旨在探讨波尔山羊激活素受体ⅡB(activin A receptor typeⅡB,ACVRⅡB)基因5′调控区多态性及其对初生体重体尺的影响。从103只波尔山羊耳组织中提取基因组DNA,扩增ACVRⅡB基因5′调控区序列,测序鉴定SNPs位点,分析遗传多态性,并与波尔...旨在探讨波尔山羊激活素受体ⅡB(activin A receptor typeⅡB,ACVRⅡB)基因5′调控区多态性及其对初生体重体尺的影响。从103只波尔山羊耳组织中提取基因组DNA,扩增ACVRⅡB基因5′调控区序列,测序鉴定SNPs位点,分析遗传多态性,并与波尔山羊初生体重、体尺进行关联分析。结果显示,鉴定到g.-1776C>G、g.-1725G>A、g.-1697C>T、g.-1604G>A、g.-1569G>C 5个SNPs位点,其中g.-1725G>A位点AA型在群体中频率为0.049,AG型为0.359,GG型为0.592,PIC为0.29,处于中度多态;g.-1569G>C位点CG型在群体中频率为0.167,GG型为0.833,PIC为0.14,处于低度多态。连锁分析发现g.-1725 G>A与g.-1697C>T、g.-1569G>C完全连锁(相关性为100%)。关联分析发现,g.-1725G>A位点AG型初生重、初生体长均显著高于GG型(P<0.05);g.-1569G>C位点CG型初生体高显著高于GG型。综上,g.-1725G>A位点可作为波尔山羊早期生长选育的候选分子标记。展开更多
克隆牦牛过渡蛋白2(transition protein 2,TNP2)基因并分析其分子特征,调查TNP2基因和蛋白在不同发育阶段牦牛睾丸中的表达差异,为研究其在睾丸发育及精子发生中的作用提供依据。采集不同发育阶段牦牛睾丸(初生期、幼年期、性成熟初期...克隆牦牛过渡蛋白2(transition protein 2,TNP2)基因并分析其分子特征,调查TNP2基因和蛋白在不同发育阶段牦牛睾丸中的表达差异,为研究其在睾丸发育及精子发生中的作用提供依据。采集不同发育阶段牦牛睾丸(初生期、幼年期、性成熟初期、性成熟后期、老年期)组织,在克隆测序的基础上对TNP2基因进行分子特征分析;利用免疫组化(IHC)、荧光定量PCR(RT-qPCR)以及Western blot技术检测TNP2蛋白在牦牛睾丸组织中的定位及TNP2基因和蛋白在牦牛睾丸组织中的表达量。结果显示,成功克隆牦牛TNP2的基因CDS区序列,分子特征预测TNP2为可溶性的膜外蛋白,有多个磷酸化位点;其二级结构包含α螺旋、β-转角、延伸链和无规则卷曲,其核苷酸序列及氨基酸序列与其他哺乳动物之间的同源性较低。RT-qPCR结果显示,TNP2 mRNA在老年期睾丸的相对表达量极显著(P<0.01)高于其他4个时期,且在幼年期极显著(P<0.01)高于初生期、性成熟早期和性成熟后期,而初生期与性成熟早期和性成熟后期三者之间无显著差异(P>0.05)。Western blot结果显示TNP2蛋白在性成熟早期和性成熟后期的表达量极显著(P<0.01)高于初生期、幼年期和老年期,且幼年期和老年期极显著高于初生期(P<0.01)。IHC结果显示,TNP2蛋白在牦牛睾丸中圆形精细胞以及精子中呈强阳性表达,而在精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、支持细胞及睾丸间质细胞呈弱阳性表达。研究表明,TNP2可能参与了牦牛精子发育过程中圆形精子细胞向长形精子细胞转换过程中细胞核蛋白的转换,为进一步探明牦牛精子形成机制及其长期生活在高寒低氧环境中的耐低氧机制与繁殖能力低之间的关系提供了基础资料。展开更多
为获得猪塞尼卡谷病毒(Seneca Valley virus,SVV)衣壳蛋白VP1及其多克隆抗体,本文通过大肠杆菌原核表达系统表达VP1基因,并纯化VP1蛋白作为抗原免疫大鼠,采用ELISA和Western blot检测高免血清的特异性和抗体效价。结果:VP1主要以包涵体...为获得猪塞尼卡谷病毒(Seneca Valley virus,SVV)衣壳蛋白VP1及其多克隆抗体,本文通过大肠杆菌原核表达系统表达VP1基因,并纯化VP1蛋白作为抗原免疫大鼠,采用ELISA和Western blot检测高免血清的特异性和抗体效价。结果:VP1主要以包涵体形式得到高效表达,并纯化得到单一条带的VP1蛋白。表达的VP1蛋白能与SVV阳性血清发生特异性反应。纯化的融合蛋白VP1免疫大鼠获得的高免血清效价高于1∶32000,且与真核表达的VP1蛋白能够发生特异性结合反应。本研究为SVV的VP1蛋白功能研究奠定了物质基础。展开更多
文摘为获得猪塞尼卡谷病毒(Seneca Valley virus,SVV)衣壳蛋白VP1及其多克隆抗体,本文通过大肠杆菌原核表达系统表达VP1基因,并纯化VP1蛋白作为抗原免疫大鼠,采用ELISA和Western blot检测高免血清的特异性和抗体效价。结果:VP1主要以包涵体形式得到高效表达,并纯化得到单一条带的VP1蛋白。表达的VP1蛋白能与SVV阳性血清发生特异性反应。纯化的融合蛋白VP1免疫大鼠获得的高免血清效价高于1∶32000,且与真核表达的VP1蛋白能够发生特异性结合反应。本研究为SVV的VP1蛋白功能研究奠定了物质基础。
