目的探讨羊膜干细胞(AMSCs)对严重烧伤大鼠早期心肌损害的作用及相关作用机制。方法采用酶消化法分离培养AMSCs,并用流式细胞仪对所分离培养细胞表面分子标志物进行检测,并进行体外诱导成脂、成骨分化鉴定。24只健康雄性SD大鼠,按照随...目的探讨羊膜干细胞(AMSCs)对严重烧伤大鼠早期心肌损害的作用及相关作用机制。方法采用酶消化法分离培养AMSCs,并用流式细胞仪对所分离培养细胞表面分子标志物进行检测,并进行体外诱导成脂、成骨分化鉴定。24只健康雄性SD大鼠,按照随机数字表法进行实验分组,分为单纯烧伤(burn)组、AMSCs组、假伤(sham)组。实验大鼠背部于98℃热水浴15 s,制成30%总体表面积Ⅲ度烧伤模型,伤后即刻burn组、AMSCs组大鼠分别腹腔注射0.9%氯化钠10 m L(50 m L/kg)行抗休克治疗,3 h后两组大鼠分别经尾静脉注射PBS和AMSCs;sham组仅对大鼠背部于37℃水浴15 s,模拟烧伤模型制作过程。48 h后采集三组大鼠腹主动脉血及心肌组织标本,采用ELISA法检测乳酸脱氢酶(LDH)、血清肌酸激酶(CK)的含量,RT-PCR法检测组织中凋亡相关因子(caspase-3),炎性相关因子TNF-α、IL-1β及抑炎因子IL-10 m RNA表达水平。对所得实验数据进行单因素方差分析、LSD-t检验。结果采用酶消化法培养的AMSCs传至第3代后检测均表达CD29、CD44、CD90、CD105,而CD34阳性率较低,可在体外向成骨成脂诱导分化。与sham组比较,burn组大鼠血清LDH、CK的含量显著增高(P<0.05),AMSCs组CK、LDH含量与burn组相比显著降低(P<0.05)。burn组大鼠心肌中TNF-α、caspase-3、IL-1βm RNA水平均高于sham组(P<0.05),AMSCs组心肌组织中TNF-α、caspase-3、IL-1βm RNA水平显著低于burn组(P<0.05)。burn组大鼠心肌组织中IL-10 m RNA表达量显著低于sham组(P<0.05),AMSCs组大鼠心肌组织中IL-10 m RNA表达量与burn组比较显著增高(P<0.05)。结论严重烧伤早期采用AMSCs治疗可显著降低心肌CK、LDH水平,减轻严重烧伤导致的心肌组织损伤,降低心肌细胞凋亡,减少炎症细胞因子IL-1β和TNF-α表达,促进抑炎细胞因子IL-10的表达水平,对严重烧伤大鼠心脏细胞损伤具有重要的保护作用。展开更多
文摘目的探讨羊膜干细胞(AMSCs)对严重烧伤大鼠早期心肌损害的作用及相关作用机制。方法采用酶消化法分离培养AMSCs,并用流式细胞仪对所分离培养细胞表面分子标志物进行检测,并进行体外诱导成脂、成骨分化鉴定。24只健康雄性SD大鼠,按照随机数字表法进行实验分组,分为单纯烧伤(burn)组、AMSCs组、假伤(sham)组。实验大鼠背部于98℃热水浴15 s,制成30%总体表面积Ⅲ度烧伤模型,伤后即刻burn组、AMSCs组大鼠分别腹腔注射0.9%氯化钠10 m L(50 m L/kg)行抗休克治疗,3 h后两组大鼠分别经尾静脉注射PBS和AMSCs;sham组仅对大鼠背部于37℃水浴15 s,模拟烧伤模型制作过程。48 h后采集三组大鼠腹主动脉血及心肌组织标本,采用ELISA法检测乳酸脱氢酶(LDH)、血清肌酸激酶(CK)的含量,RT-PCR法检测组织中凋亡相关因子(caspase-3),炎性相关因子TNF-α、IL-1β及抑炎因子IL-10 m RNA表达水平。对所得实验数据进行单因素方差分析、LSD-t检验。结果采用酶消化法培养的AMSCs传至第3代后检测均表达CD29、CD44、CD90、CD105,而CD34阳性率较低,可在体外向成骨成脂诱导分化。与sham组比较,burn组大鼠血清LDH、CK的含量显著增高(P<0.05),AMSCs组CK、LDH含量与burn组相比显著降低(P<0.05)。burn组大鼠心肌中TNF-α、caspase-3、IL-1βm RNA水平均高于sham组(P<0.05),AMSCs组心肌组织中TNF-α、caspase-3、IL-1βm RNA水平显著低于burn组(P<0.05)。burn组大鼠心肌组织中IL-10 m RNA表达量显著低于sham组(P<0.05),AMSCs组大鼠心肌组织中IL-10 m RNA表达量与burn组比较显著增高(P<0.05)。结论严重烧伤早期采用AMSCs治疗可显著降低心肌CK、LDH水平,减轻严重烧伤导致的心肌组织损伤,降低心肌细胞凋亡,减少炎症细胞因子IL-1β和TNF-α表达,促进抑炎细胞因子IL-10的表达水平,对严重烧伤大鼠心脏细胞损伤具有重要的保护作用。
