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《中国畜牧兽医》 北大核心

作品数12452被引量45923H指数43
《中国畜牧兽医》1974年2月创刊,月刊,是农业农村部主管,中国农业科学院北京畜牧兽医研究所主办的国内外公开发行的科技期刊,是国家新闻出版行政主管部门2014年第一批资质认定的学术期刊,前身为《国外畜...查看详情>>
  • 曾用名 国外畜牧科技
  • 主办单位中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
  • 国际标准连续出版物号1671-7236
  • 国内统一连续出版物号11-4843/S
  • 出版周期月刊
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基于网络药理学及分子对接探究四黄止痢复方治疗仔猪腹泻的作用机制
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作者 蒋秉妤 陈宁 +4 位作者 崔亚男 朱凯晴 姜朋欣 王旭涛 李妍 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1308-1319,共12页
【目的】利用网络药理学方法探究四黄止痢复方治疗仔猪腹泻的作用机制并进行分子对接模拟验证。【方法】在TCMSP数据库收集黄芩、黄柏、大黄、黄连、板蓝根和甘草的活性成分及对应靶点,在GeneCards数据库收集仔猪腹泻相关靶点,并通过Uni... 【目的】利用网络药理学方法探究四黄止痢复方治疗仔猪腹泻的作用机制并进行分子对接模拟验证。【方法】在TCMSP数据库收集黄芩、黄柏、大黄、黄连、板蓝根和甘草的活性成分及对应靶点,在GeneCards数据库收集仔猪腹泻相关靶点,并通过UniProt数据库对收集到的靶点进行标准化。通过Venn在线作图网站获得共有靶点,并使用Cytoscape 3.9.1制作药物-靶点网络图得到主要活性成分。对共有靶点进行蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)、GO功能和KEGG通路富集分析,制作PPI网络图,筛选出核心靶点。利用PubChem和PDB数据库分析主要活性成分及靶点的3D结构文件,并通过Discovery Studio 2019 Client软件进行分子对接。【结果】四黄止痢复方治疗仔猪腹泻的主要活性成分为汉黄芩素、β-谷甾醇、金合欢素、去氢丹参酮ⅡA和四氢小檗碱,核心靶点包括肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、胱天蛋白酶3(caspase-3,CASP3)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL6)、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)。GO功能富集分析结果显示,四黄止痢复方主要作用靶点的生物学功能富集到RNA聚合酶Ⅱ启动子转录调控、细胞凋亡、血管生成、IL8产生、细胞因子活性、生长因子活性等条目。KEGG通路富集分析结果显示,四黄止痢复方主要作用靶点富集在信号转导、免疫系统、病毒性感染等相关分子信号通路。分子对接结果表明,汉黄芩素与TNF,去氢丹参酮ⅡA、四氢小檗碱和金合欢素与STAT3都显示出良好对接活性。【结论】四黄止痢复方可能通过汉黄芩素、β-谷甾醇、金合欢素、去氢丹参酮ⅡA和四氢小檗碱等主要活性成分作用于IL6、VEGFA、STAT3、TNF、CASP3等靶点,进而通过癌症通路、脂质与粥样动脉硬化和人巨细胞病毒感染等通路对仔猪腹泻起到抗炎、抗氧化等治疗效果,体现了中药的多成分、多靶点、多通路的特点。 展开更多
关键词 四黄止痢复方 网络药理学 分子对接 仔猪腹泻 作用机制
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甲磺酸瑞波西汀体外颉颃塞内卡病毒的研究
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作者 巩有权 周晓翠 +7 位作者 郑辉 陈峰 曹振山 沙洲 张慧 崔进 武瑞 尼博 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期268-277,共10页
【目的】从含有127种化合物的FDA批准上市药物库中筛选具有颉颃A型塞内卡病毒(SenecavirusA,SV A)活性的化合物并研究其作用途径。【方法】利用荧光素酶重组塞内卡病毒(rSVA-NLuc)结合荧光素酶高通量筛选技术,建立抗SVA化合物体外筛选... 【目的】从含有127种化合物的FDA批准上市药物库中筛选具有颉颃A型塞内卡病毒(SenecavirusA,SV A)活性的化合物并研究其作用途径。【方法】利用荧光素酶重组塞内卡病毒(rSVA-NLuc)结合荧光素酶高通量筛选技术,建立抗SVA化合物体外筛选平台。从FDA批准上市药物库中筛选浓度为10μmol/L时具有抑制荧光素酶活性效应的化合物,并进一步利用实时荧光定量RT-PCR验证其抑制活性,通过反映乳酸脱氢酶(LDH)释放水平的细胞毒性试验进而确定其最大无毒浓度。针对病毒感染周期的吸附、入胞、复制和组装释放等4个主要过程,采用不同的细胞处理方法和实时荧光定量RT-PCR、间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)、蛋白免疫印迹(Western blotting)和病毒滴度测定(TCID_(50))等技术进行化合物分子额顽机制研究。【结果】从包含127种分子的FDA获批上市药物库中筛选出8种候选抗SVA活性分子,通过实时荧光定量RT-PCR及细胞毒性检测,鉴定出1种安全、有效的化合物——甲磺酸瑞波西汀。在病毒感染细胞36h内甲磺酸瑞波西汀可使SVA VP3蛋白表达量和病毒滴度均极显著下降(P<0.01)。甲磺酸瑞波西汀处理金黄仓鼠肾细胞(BSR-T7/5)可减少SVA的吸附和入胞;实时荧光定量RT-PCR也显示甲磺酸瑞波西汀能抑制SVA的组装阶段,但它对SVA的复制和释放阶段没有影响。【结论】本试验从FDA批准上市药物库中筛选出了1种细胞毒性较低且颉SVA效果优异的化合物一—甲磺酸瑞波西汀,该化合物通过抑制SVA的吸附、入胞和组装阶段来对抗SVA感染。本研究为抗SVA药物的进一步研发提供重要参考。 展开更多
关键词 A型塞内卡病毒(SVA) FDA药物库 高通量筛选
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牦牛源A型产气荚膜梭菌的分离鉴定及生物学特性研究
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作者 王冬经 吴金措姆 曾江勇 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期229-241,共13页
【目的】2023年4月至2023年5月,西藏拉萨市多地出现牦牛严重腹泻、便血甚至死亡的现象。试验旨在确定牦牛腹泻的病原菌并研究其生物学特性,以期为该地区牦牛腹泻病的防治提供参考。【方法】采集新鲜牦牛腹泻粪便样品进行厌氧培养,通过... 【目的】2023年4月至2023年5月,西藏拉萨市多地出现牦牛严重腹泻、便血甚至死亡的现象。试验旨在确定牦牛腹泻的病原菌并研究其生物学特性,以期为该地区牦牛腹泻病的防治提供参考。【方法】采集新鲜牦牛腹泻粪便样品进行厌氧培养,通过培养特性及染色镜检进行初步鉴定;对可疑阳性菌株进行生化特性、多重PCR毒素基因分型及cpe、netB、cpb2毒素鉴定,并进行cpa、cpb2、16S rRNA基因的遗传进化分析、部分分离株生长曲线测定及动物致病性试验;采用K-B法测定分离株的体外药物敏感性,统计不同分离株的多重耐药结果。【结果】从样品中分离纯化得到8株分离菌,在厌氧培养基中生长旺盛,在TSC培养基、5%脱纤维绵羊血平板、卵黄琼脂培养基上均呈现与产气荚膜梭菌相似的典型菌落,革兰染色为紫色大杆菌,初步判定为产气荚膜梭菌,命名为XZ-1~XZ-8。分离株生化检测结果与产气荚膜梭菌相符;分离株均携带cpa和cpb2基因,为A型产气荚膜梭菌;16S rRNA基因分析结果显示,8株分离株与产气荚膜梭菌参考株的相似性为97.3%~100%,在系统进化树中处于同一分支,而与屎肠球菌、大肠杆菌参考株处于不同分支;分离株cpa和cpb2基因存在一定的变异性。生长曲线显示,3株分离株(XZ-1、XZ-4、XZ-7)生长规律基本一致,其中0~4 h为迟缓期,4~8 h为对数期,8~22 h为稳定期,22 h后开始进入衰亡期。动物致病性试验结果显示,分离株对昆明小鼠具有较强的致病性。分离株对苯唑西林、红霉素、氯霉素、氧氟沙星、米诺环素、头孢哌酮、利福平及罗红霉素敏感,对青霉素、哌拉西林、羧苄西林、麦迪霉素、头孢曲松等22种药物均存在不同程度的耐药性,存在多重耐药性,其中XZ-7株耐药数量多达11种,6重以上耐药的菌株占75.0%。【结论】本研究成功从拉萨严重腹泻、血便牦牛粪样中分离出8株A型产气荚膜梭菌,分离株对小鼠具有较强的致病性,对青霉素、哌拉西林、羧苄西林等药物存在不同程度的耐药性。研究结果为该地区牦牛腹泻病防控提供了参考依据。 展开更多
关键词 牦牛 产气荚膜梭菌 分离鉴定 生长曲线 动物致病性 耐药性
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复方双黄连制剂对单核巨噬细胞(RAW264.7)Fc/C3b受体活性和分泌功能的影响
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作者 史晗 戴浩然 +1 位作者 郭彬 刘群 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期52-63,共12页
【目的】探究复方双黄连制剂对巨噬细胞吞噬能力和分泌功能的影响,为复方双黄连的深度开发及畜禽用药的合理选择提供科学依据。【方法】将金银花、黄芩、连翘、穿心莲干燥粉碎后分别制备浸膏,按照比例制备双黄连口服液(金银花∶黄芩∶连... 【目的】探究复方双黄连制剂对巨噬细胞吞噬能力和分泌功能的影响,为复方双黄连的深度开发及畜禽用药的合理选择提供科学依据。【方法】将金银花、黄芩、连翘、穿心莲干燥粉碎后分别制备浸膏,按照比例制备双黄连口服液(金银花∶黄芩∶连翘=1∶1∶2)、复方双黄连口服液(金银花∶黄芩∶连翘∶穿心莲=1∶1∶2∶2)及穿心莲口服液,调节pH为7.0,生药浓度为1 g/mL。3种药物作用于小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,采用CCK-8法检测细胞活力,确定3种药物安全浓度,将药物最大安全浓度以二倍稀释法稀释为3个浓度;采用脂多糖(LPS)和氢化考的松琥珀酸钠(HCSS)作用于RAW264.7细胞模拟机体炎症和免疫抑制状态,3种药物作用于这2种状态的细胞和正常细胞,采用YC、EA玫瑰花环法及中性红吞噬法检测巨噬细胞Fc/C3b受体活性和吞噬能力,采用ELISA法检测巨噬细胞分泌能力。【结果】复方双黄连、双黄连、穿心莲的安全浓度分别为0.625~2.5、3.125~12.5和0.625~2.5 mg/mL。不同浓度复方双黄连、双黄连、穿心莲作用于巨噬细胞,细胞吞噬能力均显著高于空白对照组(P<0.05)。复方双黄连可降低LPS巨噬细胞RAW264.7活跃的吞噬能力,增强HCSS巨噬细胞RAW264.7吞噬能力;不同浓度复方双黄连可使活化的巨噬细胞Fc/C3b受体活性下降,低下的Fc/C3b受体活性增强;不同浓度复方双黄连具有促进巨噬细胞分泌一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)及溶菌酶(LZM)的作用,抑制LPS巨噬细胞NO、TNF-α、IFN-γ及白细胞介素-6(IL-6)的分泌。【结论】复方双黄连可通过活化巨噬细胞Fc/C3b受体活性以增强机体免疫力和抗炎能力,同时对已活化的巨噬细胞分泌功能起到抑制作用,以减少由于免疫功能亢进造成的机体损伤。研究结果为中兽药复方双黄连的深度开发提供了参考依据。 展开更多
关键词 复方双黄连 巨噬细胞Fc/C3b受体 吞噬能力 分泌功能
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多杀性巴氏杆菌CRISPR-Cas系统生物信息学分析
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作者 李佳富 莫小兵 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1742-1753,共12页
【目的】了解多杀性巴氏杆菌中CRISPR-Cas系统的结构特征及cas基因的分布,为不同CRISPR亚型的应用及多杀巴氏杆菌的抗病毒进化研究提供基础。【方法】通过CRISPRCasfinder在线网站筛选多杀性巴氏杆菌基因组中的CRISPR簇和cas基因;通过... 【目的】了解多杀性巴氏杆菌中CRISPR-Cas系统的结构特征及cas基因的分布,为不同CRISPR亚型的应用及多杀巴氏杆菌的抗病毒进化研究提供基础。【方法】通过CRISPRCasfinder在线网站筛选多杀性巴氏杆菌基因组中的CRISPR簇和cas基因;通过生物信息学方法对各亚型系统中repeat和spacer序列保守性、repeat二级结构、cas基因核苷酸序列保守性、CRISPR簇相似性等进行分析。【结果】在选取的19株多杀性巴氏杆菌基因组中均存在Ⅰ-F、Ⅱ-C、Ⅲ-A亚型CRISPR系统。在相同亚型的CRISPR系统中repeat序列有着较保守的回文重复序列,但在不同CRISPR亚型中repeat序列差异较大。Ⅱ-C亚型的tracrRNA可以与crRNA形成保守的结构。在各亚型CRISPR系统中,新获取的spacer序列可以插入到CRISPR簇的5′-端、3′-端或中间位置。通过对各菌株spacer序列分析发现,在菌株内或菌株间的CRISPR序列中均存在着相同的spacer序列,这可能与细菌在遗传进化过程中repeat-spacer发生序列重组或基因水平转移产生的趋同进化有关。【结论】19株多杀性巴氏杆菌中含有Ⅰ-F、Ⅱ-C、Ⅲ-A 3种CRISPR-Cas系统,不同CRISPR亚型中repeat序列差异较大,spacer特征性重复的分布可能与多杀性巴氏杆菌在遗传进化过程中repeat-spacer发生序列重组有关。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 CRISPR-Cas系统 repeat序列 spacer序列 生物信息学
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补喂L-精氨酸对返情纯血母马妊娠率及血浆参数的影响
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作者 臧长江 刘保宣 +5 位作者 院东 李晓斌 李凤鸣 陈开旭 米热古丽·伊马木 杨开伦 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期125-133,共9页
【目的】试验旨在研究补喂L-精氨酸对返情纯血马妊娠率及血液参数的影响。【方法】选择返情纯血母马14匹随机分为2组,每组7匹(n=7),分别为对照组、L-精氨酸组,对照组饲喂基础饲粮,L-精氨酸组在基础饲粮中添加50 g/d L-精氨酸;预饲期7 d... 【目的】试验旨在研究补喂L-精氨酸对返情纯血马妊娠率及血液参数的影响。【方法】选择返情纯血母马14匹随机分为2组,每组7匹(n=7),分别为对照组、L-精氨酸组,对照组饲喂基础饲粮,L-精氨酸组在基础饲粮中添加50 g/d L-精氨酸;预饲期7 d,试验期30 d。返情母马发情时,第一次人工输精结束当天补喂L-精氨酸;配种结束时直肠B超检查妊娠情况,统计妊娠率,分别于试验第0、15、30天颈静脉采血,用于测定总一氧化氮合成酶(total nitric oxide synthetase,TNOS)、内皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthetase,eNOS)活性及一氧化氮(nitric oxide,NO)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、生长激素(growth hormone,GH)、胰岛素样生长因子(insulinlike growth factor,IGF)含量等指标。【结果】与对照组相比,L-精氨酸组妊娠率显著提高(P<0.05);试验第0、15、30天血浆TNOS、eNOS、鸟氨酸脱羧酶(orinithine decarboxylase,ODC)活性及NO、IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、VEGF含量在两组间均无显著差异(P>0.05);试验第30天L-精氨酸组血浆氨(ammonia,NH3)、尿素氮(urea nitrogen,UN)含量分别比对照组降低13.49%、26.91%(P<0.05)。与对照组相比,试验第30天L-精氨酸组血浆GH含量提高50.26%(P<0.01),试验第0、15、30天两组间母马血浆免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)含量均无显著差异(P>0.05)。【结论】返情纯血母马补喂L-精氨酸能显著提高妊娠率,改变母马体循环血浆UN、NH3、GH含量。L-精氨酸可作为营养调控剂提高纯血母马妊娠率。 展开更多
关键词 L-精氨酸 母马 妊娠率 血浆参数
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猪RPL36A基因对PK15细胞增殖过程的影响
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作者 王首元 贠红梅 +5 位作者 史明月 秦云梦 李熊 陈军舟 周琛帛 曹果清 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期3035-3044,共10页
【目的】探究核糖体蛋白L36A(ribosomal protein L36A,RPL36A)基因对PK15细胞增殖过程的影响,为解析马身猪和大白猪生长速度差异的生理机制奠定基础。【方法】采用脂质体法将RPL 36 A基因干扰和过表达载体转染至PK15细胞中,通过实时荧... 【目的】探究核糖体蛋白L36A(ribosomal protein L36A,RPL36A)基因对PK15细胞增殖过程的影响,为解析马身猪和大白猪生长速度差异的生理机制奠定基础。【方法】采用脂质体法将RPL 36 A基因干扰和过表达载体转染至PK15细胞中,通过实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测RPL 36 A基因表达效率及细胞增殖标志基因(PCNA、Ki67、Cyclin B、CDK4)的表达变化,并通过划痕试验、CCK-8和EdU法检测细胞增殖情况。【结果】过表达RPL 36 A基因后,PK15细胞中PCNA、Ki 67、CDK 4基因mRNA表达量均极显著升高(P<0.01),Cyclin B基因mRNA表达量显著升高(P<0.05);PCNA蛋白表达量显著升高(P<0.05);PK15细胞在48 h的细胞数量极显著高于空载组(P<0.01),细胞增殖速度升高;阳性细胞数极显著升高(P<0.01)。干扰RPL 36 A基因后,PK15细胞中PCNA、Cyclin B基因mRNA表达量均极显著降低(P<0.01),Ki 67、CDK 4基因mRNA表达量均显著降低(P<0.05);PCNA蛋白表达量显著降低(P<0.05);PK15细胞在48 h的细胞数量显著低于对照组(P<0.05),细胞增殖速度降低;阳性细胞数极显著降低(P<0.01)。【结论】在PK15细胞中过表达和干扰RPL 36 A基因后,细胞增殖关键基因PCNA、Ki 67、Cyclin B、CDK 4的表达量及48 h的细胞数量和阳性细胞数均有显著变化,RPL 36 A基因可影响PK15细胞的增殖过程。 展开更多
关键词 RPL 36 A基因 PK15细胞 过表达 干扰 细胞增殖
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刺五加水提物抗鳜蛙虹彩病毒活性及其对大口黑鲈免疫调节作用的研究
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作者 马艳平 徐晶晶 +7 位作者 杨宏伟 郝乐 贾梦岩 陶子骞 王敬雅 黄文 彭凯 刘振兴 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期1207-1217,共11页
【目的】研究刺五加水提物(Acanthopanax senticosus aqueous extract,ASAE)对鳜蛙虹彩病毒(Mandarin ranavirus,MRV)的抑制作用及其对大口黑鲈免疫调节功能的影响。【方法】用不同剂量ASAE(1.2、1.0、0.8、0.6、0.4和0.2 mg/mL)与MRV... 【目的】研究刺五加水提物(Acanthopanax senticosus aqueous extract,ASAE)对鳜蛙虹彩病毒(Mandarin ranavirus,MRV)的抑制作用及其对大口黑鲈免疫调节功能的影响。【方法】用不同剂量ASAE(1.2、1.0、0.8、0.6、0.4和0.2 mg/mL)与MRV同时作用鳜鱼脑细胞系(SCB3),检测ASAE对MRV的抑制活性。在基础饲粮中添加5‰ASAE,连续饲喂大口黑鲈15 d,实时荧光定量PCR和流式细胞术分析ASAE对大口黑鲈免疫功能的影响,并以1×10^(7)TCID 50/mL MRV腹腔注射攻毒,分析ASAE抗MRV保护效果。【结果】1.2、1.0、0.8、0.6、0.4和0.2 mg/mL ASAE对MRV抑制率分别为95.27%、91.36%、84.55%、60.05%、32.16%和2.49%。实时荧光定量PCR结果显示,ASAE诱导大口黑鲈白介素-10(interleukin-10,IL-10)、酪氨酸激酶(tyrosine-protein kinase,Lyn)、肌动蛋白相关蛋白(actin related protein 2/3 complex,subunit 5,ARPC5)、Fcγ受体Ⅰa(FcγreceptorⅠa,FcγRⅠa)等Fcγ受体吞噬通路相关基因显著性上调表达(P<0.05);流式细胞术分析结果显示,添加ASAE明显提高了大口黑鲈头肾白细胞吞噬能力(吞噬率80.9%)。攻毒试验结果显示,ASAE对MRV的相对保护率为30.48%。与对照组相比,ASAE明显延缓了大口黑鲈死亡时间,且添加ASAE组脑、脾脏、中肠、后肠组织的病毒拷贝数显著降低(P<0.05)。【结论】ASAE可显著激活大口黑鲈吞噬活性,发挥免疫调节作用,体内外试验均表明ASAE具有优异的抗MRV效果,可以有效预防MRV感染。 展开更多
关键词 刺五加水提物(ASAE) 鳜蛙虹彩病毒(MRV) 大口黑鲈 体外试验 体内试验 吞噬影响
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柔嫩艾美耳球虫MIF基因克隆及生物信息学分析 被引量:1
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作者 李永彬 杨惠琳 +7 位作者 宋子豪 张昱 杨瑾 孟佳 崔小珍 吕晓玲 郑明学 白瑞 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2450-2459,共10页
【目的】克隆柔嫩艾美耳球虫巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)基因CDS区,探究其生物信息学特征,为后续抗原表位筛选提供理论依据。【方法】采集晋中地区疑似柔嫩艾美耳球虫感染的阳性样本进行PCR鉴定... 【目的】克隆柔嫩艾美耳球虫巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)基因CDS区,探究其生物信息学特征,为后续抗原表位筛选提供理论依据。【方法】采集晋中地区疑似柔嫩艾美耳球虫感染的阳性样本进行PCR鉴定,根据GenBank中公布的柔嫩艾美耳球虫MIF基因序列,利用RT-PCR技术扩增MIF基因CDS区,构建pET28a-EtMIF重组质粒,经PCR和双酶切鉴定后测序并进行序列分析;利用生物信息学软件对其编码蛋白的理化性质、结构和功能等进行预测。【结果】成功克隆了柔嫩艾美耳球虫MIF基因CDS区序列,全长348 bp,共编码115个氨基酸,相对分子质量为1.203×104。系统进化树结果表明,柔嫩艾美耳球虫MIF基因氨基酸序列与毒害艾美耳球虫的亲缘关系最近,相似性为98.3%。MIF蛋白为非跨膜、可溶性、非分泌型蛋白,亚细胞定位主要在细胞质中,共有10个磷酸化位点;含有1个保守结构域,二级结构由无规则卷曲(35.65%)、延伸链(30.43%)、α-螺旋(27.83%)和β-转角(6.09%)组成,三级结构预测结果与二级结构一致。存在3个最佳潜在抗原表位。【结论】本试验成功克隆出柔嫩艾美耳球虫MIF基因,并对其进行了生物信息学分析,为今后MIF基因的功能研究及基因工程疫苗候选分子的筛选提供参考。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 MIF基因 生物信息学
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1株利用乳酸的猪源丁酸梭菌的分离鉴定及基因组序列分析 被引量:3
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作者 胡晓冰 林标声 +1 位作者 王振伟 郑黎静 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第2期569-578,共10页
【目的】研究1株利用乳酸的猪源丁酸梭菌的基因组信息。【方法】采用厌氧培养法,通过乳酸分解培养基(LADM)初筛、梭菌增殖培养基(RCM)复筛,从饲喂乳酸菌发酵饲料的健康仔猪肠道内容物中分离利用乳酸快、丁酸转化率高的菌株,对所筛选的... 【目的】研究1株利用乳酸的猪源丁酸梭菌的基因组信息。【方法】采用厌氧培养法,通过乳酸分解培养基(LADM)初筛、梭菌增殖培养基(RCM)复筛,从饲喂乳酸菌发酵饲料的健康仔猪肠道内容物中分离利用乳酸快、丁酸转化率高的菌株,对所筛选的菌株进行形态鉴定、16S rDNA序列分析、乳酸转化特性试验、基因组重测序和框架图测序,并对其编码蛋白进行功能注释。【结果】分离得到1株分离菌LY33,基于形态和16S rDNA序列分析鉴定为丁酸梭菌。菌株LY33对乳酸具有较好的利用能力,在生长第6天可将66 mmol的乳酸基本转化完全,生成17 mmol左右的丁酸。LY33菌株的重测序表明,其编码基因整体变异较小,与参考基因组相比,LY33菌株全基因组杂合比率为0.022‰,单核苷酸多态性(SNP)位点变异总数21590个(占整个基因组0.4666%),插入缺失(InDel)突变总和594个(占0.0128%),不存在拷贝数变异(CNV),结构变异(SV)注释的变异总数103个(占0.0003%)。突变基因主要为与菌株生长、能量代谢调节、维生素合成(特别是生物素)有关的基因,分布于2条染色体的多条序列上。LY33菌株框架图测序及其编码基因蛋白的功能注释表明,其基因组序列长度4627127 bp,GC含量28.60%,含有4171个基因,编码区总长度占比84.12%,参与了糖代谢(carbohydrate metabolism)、膜转运(membrane transport)和氨基酸代谢(amino acid metabolism)等多种代谢途径转化过程,基因组中抗大环内酯类药物、抗杆菌肽、VanI糖肽抗性基因个数较多。【结论】本研究从饲喂4%乳酸菌发酵饲料的健康仔猪肠道内容物中分离到1株利用乳酸快、丁酸转化率高的LY33菌株,经鉴定为丁酸梭菌,其具有良好的应用前景,可作为一种新的微生物资源用于微生态制剂产品。 展开更多
关键词 丁酸梭菌 乳酸 分离鉴定 基因组 序列分析
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miR-449b对绵羊早期胚胎发育的影响 被引量:2
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作者 任秀美奥 姚旭东 +6 位作者 蒙亚琦 郭延华 唐红 张译元 赵兴旺 王立民 周平 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第7期2661-2668,共8页
【目的】研究miR-449b对绵羊早期胚胎发育的影响。【方法】采用Percoll密度梯度离心法获得纯化绵羊精子,将绵羊卵丘-卵母细胞复合体(COCs)在培养箱中培养16~18 h获得成熟卵母细胞,从1月龄纯种萨福克绵羊耳组织分离成纤维细胞,通过实时... 【目的】研究miR-449b对绵羊早期胚胎发育的影响。【方法】采用Percoll密度梯度离心法获得纯化绵羊精子,将绵羊卵丘-卵母细胞复合体(COCs)在培养箱中培养16~18 h获得成熟卵母细胞,从1月龄纯种萨福克绵羊耳组织分离成纤维细胞,通过实时荧光定量PCR比较绵羊精子、成熟卵母细胞与成纤维细胞中miR-449b的相对表达量;给成熟卵母细胞分别显微注射0.9%生理盐水(Con组)、miR-449b模拟物对照(NC mimic)与miR-449b模拟物(miR-449b mimic),注射后进行孤雌激活,分别于激活的第2、7天统计胚胎卵裂率与囊胚率;将成熟卵母细胞进行体外受精(IVF),收集IVF、Con、NC mimic与miR-449b mimic组2-细胞胚胎,采用免疫荧光法比较组蛋白H3K9me3的变化。【结果】miR-449b在精子中的表达显著高于成熟卵母细胞和成纤维细胞(P<0.05);与Con组相比,miR-449b mimic和NC mimic组胚胎的卵裂率均显著降低(P<0.05),NC mimic组胚胎卵裂率显著低于miR-449b mimic组(P<0,05);miR-449b mimic组胚胎囊胚率提高,但差异不显著(P>0.05);IVF、Con、NC mimic与miR-449b mimic组2-细胞胚胎均表达组蛋白H3K9me3,且都在细胞核表达。与Con组相比,NC mimic组2-细胞胚胎组蛋白H3K9me3的表达水平显著增加(P<0.05),miR-449b mimic组显著降低(P<0.05);NC mimic组2-细胞胚胎组蛋白H3K9me3的表达水平显著高于miR-449b mimic组(P<0.05),miR-449b mimic与IVF组无显著差异(P>0.05)。【结论】miR-449b能显著提高绵羊早期胚胎的发育率,且降低早期胚胎中H3K9me3的表达水平。 展开更多
关键词 miR-449b 早期胚胎 H3K9me3 精子
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《中国畜牧兽医》编委会
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《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第1期F0004-F0004,共1页
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绿色荧光蛋白的真核表达及其单克隆抗体制备
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作者 胡换仪 汪建中 +4 位作者 刘昌锦 林敏 刘小兰 魏黄思梧 邓舜洲 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第1期328-337,共10页
【目的】构建表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组猪痘病毒(recombinant Swinepox virus,rSWPV),制备抗GFP单克隆抗体。【方法】首先合成3′-端含His标签的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列EGFP-His,用双酶切方法将其... 【目的】构建表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组猪痘病毒(recombinant Swinepox virus,rSWPV),制备抗GFP单克隆抗体。【方法】首先合成3′-端含His标签的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列EGFP-His,用双酶切方法将其插入到基础质粒载体pSW中,构建重组转移载体pSW-EGFP-His;采用脂质体转染的方法使该载体与SWPV(SWPV-JX20G株)同源重组,经蚀斑纯化获得rSWPV-EGFP-His。重组病毒进行PCR和SDS-PAGE鉴定,扩增并纯化EGFP-His蛋白免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选分泌抗GFP特异性抗体的杂交瘤细胞,制备腹水,对抗GFP单克隆抗体进行效价及特异性鉴定。【结果】PCR和SDS-PAGE结果显示,成功构建并纯化到rSWPV-EGFP-His,该病毒感染PK15细胞可稳定表达EGFP-His蛋白,蛋白大小约27 ku,为可溶性表达,镍柱纯化的EGFP-His蛋白溶液呈明显的绿色。EGFP-His蛋白免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠血清抗体效价高达1∶256000。采用杂交瘤技术制备了9株能稳定分泌抗EGFP-His单克隆抗体的杂交瘤细胞株,间接ELISA和Western blotting结果显示,9株单克隆抗体中的7株针对GFP的线性表位,另外2株单克隆抗体针对GFP的构象表位。【结论】本研究成功制备了EGFP-His蛋白和9株抗EGFP-His的单克隆抗体,为后续建立GFP的免疫学检测方法提供了必备材料。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白(GFP) 猪痘病毒载体 真核表达 单克隆抗体
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β-葡聚糖的生物学功能及在水产养殖中的应用
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作者 侯冬强 赵红霞 +1 位作者 彭凯 曹俊明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第12期1525-1534,共10页
β-葡聚糖来源广泛,主要存在于植物和微生物细胞壁中,由葡聚糖单体构成,具有多种结构,因其侧链残基种类和数量的不同而具有多种生物学功能,如通过降低炎症相关基因表达及提高免疫因子的表达发挥调节免疫的作用;通过减少脂质的产生和吸... β-葡聚糖来源广泛,主要存在于植物和微生物细胞壁中,由葡聚糖单体构成,具有多种结构,因其侧链残基种类和数量的不同而具有多种生物学功能,如通过降低炎症相关基因表达及提高免疫因子的表达发挥调节免疫的作用;通过减少脂质的产生和吸收发挥调节脂质代谢的作用;通过提高抗氧化酶、自由基、超氧阴离子的清除活性及激活Nrf2信号通路、上调抗氧化基因的表达来增强机体的抗氧化能力,发挥抗氧化作用;通过增强缺氧耐受性及提高抗氨氮应激能力、能量代谢和抗氧化酶基因的表达等发挥抗应激作用。自抗生素禁用以来,β-葡聚糖在水产动物中的研究和应用逐渐深入,β-葡聚糖在预防水产动物疾病和减少抗生素使用等方面发挥着重要作用。在水产养殖中,β-葡聚糖可通过提高消化酶活性、改善肠道结构、优化肠道菌群及增强非特异性免疫力来提高水产动物生长性能,β-葡聚糖的联合使用比添加单一种类的免疫刺激剂具有更好的免疫效果。作者就β-葡聚糖的结构特征、生物学活性、作用机制及在水产动物中的应用进行了综述,并对β-葡聚糖今后的发展方向进行了展望,为实现水产动物生态健康养殖提供材料。 展开更多
关键词 Β-葡聚糖 水产动物 营养 免疫 抗氧化
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1株鹅源类志贺邻单胞菌的分离鉴定及致病性研究
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作者 康宇晖 周洪善 +1 位作者 金文杰 秦爱建 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第9期3676-3682,共7页
【目的】查明江苏某鹅场鹅发病及死亡原因。【方法】剖检病死鹅,运用细菌分离纯化、染色观察、生化试验、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定、16S rDNA测定方法进行病原菌分离鉴定,通过药敏试验和小鼠致病性试验探究... 【目的】查明江苏某鹅场鹅发病及死亡原因。【方法】剖检病死鹅,运用细菌分离纯化、染色观察、生化试验、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定、16S rDNA测定方法进行病原菌分离鉴定,通过药敏试验和小鼠致病性试验探究分离菌株的特性。【结果】从患病鹅肝脏分离到1株革兰氏阴性短杆状细菌;生化试验结果显示,此菌株可发酵葡萄糖、麦芽糖、枸橼酸盐、尿素;MALDI-TOF MS鉴定结果显示,此菌株为类志贺邻单胞菌;16S rDNA序列对比分析发现,分离菌与类志贺邻单胞菌相似性最高,达98%以上;药敏试验结果显示,分离菌对左氧氟沙星、美罗培南、头孢西丁、庆大霉素等10种抗菌药敏感,对四环素、头孢吡肟、头孢他啶、头孢唑林表现为中介,对阿奇霉素、复方新诺明、氨苄西林等6种药物表现为耐药,是典型的多重耐药菌;小鼠致病性试验结果显示,分离菌对小鼠的半数致死量为5.0×10^(6.5)CFU。【结论】本试验首次报道了从鹅体内分离到致病性类志贺邻单胞菌,通过药敏试验筛选了左氧氟沙星、美罗培南、头孢西丁等有效的临床常用抗菌药,分离株对小鼠致病性较强,提示其带来的潜在风险不可忽视。 展开更多
关键词 类志贺邻单胞菌 药敏试验 致病性
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中国西南部分地区2020-2021年猪流行性腹泻病毒遗传变异分析 被引量:8
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作者 刘雨桐 姚妍婷 +4 位作者 黎芮伶 韩文琪 石婷 王一丹 任玉鹏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第6期2279-2290,共12页
【目的】了解中国西南部分地区流行的猪流行性腹泻病毒(PEDV)基因型及遗传变异规律。【方法】对2020-2021年四川和云南不同地区来源的200份腹泻猪肛门拭子进行RT-PCR检测,对PEDV S和ORF3基因进行克隆测序,利用MegAlign软件进行变异性分... 【目的】了解中国西南部分地区流行的猪流行性腹泻病毒(PEDV)基因型及遗传变异规律。【方法】对2020-2021年四川和云南不同地区来源的200份腹泻猪肛门拭子进行RT-PCR检测,对PEDV S和ORF3基因进行克隆测序,利用MegAlign软件进行变异性分析,采用Mega 7.0软件进行系统进化分析,采用RDP4软件进行基因重组分析。【结果】在所有样本中PEDV总体阳性率为15.50%(31/200),群体阳性率为100%(8/8)。检出的8株PEDV S基因和ORF3基因序列与已登录毒株相似性分别为90.5%~99.4%和92.9%~100%。对S基因的进化分析显示,8个PEDV流行株分布于G2a、G2b和G2c 3个亚群中。其中,四川SCWJSWUN02株与福建CH/FJXM/1/2012株遗传距离较近,云南YNKMSWUN01株与越南毒株单独聚为一支,表明当前西南地区PEDV的流行呈现出区域间传播的特征。与本地区近年流行毒株和常用疫苗株相比,其S蛋白氨基酸序列均存在不同程度的变异,但ORF3蛋白相对保守。部分毒株S蛋白存在连续氨基酸的插入或缺失,如在SCMYSWUN03株S蛋白59-62位氨基酸处发现4个氨基酸的缺失;在YNKMSWUN01株78-82位氨基酸处和84-88位氨基酸处分别有5个氨基酸插入和缺失。部分氨基酸突变位点存在于已鉴定的PEDV S蛋白受体结合中。此外,基因重组分析结果显示,SCMYSWUN03株可能发生了基因重组事件,概率为98.2%(P<0.01)。【结论】本研究发现当前西南地区流行的PEDV毒株包括G2a、G2b和G2c 3个亚群,毒株基因型具有多样性,且不同毒株间的变异性较大,丰富了PEDV在四川和云南地区的分子流行病学调查资料,揭示了中国西南地区流行的8个PEDV毒株的分子遗传变异规律和进化特征,为本地区猪腹泻病防控措施的制定提供了理论依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) S基因 ORF3基因 遗传进化分析
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过瘤胃胆碱和有机铬对围产期奶牛免疫及抗氧化功能的影响 被引量:3
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作者 李向宝 徐小辉 +4 位作者 安秀秀 魏学良 徐玉薇 王媛媛 陈诗 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第12期1546-1553,共8页
【目的】试验通过研究饲粮中添加过瘤胃胆碱和有机铬对围产期奶牛免疫及抗氧化功能的影响,旨在为过瘤胃胆碱和有机铬在围产期奶牛饲粮中的科学应用提供理论依据。【方法】选取40头健康、经产(平均胎次1~2)的中国荷斯坦奶牛,随机分为4组... 【目的】试验通过研究饲粮中添加过瘤胃胆碱和有机铬对围产期奶牛免疫及抗氧化功能的影响,旨在为过瘤胃胆碱和有机铬在围产期奶牛饲粮中的科学应用提供理论依据。【方法】选取40头健康、经产(平均胎次1~2)的中国荷斯坦奶牛,随机分为4组(每组10头牛):对照组(TO),基础饲粮;胆碱组(TC),基础饲粮+30 g/d过瘤胃胆碱;有机铬组(TA),基础饲粮+8 g/d蛋氨酸铬;混合组(TCA),基础饲粮+30 g/d过瘤胃胆碱+8 g/d蛋氨酸铬。试验处理从产前20 d至产后20 d,记录奶牛产后4周内日均产奶量,分别于产前第20、10天和产犊日、产后第10、20天,于晨饲前采集血样,测定血清抗氧化(谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD))及免疫(白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α))功能指标。【结果】与对照组相比,3个试验组奶牛产后4周内日均产奶量均显著提高(P<0.05);产前各组奶牛血清GSH-Px、CAT含量无显著差异(P>0.05),但试验组奶牛血清SOD含量显著降低(P<0.05);产犊日至产后第10天,胆碱组和有机铬组奶牛血清GSH-Px、CAT和SOD含量均显著高于对照组(P<0.05);产后第20天,胆碱组血清GSH-Px、CAT含量均显著低于高于对照组、有机铬组和混合组,而血清SOD含量却显著降低(P<0.05);整个试验周期内,胆碱组奶牛血清IL-1含量显著低于对照组及有机铬组和混合组(P<0.05),IL-6和TNF-α含量却显著提高(P<0.05)。【结论】综上所述,本试验条件下,饲粮中单独添加30 g/d过瘤胃胆碱或8 g/d有机铬可明显降低围产期奶牛机体氧化应激水平,提高产奶量和机体免疫力,改善奶牛健康状况,联合添加过瘤胃胆碱和有机铬与单独添加效果差异不明显。 展开更多
关键词 过瘤胃胆碱 有机铬 围产期奶牛 免疫功能 抗氧化功能
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禽源烟曲霉菌和黄曲霉菌的分离鉴定及几种中药抑菌作用研究 被引量:1
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作者 薛文慧 赵千惠 +4 位作者 梁天 王明迪 孙鹏 霍书英 李永 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第1期375-385,共11页
【目的】对保定市临床真菌感染病鸭进行菌株分离鉴定,并筛选分离菌株的体外抑菌药物。【方法】通过形态学观察、PCR扩增、测序及动物回归试验对菌株进行鉴定,并采用微量稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)及体外药敏试验统计菌落数量和直径来... 【目的】对保定市临床真菌感染病鸭进行菌株分离鉴定,并筛选分离菌株的体外抑菌药物。【方法】通过形态学观察、PCR扩增、测序及动物回归试验对菌株进行鉴定,并采用微量稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)及体外药敏试验统计菌落数量和直径来探究石菖蒲、黄柏、决明子、苦参、辣蓼、白头翁和蒲公英对烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus)和黄曲霉菌(Aspergillus flavus)的体外抑菌活性。【结果】成功分离到烟曲霉菌和黄曲霉菌。动物回归试验结果显示,雏鸡出现与病鸭相似的症状,剖检可见肝脏长出灰白色结节,且病变组织出现肉芽肿病变,说明2种病原菌均可使雏鸡感染。烟曲霉菌MIC_(80)结果显示,石菖蒲、黄柏、决明子和苦参MIC_(80)分别为8、16、32和64μg/μL,辣蓼、白头翁和蒲公英均为128μg/μL;黄曲霉菌的MIC_(80)结果显示,石菖蒲、决明子和黄柏MIC_(80)分别为8、16和32μg/μL,苦参和辣蓼均为64μg/μL,白头翁和蒲公英均为128μg/μL。体外药敏试验结果显示,在石菖蒲浓度为16μg/μL时培养基长出烟曲霉菌和黄曲霉菌菌落,在决明子浓度为32μg/μL时培养基长出黄曲霉菌菌落,黄柏浓度为32μg/μL时培养基中长出烟曲霉菌菌落,而在苦参、辣蓼、白头翁和蒲公英浓度128μg/μL培养基中就已长出直径较大的烟曲霉菌和黄曲霉菌菌落。【结论】石菖蒲、黄柏和决明子对烟曲霉菌和黄曲霉菌的生长具有显著的抑制作用,其中石菖蒲的抑制作用最为显著。本试验可为抗家禽曲霉病的中药研发提供新的思路。 展开更多
关键词 烟曲霉菌 黄曲霉菌 分离与鉴定 中药 最小抑菌浓度(MIC) 抑菌作用
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绵羊BMP15基因B2突变可视化检测技术的建立
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作者 胡瑞瑞 刘莉 +3 位作者 郭涛 李雅心 王小奎 胡圣伟 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第3期810-817,共8页
骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic protein 15,BMP15)基因突变对绵羊排卵率、产仔数以及繁殖力有很大影响,本研究旨在建立快速可视化检测BMP15基因B2突变的技术。将改良的扩增阻滞突变系统(amplification refractory mutation syste... 骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic protein 15,BMP15)基因突变对绵羊排卵率、产仔数以及繁殖力有很大影响,本研究旨在建立快速可视化检测BMP15基因B2突变的技术。将改良的扩增阻滞突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS)与核酸染料SYBR GreenⅠ结合,针对BMP15基因B2突变设计ARMS特异性引物,使引物下游3′端的最后一个碱基为A,并在下游引物3′端的第3位碱基处设计额外的错配,以提高引物的特异性;经ARMS PCR扩增后,向产物中加入SYBR GreenⅠ,通过肉眼观察PCR管内的颜色变化来检测BMP15基因的B2突变。经测序发现所采集的样本均为野生型,因此,利用重叠延伸PCR构建BMP15基因B2突变型模板,测序结果显示BMP15基因B2突变型模板构建成功。ARMS PCR结果显示,ARMS特异性引物能够只扩增突变型模板,而不会扩增野生型模板,且扩增效果良好。ARMS PCR扩增后加入SYBR GreenⅠ发现已知野生型模板与阴性对照一致,呈SYBR GreenⅠ原始颜色橙黄色,而已知突变型模板呈亮绿色,且色差明显,肉眼可辨。用建立的可视化检测BMP15基因B2突变的技术检测50个小尾寒羊基因组DNA(随机向其中20个样本中加入构建的BMP15基因B2突变型模板),将可视化检测的突变型样本编号与混合样本时记录的编号对比,结果表明该技术能够准确检测绵羊BMP15基因的B2突变,且准确率高达100%。将构建的BMP15基因B2突变型的模板进行梯度稀释,对本试验可视化检测体系的灵敏度进行检测,发现ARMS可视化检测技术的灵敏度达到0.006 ng/μL。因此,本研究建立的技术能够可视化地检测绵羊BMP15基因B2突变,且准确率高,有望为高繁殖力绵羊的选育提供技术支持。 展开更多
关键词 绵羊 BMP15基因 B2突变 可视化检测 ARMS SYBR GreenⅠ
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小分子化合物单克隆抗体的制备及其在动物医学领域的应用 被引量:8
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作者 杨松鑫 冯建远 +5 位作者 郭旋 韦柳源 梁翼莹 严昊 张子仪 陈海兰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第3期1121-1131,共11页
农药、兽药、重金属、生物毒素等残留物质的痕量检测在医学诊断、食品安全、环境监测等领域均具有重要意义,其中基于抗原-抗体特异性识别的免疫分析技术具有特异性强、灵敏度高、稳定性好、操作简便快捷等优点,但如何获得小分子化合物... 农药、兽药、重金属、生物毒素等残留物质的痕量检测在医学诊断、食品安全、环境监测等领域均具有重要意义,其中基于抗原-抗体特异性识别的免疫分析技术具有特异性强、灵敏度高、稳定性好、操作简便快捷等优点,但如何获得小分子化合物的特异性抗体是研制免疫分析技术的关键。作者介绍了基于杂交瘤技术制备小分子化合物单克隆抗体的方法,分析了影响杂交瘤技术制备小分子化合物单克隆抗体的因素,然后综述了小分子化合物单克隆抗体在兽药残留、药物开发、环境保护等动物医学领域的应用,最后展望了小分子化合物单克隆抗体生产和应用的发展趋势,为小分子化合物单克隆抗体的制备与应用相关研究提供指导。 展开更多
关键词 小分子化合物 痕量检测 单克隆抗体 影响因素 兽医临床
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