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PKH26标记大鼠骨髓间质干细胞的实验研究 被引量：2
1
作者 杨欢 许文荣 +5 位作者 朱伟 王兴忠 乔纯 胡嘉波 钱晖 陈永昌 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期745-749,754,共6页
目的建立PKH26标记大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)的方法,并探讨标记MSCs的基本生物学活性。方法大鼠MSCs按PKH26标记程序进行标记后培养,采用激光共聚焦显微镜、流式细胞分析仪等观察细胞生长状态和荧光标记活性变化;应用RT-PCR检测标记后M... 目的建立PKH26标记大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)的方法,并探讨标记MSCs的基本生物学活性。方法大鼠MSCs按PKH26标记程序进行标记后培养,采用激光共聚焦显微镜、流式细胞分析仪等观察细胞生长状态和荧光标记活性变化;应用RT-PCR检测标记后MSCs的GAPDH、nucleostemin及Bmi-1基因的表达;选用碱性磷酸酶染色、Von Kossa染色及骨形成蛋白3(BMP3)基因表达分析等技术,观察标记后MSCs体外分化成骨细胞的特性。结果PKH26标记后细胞呈红色荧光,荧光的强度随着PKH26浓度的增加而递增,并与传代时间和代数相关;标记后细胞生长状态良好,基本生长特性如传代培养和生长曲线无明显改变;细胞GAPDH、nucleostemin及Bmi-1基因表达未见改变;标记MSCs诱导后ALP、Von Kossa染色阳性,呈现典型的成骨细胞形态和生物学特征,并表达BMP3基因。结论PKH26可稳定标记大鼠骨髓MSCs并能传代培养,标记后细胞形态、生长活力及多向分化潜能等无明显影响,该技术可用于追踪MSCs转归、可塑性及干细胞移植方面的实验研究。 展开更多
关键词 骨髓间质干细胞 PKH26 成骨细胞 RT-PCR
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人脐带间质干细胞来源的exosomes对肝细胞过氧化损伤的保护作用 被引量：2
2
作者 王冰莹 肖宇晴 +8 位作者 蒋留留 李里明 李霞 贾浩源 周颖 叶惠慧 许文荣 严永敏 钱晖 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期455-458,共4页
目的探讨人脐带间质干细胞来源的exosomes(hucMSC-Ex)对四氯化碳(CCL4)诱导的肝细胞氧化应激损伤的保护作用。方法将体外培养的人肝细胞系HL7702分为对照组(常规培养)、CCL4损伤组及hucMSC-Ex处理组(CCL4+hucMSC-Ex)。免疫荧光检测CM-Di... 目的探讨人脐带间质干细胞来源的exosomes(hucMSC-Ex)对四氯化碳(CCL4)诱导的肝细胞氧化应激损伤的保护作用。方法将体外培养的人肝细胞系HL7702分为对照组(常规培养)、CCL4损伤组及hucMSC-Ex处理组(CCL4+hucMSC-Ex)。免疫荧光检测CM-Dil染料标记的hucMSC-Ex进入HL7702细胞的情况;免疫组织化学法分析细胞过氧化物8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)的表达水平;比色法检测培养上清中谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的含量;western blot分析P38MAPK通路的活化情况。结果免疫荧光结果显示,hucMSC-Ex可转移进入HL7702细胞;比色法结果表明,与对照组相比,CCL4损伤组HL7702细胞培养上清中GSH含量下降,MDA上升(P<0.01),hucMSC-Ex处理组GSH和MDA含量无显著性变化;免疫组化结果显示,与对照组相比,CCL4损伤组8-OHdG表达阳性的HL7702细胞(胞核棕黄色)数量明显增高,而hucMSC-Ex处理组阳性细胞数量无明显变化;western blot结果表明,CCL4损伤组P-P38蛋白表达水平明显上升,而hucMSC-Ex处理组P-P38蛋白表达下降,其P-P38与P38/GAPDH蛋白的灰度值较CCL4损伤组下降约2.4倍。结论 HucMSC-Ex可减轻CCL4诱导的肝细胞过氧化损伤。 展开更多
关键词 脐带间质干细胞 外体 四氯化碳 肝损伤 氧化应激
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人脐带间充质干细胞来源的exosomes对脂多糖诱导的肝星状细胞活化的抑制研究 被引量：1
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作者 李里明 蒋留留 +7 位作者 祝源 严永敏 叶惠慧 贾浩源 薛建国 朱伟 许文荣 钱晖 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期291-294,共4页
目的探讨人脐带间充质干细胞(hucMSC)来源的外体(exosomes,hucMSC-Ex)对脂多糖(LPS)诱导的人肝星状细胞系LX2活化的抑制作用及其可能机制。方法体外培养LX2细胞,分别设PBS对照组、LPS组(100 ng/mL)及hucMSC-Ex组(LPS+150μg/mL hucMSC-E... 目的探讨人脐带间充质干细胞(hucMSC)来源的外体(exosomes,hucMSC-Ex)对脂多糖(LPS)诱导的人肝星状细胞系LX2活化的抑制作用及其可能机制。方法体外培养LX2细胞,分别设PBS对照组、LPS组(100 ng/mL)及hucMSC-Ex组(LPS+150μg/mL hucMSC-Ex),48 h后收集细胞并提取相应的RNA及蛋白质。western blot检测LX2活化相关指标(α-SMA、ColΙα1及TGF-β1蛋白)和凋亡指标(Bcl2、Bax及caspase3蛋白)的表达情况;RT-PCR和荧光定量RT-PCR检测α-SMA mRNA表达水平;MTT法分析hucMSC-Ex对LX2细胞活化后增殖的影响。结果 LPS可刺激LX2细胞活化,活化后的LX2细胞形态由不规则形状向成纤维细胞样改变,并高表达α-SMA、ColΙα1及TGF-β1蛋白,其灰度值分别上升约2.45、2.34、2.77倍(P均<0.05);Bax及caspase3蛋白表达下降而Bcl2蛋白表达增强;LX2增殖能力增强;经hucMSC-Ex处理后,细胞形态由细长向不规则形态转变,α-SMA、ColΙα1及TGF-β1蛋白表达减弱,高表达Bax及caspase3蛋白而Bcl2蛋白表达下降,且细胞增殖减少(F=23.44,P<0.05)。结论 hucMSC-Ex能够抑制LPS诱导的LX2细胞活化,降低其增殖能力并促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 外体 脂多糖 肝星状细胞 肝纤维化
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人脐带间充质干细胞来源外体提取方法的比较 被引量：1
4
作者 吴晓丹 张斌 +5 位作者 朱艳华 孙瑶湘 史惠 朱伟 钱晖 许文荣 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期350-353,共4页
目的比较蔗糖密度梯度离心法和差速离心法提取的脐带间充质干细胞来源外体（hucMSC-Ex）在高丰度蛋白质含量和纯度上的差异。方法分别用蔗糖密度梯度离心法和差速离心法提取hucMSC-Ex,透射电镜下观察两法提取的外体的形态结构,SDS-PAGE... 目的比较蔗糖密度梯度离心法和差速离心法提取的脐带间充质干细胞来源外体（hucMSC-Ex）在高丰度蛋白质含量和纯度上的差异。方法分别用蔗糖密度梯度离心法和差速离心法提取hucMSC-Ex,透射电镜下观察两法提取的外体的形态结构,SDS-PAGE分析二者的蛋白质组分,western blot检测二者的表面标志蛋白CD9和CD81,免疫荧光法检测二者内化至靶细胞EA.hy926的数量。结果两种方法提取的hucMSC-Ex均为直径约30~100 nm的圆形或椭圆形膜性囊泡结构;在相同蛋白质总量下,差速离心法提取的hucMSC-Ex高丰度蛋白质含量明显低于蔗糖密度梯度离心法,但其表面标志蛋白CD9和CD81的表达量却明显高于蔗糖密度梯度离心法;在相同蛋白质浓度下,差速离心法提取的hucMSC-Ex被靶细胞EA.hy926细胞内化的数量更多。结论两种方法均能成功提取hucMSC-Ex,差速离心法提取的hucMSC-Ex纯度更高,而高丰度蛋白质含量明显降低。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 外体 差速离心法 蔗糖密度梯度离心法 比较
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流式细胞仪分选侧群细胞条件的探索与优化 被引量：1
5
作者 叶惠慧 贾浩源 +6 位作者 张蕾蕾 薛建国 祝源 蒋留留 李里明 许文荣 钱晖 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期30-33,共4页
目的探讨不同浓度的荧光染料(Hoechst 33342)和抑制剂维拉帕米(verapamil)对流式细胞仪分选侧群(SP)细胞的影响。方法实验分为Hoechst 33342组(Hoechst 33342浓度分别为2.5、5.0和7.5μg/mL)和抑制组(Hoechst 33342+verapamil,verapami... 目的探讨不同浓度的荧光染料(Hoechst 33342)和抑制剂维拉帕米(verapamil)对流式细胞仪分选侧群(SP)细胞的影响。方法实验分为Hoechst 33342组(Hoechst 33342浓度分别为2.5、5.0和7.5μg/mL)和抑制组(Hoechst 33342+verapamil,verapamil浓度分别为50、100和150μmol/L),用流式细胞仪分选人肺腺癌细胞系A549中SP细胞,摸索Hoechst 33342和verapamil的最佳浓度,并用本实验室构建的一株肿瘤细胞系K1进行验证。结果在verapamil和Hoechst 33342浓度分别为150μmol/L和7.5μg/mL时,A549细胞染色充分,SP细胞亚群与非SP(non-SP)细胞亚群分群明显,SP细胞约为2.2%。K1细胞在verapamil为50μmol/L和Hoechst 33342为5μg/mL时,SP细胞亚群与non-SP细胞亚群分群明显,SP细胞亚群可被verapamil抑制,其比例约为1.3%。分选后的SP细胞和non-SP细胞可进一步扩增培养。结论 Hoechst 33342和verapamil可影响肿瘤细胞中SP细胞分选效率。 展开更多
关键词 侧群细胞 流式细胞术 肿瘤干细胞 人肺腺癌细胞
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