结核病临床检验实验室生物安全管理指标体系构建

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作者 柳芳超 张迪 +6 位作者 弭凤玲 李自慧 黄海荣 潘丽萍 时广利 姜广路 潘军华 《中国防痨杂志》 北大核心 2025年第5期569-576,共8页

目的:构建结核病临床检验实验室生物安全管理指标体系。方法:在课题组前期实验室生物安全管理与检查督导工作经验基础上,通过文献研究集中收集国内实验室生物安全标准,包括《WS 233—2017病原微生物实验室生物安全通用准则》《CNAS—CL0... 目的:构建结核病临床检验实验室生物安全管理指标体系。方法:在课题组前期实验室生物安全管理与检查督导工作经验基础上,通过文献研究集中收集国内实验室生物安全标准,包括《WS 233—2017病原微生物实验室生物安全通用准则》《CNAS—CL05—2009实验室生物安全认可准则》《GB 19489—2008实验室生物安全通用要求》等,经课题组内部讨论初步筛选结核病临床检验实验室生物安全管理候选指标池并搭建体系框架,据此进行两轮外部专家咨询,根据专家对每一个指标的纳入排除情况以及重要性评分,确定指标体系内容,并运用层次分析法计算各个指标的权重系数,形成结核病临床检验实验室生物安全管理三级评价指标体系。结果:第一轮、第二轮分别收集专家咨询表15份和14份,咨询表回收率分别为100.0%、93.3%,第一轮主要针对指标体系结构进行删改,第二轮则进行指标重要性评分,第二轮咨询专家权威系数为0.76,咨询结果可靠。两轮调查各层级指标的协调系数均>0.1,经Kendall’s W一致性检验,除一级指标外,P值均<0.05,专家意见一致性较好。最终形成一套可操作的结核病临床检验实验室生物安全管理指标体系,包含5个一级指标、13个二级指标和44个三级指标。结论:依据科学理论构建了结核病临床检验实验室生物安全管理指标体系,可用于评价结核病临床检验实验室的生物安全管理水平,也可指导实验室通过定期自查提高管理效率,为医疗机构管理者制定管理制度与政策提供科学依据。 展开更多

关键词 结核 实验室感染 安全管理 模型 组织管理

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医学研究生实验规范化操作探讨 被引量：3

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作者 李伟英 岳文涛 杨学惠 《继续医学教育》 2015年第6期46-47,共2页

实验研究是医学研究生进行科学研究的手段之一,而规范化实验是完成科学研究的重要保证,但实验非规范化操作现象比比皆是,这无疑会使学生多走很多弯路,那么让学生形成规范操作的意识,养成良好的规范操作习惯就显得至关重要。

关键词 医学研究生 实验操作 规范化操作

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不同靶点环介导等温扩增技术对结核分枝杆菌检测的比较研究 被引量：4

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作者 刘洋 郭艳玲 +3 位作者 姜广路 孙琦 郑素华 张宗德 《中国防痨杂志》 CAS 2015年第8期843-847,共5页

目的探讨针对hspX、gyrB、IS6110靶基因设计引物，采用环介导等温扩增技术（LAMP）检测对结核病的诊断价值。方法肺结核组为我院收治的68例肺结核患者，对照组为我院收治的45例肺癌患者和20名健康体检者，收集痰标本后采用LAMP、定量PC... 目的探讨针对hspX、gyrB、IS6110靶基因设计引物，采用环介导等温扩增技术（LAMP）检测对结核病的诊断价值。方法肺结核组为我院收治的68例肺结核患者，对照组为我院收治的45例肺癌患者和20名健康体检者，收集痰标本后采用LAMP、定量PCR及涂片法进行分析，评价LAMP技术的临床应用价值。采用LAMP及定量PCR分别对结核分枝杆菌标准株H37Rv的DNA样品进行检测，评价LAMP技术的检测限；同时对鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、偶发分枝杆菌、耻垢分枝杆菌、海分枝杆菌、龟分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌等8种非结核分枝杆菌菌株及4株普通菌标准株包括大肠埃希菌（ATCC25922）、阴沟肠杆菌（ATCC700323）、铜绿假单胞菌（ATcc27853）和金黄色葡萄球菌标准菌株（ATcc29213）进行鉴定，评价LAMP的敏感度和特异度。结果本研究采用hspX、IS6110和gyrB靶基因进行LAMP检测，对H37Rv的DNA样品检测限分别为320amol／L，320amol／L和32amol／L。LAMP对8种非结核分枝杆菌和4种普通菌检测结果为阴性。对照组中健康志愿者定量PCR，涂片法及LAMP方法的结果均为阴性，对照组中肺癌患者中hspX，gyrB，IS6110LAMP方法和定量PCR阳性结果2例，3种靶基因位点的LAMP和定量PCR检测的特异度均为96．9％（63／65）。针对hspX、gyrB、IS6110靶基因进行LAMP检测，对68例肺结核患者痰标本检测的敏感度分别为75．0％（51／68），77．9％（53／68），73．5％（50／68）；定量PCR检测的敏感度为79．4％（54／68）。3种不同基因位点LAMP技术与定量PCR检测的敏感度比较差异无统计学意义（x^2=0．82，P〉0．05），但均高于涂片法的38．2％（26／68），LAMP技术与涂片法之间差异均有统计学意义（x^2=18．71，x^2=22．02，x^2=17．18，P值均〈0．01）。结论hspX、gyrB、IS6110LAMP技术检测的敏感度和特异度均较高，尤其是针对gyrB靶基因位点进行LAMP检测的敏感度与定量PCR接近，并且高于涂片法；如果结合不同基因位点LAMP技术的检测结果进行评判可以提高该技术的敏感度。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 核酸扩增技术 结核 肺/诊断

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环介导等温扩增技术在结核性胸膜炎快速诊断中的应用 被引量：5

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作者 刘洋 郭艳玲 +3 位作者 姜广路 孙琦 邢爱英 张宗德 《临床肺科杂志》 2015年第4期583-585,共3页

目的探讨针对hsp X基因设计引物的环介导等温扩增技术(LAMP)对结核性胸膜炎患者结核分枝杆菌的诊断价值。方法采用LAMP技术对结核分枝杆菌标准株H37Rv的DNA样品进行检测,评价LAMP技术的检测限;同时对8种非结核分枝杆菌菌株及阴沟肠杆菌... 目的探讨针对hsp X基因设计引物的环介导等温扩增技术(LAMP)对结核性胸膜炎患者结核分枝杆菌的诊断价值。方法采用LAMP技术对结核分枝杆菌标准株H37Rv的DNA样品进行检测,评价LAMP技术的检测限;同时对8种非结核分枝杆菌菌株及阴沟肠杆菌和大肠埃希菌标准菌株进行鉴定,评价该方法的特异性。对58例结核性胸膜炎患者和32例肺癌患者胸腔积液样本结核分枝杆菌进行检测,评价LAMP技术的临床应用价值。结果 LAMP对倍比稀释的H37Rv的DNA样品检测结果为阳性,检测限为320a M。八种非结核分枝杆菌和2种普通菌菌株检测结果为阴性。LAMP对胸腔积液标本检测的灵敏度是75.8%(44/58),定量PCR为79.3%(46/58),无显著差别(χ2=0.25,P>0.05);均显著高于涂片法39.6%(23/58),差异具有统计学意义(χ2=17.39,P<0.01)。结论 LAMP技术是一种简单快速有效的等温扩增技术,由于其较高的灵敏度和特异度,可以对结核性胸膜炎患者胸腔积液标本快速鉴定。 展开更多

关键词 环介导等温扩增 结核分枝杆菌 胸腔积液

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活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能CD4＋和CD8＋T淋巴细胞的特征研究 被引量：9

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作者 肖婧 朱传智 +4 位作者 李洁琼 古淑香 贾红彦 申阿东 张宗德 《标记免疫分析与临床》 CAS 2017年第6期686-691,共6页

目的研究活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能T淋巴细胞细胞因子的分泌特征。方法利用γ干扰素释放试验和多色流式细胞术分析了13例活动性结核病患者、11例肺部感染性/肿瘤疾病患者以及14例健康对照者外周血... 目的研究活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能T淋巴细胞细胞因子的分泌特征。方法利用γ干扰素释放试验和多色流式细胞术分析了13例活动性结核病患者、11例肺部感染性/肿瘤疾病患者以及14例健康对照者外周血中结核分枝杆菌抗原特异性(ESAT-6和CFP-10)CD4^+Th1和CD8^+Tc淋巴细胞表达细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的情况。结果与肺部感染性/肿瘤疾病组和健康对照组相比:(1)活动性结核病组具有较低比例的分泌TNF-α^+的CD4^+Th1细胞、较高比例的分泌IFN-γ^+和IFN-γ^+TNF-α^+IL-2^+的CD4^+Th1细胞;(2)活动性结核病组具有较高比例的分泌IFN-γ^+TNF-α^+IL-2^+的CD8^+Tc细胞。结论实验结果提示活动性结核病患者中表达IFN-γ^+TNF-α^+IL-2^+的多能CD4^+Th1及CD8^+Tc细胞,可能在区别活动性结核病与肺部感染性/肿瘤疾病方面具有一定的临床参考价值。 展开更多

关键词 活动性结核病 多能T细胞 细胞因子 多色流式细胞术

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甘露糖结合凝集素水平的调节与肺结核易感性关系的研究 被引量：2

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作者 刘洋 郭艳玲 +3 位作者 姜广路 孙琦 郑素华 张宗德 《国际检验医学杂志》 CAS 2016年第13期1767-1769,共3页

目的研究甘露糖结合凝集素(MBL)水平的调节与肺结核易感性的关系。方法对142例肺结核患者和120例健康对照者血清中MBL水平进行测定。同时采用限制性片段长度多态性分析方法对MBL2基因多态性进行测定。结果采用单因素方差分析不同基因型... 目的研究甘露糖结合凝集素(MBL)水平的调节与肺结核易感性的关系。方法对142例肺结核患者和120例健康对照者血清中MBL水平进行测定。同时采用限制性片段长度多态性分析方法对MBL2基因多态性进行测定。结果采用单因素方差分析不同基因型组的MBL水平,YA/YA组,XA/YA组和XA/XA、YA/YB、XA/YB、YB/YB组,发现3组之间和任何两组之间的MBL水平差异均有统计学意义(P<0.01)。肺结核患者MBL水平显著高于健康对照(P<0.01)。健康对照者中携带YA/YA基因的个体中有93.2%(55/59)的MBL水平大于1 000ng/mL。而携带XA/XA或B等位基因的个体100%(26/26)的MBL水平小于或等于1 000ng/mL。结论 MBL水平可能与肺结核易感性有关,而决定高水平MBL的YA/YA基因可能是一种保护性基因。 展开更多

关键词 甘露糖结合凝集素 多态性 结核 易感性

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CRISPR-Cas9系统在真核细胞领域内的研究进展 被引量：2

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作者 肖婧 张宗德 申阿东 《标记免疫分析与临床》 CAS 2016年第10期1218-1225,共8页

CRISPR-Cas免疫系统在天然状态下保护细菌和古生菌免受外来质粒或噬菌体的入侵。研究者们根据Ⅱ型CRISPRCas系统开发了全新的基因编辑工具——CRISPR-Cas9,它利用与靶序列互补的向导RNA引导Cas9酶定点切割DNA,该技术具有设计简单、操作... CRISPR-Cas免疫系统在天然状态下保护细菌和古生菌免受外来质粒或噬菌体的入侵。研究者们根据Ⅱ型CRISPRCas系统开发了全新的基因编辑工具——CRISPR-Cas9,它利用与靶序列互补的向导RNA引导Cas9酶定点切割DNA,该技术具有设计简单、操作方便、特异性强、效率高等优势,成为新一代基因组编辑技术。本文综述了CRISPR-Cas系统的技术发展史、最新分类和作用原理,重点介绍了近几年来CRISPR-Cas9系统应用于真核细胞领域的研究进展。 展开更多

关键词 CRISPR-Cas9系统 真核细胞 基因编辑 基因调节

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结核分枝杆菌Rpf-DNA疫苗对Mtb感染小鼠免疫保护作用的研究

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作者 邢爱英 刘忠泉 +8 位作者 刘洋 贾红彦 李自慧 郑晓静 曹廷明 杜凤娇 杜博平 古淑香 张宗德 《中国防痨杂志》 CAS 2012年第8期532-537,共6页

目的评价Mtb复苏因子DNA疫苗(resuscitation-promoting factor DNA,Rpf-DNA)对Mtb感染宿主的免疫保护作用。方法构建复苏因子D(Rpf D-DNA)和复苏因子E(Rpf E-DNA)质粒疫苗,180只BALB/c小鼠(4周龄)分为6组,每组30只,分别用空质粒、Rpf D-... 目的评价Mtb复苏因子DNA疫苗(resuscitation-promoting factor DNA,Rpf-DNA)对Mtb感染宿主的免疫保护作用。方法构建复苏因子D(Rpf D-DNA)和复苏因子E(Rpf E-DNA)质粒疫苗,180只BALB/c小鼠(4周龄)分为6组,每组30只,分别用空质粒、Rpf D-DNA质粒、Rpf E-DNA质粒、BCG、生理盐水免疫,H37Rv标准株气溶胶感染。检测血清复苏因子(Rpf)抗体、IFN-γ;RpfD、E刺激淋巴细胞后进行淋巴细胞增殖、细胞杀伤实验;检测细胞上清IFN-γ、IL-12、IL-2;对肺组织进行病理学检测和细菌负荷(CFU)计数。结果 (1)疫苗免疫组血清Rpf D、Rpf E抗体水平:Rpf D组0.32±0.1,Rpf E组0.39±0.1,BCG组0.02±0.01,空质粒组0.01±0.0,生理盐水组0.09±0.04,空白对照组0.03±0.01,RpfD组与RpfE组抗体水平与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义,F值分别为Rpf D:45.6,43.2,45.1,45.7;Rpf E:51.6,53.6,51.0,52.2;P值均<0.01。血清IFN-γ:Rpf D组(43.9±24.8)pg/ml,Rpf E组(45.9±21.0)pg/ml,BCG组(21.0±11.0)pg/ml,空质粒组(7.9±4.9)pg/ml,生理盐水组(4.7±2.1)pg/ml,空白对照组(5.8±4.7)pg/ml,Rpf D、Rpf E质粒组与BCG组比较差异有统计学意义(F值分别为Rpf D:10.2;Rpf E:12.4;P值均<0.05),与空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义,F值分别为Rpf D:15.6,17.8,17.3;Rpf E:17.5,21.1,20.7;P值均<0.01。(2)淋巴细胞增殖实验CCK-8:Rpf D组176.0±4.2,Rpf E组183.0±4.3,BCG组101.0±1.1,空质粒组100.0±6.8,生理盐水组104.0±8.4,空白对照组116.0±2.2,RpfD、RpfE质粒组与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D:9.5,10.1,10.0,9.0;Rpf E:11.2,12.9,11.7,10.3;P值均<0.05。细胞杀伤实验:Rpf D组32.0±3.2,Rpf E组30.0±4.2,BCG组16.0±5.9,空质粒组3.3±1.5,生理盐水组6.7±0.5,空白对照组7.3±3.5,Rpf D、Rpf E质粒组与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D:8.8,14.5,13.7,11.9;Rpf E:8.1,12.5,11.6,11.1;P值均<0.05。(3)Rpf D、Rpf E蛋白各自刺激淋巴细胞后上清细胞因子检测:IL-2:Rpf D组9.5±2.4,RpfE组9.2±1.2,BCG组2.4±2.1,空质粒组1.2±0.3,生理盐水组1.8±1.0,空白对照组1.5±0.7,Rpf D、Rpf E质粒组与其他各组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D:12.5,14.6,13.5,13.9;Rpf E:12.0,13.6,13.1,13.2;P值均<0.05。IFN-γ:Rpf D组22.2±5.7,Rpf E组28.7±14.4,BCG组16.1±10.1,空质粒组9.8±1.6,生理盐水组13.2±2.1,空白对照组15.7±2.9,RpfD、RpfE质粒组与其他各组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D:7.8,12.6,8.7,8.3;Rpf E:11.3,16.4,14.7,14.2;P值均<0.05。结论实验表明复苏因子疫苗能诱导Mtb感染小鼠产生体液免疫和细胞免疫,有希望成为结核病候选疫苗之一。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 细菌蛋白质类 细胞因子类 疫苗 DNA

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中国结核病基础研究60年 被引量：1

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作者 张宗德 刘菲 《结核病与胸部肿瘤》 2014年第1期53-57,共5页

回顾60年来国内结核病学基础研究成果，既是对前辈的追忆和对既往研究成果的肯定，也可以明确我们的责任和今后努力的方向。1结核病基础研究的起始新中国建国之初，资金、技术极度匮乏，结核病学界的前辈克服重重困难，开创了我国结核... 回顾60年来国内结核病学基础研究成果，既是对前辈的追忆和对既往研究成果的肯定，也可以明确我们的责任和今后努力的方向。1结核病基础研究的起始新中国建国之初，资金、技术极度匮乏，结核病学界的前辈克服重重困难，开创了我国结核病学基础和临床研究。1950年国家卫生部在全国各城市推广免费接种卡介苗，同时将异烟肼国产化并用于临床，使结核病发病率明显下降。 展开更多

关键词 结核病学 新中国 基础研究成果 临床研究 接种卡介苗 国家卫生部 国产化 异烟肼

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微小RNA在感染性疾病及结核病中的研究进展 被引量：1

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作者 刘菲 张宗德 《结核病与胸部肿瘤》 2014年第2期123-126,共4页

微小RNA（miRNA）属于非编码RNA大家族，是内源性含22个寡核苷酸的小分子RNA序列，从病毒、线虫、植物到动物体内都存在miRNA，并在细胞生长、分化、凋亡、代谢及病毒感染、肿瘤发生等生理、病理过程中发挥至关重要的作用。目前发现，循... 微小RNA（miRNA）属于非编码RNA大家族，是内源性含22个寡核苷酸的小分子RNA序列，从病毒、线虫、植物到动物体内都存在miRNA，并在细胞生长、分化、凋亡、代谢及病毒感染、肿瘤发生等生理、病理过程中发挥至关重要的作用。目前发现，循环miRNA异常表达出现在肿瘤、肝炎、 展开更多

关键词 感染性疾病 微小RNA 结核病 miRNA 非编码RNA 病毒感染 肿瘤发生 RNA序列

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脑脊液miRNA定量检测中内参基因的选择评价

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作者 贾红彦 黄麦玲 +7 位作者 刘菲 董静 孙琦 魏荣荣 邢爱英 杜博平 张宗德 潘丽萍 《结核病与胸部肿瘤》 2020年第4期265-271,共7页

目的探讨常规内参基因U6和Cel-miR-39用于结核性脑膜炎患者脑脊液微小核糖核酸(miRNA)定量检测的可行性,并初步用于脑脊液miRNA定量检测分析。方法本研究选取首都医科大学附属北京胸科医院常规脑脊液检测后保存的标本,根据最终诊断依据... 目的探讨常规内参基因U6和Cel-miR-39用于结核性脑膜炎患者脑脊液微小核糖核酸(miRNA)定量检测的可行性,并初步用于脑脊液miRNA定量检测分析。方法本研究选取首都医科大学附属北京胸科医院常规脑脊液检测后保存的标本,根据最终诊断依据纳人结核性脑膜炎患者36例、病毒性脑膜炎患者34例。提取其脑脊液标本miRNA.采用TaqMan探针法检测miRNA的表达水平。采用GeNorm.NormnFinder和Bestkeeper软件分析内参基因miRNA的稳定性,采用2^(-△Ct)方法计算靶标miRNA的相对表达量。标本重复检测的一致性分析采用Pearson检验。靶标基因在两组间的表达差异比较采用1检验。结果70份脑脊液标本中,U6检测的循环阈值(Ct)为(30.40±3.30)个循环,表达丰度较低,Cel-miR-39检测的Ct值为(21.49±0.70)个循环,表达丰度适中。内参和靶标基因miRNA在重复样本检测中一致性均较好(r>0.931,P<0.00)。根据3种软件分析结果,Cl-miR-39在70份脑脊液标本中表达稳定性更高,更适合作为脑脊液miRNA检测的内参基因。以Cel-miR-39为内参,靶标基因miR-126-3p(1.13±0.41比3.34±0.82,t=2.452,P=0.016).miR-130a-3p(0.56±0.10比2.59±0.70,t=2.960,P=0.004)和miR-151a-3p(0.64±0.25比2.11±0.33,t=3.536,P=0.001)在结核性脑膜炎组脑脊液中的相对表达量均显著低于病毒性脑膜炎组。结论Cel miR-39可作为结核性脑膜炎患者脑脊液中miRNA定量检测的标准内参,脑脊液中miR-126-3p、miR-130a-3p和miR-151a-3p的相对表达量在结核性脑膜炎患者和病毒性脑膜炎患者之间存在差异。 展开更多

关键词 结核 脑膜 脑脊髓液 微RNAS 参考值

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不同靶点环介导等温扩增技术对结核分枝杆菌检测的比较研究

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作者 刘洋 郭艳玲 +3 位作者 姜广路 孙琦 郑素华 张宗德 《结核病与胸部肿瘤》 2015年第4期235-239,共5页

目的探讨针对hspX、gyrB、IS6110靶基因设计引物，采用环介导等温扩增技术（LAMP）检测对结核病的诊断价值。方法肺结核组为我院收治的68例肺结核患者，对照组为我院收治的45例肺癌患者和20名健康体检者，收集痰标本后采用LAMP、定量PC... 目的探讨针对hspX、gyrB、IS6110靶基因设计引物，采用环介导等温扩增技术（LAMP）检测对结核病的诊断价值。方法肺结核组为我院收治的68例肺结核患者，对照组为我院收治的45例肺癌患者和20名健康体检者，收集痰标本后采用LAMP、定量PCR及涂片法进行分析，评价LAMP技术的临床应用价值。采用LAMP及定量PCR分别对结核分枝杆菌标准株H37Rv的DNA样品进行检测，评价LAMP技术的检测限；同时对鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、偶发分枝杆菌、耻垢分枝杆菌、海分枝杆菌、龟分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌等8种非结核分枝杆菌菌株及4株普通菌标准株包括大肠埃希菌（ATCC25922）、阴沟肠杆菌（ATCC700323）、铜绿假单胞菌（ATCC27853）和金黄色葡萄球菌标准菌株（ATCC29213）进行鉴定，评价LAMP的敏感度和特异度。结果本研究采用hspX、IS6110和gyrB靶基因进行LAMP检测，对H37Rv的DNA样品检测限分别为320amol/L，320amol／L和32amol／L。LAMP对8种非结核分枝杆菌和4种普通菌检测结果为阴性。对照组中健康志愿者定量PCR，涂片法及LAMP方法的结果均为阴性，对照组中肺癌患者中hspX，gyrB，IS6110LAMP方法和定量PCR阳性结果2例，3种靶基因位点的LAMP和定量PCR检测的特异度均为96．9％（63／65）。针对hspX、gyrB、IS6110靶基因进行LAMP检测，对68例肺结核患者痰标本检测的敏感度分别为75．0％（51／68），77．9％（53／68），73．5％（50／68）；定量PCR检测的敏感度为79．4％（54／68）。3种不同基因位点LAMP技术与定量PCR检测的敏感度比较差异无统计学意义（χ^2=0．82，P〉0．05），但均高于涂片法的38．2％（26／68），LAMP技术与涂片法之间差异均有统计学意义（χ^2=18．71，χ^2=22．02，χ^2=17．18，P值均〈0．01）。结论hspX、gyrB、IS6110 LAMP技术检测的敏感度和特异度均较高，尤其是针对gyrB靶基因位点进行LAMP检测的敏感度与定量PCR接近，并且高于涂片法；如果结合不同基因位点LAMP技术的检测结果进行评判可以提高该技术的敏感度。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 核酸扩增技术 结核 肺/诊断

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骨结核临床分离菌株基因分型的特点

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作者 李文胜 刘毅 +6 位作者 孙勇 田苗 刘忠泉 马峻 李传友 许绍发 纪婷婷（编辑） 《结核病与胸部肿瘤》 2012年第1期32-37,共6页

目的对小样本量骨结核临床分离菌株基因型的特点进行初步研究，以了解引起骨结核与肺结核的病原菌在基因型方面有无差异，为探讨两者之间的关系提供相关依据。方法利用间隔区寡核苷酸分型法（Spoligotyping）和数目可变串联重复序列分析... 目的对小样本量骨结核临床分离菌株基因型的特点进行初步研究，以了解引起骨结核与肺结核的病原菌在基因型方面有无差异，为探讨两者之间的关系提供相关依据。方法利用间隔区寡核苷酸分型法（Spoligotyping）和数目可变串联重复序列分析（VNTR）分型法对骨结核与肺结核的临床分离菌株进行分型，从而确定每株结核分枝杆菌的基因型。结果Spoligotyping分型方法确定了在14株肺结核临床分离菌株中有9株为Beijing基因型，2株为T2基因型，另外3株分别为MANU2型、Haaslem3型以及未知型，VNTR可将14株肺结核临床分离菌株完全区分为14个基因型。而对于14株骨结核临床分离菌株来说，Spoligotyping和VNTR两种分型方法的结果均显示其具有完全相同的基因型。结论骨结核与肺结核临床分离菌株基因型差异巨大。特定型别（Spoligotyping：777777777777771，VNTR：013582202252）的结核分枝杆菌在骨结核流行菌株中占据主要地位，较之其他型别更易引起骨组织的病蛮。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 结核 骨关节 基因分型

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莫西沙星抗结核分枝杆菌浓度标准的研究

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作者 姜广路 李雪莲 +2 位作者 黄海荣 高孟秋 陈曦 《结核病与胸部肿瘤》 2012年第3期177-179,共3页

目的通过比较新患者与复治患者分离结核分枝杆菌的莫西沙星最低抑菌浓度（MIC）的差异，确定莫西沙星的临床耐药界限。方法根据患者治疗史，选取109例肺结核病新患者分离出的菌株以及使用过莫西沙星治疗复治患者31例分离出的菌株，共14... 目的通过比较新患者与复治患者分离结核分枝杆菌的莫西沙星最低抑菌浓度（MIC）的差异，确定莫西沙星的临床耐药界限。方法根据患者治疗史，选取109例肺结核病新患者分离出的菌株以及使用过莫西沙星治疗复治患者31例分离出的菌株，共140株，以罗氏含药培养基测定MIC，并分析MIC分布状况，比较MIC累计百分比，通过新患者菌株和复治患者菌株差值最大时的MIC作为耐药界限。结果来自既往未用过莫西沙星治疗新患者的临床分离株中，94．50％的菌株MIC〈0．41μg／ml，既往曾接受莫西沙星治疗的临床分离株中，MIC〉1．01μg／ml占93．55％。结论根据MIC分布，两类患者分离的结核分枝杆菌对莫西沙星MIC的差异，提示使用罗氏培养基的莫西沙星药敏试验耐药界限采用1μg／ml为宜，复治患者中仍有6．45％对莫西沙星敏感。 展开更多

关键词 莫西沙星 结核分枝杆菌 抗药性

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环介导等温扩增技术在结核性胸膜炎快速诊断中的应用

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作者 刘洋 郭艳玲 +3 位作者 姜广路 孙琦 邢爱英 张宗德 《结核病与胸部肿瘤》 2015年第2期114-116,共3页

目的探讨针对hspX基因设计引物的环介导等温扩增技术（LAMP）对结核性胸膜炎患者结核分枝杆菌的诊断价值。方法采用LAMP技术对结核分枝杆菌标准株H37Rv的DNA样品进行检测，评价LAMP技术的检测限；同时对8种非结核分枝杆菌菌株及阴沟肠... 目的探讨针对hspX基因设计引物的环介导等温扩增技术（LAMP）对结核性胸膜炎患者结核分枝杆菌的诊断价值。方法采用LAMP技术对结核分枝杆菌标准株H37Rv的DNA样品进行检测，评价LAMP技术的检测限；同时对8种非结核分枝杆菌菌株及阴沟肠杆菌和大肠埃希菌标准菌株进行鉴定，评价该方法的特异性。对58例结核性胸膜炎患者和32例肺癌患者胸腔积液样本结核分枝杆菌进行检测，评价LAMP技术的临床应用价值。结果LAMP对倍比稀释的H37Rv的DNA样品检测结果为阳性，检测限为320aM。八种非结核分枝杆菌和2种普通菌菌株检测结果为阴性。LAMP对胸腔积液标本检测的灵敏度是75．8％（44／58），定量PCR为79.3％（46／58），无显著差别（Х^2=0．25，P〉0．05）；均显著高于涂片法39．6％（23／58），差异具有统计学意义（Х^2=17．39，P〈0．01）。结论LAMP技术是一种简单快速有效的等温扩增技术，由于其较高的灵敏度和特异度，可以对结核性胸膜炎患者胸腔积液标本快速鉴定。 展开更多

关键词 环介导等温扩增 结核分枝杆菌 胸腔积液

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老年人结核性脑膜炎误诊分析

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作者 黄麦玲 马艳 +7 位作者 高孟秋 宋艳华 陈红梅 孔忠顺 张立群 潘丽萍 陈效友 李琦 《结核病与胸部肿瘤》 2017年第4期285-290,共6页

目的探讨老年结核性脑膜炎（TBM）患者的临床特征，分析误诊原因。方法对2011年1月至2017年1月在首都医科大学附属北京胸科医院住院的60例老年TBM患者的临床资料进行回顾性分析，对误诊组与非误诊组老年TBM患者临床特征进行比较分析。结... 目的探讨老年结核性脑膜炎（TBM）患者的临床特征，分析误诊原因。方法对2011年1月至2017年1月在首都医科大学附属北京胸科医院住院的60例老年TBM患者的临床资料进行回顾性分析，对误诊组与非误诊组老年TBM患者临床特征进行比较分析。结果60例老年TBM患者中，住院前误诊患者32例，误诊率为53．3％，主要误诊疾病依次为肺部感染11例（34．4％）、未明确部位感染性疾病6例（18．8％）、上呼吸道感染4例（12．5％）、脑血管疾病3例（9．4％）。误诊组发病时间、发热发生率、脑脊液糖水平分别为42．5（20.3，60．0）d、96．9％（3i例）、1．5（1．1，2．3）mmol/L，与非误诊组15．0（10．0，20．0）d、75．0％（21例）、2-3（1．4，3．2）mmol／L比较差异有统计学意义（均P〈0．05），在年龄、性别、职业、居住地、并发症、并发慢性疾病、影像学表现等方面，差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论老年TBM患者临床表现不典型，合并疾病多，脑脊液细菌学检查阳性率低、影像学检查缺乏特异性，导致老年人TBM误诊率高。 展开更多

关键词 结核 脑膜 误诊

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CRISPR-Cas9系统在细菌学领域内的应用研究进展

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作者 肖婧 张宗德 《结核病与胸部肿瘤》 2017年第2期147-153,共7页

1987年，Ishino等在大肠杆菌中首次发现了一段独特的被非重复序列所间隔的“串联重复序列”。2002年，Jansen等将此特点的序列命名为成簇规律间隔短回文重复序列（clustered regularlyinterspaced short palindromic repeats，CRISPRs）... 1987年，Ishino等在大肠杆菌中首次发现了一段独特的被非重复序列所间隔的“串联重复序列”。2002年，Jansen等将此特点的序列命名为成簇规律间隔短回文重复序列（clustered regularlyinterspaced short palindromic repeats，CRISPRs）.2012年，Jinek等首次体外证实CRISPR相关蛋白9（CRISPR-associated protein 9，Cas9）能够切割DNA，使得CRISPR-Cas9基因编辑技术取得了突破性进展。 展开更多

关键词 串联重复序列 细菌学 PROTEIN 应用 系统 大肠杆菌 相关蛋白 DNA

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血浆miR-34b-3p和miR-302a-5p在非小细胞肺癌诊断中的临床应用 被引量：16

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作者 宋治鹏 张宗德 刘洋 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期216-222,共7页

背景与目的微小核糖核酸(microRNA, miRNA)是一类长约22个核苷酸的单链非编码RNA,其表达异常与疾病密切相关。本研究旨在探讨miR-34b-3p和miR-302a-5p在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者血浆中的表达水平及其在NSCL... 背景与目的微小核糖核酸(microRNA, miRNA)是一类长约22个核苷酸的单链非编码RNA,其表达异常与疾病密切相关。本研究旨在探讨miR-34b-3p和miR-302a-5p在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者血浆中的表达水平及其在NSCLC诊断的临床应用价值研究。方法采用荧光定量PCR(real-time polymerase chain reaction, RT-PCR)对86例NSCLC患者、64例肺结核(pulmonary tuberculosis, PTB)患者、39例健康体检者血浆中的miR-34b-3p和miR-302a-5p含量进行测定,同时对比并结合癌胚抗原(carcino-embryonic antigen, CEA)、神经元烯醇化酶(neuron-specific enolase, NSE)和血清骨胶素(cytokeratin 19 fragments 21-1, CYFRA21-1),分析其诊断NSCLC的价值。结果 NSCLC组血浆中miR-34b-3p及miR-302a-5p表达水平明显高于PTB组和健康对照组(P<0.05)。血浆miR-34b-3p的表达水平与肿瘤直径相关(P<0.01)。单项检测NSCLC时,miR-302a-5p的灵敏度最高(82.6%),CEA的特异度最高(81.6%)。双项检测NSCLC时,miR-34b-3p+miR-302a-5p的灵敏度最高(80.2%),miR-34b-3p+CEA的特异度最高(89.3%)。多项检测NSCLC时,miR-302a-5p+NSE+CYFRA21-1的灵敏度最高(81.4%),miR-34b-3p+CEA+NSE的特异度最高(90.3%)。当联合miR-34b-3p、miR-302a-5p和CEA进行检测时,其ROC曲线下面积AUC(area under the curve, AUC)最大,为0.832。Logistic回归模型表明:在NSCLC与对照组(PTB组+健康对照组)中,miR-34b-3p可能是NSCLC发生的独立危险因素。结论血浆miR-34b-3p、miR-302a-5p有可能成为NSCLC辅助诊断的血浆学标志物。 展开更多

关键词 肺肿瘤 诊断 微小核糖核酸 肿瘤标志物

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血浆miRNA在肺癌早期筛查中作用的病例对照研究 被引量：4

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作者 林婷婷 宋治鹏 +4 位作者 董静 王赛赛 潘丽萍 张宗德 刘洋 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2022年第17期3127-3132,共6页

目的:探讨miR-122-5p等miRNA在早期肺癌患者血浆中的表达水平及其与肺癌发病风险的关联性。方法:运用高通量测序技术筛选在早期肺癌患者和对照者血浆中差异表达的miRNA,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测mi... 目的:探讨miR-122-5p等miRNA在早期肺癌患者血浆中的表达水平及其与肺癌发病风险的关联性。方法:运用高通量测序技术筛选在早期肺癌患者和对照者血浆中差异表达的miRNA,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测miRNA的表达。采用性别、年龄±5岁进行1∶2匹配的病例对照研究,使用条件Logistic回归分析miRNA与肺癌发病风险的关联。结果:早期肺癌组血浆miR-122-5p、miR-199a-5p、miR-221-3p、miR-27b-3p和miR-99a-5p的表达水平均显著高于对照组(P<0.01);用于检测早期肺癌时,miR-199a-5p的灵敏度可达95.8%,miR-99a-5p的特异度可达81.2%;血浆miR-122-5p、miR-199a-5p、miR-221-3p、miR-27b-3p和miR-99a-5p的表达与肺癌发病风险升高存在显著关联,第四分位数组的肺癌发病风险较高,分别是第一分位数组的9.613倍(95%CI:1.488~62.118,P_(trend)=0.011)、23.863倍(95%CI:2.208~257.938,P_(trend)=0.007)、27.416倍(95%CI:2.575~291.919,P_(trend)=0.003)、23.626倍(95%CI:2.044~273.070,P_(trend)=0.005)和72.504倍(95%CI:3.519~1493.742,P_(trend)=0.004)。结论:miR-122-5p、miR-199a-5p、miR-221-3p、miR-27b-3p和miR-99a-5p是肺癌发病的危险因素。 展开更多

关键词 肺肿瘤 微小核糖核酸 危险因素 病例对照研究

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血浆miR-34b-3p和miR-302a-5p在非小细胞肺癌诊断中的临床应用

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作者 宋治鹏 张宗德 刘洋 《结核病与胸部肿瘤》 2019年第2期93-98,共6页

背景与目的微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是一类长约22个核昔酸的单链非编码RNA,其表达异常与疾病密切相关。本研究旨在探讨miR-34b-3p和miR-302a-5p在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者血浆中的表达水平及其在NSCLC... 背景与目的微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是一类长约22个核昔酸的单链非编码RNA,其表达异常与疾病密切相关。本研究旨在探讨miR-34b-3p和miR-302a-5p在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者血浆中的表达水平及其在NSCLC诊断的临床应用价值研究。方法采用荧光定量PCR(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)对86例NSCLC患者、64例肺结核(pulmonary tuberculosis,PTB)患者、39例健康体检者血浆中的miR-34b-3p和miR-302a-5p含量进行测定,同时对比并结合癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)、神经元烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)和血清骨胶素(cytokeratin 19 fragments 21-1,CYFRA21-1),分析其诊断NSCLC的价值。结果NSCLC组血浆中miR-34b-3p及miR-302a-5p表达水平明显高于PTB组和健康对照组(P<0.05)。血浆miR-34b-3p的表达水平与肿瘤直径相关(P<0.01)。单项检测NSCLC时,miR-302a-5p的灵敏度最高(82.6%),CEA的特异度最高(81.6%)。双项检测NSCLC时,miR-34b-3p+miR-302a-5p的灵敏度最高(80.2%),miR-34b-3p+CEA的特异度最高(89.3%)。多项检测NSCLC时,miR-302a-5p+NSE+CYFRA21-1的灵敏度最高(81.4%),miR-34b-3p+CEA+NSE的特异度最高(90.3%).当联合miR-34b-3p-miR-302a-5p和CEA进行检测时,其ROC曲线下面积AUC(area underthe curve,AUC)最大,为0.832。Logistic回归模型表明:在NSCLC与对照组(PTB组+健康对照组)中,miR-34b-3p可能是NSCLC发生的独立危险因素。结论血浆miR-34b-3p、miR-3O2a-5p有可能成为NSCLC辅助诊断的血浆学标志物。 展开更多

关键词 肺肿瘤 诊断 微小核糖核酸 肿瘤标志物

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