中国体视学与图像分析》 2010年第2期191-194,共4页
目的比较不同放大倍数和包埋介质对睾丸组织体视学研究的影响。方法不同放大倍数(10×、40×物镜和100×油镜)下观察石蜡(7μm)和甲基丙烯酸树脂(25μm)包埋的睾丸切片,利用体视学方法测量睾丸内生精小管、间质及间质内的... 目的比较不同放大倍数和包埋介质对睾丸组织体视学研究的影响。方法不同放大倍数(10×、40×物镜和100×油镜)下观察石蜡(7μm)和甲基丙烯酸树脂(25μm)包埋的睾丸切片,利用体视学方法测量睾丸内生精小管、间质及间质内的空隙、生精细胞核的体积分数,以及生精小管和早期圆形精子细胞核的直径。结果不同放大倍数对生精小管体积分数的估计无显著性影响。与树脂切片相比,石蜡切片估计的生精小管的体积分数明显减少了16.9%～17.5%,生精小管直径、生精小管内生精细胞核的体积分数和早期圆形精子细胞核的直径分别明显减少了17.1%、26.6%和10.8%。石蜡切片睾丸内空隙的体积分数为20%～24%,而树脂切片几乎无这种空隙。结论放大倍数对睾丸组织绝大多数体视学参数估计无显著影响,而包埋介质影响较大。石蜡包埋使睾丸内各组织结构明显皱缩,生精小管之间出现明显空隙。 展开更多
关键词 生精小管 睾丸 石蜡 甲基丙烯酸树脂 放大倍数 体视学
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氧化低密度脂蛋白可促进小鼠造血干细胞衰老 被引量：1
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作者 张先平 张贵海 +5 位作者 文坤明 刘俊 徐春燕 王璐 姜蓉 王亚平 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期189-193,共5页
目的观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对造血干细胞(HSCs)细胞周期调控基因p16、p21、CDK2、CDK4及细胞周期蛋白(cyclinD)表达的影响,探讨ox-LDL诱导HSCs衰老的可能分子机制。方法采用免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1+HSCs,并与ox-LDL共培... 目的观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对造血干细胞(HSCs)细胞周期调控基因p16、p21、CDK2、CDK4及细胞周期蛋白(cyclinD)表达的影响,探讨ox-LDL诱导HSCs衰老的可能分子机制。方法采用免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1+HSCs,并与ox-LDL共培养,通过衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测衰老HSCs,四唑氮盐(MTS)比色法与多向造血祖细胞(CFU-Mix)混合集落培养检测HSCs自我更新能力和多向分化潜能,流式细胞术分析细胞周期分布,荧光定量PCR及Western blotting检测HSCs p16、p21、CDK2、CDK4及cyclinD表达。结果与对照组比较,ox-LDL能增加HSCs SA-β-Gal染色阳性细胞率;促进HSCs停滞于G1期,G0/G1期细胞增多、S期细胞减少,减弱HSCs自我更新与多向分化能力;ox-LDL能上调HSCs p16和p21 mRNA及蛋白表达水平,下调CDK4及cyclinD蛋白表达,而对CDK2蛋白表达无影响。结论 ox-LDL能通过上调p16、p21表达及下调CDK4、cyclinD表达,在体外促进HSCs衰老。 展开更多
关键词 衰老 造血干细胞 氧化低密度脂蛋白 细胞周期 流式细胞术 小鼠
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氧化低密度脂蛋白通过氧化应激诱导小鼠造血干细胞衰老 被引量：1
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作者 张先平 张贵海 +4 位作者 陈斌 刘俊 魏强 王璐 王亚平 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2013年第2期172-178,共7页
目的探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)体外诱导造血干细胞(HSCs)衰老的可能机制。方法用免疫磁性分选法分离纯化小鼠HSC,与ox-LDL共培养,采用β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测衰老HSC,流式细胞术检测HSC细胞周期分布,混合集落培养(CFU-Mix... 目的探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)体外诱导造血干细胞(HSCs)衰老的可能机制。方法用免疫磁性分选法分离纯化小鼠HSC,与ox-LDL共培养,采用β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测衰老HSC,流式细胞术检测HSC细胞周期分布,混合集落培养(CFU-Mix)检测HSC混合集落形成能力。流式细胞术和免疫荧光检测HSC产生活性氧(ROS)的量,酶学比色法检测HSC培养上清液超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)含量。Southern blot和TRAP-PCR法检测HSC端粒长度和端粒酶活性。结果 ox-LDL诱导HSC呈现典型的衰老生物学表现:SA-β-Gal染色阳性细胞率显著增高(P<0.01);G0/G1期比例明显增加,S期显著减少(P<0.01);CFU-Mix数量显著减少(P<0.01)。衰老HSC端粒缩短(P<0.05),端粒酶活性降低(P<0.05)。衰老HSC ROS含量显著增加(P<0.01),细胞培养上清液中SOD、GSH-Px活力下降、MDA含量增加(P<0.05)。结论 ox-LDL能通过氧化应激诱导HSC衰老,其机制可能与ROS的蓄积及抗氧化酶活性受抑引起端粒功能异常有关。 展开更多
关键词 衰老 造血干细胞 氧化低密度脂蛋白 氧化应激
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造血干细胞衰老模型的建立及其评价 被引量：1
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作者 杨斌 周玥 王亚平 《解剖科学进展》 CAS 2009年第3期315-317,323,共4页
造血干细胞衰老模型的建立是研究造血干细胞衰老机理与延缓其衰老的重要途径,目前可通过体内和体外两种途径实现。体内衰老模型可通过供体造血干细胞在受体内连续性移植建立,体外衰老模型可通过白消安、三丁基过氧化氢等致衰老药物和电... 造血干细胞衰老模型的建立是研究造血干细胞衰老机理与延缓其衰老的重要途径,目前可通过体内和体外两种途径实现。体内衰老模型可通过供体造血干细胞在受体内连续性移植建立,体外衰老模型可通过白消安、三丁基过氧化氢等致衰老药物和电离辐射等方法建立。造血干细胞衰老模型建立后,可通过其自我更新和多向分化能力检测、细胞周期分析、β-半乳糖苷酶染色等方法检测和评价造血干细胞的衰老变化,并应用Southern bloting,Western bloting,RT-PCR等方法检测造血干细胞衰老相关基因和蛋白变化。本文就造血干细胞衰老模型的建立以及评价方法综述如下。 展开更多
关键词 细胞衰老模型 造血干细胞 β-半乳糖苷酶染色 三丁基过氧化氢 细胞周期分析 衰老相关基因 RT-PCR 衰老机理
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神经干细胞体外衰老模型的构建及相关生物学特点
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作者 彭彬 王朝丽 +1 位作者 冯丽 王亚平 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第49期9241-9246,共6页
背景:干细胞衰老主要表现为其增殖、分化能力下降,端粒长度缩短及端粒酶活性增强以及衰老相关基因及蛋白的表达上调等。目的:建立神经干细胞体外衰老模型,探讨其衰老的相关生物学特点及调控机制。方法:将从新生SD大鼠海马组织中分离纯... 背景:干细胞衰老主要表现为其增殖、分化能力下降,端粒长度缩短及端粒酶活性增强以及衰老相关基因及蛋白的表达上调等。目的:建立神经干细胞体外衰老模型,探讨其衰老的相关生物学特点及调控机制。方法:将从新生SD大鼠海马组织中分离纯化的第3代神经干细胞在37℃、体积分数5%CO2和神经干细胞完全培养基中培养2h为对照组,在对照组基础上加入终浓度为100μmol/L三丁基过氧化氢培养2h构建神经干细胞体外衰老模型为衰老模型组。结果与结论:与对照组比较,三丁基过氧化氢作用2h,倒置显微镜下见衰老模型组神经干细胞增殖形成的神经球数量、体积以及由其分化形成的细胞数量均显著下降;MTT吸光度值显著下降26%,神经干细胞增殖形成的神经球数量下降48%;神经干细胞分化形成的神经元的数密度显著下降61%;衰老相关β-半乳糖苷酶阳性神经球百分比显著升高了19倍;p16INK4a、p21Cip1/Waf1mRNA的表达水平分别显著升高了137%和68%。以上结果表明,三丁基过氧化氢能构建神经干细胞体外衰老模型,p16INK4、p21Cip1/Waf1可能通过p16/RB和p19ARF/p53/p21cip1通路调控三丁基过氧化氢诱导神经干细胞衰老。 展开更多
关键词 神经干细胞 衰老 体外模型 三丁基过氧化氢 大鼠
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切片位置对兔睾丸组织体视学研究的影响
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作者 赵圆宇 王亚平 +2 位作者 郭洋 张仁东 杨正伟 《中国体视学与图像分析》 2010年第4期428-431,共4页
目的比较不同包埋介质内切片位置对成年新西兰大耳白兔睾丸组织体视学研究的影响。方法将成年雄性新西兰大耳白兔麻醉后,随机抽选一侧睾丸经Bouin液固定后从中央及两端(垂直于睾丸中心长轴)切取共三个平行组织薄片。将每个组织薄片平分... 目的比较不同包埋介质内切片位置对成年新西兰大耳白兔睾丸组织体视学研究的影响。方法将成年雄性新西兰大耳白兔麻醉后,随机抽选一侧睾丸经Bouin液固定后从中央及两端(垂直于睾丸中心长轴)切取共三个平行组织薄片。将每个组织薄片平分为二,再随机将其中一块平分得到2个(1/4圆)组织块,分别随机采用羟乙基甲基丙烯酸树脂或石蜡包埋、切片和染色后,在低倍镜(10×)下分别对睾丸组织树脂切片(25μm)和石蜡切片(7μm)不同切片位置进行观察:紧贴白膜选择若干视野(所有视野间无任何重叠),再向扇形切片中心连续选择3个视野,利用体视学方法估计各视野睾丸组织内生精小管的体积分数。结果石蜡切片较树脂切片估计的生精小管体积分数减少15.9%;树脂切片不同部位估计的生精小管体积分数无差异,而石蜡切片不同部位估计的结果存在差异:距离白膜愈远,体积分数愈小,近切片中心与近白膜相比显著减少了30.1%。结论石蜡包埋能引起睾丸组织不均匀皱缩,因此,当应用石蜡切片进行睾丸体积分数研究时,应考虑不均匀组织皱缩因素。 展开更多
关键词 生精小管 切片位置 甲基丙烯酸树脂 石蜡 体视学
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