目的:探究RNA干扰(RNAi)色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(Ywhaz)基因对高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖、凋亡的影响及可能作用机制。方法:在Lipofectamine 2000介导下,将siRNA阴性对照以及siRNA-Ywhaz分别转染高糖条件下培养的小鼠肾小球系膜细...目的:探究RNA干扰(RNAi)色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(Ywhaz)基因对高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖、凋亡的影响及可能作用机制。方法:在Lipofectamine 2000介导下,将siRNA阴性对照以及siRNA-Ywhaz分别转染高糖条件下培养的小鼠肾小球系膜细胞,以高糖未转染和正常培养的肾小球系膜细胞作为对照,实时定量PCR(RT-PCR)检测各组细胞中Ywhaz mRNA水平;噻唑蓝(MTT)实验检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞的凋亡率;RT-PCR检测各组细胞中炎症因子白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达量;蛋白质印迹法(Western blot)检测Ywhaz蛋白、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)和磷酸化丝裂原活化蛋白激酶-3(p-MKK3)的表达水平。结果: Ywhaz在高糖对照组细胞中的表达量显著高于正常对照组( P <0.05),RNA干扰后Ywhaz基因的表达量较高糖对照组显著降低( P <0.05);与高糖对照组相比,siRNA-Ywhaz组细胞的增殖能力明显降低( P <0.05),凋亡率显著增加( P <0.05),显著抑制IL-8和TNF-α以及p-p38 MAPK、p-MKK3的表达量( P <0.05)。结论:下调Ywhaz可降低p38 MAPK 信号通路关键蛋白 p-p38 MAPK、p-MKK3的表达以及炎症反应,从而抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖。展开更多
文摘目的:探究RNA干扰(RNAi)色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(Ywhaz)基因对高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖、凋亡的影响及可能作用机制。方法:在Lipofectamine 2000介导下,将siRNA阴性对照以及siRNA-Ywhaz分别转染高糖条件下培养的小鼠肾小球系膜细胞,以高糖未转染和正常培养的肾小球系膜细胞作为对照,实时定量PCR(RT-PCR)检测各组细胞中Ywhaz mRNA水平;噻唑蓝(MTT)实验检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞的凋亡率;RT-PCR检测各组细胞中炎症因子白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达量;蛋白质印迹法(Western blot)检测Ywhaz蛋白、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)和磷酸化丝裂原活化蛋白激酶-3(p-MKK3)的表达水平。结果: Ywhaz在高糖对照组细胞中的表达量显著高于正常对照组( P <0.05),RNA干扰后Ywhaz基因的表达量较高糖对照组显著降低( P <0.05);与高糖对照组相比,siRNA-Ywhaz组细胞的增殖能力明显降低( P <0.05),凋亡率显著增加( P <0.05),显著抑制IL-8和TNF-α以及p-p38 MAPK、p-MKK3的表达量( P <0.05)。结论:下调Ywhaz可降低p38 MAPK 信号通路关键蛋白 p-p38 MAPK、p-MKK3的表达以及炎症反应,从而抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖。
