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题名日本对虾精巢和卵巢全长cDNA文库的构建
被引量：25
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作者
王艺磊
张子平
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机构
集美大学水产生物技术研究所
香港城市大学生物与化学系香港九龙
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出处
《动物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第2期9-13,共5页
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基金
国家自然科学基金 (No.30 0 70 5 97)
福建省自然科学基金 (No.B9910 0 2 8)
国家教育部骨干教师基金资助项目
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文摘
采用RDP试剂提取日本对虾精巢和卵巢的总RNA ,经Oligotex试剂盒纯化得到mRNA。根据SMART(switchingmechanismat5′endofRNAtranscript)技术 ,利用含SfiⅠB酶切位点的oligo(dT)引物合成cDNA第一条链 ,利用含SfiⅠA酶切位点的SMART核苷酸作为cDNA第一条链在mRNA 5′端延伸出去的模板 ,采用LDPCR引物合成双链cDNA ,双链cDNA用SfiⅠ酶切和过柱分级分离后 ,与λTriplEx2两臂进行连接 ,随后进行λ噬菌体体外包装反应 ,构建成精巢和卵巢之全长cDNA文库。构建好的文库中 ,精巢的文库含有约 1 0 4× 1 0 6的重组子 ,卵巢的文库含有约为 1 2× 1 0 6的重组子。文库扩增后 ,滴度分别达7 3× 1 0 8(Pfu ml)和 9 1× 1 0 8(Pfu ml) ,插入cDNA长度为 4 0 0bp～ 3kb ,说明两文库均具有良好的质量 ,为进一步筛选、克隆精巢与卵巢特异表达基因奠定了基础。
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关键词
日本对虾
精巢
卵巢
全长CDNA文库
性别决定
性别分化
SMART技术
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Keywords
cDNA library
Testis
Ovary
Marsupenaeus japonicus
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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